Összehasonlító tanulmány a Cistanche Tubulosa (Guanhua Roucongrong) és feldolgozott termékei kémiai összetevőiről és tartalmáról

Absztrakt

Célkitűzés:A feldolgozott termékek kémiai összetevőinek változásának (változási mintázatának) vizsgálata.Cistanche tubulosa(Guanhua Roucongrong).
Mód:Ötféle főzetdarabot választottak ki, köztük a nyers szeleteket, a borban párolt szeleteket, a párolt szeleteket, a feketebabbal kevert szeleteket és a feketebab levével feldolgozott szeleteket. Létrehoztak egy HPLC ujjlenyomat-módszert, amelyet hasonlóság-értékeléssel, klaszteranalízissel (CA) és főkomponens-analízissel (PCA) kombináltak a nyerstermék és a feldolgozott termékek közötti különbségek szűrésére és megerősítésére. A nyers és feldolgozott minták összes fenil-etanoid-glikozid-, poliszacharid-, összes flavonoid- és négy fenil-etanoid-glikozid-tartalma közötti különbségek meghatározására és összehasonlítására kemometriai módszereket és HPLC-t alkalmaztunk.
Eredmények:HPLC ujjlenyomataiCistanche tubulosa and its processed products were established. With Mark peak matching, 9 common peaks were assigned for raw slices, whereas 11 common peaks were assigned for the other four processed products. Peaks No. 2 and No. 7 were differential chromatographic peaks. By comparison with reference standards, four chromatographic peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Fingerprints of the processed products showed similar profiles with the same number of common peaks; similarity values were all >0.9. Az echinakozidot referenciacsúcsként használva a különböző feldolgozott termékek közös csúcsainak relatív retenciós idejének RSD-je 0,11% és 0,82% között volt, míg a relatív csúcsterületek RSD-je 15,46% és 76,07% között volt. Amikor az osztályok közötti távolságot 10-re állította, a CA három kategóriába sorolta a nyers szeleteket és a feldolgozott termékeket. A PCA összetételbeli különbségeket mutatott ki a nyers és a feldolgozott minták között: a 11 csúcsváltozót három fő komponensre csökkentették; a különböző főkomponensek különböző kromatográfiás csúcsokkal korreláltak. A komponensmátrix és a lineáris súlyozás alapján az átfogó pontszámok azt mutatták, hogy a feketebablével feldolgozott szeletek, valamint a sárgaborral párolt és a vízben párolt szeletek szerepeltek előrébb. A nyers és feldolgozott minták tartalma a következő volt: összes fenil-etanol-glikozid 3,80–7,07%, poliszacharidok össztartalma 5,85–6,70%, flavonoidok össztartalma 14,16–24,26%; echinakozid 4,11%–5,99%, akteozid 0,67%–1,34%, cisztanozid A 0,06%–0,36%, izoakteozid 0,25–1,66%. Jelentős különbségek voltak a feldolgozott termékek között.
Következtetés:A bevezetett HPLC ujjlenyomat-módszer erős specificitású, hatékonyan megkülönbözteti a nyers szeleteket a feldolgozott termékektőlCistanche tubulosa, és alkalmas az echinakozid, az akteozid, a cisztanozid A és az izoakteozid kvalitatív és kvantitatív elemzésére a nyers gyógyszerben és a feldolgozott termékekben. A különböző minták összehasonlító profilalkotása és tartalmi változásai tudományos alapot nyújthatnak a minták azonosításához és minőségellenőrzéséhezCistanche tubulosaés különféle feldolgozott termékei.

Kulcsszavak: Cistanche tubulosa; feldolgozás; kémiai összetevők; ujjlenyomat; nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC)

 

1 Bevezetés

Cistanche tubulosaA (Schenk) Wight (Guanhua Roucongrong) egy évelő gyógynövény az Orobanchaceae-ben, és a Cistanches Herba hivatalosan felsorolt ​​forrása a Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyvében (a továbbiakban: "Kínai Gyógyszerkönyv"). A gyógyászati ​​rész a szárított húsos szár pikkelyes levelekkel. Meleg természetű, édes és sós ízű, behatol a vese és a vastagbél meridiánjaiba, tonizálja a vese yangot, jótékony hatással van az esszenciára és a vérre, valamint nedvesíti a beleket a székrekedés enyhítésére [1]. A modern farmakológiai vizsgálatok számos hatást igazoltak, például öregedésgátló, immunerősítő, vese-tonizáló és afrodiziákum hatást, hashajtó hatást és vérnyomáscsökkentő hatást.

Cistanche tubulosagazdag feniletanoid-glikozidokban, iridoidokban és glikozidjaikban, lignánokban, oligoszacharid-észterekben, poliolokban, poliszacharidokban, flavonoidokban és egyéb összetevőkben [2]. Ezek közül a fenil-etanoid-glikozidok a fő aktív komponensek és a legnagyobb mennyiségben előforduló vegyületek; a gyógyszerkönyvben a tartalom meghatározásának markerkomponensei is, és sokféle biológiai aktivitást mutatnak, például antioxidáns hatást, metabolikus elősegítést, a tanulás és a memória javítását, valamint a szexuális funkciók fokozását [3].

Cistanche tubulosaa szikes-lúgos földet és a Góbi-sivatagot kedveli, a gyökereken parazitálTamarixspp., és főleg Belső-Mongóliában, Hszincsiangban és Gansuban terjesztik Kínában [4]. A vadon élő és megművelt földrajzi hiteles területek közé tartozik Minfeng megye, Yutian, Pishan és Moyu a hszincsiangi Hotan prefektúrában. Feldolgozását főként szeletelt főzetdarabokra, nyers növényi anyagokra, kivonatokra, egészségügyi termékekre és funkcionális élelmiszerekre fejlesztik; ezek közül a kereskedelmi főzetdarabok továbbra is a fő áramlatok maradnak. A piacon azonban a különböző feldolgozott termékeket – például nyers szeleteket, borral feldolgozott szeleteket, magas hőmérsékletű enzimekkel inaktivált szeleteket és vízgőzzel párolt szeleteket – gyakran összekevernek és nehéz megkülönböztetni.

A Cistanches Herba feldolgozása az idők során fejlődött, az ősi feljegyzésekből, mint plTaiping Shenghui Fang, Zhenglei Bencao, ésPuji Fang[5–7] (pl. boros mosás, boros sütés, gőzölés/boros sütés, boros áztatás/száraz sütés, vízben forralás, háromszoros gőzölés és vajas keverés) olyan modern módszerekig, mint a bormacerálás (gőzölés), egyszeri gőzölés, „négygőzölés és négyszemes feldolgozás”, [8]. A különböző feldolgozási módszerek befolyásolhatják az aktív összetevők tartalmát, a biztonságot és a biológiai aktivitást. Cai Hong és mtsai. [9] azt találta, hogy a friss anyagok 70 fokos forró vízzel 6 percig tartó enziminaktiválása 7,3-szoros echinakozid-, illetve 6,5-szeres akteozid-tartalmat eredményezett a közvetlen napon szárításéhoz képest. Tie Xiaoyan et al. [10] arról számolt be, hogy a gőzöléssel végzett feldolgozás jelentősen javította a főzetdarabok minőségét a friss anyagokhoz képest. Chen Weijun et al. [11] megfigyelte, hogy a betain-tartalom bor-, só- és gőzfeldolgozás után csökkent a friss termékekhez képest. Zhang Chao et al. [12] kimutatta, hogy a borpárolás során hosszabb gőzölési idővel az echinakozid, az akteozid, a cisztanozid A és a 2′-acetil-lakteozid fokozatosan csökkent, míg az izoakteozid szignifikánsan nőtt.

A Kínai Gyógyszerkönyv jelenlegi, 2025-ös kiadása csak a nyers szeletekben és a borban párolt szeletekben szab határt az echinakozidra és az akteozidra, de nem határozza meg a többi feldolgozott termék markerkomponenseit, és hiányoznak a hatékony tartalomszabályozási módszerek. Ezért a jellemző összetevők elemzése és összehasonlítása, valamint az összetételváltozás mintáinak feltárása különösen fontos a nyers és feldolgozott termékek minőségi azonosítása és mennyiségi ellenőrzése szempontjából.

A hagyományos kínai orvoslás (TCM) ujjlenyomatvétele a kémiai összetevők holisztikus ábrázolása. Az integritás, a specifikusság és a gazdag információ előnyei révén széles körben használják a nyers gyógyszerek és készítmények minőség-ellenőrzési értékelésében, a nemzetközi szabványokhoz való igazodásban, a hitelesség azonosításában, a gyártási folyamat nyomon követésében és a farmakodinámiás anyagok kutatásában [13]. A HPLC ujjlenyomat alapján ez a tanulmány az echinakozidot, az akteozidot, a cisztanozid A-t és az izoakteozidot választotta minőségjelzőként, és hasonlóságelemzést, CA-t és PCA-t használt a tartalom meghatározásával kombinálva a kémiai összetevők és a tartalomváltozási minták összehasonlítására a különböző feldolgozott termékek között, tudományos alapot biztosítva az azonosításhoz és a minőség-ellenőrzéshez.

 

2 Eszközök és anyagok

2.1 Műszerek

U3000 HPLC rendszer (Thermo Fisher); UPL-111-20R ultratiszta vízrendszer (Sichuan Youpu); AB 265-S elektronikus mérleg (Mettler Toledo); KQ-5200DA ultrahangos elszívó/tisztító (Kunshan Ultrasonic); GZX-9240MBE elektromos szárítókemence (Shanghai Boxun); UV-2600 UV-Vis spektrofotométer (Shimadzu, Kína).

2.2 Gyógyszerek és reagensek

FrissCistanche tubulosa(Tételszám:. 20241008) a Xinjiang Congrongtang Biotechnology Co., Ltd. szállította, és Wang Guoping kutató (Materia Medica Hszincsiangi Ujgur Autonóm Régió Intézete) hitelesítette, mint a húsos szárat.Cistanche tubulosa(Schenk) Wight (Orobanchaceae).

Referenciaanyagok: vízmentes D-glükóz (tétszám. 361810, 100,00%, Shenzhen Jinhui Biotechnology Co., Ltd.); echinakozid (Tételszám. 111670-201907), rutin (Tételszám. 100080-202012), akteozid (Tételszám. 11530-202315), cisztanozid A (Tételszám. 313512) és izoakteozid (Tételszám. 313413), a HPLC vizsgálati tisztaság legalább 91,8%, 2%, 97,6%, 92,0%. 98,09%, illetve a National Institutes for Food and Drug Control (Kína).(Megjegyzés: egy tisztasági sort csonkoltunk a mellékelt szövegben; a fentiek az olvasható részt követik.)

Sárga rizsbor (félszáraz típus, alkohol 16%; Zhejiang Guyuelongshan Shaoxing Wine Co., Ltd.); metanol és acetonitril (HPLC minőségű, Fisher Scientific, USA). A többi reagens analitikai minőségű volt.

3 Módszerek és eredmények

3.1 Nyers szeletek és feldolgozott termékek elkészítéseCistanche tubulosa

A következő módszereket alkalmaztuk a nyers szeletek és feldolgozott termékek elkészítéséhez, egyenként 6 tételben.

Nyers szeletek:FrissCistanche3 mm-es szeletekre vágjuk és 60 fokon szárítjuk.

Gőzölési mód:A szakirodalom szerint [14] 20 g tiszta szeletet lezárt edényben 6 ml desztillált vízzel összekevertek, 4 órán át nedvesítettek [12], 12 órán át víz felett gőzölték, lehűtötték és 60 fokon szárították.

A borfeldolgozás módja:Borpárolási vagy borpárolási módszerrel (General Rule 0213, Chinese Pharmacopoeia) készült.

Keveréses feldolgozás feketebabbal:szerint elkészítveKínai Materia Medica(Zhonghua Bencao) Cistanches Herba alatt; fekete babot 1 kg/10 kg mennyiségben adtunk hozzáCistancheanyag.

Feketebablé feldolgozás:A szeleteket feketebab levével kevertük össze, majd a fenti gőzölési módszerrel dolgoztuk fel; a feketebab adagja ugyanaz volt, mint fent.

3.2 Az ellenőrzési tételek meghatározása

A nedvességet kemencében történő szárítással határoztuk meg (0832 általános szabály, Kínai Gyógyszerkönyv); teljes hamu a 2302. általános szabály szerint; alkoholban oldódó extraktumok hideg macerációs módszerrel a 2201. általános szabály szerint. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza.

 

3.3 HPLC ujjlenyomatok összehasonlító elemzéseCistanche tubulosaés Feldolgozott Termékei

3.3.1 Kromatográfiai körülmények

Waters Xterra RP18 oszlop (250 mm × 4,6 mm, 5 µm). Mozgófázis: acetonitril (A) – 0,1% hangyasav (B) gradiens elúcióval: 0-12 perc, 14% A → 17% A; 12–30 perc, 17% A → 19% A; 30–35 perc, 19% A → 14% A; 35-50 perc, 14% A. Áramlási sebesség: 1,0 mL·perc⁻¹. Oszlop hőmérséklet: 30 fok. Érzékelési hullámhossz: 330 nm. Injekciós térfogat: 10 µL.

3.3.2 Megoldások elkészítése

Referencia megoldások:Az echinakozidot, az akteozidot, a cisztanozid A-t és az izoakteozid referenciaanyagokat pontosan lemértük és 50%-os metanolban feloldottuk 10 ml-es mérőlombikban, így 1,1301, 0,2294, 0,2255 és 0,2109 mg¹, ml-es oldatokat kaptunk. szűrjük, hogy végső oldatokat kapjunk.

Megoldási minta:A nyers és feldolgozott mintákból 0,5 g 80 mesh-es port pontosan lemértünk, 50%-os metanollal extraháltunk egy 25 ml-es mérőlombikban, ultrahanggal kezeltük (200 W, 40 kHz) 40 percig, lehűtöttük, összekevertük, állni hagytuk és 0,22 µm-es membránon átszűrtük; a szűrletet használtuk fel.

3.3.3 A módszer érvényesítése (ujjlenyomat)

3.3.3.1 Pontosság

Ugyanazt a mintaoldatot hat alkalommal fecskendeztük be egymás után. Az echinakozidot referenciacsúcsként használva a közös csúcsok relatív retenciós idejének RSD-je ez volt<0.48% and the RSD of relative peak areas was <2.86%, indicating good instrumental precision.

3.3.3.2 Megismételhetőség

Hat párhuzamos mintaoldatot készítettünk ugyanabból a tételből (S1 nyers szelet). Az echinakozidot referenciacsúcsként használva a relatív retenciós idők RSD értéke a következő volt<0.07% and the RSD of relative peak areas was <2.77%, indicating good method repeatability.

3.3.3.3 Stabilitás

Ugyanezt a mintaoldatot elemeztük 0, 3, 6, 9, 12 és 24 órában. Az echinakozidot referenciacsúcsként használva a relatív retenciós idők RSD értéke a következő volt<0.11% and the RSD of relative peak areas was <2.33%, indicating stability within 24 h.

3.3.4 Ujjlenyomatok létrehozása

Harminc tételCistanche tubulosaés a feldolgozott termékeket elemezték. A "Hagyományos kínai orvoslás kromatográfiás ujjlenyomatához hasonló kiértékelési rendszert" (2012-es kiadás) használták. Referencia ujjlenyomatként az S1 nyers szeletet és a sárgaborban párolt J1 szeletet használtuk; az átlagos módszert és a 0,1 perces időablak szélességét alkalmaztuk a többpontos korrekcióhoz és a Mark peak matchinghez az ujjlenyomatok generálásához (1–2. ábra), és átfedő kromatogramokat kaptunk vegyes referenciastandardokkal (3. ábra).

Az eredmények azt mutatták, hogy a négy feldolgozott termék ujjlenyomat-profilja hasonló a nyers szeletekéhez. A nyers szeletek 9, míg a borpárolt, párolt, kevert feketebabbal és feketebablével feldolgozott szeletek 11 közös csúcsot értek el. Kilenc közös csúcson mindkettő osztozott. A No. 2 és No. 7 csúcsok jellegzetes csúcsok voltak, amelyek megkülönböztetik a nyers szeleteket a feldolgozott termékektől. A négy feldolgozott termék ujjlenyomat-profilja hasonló volt, és nem tükrözte egyértelműen a köztük lévő különbségeket.

3.3.5 Hasonlósági elemzés

Using J1 as the reference fingerprint, similarity analysis was performed for different processed products (Table 2). Similarities were all >0,9, ami hasonló ujjlenyomat-jellemzőket jelez a különböző feldolgozott termékek között.

3.3.6 Közös csúcsok azonosítása

A retenciós időket kevert referencia standardokkal és a nyers szelet kromatogrammal összehasonlítva négy kromatográfiás csúcsot azonosítottunk: 4. csúcs, echinakozid; 9. csúcs, cisztanozid A; 10. csúcs, akteozid; 11. csúcs, izoakteozid (2. ábra). A 4. csúcs (echinakozid) referenciacsúcsként a közös csúcsok relatív retenciós idejének RSD értékei a négy feldolgozott termék különböző tételei között 0,11% és 0,82% között, a relatív csúcsterületek RSD értékei pedig 15,46% és 76,07% között voltak.

3.3.7 Klaszterelemzés

Az SPSS 27.0-t a nyers szeletek és feldolgozott termékek klaszteranalízisére használták. Csoportok közötti kapcsolatot alkalmaztunk, és négyzetes euklideszi távolságot használtunk (4. ábra). Amikor az osztályok közötti távolság volt<5, water-steamed slices and wine-steamed slices clustered together. When the inter-class distance was 10, raw slices and the four processed products were classified into three categories: raw materials (S1–S6) as one category; black-bean-juice-processed slices (H1–H6) as one category; and wine-steamed slices (J1–J6) together with water-steamed slices (Q1–Q6) and stir-processed-with-black-beans slices (C1–C6) as one category. When the inter-class distance was between 15 and 25, black-bean-juice-processed slices formed a separate cluster from the other samples.

3.3.8 Főkomponens-elemzés

A csúcsterületek szabványosítása után a PCA-t SPSS 27.0 segítségével végeztük. A KMO-érték 0,679, a Bartlett-teszt szignifikancia pedig ez volt<0.001, indicating suitability for PCA. With eigenvalues >Az 1. ábrán három fő komponenst vontunk ki 6,815, 1,987 és 1,105 sajátértékekkel. A szórás-hozzájárulás mértéke 61,954%, 18,063% és 10,047% volt, a kumulatív szóráshozzájárulás mértéke 90,064% (3. táblázat). Ez azt jelzi, hogy az első főkomponens az átfogó pontszám legfontosabb mutatója.

A komponensmátrix azt mutatta, hogy az első főkomponensben a 2–9. és a 11. csúcs csúcsterületi változóinak abszolút együtthatói viszonylag nagyok voltak, ami arra utal, hogy erős hatást gyakoroltak az F1-re. A második főkomponens az 1. és 10. csúcs információival, a harmadik főkomponens pedig az 1. csúcs információival korrelált. A komponensmátrix a 4. táblázatban látható; az 5. és 6. ábrán látható a simítódiagram és a terhelési diagram. A három főkomponens pontszámait és azok variancia-hozzájárulási arányait használva súlyként a lineáris súlyozáshoz, átfogó pontszámokat számoltunk (5. táblázat), amely azt jelzi, hogy a feketebablével feldolgozott szeletek, vízben párolt szeletek és a borpárolt magasabb slice rangsorolása.

 

3.4 Több összetevő HPLC meghatározásaCistanche tubulosaés Feldolgozott Termékei

3.4.1 Kromatográfiai körülmények és specifitás

A kromatográfiás körülmények megegyeztek az ujjlenyomatvételhez használtakkal. A mintaoldatokat, a referenciaoldatokat és a negatív vakoldatokat (sárga rizsbor, tisztított víz, feketebablé) injektáltuk (10 µl). A retenciós időket összehasonlítottuk. A negatív vakoldatok nem mutattak interferenciát az echinakoziddal, a cisztanozid A-val, az akteoziddal és az izoakteoziddal.[a szöveg hiányzik a forrásból]

3.4.2 Linearitás

Az echinakozid, akteozid, cisztanozid A és izoakteozid 1,1301, 0,2294, 0,2255 és 0,2109 mg·mL⁻¹ koncentrációjú referenciaoldatait pontosan pipettáztuk 1, 2, 4, 8, 10 µl és 1 µl-nél. Lineáris regressziót hajtottunk végre a XXX csúcsterülettel az YYY injektált koncentráció (mg·mL–1) függvényében. A lineáris egyenletek és tartományok a 6. táblázatban láthatók.

3.4.3 Pontosság

Ugyanazt a mintaoldatot hat alkalommal fecskendeztük be egymás után. A négy analit (echinakozid, cisztanozid A, akteozid, izoakteozid) RSD-értékei rendre 0,23%, 2,71%, 0,53% és 2,08% voltak (7. táblázat).<3%, indicating good instrumental precision.

3.4.4 Megismételhetőség

Hat párhuzamos mintaoldatot készítettünk ugyanabból a tételből (S1 nyers szelet). A négy analit RSD-tartalma 0,22%, 2,46%, 0,50% és 2,46% volt (7. táblázat).<3%, indicating good repeatability.

3.4.5 Stabilitás (napon belüli)

Ugyanezt a mintaoldatot elemeztük 0, 3, 6, 9, 12 és 24 órában. A négy analit RSD-tartalma 0,80%, 1,62%, 1,72% és 1,49% volt (7. táblázat).<2.0%, indicating stability within 24 h.

3.4.6 Stabilitás (napközi)

Ugyanazt a mintaoldatot elemeztük öt egymást követő napon. A négy analit tartalom RSD-értékei öt napon belül 2,80%, 2,53%, 3,53% és 2,88% voltak (7. táblázat), ami öt napon belüli stabilitást jelez.

3.4.7 Helyreállítás

Megfelelő mennyiségbenCistanche tubulosaA mintát lemértük, és az echinakozid, az akteozid, a cisztanozid A és az izoakteozid referencia standardjait 1:1 arányban feltápászkodtuk. Hat párhuzamos mintaoldatot készítettünk és elemeztünk (10 µl injekció). Az átlagos gyógyulás 99,29%, 98,75%, 99,45% és 96,13% (n=6), az RSD-értékek 2,51%, 0,38%, 1,71% és 0,49% voltak.

3.4.8 Meghatározási eredmények

Minden mintánál 0,5 g port mértünk le pontosan; 10 µl-t fecskendeztünk be, hogy meghatározzuk és kiszámítsuk a négy összetevő százalékos tartalmát. Az eredményeket a 7–10.

 

3.5 Az összes fenil-etanol-glikozid, összes poliszacharid és összes flavonoid meghatározása

3.5.1 Az összes fenil-etanol-glikozid meghatározása

3.5.1.1 Referenciaoldat elkészítése

Megfelelő mennyiségű echinakozid referenciaanyagot pontosan lemérünk és metanolban feloldunk egy 10 ml-es mérőlombikban, így 0,32 mg·mL-1 koncentrációjú oldatot kapunk. A szakirodalom szerint [15] a referenciaoldatból 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 és 1,2 ml-t pipettáztunk, metanollal 10 ml-re hígítottuk, és 333 nm-en mértük az abszorbanciát (A). Az illesztett standard görbe egyenlet: Y=24.7596X+0.0147Y=24.7596X + 0.0147Y=24.7596X+0.0147, R2=0.9995R^2=0.9995R2=0.9995, lineáris tartománya 0,0029–0,035 mg¹m¹mL.035.

3.5.1.2 Mintaoldat elkészítése

100 mg mintaport (100 mesh-es szitán átpasszíroztunk) pontosan lemértünk, ultrahanggal extraháltuk metanollal 30 percig (200 W, 40 kHz), 10 ml-re hígítottuk, és 0,22 µm-es membránon szűrtük. Ezután 0,2 ml szűrletet metanollal tovább hígítottunk 10 ml-re, és elemzés céljából összekevertük.

3.5.1.3 Meghatározás

Minden mintához 100 mg port használtunk a mintaoldat elkészítéséhez. Az abszorbanciát 333 nm-en mértük, és kiszámítottuk az összes fenil-etanol-glikozid százalékos tartalmát (9. táblázat).

(1) egyenlet:
Tartalom (%) =C×V×Dm×100%= \\dfrac{C \\times V \\times D}{m} \\times 100\\%=mC×V×D​×100%
ahol CCC az analit koncentrációja a mintaoldatban, VVV a hígítási térfogat, DDD a hígítási tényező és mmm a minta tömege (mg).

3.5.2 Az összes poliszacharid meghatározása

3.5.2.1 Referenciaoldat elkészítése

Megfelelő mennyiségű vízmentes D-glükóz referenciaanyagot pontosan lemértünk, tisztított vízben feloldottuk, és 10 ml-re hígítottuk, így 0,190 mg·mL-1 oldatot kaptunk. Keverés és szűrés (0,22 µm) után 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 és 1,0 ml-t pipettáztunk. A színfejlesztést antron-kénsav módszerrel végeztük [16]. Az abszorbanciát 625 nm-en mértük. Az illesztett standard görbe egyenlete: Y=35.1316X−0,0079Y=35.1316X - 0.0079Y=35.1316X−0,0079, R2=0.9957R^2=0.9957R2=0.9957, lineáris tartománya 0,0038–0,090 mg¹90,0 mL.

3.5.2.2 Mintaoldat elkészítése

40 mg mintaport pontosan lemértünk, ultrahanggal feloldottunk tisztított vízben 30 percig (200 W, 40 kHz), 10 ml-re hígítottuk, és 0,22 µm-es membránon átszűrtük.

3.5.2.3 Meghatározás

Minden mintához 40 mg-ot használtunk a mintaoldat elkészítéséhez. Ezután 0,1 ml szűrletet pipettáztunk, és tisztított vízzel 2,00 ml-re egészítettük ki. Az antron-kénsav módszerrel végzett színfejlesztést követően megmértük az abszorbanciát és kiszámítottuk az összes poliszacharid százalékos tartalmát (8. táblázat).

3.5.3 Az összes flavonoid meghatározása

3.5.3.1 Referenciaoldat elkészítése

A rutin referenciaanyag megfelelő mennyiségét pontosan lemértük, feloldottuk 70%-os etanolban, és 25 ml-re hígítottuk; 0,22 µm-es membránon átszűrjük. Ezután 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 és 4,0 ml-t pipettáztunk. A színfejlesztést nátrium-nitrit–alumínium-nitrát–nátrium-hidroxid módszerrel végeztük [17]. Az abszorbanciát 510 nm-en mértük. Az illesztett standard görbe egyenlet: Y=11.5699X+0.0684Y=11.5699X + 0.0684Y=11.5699X+0.0684, R2=0.9989R^2=0.9989R2=0.9989, lineáris tartománya 0,0097–0,0738 mg»6 mg¹mL.

3.5.3.2 A mintaoldat elkészítése

50 mg port pontosan lemértünk, ultrahanggal feloldottuk 70%-os etanolban 30 percig (200 W, 40 kHz), 10 ml-re hígítottuk, és 0,22 µm-es membránon átszűrtük.

3.5.3.3 Meghatározás

Minden mintához 50 mg-ot használtunk a mintaoldat elkészítéséhez. Ezután 0,5 ml szűrletet átvittünk egy 10 ml-es mérőlombikba, és a színező reagenseket a fenti sorrendben adtuk hozzá. A tisztított víz szolgált üresnek. Megmértük az abszorbanciát és kiszámítottuk az összes flavonoid százalékos tartalmát (8. táblázat).

 

4 Vita

Ebben a tanulmányban a HPLC ujjlenyomatokCistanche tubulosa and its various processed products were established. Peak matching across different batches confirmed 9 common peaks in raw slices and 11 common peaks in processed products. By comparison with reference standards, four common peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Similarity analysis showed that similarity values among four processed products were all >0,9, és az összesített ujjlenyomat-profilok hasonlóak voltak, ami azt jelzi, hogy az alkotóelemeik közel állnak egymáshoz. A relatív csúcsterületek RSD-jében mutatkozó nagy különbségek azonban jelentős különbségekre utalnak az alkotóelemek tartalmában.

A nyers szeletekhez képest a négy feldolgozott termék két további csúcsot (2. és 7. csúcs) mutatott, ami azt jelzi, hogy a kémiai összetevők megváltoztak a borpárolás, a vízgőzölés vagy a feketebab feldolgozása után. Ezek az újonnan keletkezett csúcsok feltételezhetően a feldolgozás során keletkeztek; komponenseik jellemzésével a következő tanulmányok foglalkoznak majd.

CA eredmények azt mutatták, hogy amikor az osztályok közötti távolság volt<5, wine-steamed and water-steamed slices clustered together, suggesting similar chemical composition and content. At an inter-class distance of 10, raw slices could be separated from black-bean-juice-processed slices, stir-processed-with-black-beans slices, and wine/water-steamed slices. At inter-class distances of 15–25, differences between black-bean-juice-processed slices and other samples became more prominent. PCA results indicated that three principal components had substantial influence on comprehensive evaluation.

A különböző feldolgozási módszerek közvetlenül befolyásolták a különböző összetevők szintjét. A kemometrikus meghatározás alapján az összes fenil-etanoid glikozid a következőképpen rangsorolt: feketebablével feldolgozva > nyers szeletekkel > vízben párolt > borban párolva > keverve feldolgozva-feketebabbal. Az összes poliszacharid a következőképpen rangsorolva: vízben párolt > borban párolt > fekete babbal keverve > feketebablével feldolgozva > nyers szelet. Az összes flavonoid a következőképpen rangsorolható: feketebablével feldolgozva > vízben gőzölve > keverve feldolgozva feketebabbal > párolt borral > nyers szeletekkel. A nyers szeletekhez képest a feketebablé feldolgozása növelte az összes fenil-etanoid-glikozidot, míg más feldolgozási módszerek csökkentették azt; mind a négy feldolgozási módszer szignifikánsan növelte az összes poliszacharidot és összes flavonoidot. A két feketebab-módszer között a feketebablé-feldolgozás nagyobb növekedést produkált az összes fenil-etanol-glikozidban és az összes flavonoidban, mint a feketebabbal végzett keverés, statisztikai eltérésekkel.

 

8. táblázat: Az összes fenil-etanol-glikozid, összes poliszacharid és összes flavonoid meghatározásaCistanche tubulosaés feldolgozott termékei

Feldolgozott termék (főzetdarabok)	Összes fenil-etanol-glikozid (%)	Összes poliszacharid (%)	Összes flavonoid (%)
Nyers szelet	6.81 ± 0.06	5.85 ± 0.10	14.16 ± 0.24
Borban párolt szeletek	5.10 ± 0.05***	6.61 ± 0.05***	20.84 ± 0.33***
Vízben párolt szeletek	5.23 ± 0.05***	6.70 ± 0.15***	21.59 ± 0.37***
Feketebab szeletekkel keverve	3.80 ± 0.02***	6.56 ± 0.09***	21.02 ± 0.35***
Feketebab-lével feldolgozott szeletek	7.07 ± 0.09****	6.09 ± 0.03****	24.26 ± 0.18****

Megjegyzések: Nyers szeletekkel összehasonlítva: *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001; összehasonlítva a keveréssel feldolgozott feketebab szeletekkel: *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001.

Az echinakozid, az akteozid, a cisztanozid A és az izoakteozid kulcsfontosságú fenil-etanoid-glikozidok, amelyek hozzájárulnak a vese tonizáló és esszenciajótékony hatásához.Cistanche tubulosa. A négy összetevő HPLC-s összehasonlítása azt mutatta, hogy a közös csúcsok közötti csúcsterület-különbségek alapul szolgálhatnak a különböző feldolgozott termékek megkülönböztetéséhez. A nyers szeletekhez képest az echinakozid, a cisztanozid A és az izoakteozid mennyisége különböző mértékben nőtt a feldolgozott termékekben, a feketebablé-termékeknél pedig kifejezettebb. Az akteozid három feldolgozott termékben csökkent, de nőtt a feketebabbal kevert termékekben. Ez összefüggésbe hozható az akteozid inherens stabilitásával: fenil-etanoid-diglikozidként egy koffeoil-résszel, a melegítési hőmérséklet, az idő és a pH változása során észterkötés hasadhat, így kávésav keletkezik, és részlegesen izomerizálódik izoakteoziddá. A négy feldolgozott termékben megfigyelt akteozid-csökkenés és izoakteozid-növekedés összefüggésbe hozható a magas hőmérsékletű gőzöléssel, ami összhangban van a Rehmanniae Radix feldolgozásnál leírt mintákkal [18].

Ebben a tanulmányban az echinakozid emelkedett a bor/víz gőzölés és a feketebab feldolgozás után, ami ellentétes Zhang Chao et al. [12]. A keveréses feldolgozást a feketebabbal és a feketebablé-feldolgozással összehasonlítva az utóbbi szignifikánsan magasabb echinakozid- és cisztanozid-A-tartalmat mutatott, és kifejezettebb konverziót mutatott az akteozidról az izoakteozidra. Összességében ez a tanulmány feltárja a különböző feldolgozási módszerek után bekövetkező összetételi és tartalmi változásokat, és igazolja az akteozid és az izoakteozid közötti változást. A HPLC ujjlenyomatok tudományos módszert biztosítanak a nyers szeletek és a feldolgozott termékek azonosítására, és referenciaként szolgálnak a minőség-ellenőrzési szabványok megállapításához, valamint a minőségi és mennyiségi elemzésekhez.

 

Összeférhetetlenség

A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről.

Szerzői hozzájárulások

XU Xiaoqin: projekttámogatás, tanulmánytervezés, kísérleti meghatározás és kéziratírás;
QING Degang: a gyógyászati ​​anyagok átfogó koordinációja és gyűjtése;
ZHANG Juan és ZHAO Peng'an: alkotóelemek meghatározása és adatelemzés;
WANG Guoping: gyógyászati ​​anyagok hitelesítése.

 

Cistanche mintagyár:

https://www.xjcistanche.com/about-us

 

 

Hivatkozások

[1] A Kínai Népköztársaság Egészségügyi Minisztériumának Gyógyszerkönyvi Bizottsága.A Kínai Népköztársaság gyógyszerkönyve[M]. Peking: Vegyipari sajtó, 2025.
[2] Jia Xiaoguang, Ni Hui, Zhang Juan és mások. Kutatási és ipari fejlesztési helyzeteCistanche tubulosa [J]. A Xinjiang Orvosi Egyetem folyóirata, 2012, 35(7): 876–880.
[3] Liu Yuewen. A fenil-etanol-glikozidokkal kapcsolatos kutatási eredményekCistanche tubulosa [J]. Kortárs mezőgazdasági gépek, 2020(11): 60–62.
[4] Tu Pengfei. A Cistanches Herba [J] gyógynövényes szöveges bizonyítékainak újbóli vizsgálata.China Journal of Chinese Materia Medica, 2022, 47(20): 5670–5679.
[5] Zhu Su, Teng Shuo, Liu Chun.Puji Fang[M]. Peking: Népi Orvosi Kiadó, 1959.
[6] Wang Huaiyin.Taiping Shenghui Fang[M]. Peking: Népi Orvosi Kiadó, 1959.
[7] Tang Shenwei.Chongxiu Zhenghe Jingshi Zhenglei Beiyong Bencao[M]. Peking: Népi Orvosi Kiadó, 1957.
[8] Zhang Yong, Wu Huan. A Cistanches Herba [J] feldolgozási módszereinek történeti fejlődése.China Journal of Chinese Materia Medica, 1992, 17(4): 213–214.
[9] Cai Hong, Bao Zhong, Jiang Yong. Feldolgozási technológia a frissCistanche tubulosa [J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2007, 32(13): 1289–1291.
[10] Tie Xiaoyan, Feng Yinping, Ma Dongni. A származási területen végzett gőzölési feldolgozás hatása a sivatagi Cistanches Herba minőségére [J].Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine, 2021, 40(2): 54–56.
[11] Chen Weijun, Jia Cuiyu, Li Lianjiang. A különböző feldolgozási módszerek hatása a betain-tartalomra XinjiangbanCistanche tubulosa [J]. Mezőgazdasági rekultivációs gyógyászat, 2009, 31(5): 400–402.
[12] Zhang Chao, Hua Yue, Lian Jing és mások. Fenil-etanol-glikozidok tartalomváltozásának tanulmányozása a Cistanches Herba feldolgozása során [J].Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine, 2022, 29(4): 92–97.
[13] Wu Chunxing, Yang Yang, Meng Mei és mások. A TCM-ujjlenyomatvétel kutatási helyzete és trendelemzése az elmúlt évtizedben [J].A kínai Minzu Egyetem folyóirata (természettudományi kiadás), 2024, 33(4): 63–72.
[14] Jiang Yong, Bao Zhong, Sun Yongqiang. Tanulmány a Cistanches Herba szeletek feldolgozási technológiájáról [J].Chinese Pharmaceutical Journal, 2011, 46(14): 1074–1076.
[15] Zhang Leihong, Du Niansheng, Wang Qing. Fenil-etanoid glikozidok meghatározása Cistanches Herba összglikozid kapszulákban UV spektrofotometriával [J].A Xinjiang Orvosi Egyetem folyóirata, 2002, 25(4): 407–408.
[16] Ailadan·Maimaiti Aili, Yang Ting, Yuan Jie. A poliszacharidok extrakciós folyamata és in vitro antioxidáns hatása a maradékokbólCistanche tubulosa [J]. Kémiai és Biokémiai Mérnöki Negyedév(a folyóirat lefordított neve kínai nyelven alapul), 2020, 37(2): 36–41.
[17] Luo Yan. Az összes flavonoid extrakciós folyamatának optimalizálásaCistanche tubulosa[D]. Shihezi: Shihezi Egyetem, 2015.
[18] Shan Guoshun, Zhao Qimiao, Li Rui és mások. Az akteozidtartalom dinamikus vizsgálata a feldolgozás soránRehmannia glutinosa [J]. Ázsiai-csendes-óceáni hagyományos orvoslás, 2019, 15(3): 37–39.