A fenilpropanoid glikozidok antioxidáns és véralvadásgátló hatásai

további információ:ali.ma@wecistanche.com

Bartosz Skalski, et al

Absztrakt

Az Orobanchaceae holoparazita növényei, köztük a Cistanche, az Orobanche és a Phelipanche spp., gazdagságukról ismertek.fenilpropanoidglikozidok(PPG-k). Számos PPG-vegyületről azt találták, hogy széles spektrummal rendelkezik, például antimikrobiális, gyulladáscsökkentő, antioxidáns és memóriajavító. Az európai seprűszőnyegek (O. Caryophyllaceae – OC, P. Arenaria – PA, P. ramosa – PR) és tíz izolált fenilpropanoid komponens bioaktivitási potenciáljának jobb feltárása érdekében vizsgáltuk gyökellenes hatásukat, oxidáció elleni védő hatásukat a plazmában in vitro rendszerben. és befolyásolja a koagulációs paramétereket. A tesztelt kivonatok a Trolox erejének 50-70 százalékát kitevő tisztító aktivitást mutattak. Az akteozidban gazdag OC-kivonat több mint 20%-kal jobb antiradikális potenciállal rendelkezik, mint a PR-kivonat, amely az egyetlen olyan PPG-t tartalmazott, amelyből hiányzott az acilegységben a B-gyűrű katechol-része. Ezenkívül azt találták, hogy csak nyolc PPG-t teszteltek(pfenilpropanoidglikozidok)kimutatták az antioxidáns potenciált a H2O2/Fe-vel kezelt humán plazmában; azonban a három tesztelt PPG(pfenilpropanoidglikozidok)Az antioxidáns tulajdonságok mellett antikoaguláns potenciállal is rendelkezik. Úgy tűnik, hogy a PPG-k szerkezete, különösen az acil- és katekolrészek jelenléte, főként antioxidáns tulajdonságaikkal függ össze. Ezeknek a vegyületeknek a véralvadásgátló képessége a kémiai szerkezetükkel is összefügg. A kiválasztott PPG-k potenciálisan kezelik a szív- és érrendszeri betegségeketoxidatívfeszültség.

Kulcsszavak:Broomrape, fenilpropanoid glikozidok, oxidatív stressz, plazma hemosztázis

CistanchevanFenilpropanoidglikozidok

Kattintson a Cistanche termékekhez

1. Bemutatkozás

Oxidatívfeszültségszéles körben ismert az élő szervezetek egészségére gyakorolt ​​negatív hatásairól, beleértve a felgyorsult öregedést és egyes rákos megbetegedéseket. Az előfordulásaoxidatívfeszültségA szervezet sejtjeiben az oxidatív és antioxidatív mechanizmusok (beleértve az enzimatikus (kataláz, glutation-peroxidáz) és a nem enzimes (glutation) védekezést) közötti egyensúly megbomlásával jár [1]. A reaktív oxigénfajták (ROS) túltermelése, beleértve az oxidáló gyököket és a zárt héjú anyagokat, az egyik fő mechanizmus az oxidatív stressz kialakulásában. A ROS által okozott biológiai hatás azonban nagyban függ a koncentrációtól, az expozíció idejétől és a helytől. Normál körülmények között (alacsony koncentrációban) az oxigén/nitrogén gyökök másodlagos hírvivő szerepet tölthetnek be, magasabb szinten viszont reakcióba léphetnek a biológiai struktúrákkal, például a sejtmembránokkal [2]. Az összes ROS faj közül egy hidroxilgyök (HO.) okozzaOxidatívhangsúlyozzaismert, hogy fontos szerepet játszik számos betegségben, beleértve a szív- és érrendszeri betegségeket is. A vérrendszer rendellenességeit korrelálták és/vagy megelőzték a hemosztázis és a plazma biomarkerek különböző paramétereinek változása [1,3].

Másrészt számos természetes anyagot, például polifenolokat és többszörösen telítetlen zsírsavakat erős antioxidánsként azonosítottak, amelyek képesek megakadályozni a reaktív oxigénfajták képződését és/vagy csökkentését. Az ilyen tulajdonságokkal rendelkező vegyületek számos növényi eredetű élelmiszerben és gyógyszerkészítményben megtalálhatók. Ezért széles körben javasolt a friss zöldségekkel és gyümölccsel dúsított étrend, valamint a természetes antioxidánsokon alapuló antioxidáns terápia, mivel ezek csökkenthetik aoxidatívfeszültségés megelőzik a különféle kórélettani folyamatokat [4,5]. A növényi polifenolok a másodlagos metabolitok változatos csoportját alkotják, amelyek között a fenolos savak fontos helyet foglalnak el, mivel széles körben elterjedtek, és számos biológiai hatást mutatnak, például antimikrobiális, antioxidáns és gyulladáscsökkentő hatásúak.Fenilpropanoidglikozidok(PPG-k) a hidroxi-fahéjsav észterszármazékai, és a holoparazita Orobanchaceae növényekben, köztük a Cistanche, Orobanche és Phelipanche spp. Ennek a családnak több faja komoly növénykártevő, amelytől a gazdálkodók meg akarnak szabadulni a szántóföldeken (például a Phelipanche ramosa), keveset használnak a gyógyszerészetben, míg a legtöbb ember számára kevéssé fontos. A Herba Cistanche-t széles körben használják az ázsiai hagyományos orvoslásban a veseelégtelenség kezelésére, valamint immun- és memóriajavító, öregedésgátló és fáradtság elleni szerként [6]. Különböző kutatócsoportok fitokémiai elemzései azt mutatták befenilpropanoidglikozidok, mint például az akteozid, az echinakozid és a dobogós oldal, a Herba Cistanche egyik fő hatóanyaga [7]. A közelmúltban Jedrejek és munkatársai több, Lengyelországban talált seprűszőnyegfajt vizsgáltak. [8] kimutatta, hogy ennek a növényi anyagnak hasonló minőségi összetétele van (a PPG-k dominanciája)(pfenilpropanoidglikozidok), sőt, megegyezik, sőt meghaladja a Cistanche spp. a hatóanyag-tartalom tekintetében [8]

Jelen tanulmány célja a három különböző fenilpropanoidokban gazdag seprűszőnyeg-kivonat (Orobanche caryophyllacea – OC, Phelipanche Arenaria – PA és P. ramosa – PR) antiradikális és antioxidáns potenciáljának, valamint a vérzéscsillapító paraméterekre gyakorolt ​​hatásának vizsgálata volt. valamint azok egyes PPG-összetevői. A gyökellenes kapacitást 2,2′-azinobisz-3-etilbenztiazolin-6-szulfonsav/trolox-ekvivalens (ABTS/TE) és 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) segítségével mérték. ) tesztek. Azoxidatívfeszültséga plazmatesztrendszerben hidroxilgyökkel (H2O2/Fe) indukáltuk, majd lipidperoxidációt (TBARS-teszt), valamint a fehérje karbonil- és tiolcsoportok szintjét mértük. A hemosztázis meghatározott paraméterei között szerepelt: aktivált parciális thromboplasztin idő (APTT), protrombin idő (PT) és trombin idő (TT).

CistanchevanFenilpropanoidglikozidok

2. Anyagok és módszerek

2.1. Vegyszerek

2,2-difenil-1-pikrilhidrazil gyök (DPPH), 2,2'-azinobisz-3-etilbenztiazolin-6-szulfonsav (ABTS), kálium-perszulfát, 6- hidroxi-2,5,7,8-tetrametilkromán-2-karbonsav (Trolox), dimetil-szulfoxid (DMSO), tiobarbitursav (TBA), hangyasav (LC-MS minőségű) és H2O2 a Sigma-Aldrich-től (St. Louis, MO, USA) vásároltuk. A metanolt (HPLC gradiens minőségű) és az acetonitrilt (LC-MS minőségű) a Mercktől (Darmstadt, Németország) szereztük be. Tíz fenilpropanoid vegyületet vizsgáltak ebben a munkában, köztük 2'-O-acetil-lakteozidot (97 százalék), 2'-O-acetil-poliumosidot (98 százalék), 3-O-metil-poliumosidot (96 százalék), akteozidot (99 százalék), A belső arénát (97 százalék), a krenatozidot (98 százalék), a tenipozidot (99 százalék), a poliumosidot (99 százalék), a tubulozid A-t (96 százalék) és a wiede manniozid D-t (96 százalék) korábban izoláltuk az alábbi növényből. anyag [8]. A vegyületek tisztaságát UHPLC-PDA-MS analízissel határoztuk meg. Az ultratiszta vizet házon belül állítottuk elő Milli-Q víztisztító rendszerrel (Millipore Co.). A többi reagens analitikai minőségű volt, és belföldi kereskedelmi szállítók biztosították őket.

2.2. Növényi anyag

Három seprűszőnyegfaj virágzó növényeit azonosította prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski Egyetem, Kielce, Lengyelország) és egy lengyelországi természetes forrásból gyűjtötték. Utalványpéldányok (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), xeroterm gyep, Galium boreale parazita, 2014. május; P. Arenaria – Zwierzyniec, parasizewland,50.3652◦paras. Artemisia campestris, 2014. június; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), szabadföldi, Solanum Lycopersicum parazita, 2014. szeptember) a kielcei Jan Kochanowski Egyetem Herbáriumában (KTC) vannak letétbe helyezve. A növényi anyagot extrahálás előtt liofilizáltuk és finomra őröltük.

2.3. Seprűvirág kivonat készítése

A porított növényi anyagot (O. Caryophyllaceae (OC) – 2 g, P. Arenaria (PA) – 3 g és P. ramosa (PR) – 3 g) 80 százalékos MeOH-val extraháltuk 40 °C-on és 1500 psi nyomáson (oldószer nyomáson). ) ASE 200 gyorsított oldószeres extraktorral (Dionex, Sunnyvale, CA, USA). Az extraktumokat bepároltuk és fagyasztva szárítottuk (Gamma 2-16 LSC fagyasztva szárító, Christ, Németország). Az OC, PA és PR extrakciós hatékonysága a növényi anyag tömegének 55, 37 és 43 százaléka volt. A magas szénhidráttartalom miatt (az adatokat nem mutatjuk be), a nyers kivonatokat szilárd fázisú extrakcióval (SPE) tovább tisztítottuk Oasis HLB mikrooszlopon (500 mg; Waters, Milford, MA, USA). A cukrokat 1% metanollal eltávolítottuk, majd a kívánt vegyületeket 80% metanollal eluáltuk. Az oldószer eltávolítása után az OC, PA és PR kivonatokat liofilizáltuk (Gamma 2-16 LSC fagyasztva szárító), és az SPE tisztítás hozama 53 százalék (OC), 67 százalék (PA) és 51 százalék (PR) volt. .

2.4. A seprűszőnyeg-kivonatok fitokémiai jellemzői

A broomrape kivonatok kvalitatív és kvantitatív elemzését ACQUITY UPLC rendszerrel (Waters) végeztük, amely fotodiódasoros detektorhoz (PDA) és tandem kvadrupólus tömegspektrométerhez (TQD-MS/MS) volt csatlakoztatva. A fagyasztva szárított OC, PA és PR kivonatokat 50 százalékos metanolban oldottuk fel 0,50 mg/ml koncentrációban, majd BEH C18 oszlopon kromatografáltuk (1{ {21}}0 × 2,1 mm, 1,7 µm, Waters). A kromatográfiás körülmények a következők voltak: kemence hőmérséklete – 25 ◦C, lineáris gradiens 10 → 25% B-mozgófázis (0,1% hangyasav acetonitrilben) az A-mozgófázisban (0,1% hangyasav H2O-ban) 12 perc alatt, áramlási sebesség – 0,4 ml/perc, befecskendezési térfogat – 2 μL, UV tartomány – 190–490 nm (3,6 nm-es felbontás). Az MS analízist negatív ion módban, elektrospray ionizációval (ESI) végeztük, a következő beállításokkal: pásztázási tartomány 100-1200 m/z; kapilláris feszültség 2,8 kV; kúpfeszültség 35 V; forráshőmérséklet 150 ◦C; deszolvatációs hőmérséklet 450 ◦C; deszolvációs gázáram 900 l/h, kúpos gázáram 100 l/h. Az adatgyűjtés és -feldolgozás Waters MassLynx 4.1 szoftverrel történt.

A fenil-propanoid-glikozid (PPG) csúcsokat a kapott LC-MS adatok és a korábban izolált vegyületek eredményeinek összehasonlításával azonosítottuk [8]. A PPG-k mennyiségi meghatározása(pfenilpropanoidglikozidok)seprűsült kivonatokban az UPLC-UV módszeren alapult 330 nm-en történő detektálással, és egy külső standard kalibrációval, akteoziddal (Sigma-Aldrich, 99 százalék vagy egyenlő, HPLC) csoportstandardként. Lineáris kalibrációs görbét készítettünk hat koncentrációban, 1–200 ug/ml tartományban, és jó linearitást mutatott (R2 nagyobb vagy egyenlő, mint 0,999). A kvantitatív eredmények három injekció átlagos ± SD értékét képviselik, és milligramm akteozid-ekvivalensben (ekv.) a kivonat grammjára vonatkoztatva (mg akteozid ekv./g) adták meg.

CistanchevanFenilpropanoidglikozidok

2.5. Radikellenes aktivitás in vitro

2.5.1. ABTS gyökfogó vizsgálat

Az ABTS antiradikális tesztet a Kontek és munkatársai által leírt módszerrel végeztük. [9], enyhe módosításokkal az alábbiak szerint: 20% MeOH-t használtunk a reagensek előállításához (7 mM ABTS és 4,9 mM kálium-perszulfát); az OC, PA és PR kivonatok oldatait négy koncentrációban, 100-400 ug/ml tartományban, valamint a Trolox oldatokat hat koncentrációban, 10-250 ug/ml tartományban 50 százalékos oldattal készítettük. MeOH. A minta és az ABTS plusz munkaoldat aránya 1:25 (v/v). A 734 nm-en mért abszorbanciát 30 perces, sötétben történő inkubálás után UV-vis spektrofotométerrel (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) mértük.

Az abszorbanciagátlást (százalék) a következőképpen számítottuk ki: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] × 100.

A seprűszőnyeg-kivonatok Trolox-egyenértékét (TE) a TE {{0}} minta/standard képlet alapján számítottuk ki, ahol m az egyenes görbék meredeksége (abszorbanciagátlás vs. koncentráció). A minta TE értéke a Trolox elleni normalizált aktivitást írja le (TEstandard =1.0). Az OC, PA és PR kivonatok és a Trolox IC50-értékeit kísérleti úton érték el, majd egyenes görbéikből számították ki (abszorbanciagátlás vs. koncentráció), és ug/mL-ben fejezték ki.

A vizsgálatot három párhuzamosban végeztük, és az eredményeket átlag ± standard deviáció (SD) formájában mutatjuk be.

2.5.2. DPPH gyökfogó vizsgálat

A DPPH antiradikális tesztet a Jedrejek és munkatársai által leírt módszerrel végeztük. [8] és Brand-Williams et al. [10], enyhe módosításokkal az alábbiak szerint: OC, PA és PR kivonatok oldatai négy koncentrációban 50-250 ug/mL tartományban és Trolox oldatok, hat koncentrációfokozatban 10- tartományban. 250 ug/ml, 50%-os metanollal állítottuk elő. A minta és a DPPH aránya 1:19 (v/v). Az 517 nm-en mért abszorbanciát 30 perces, sötétben történő inkubálás után UV-vis spektrofotométerrel (Evolution 260 Bio) mértük.

Az abszorbanciagátlást (százalék) a következőképpen számítottuk ki: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] × 100.

A vizsgálati minták Trolox-egyenértékét (TE) és IC50-értékét az ABTS-tesztben leírtak szerint számítottuk ki (2.5.1. szakasz). A vizsgálatot három párhuzamosban végeztük, és az eredményeket átlag ± SD formában mutatjuk be.

2.6. Vizsgált növényi vegyületek és kivonatok törzsoldatai emberi plazmával végzett kísérletekhez

A vizsgált vegyületek és növényi kivonatok törzsoldatait 50 százalékos DMSO-ban készítettük. A DMSO végső koncentrációja a vizsgált mintákban 0,05 százaléknál alacsonyabb volt, hatását minden kísérletben meghatároztuk.

2.7. Humán plazma izolálása

Emberi vért vagy plazmát hat rendszeres donortól (nemdohányzó férfiak és nők) szereztek be egy vérbankba (Lengyelország, Lodz) és egy egészségügyi központba (Lodz, Lengyelország). A vért CPD-oldatként (citrát/foszfát/dextróz; 9:1; v/v vér/CPD) vagy CPDA-oldatként (citrát/foszfát/dextróz/adenin; 8,5:1; v/v; vér/CPDA) vettük. Az adományozók az adományozás előtt legalább két hétig nem szedtek semmilyen gyógyszert vagy függőséget okozó szert (beleértve a dohányt, alkoholt és antioxidáns-kiegészítőket). A vérminták elemzését a Helsinki Declaration for Human Research irányelvei szerint végeztük, és a Lodzi Egyetem Humánkísérletek Kutatási Etikai Bizottsága hagyta jóvá. A plazmát friss emberi vér centrifugálásával állítottuk elő 4500xg-vel 25 percig szobahőmérsékleten. A fehérjekoncentrációt a vizsgált minták abszorbanciájának 280 nm-en történő mérésével számítottuk ki, Whitaker és Granum [11] eljárása szerint.

CistanchevanFenilpropanoidglikozidok

2.8. Az oxidatív stressz markerei az emberi plazmában

2.8.1. Lipid peroxidáció mérése

A plazma lipidperoxidációját a tiobarbitursav reaktív anyagok (TBARS) koncentrációjának mérésével határoztuk meg. A TBARS koncentrációt a moláris extinkciós együttható (ε =156, 000 M− 1cm− 1) segítségével számítottuk ki. A módszert részletesebben máshol ismertetjük [12,13].

2.8.2. Karbonilcsoport mérés

A karbonilcsoportok szintjét a moláris extinkciós együttható (ε=22,000 M− 1 cm−1) segítségével számítottuk ki, és nmol karbonilcsoportok/mg plazmafehérje értékben fejezték ki Bartosz szerint [13]. ] és Levine et al. [14].

2.8.3. Tiolcsoport meghatározása

A plazmafehérjék tiolcsoport-tartalmát spektrofotometriásan mértük SPECTROstar Nano Microplate Reader (BMG LABTECH, Németország) segítségével 412 nm-en 5,5′-ditiol-bisz-(2- nitrobenzoesav) végzett abszorbancia alapján. A módszert részletesebben máshol ismertetjük [15–17].

2.9. A hemosztázis paraméterei

2.9.1. A protrombin idő (PT) mérése

A PT-t koagulometriával határoztuk meg egy Optic Coagulation Analyzer (K-3002 modell, Kselmed, Grudziadz, Lengyelország) segítségével Malinowska et al. [18].

2.9.2. A trombin idő (TT) mérése

A TT-t koagulometriás módszerrel határoztuk meg egy Optic Coagulation Analyzer (K-3002 modell, Kselmed, Grudziadz, Lengyelország) segítségével Malinowska és munkatársai által leírt módszer szerint. [18].

2.9.3. Az aktivált parciális tromboplasztin idő (APTT) mérése

Az APTT-t koagulometriával határozták meg egy K-3002 Optic Coagulation Analyzer (Kselmed, Grudziadz, Lengyelország) alkalmazásával Malinowska és munkatársai szerint. [18].

2.10. Adatelemzés

A Q-Dixon tesztet a bizonytalan adatok kiküszöbölésére végeztük. Az adatok normál eloszlását a Shapiro-Wilk teszttel és a varianciaegyenlőségre Levene teszttel teszteltük. A statisztikailag szignifikáns különbségeket ANOVA, majd Tukey többszörös összehasonlítási teszt vagy Kruskal-Wallis teszt követte. Az összehasonlításokat p < 0,05="" értéknél="" tekintettük="" szignifikánsnak.="" az="" értékek="" átlag="">

3. Eredmények és megbeszélés

Tíz korábban általunk izoláltfenilpropanoidglikozidok[8], beleértve a 2'-O-acetil-lakteozidot, a 2'-O-acetil-poliumosidot, az 3-O-metil-poliumosidot, az akteozidot, a belső arénát, a krenatozidot, a felipozidot, a pódiumoldalt, a tubulozid A-t és a wiedemanniozid D-t, hárommal együtt A seprűsült kivonatokat (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) és P. ramosa (PR)) jelenleg tanulmányozták enyhítés céljábóloxidatívfeszültségés antikoaguláns tulajdonságok emberi plazmarendszerben. A vizsgált fenilpropanoidok kémiai szerkezetét az 1. ábra mutatja be, és amint látható, mindegyik hasonló minta szerint épül fel, azonos/hasonló alegységekkel: hidroxitirozol, monoszacharidok (glükóz, ramnóz és/vagy) xilóz) és hidroxi-fahéjsav. A vizsgált PPG vegyületek többsége kávésavval van helyettesítve, de ez helyettesíthető kumársavval vagy ferulinsavval.

Az egyes PPG-vegyületeken kívül három seprűszőnyeg-kivonat – OC, PA és PR, amelyek több PPG keverékei(pfenilpropanoidglikozidok)és korábban kiindulási anyagként szolgáltak a vegyület izolálásához, szintén szerepeltek a biológiai vizsgálatban. A másik ok, amiért három különböző fajt választottunk, a fitokémiai profilok közötti nagy különbség volt, amint az a 2. ábrán is látható. Az OC, PA és PR kivonatok részletesebb összehasonlítása, beleértve a mennyiségi adatokat, a táblázatban látható. 1. Az akteozid volt az O. Caryophyllaceae kivonat fő alkotóeleme (690 mg/g), a P. Arenaria-ban a tenipozid és az aréna dominált (együttesen 550 mg/g), míg a poliumosid és acetilezett származéka volt a legfontosabb metabolitok. P. ramosa kivonat (együtt 640 mg/g). A vizsgált kivonatok összesített fenilpropanoid-tartalmában is különböztek, a legnagyobb mennyiséget az OC-ban (810 mg/g), a PR-ban valamivel kevesebbet (795 mg/g), a PA-ban (685 mg/g) találtuk. Érdemes megjegyezni továbbá, hogy a koffeoilcsoporton kívül más PPG-k, például kumaroil vagy feruloil jelenléte csak a P. ramosa kivonatban volt kimutatható, ahol ezek a vegyületek az összes PPG-nek körülbelül egyhatodát tették ki (körülbelül 120 mg/kg). g) (1. táblázat).

Korábbi tanulmányok a radikális hatásrólfenilpropanoidglikozidokHeilmann et al. [19] és Jedrejek et al. [8], beleértve körülbelül 30 különböző PPG-t(pfenilpropanoidglikozidok)mint például az akteozid, az izoakteozid és a krenatozid, feltárták szoros kapcsolatukat az acilcsoportok (fenolsav és tirozol) szerkezetével. Általánosságban elmondható, hogy az acilegység katecholrészének módosítása vagy helyettesítése a reaktív oxigéngyökök (ROS) és a DPPH gyökök elleni befogó aktivitás jelentős csökkenését eredményezte. A jelen tanulmányban három seprűszőnyeg kivonat (OC, PA és PR) antiradikális in vitro potenciálját vizsgáltuk ABTS és DPPH vizsgálatokkal, és az eredményeket összehasonlítottuk egymással, valamint az egyes fenilpropanoid komponensek ben mért aktivitásával. korábbi tanulmányunk [8]. Az eredményeket Trolox-egyenértékben (TE) és IC50 értékben fejeztük ki (2. táblázat). Általánosságban elmondható, hogy mindhárom kivonat jó megkötője volt mind az ABTS, mind a DPPH gyököknek, de a vizsgált minták között különbségek is megfigyelhetők (a becsült TE a 0,5–0,7 tartományba esett; 1,0 volt a Trolox megfelelője). A minták radikális befogó aktivitása a következő sorrendben volt: Trolox > OC > PA > PR. Az Orobanche Caryophyllaceae kivonata (IC50=155–275 µg/mL) több mint 20 százalékkal nagyobb aktivitást mutatott, mint a Phelipanche ramosa kivonat (IC50=200–320 µg/ml).

Az OC kivonat legnagyobb gyökfogó aktivitása a legmagasabb PPG-vel magyarázható(pfenilpropanoidglikozidok)tartalom ebben a mintában, valamint az akteozid, annak domináns összetevője, amely a korábbi kutatások szerint [8,19] az egyik legerősebb szabadgyökfogó az ebbe a csoportba tartozó metabolitok között (TEDPPH=0). .87; [4]). Figyelembe véve azonban az antiradikális aktivitás és az OC, PA és PR kivonatok fenilpropanoid-tartalmának kölcsönös kapcsolatát, nem találtunk egyszerű összefüggést e két tényező között (r < 0,5),="" ami="" arra="" utal,="" hogy="" minőségi="" profil.="" ez="" elsősorban="" a="" p.="" ramosa="" kivonattal="" függ="" össze,="" amely="" a="" magas="" ppg-szint="">(pfenilpropanoidglikozidok)({0}},8 g/g) a legalacsonyabb biológiai aktivitással jellemezhető a vizsgált minták közül (TE ~ 0,5). A PR-kivonat volt az egyetlen minta, amely kumársavval vagy ferulsavval tartalmazott fenilpropanoidokat, olyan anyagokat, amelyekből hiányzik a B-gyűrű katechol-része, és amelyekről beszámoltak arról, hogy csökkent antioxidatív potenciállal rendelkeznek. Négy módosított kávésavat tartalmazó PPG-vegyület, köztük az 3-O-metil-poliumosid, a ramóz A és a wiedemanniozid D, amelyeket korábban teszteltünk, TEDPPH-értéke 0,3 körül volt [8]. Így a jelenlegi eredmények összhangban vannak a fenilpropanoidokon végzett korábbi radikális in vitro kísérletek eredményeivel, és megerősítik azokat.

Ahogy Chen és mtsai. [20] leírták, hogy nagyobb H-donor képességgel vagy a gyök stabilizálásával jár együtt vegyületkeverék különféle funkciós csoportjaival. Számos szerkezeti elemet azonosítottak, amelyek fokozzák a polifenolok közvetlen antioxidáns aktivitását, különösen azokat, amelyek a hidroxilcsoportok számával és helyzetével kapcsolatosak. Úgy gondolják, hogy a szabad gyökfogó aktivitás növekszik az –OH csoportok számának növekedésével. Azonban ezeknek a csoportoknak a molekulában elfoglalt helyzete még nagyobb hatással van a kifejtett aktivitásra. Viszonylag stabil hatásos vegyületek azok, amelyek szerkezetükben 3,4-dihidroxi-csoportot tartalmaznak, valamint azok, amelyek kettőnél több hidroxilcsoportot tartalmaznak [21]. Az antioxidáns anyag kémiai szerkezete lehetővé teszi az antioxidáns reakciómechanizmus megértését. Lopez-Munguía et al. [22] a sűrűségfunkcionális elmélet (DFT) számításai alapján megállapította, hogy a PPG-k(pfenilpropanoidglikozidok)Az antioxidáns mechanizmus a szekvenciális protonveszteség egyelektrontranszferen (SPLET) keresztül megy végbe. Azonban Li és mtsai. [23] a fenolos fenilpropanoid antioxidánsok mechanizmusának feltárására tett kísérlet arra a következtetésre jutott, hogy a PPG-k (akteozid, forzitozid B és poliumosid) többféle úton is részt vehetnek az antioxidáns hatás kifejtésében, megerősítve a cukormaradékok szerepét.

Tanulmányok kimutatták, hogy a növényi eredetű antioxidánsok hatékonyan modulálják a vérzéscsillapítást szív- és érrendszeri betegségekben [24–26]. A hagyományos orvoslásban használt különféle növények jelentős mennyiségű PPG-t tartalmaznak [27,28]. Ezen kívül a PPG-k(pfenilpropanoidglikozidok)ismert, hogy számos biológiai hatással rendelkeznek, beleértve a gyulladáscsökkentő, antinefritisz és anti-hepatoxikus tulajdonságokat [29–33].

Jedrejek et al. [8] leírta a PPG-k izolálását(pfenilpropanoidglikozidok)három lengyel seprűről, és DPPH teszttel értékelték antioxidáns aktivitásukat. Ennek alapján a jelen tanulmány azt értékeli, hogy az ezekből a növényekből izolált tíz kiválasztott PPG képes-e csökkentenioxidatívfeszültségerős biológiai oxidálószerrel, azaz a hidroxilgyök donor H2O2/Fe-vel kezelt humán plazmában, és in vitro modulálják a plazma koagulációs tulajdonságait. Tíz izolált PPG antioxidáns tulajdonságait a kiválasztott paraméterek szerint határoztuk megoxidatívfeszültség: A TBARS szint, mint a lipidperoxidáció markere, a karbonilcsoport és tiolcsoport szintekkel együtt, mint az oxidatív fehérjekárosodás markerei.

A H2O2/Fe által kiváltott plazma lipidperoxidációs és fehérjekarbonilációs szintje egyaránt szignifikánsan csökkent nyolc vizsgált vegyület, ti. akteozid, krenatozid, 2'-O-acetil-lakteozid, felipozid, belső aréna, tubulozid A, poliumosid és 3- O-metil-polimuozid, minden vizsgált koncentrációban (1, 5 és 50 µg/ml); azonban egyik hatást sem figyelték meg a vizsgált vegyületek közül kettőnél, ti. 2′-O-acetil-poliumosid és wiedemanniozid D, vagy a vizsgált kivonatok bármelyike ​​bármilyen koncentrációban (1, 5 és 50 µg/ml). Ezenkívül a vizsgált vegyületek vagy kivonatok egyike sem védi meg a plazmát a H2O2/Fe-indukált tiolcsoport-oxidációval szemben a fehérjékben (3–5. ábra). A vizsgált kivonatok azonban különféle biológiai tulajdonságokkal rendelkező vegyületek forrásai lehetnek.

A jelen tanulmány eredményei most először mutatják, hogy a tesztelt PPG-k közül nyolc(pfenilpropanoidglikozidok)antioxidáns potenciált mutatnak be a humán plazmában exogén reaktív oxigénfajták jelenlétében a lipidperoxidáció és a fehérje karboniláció gátlásával H2O2/Fe-vel kezelt plazmában. Ezenkívül a 2′-O-acetil-poliumosid és a wiedemanniozid D nem mutatott ilyen hatást. Általánosságban elmondható, hogy eredményeink összhangban vannak a PPG-ken végzett korábbi in vitro kísérletekkel. Heilmann et al. [19] és Jedrejek et al. [8] összefüggést mutat be a PPG-k kémiai szerkezete és tevékenységeik között. A PPG-k antioxidáns tulajdonságai(pfenilpropanoidglikozidok)úgy tűnik, hogy elsősorban az acilrészeik szerkezetével, azaz a fenolsav- és fenilpropanoid-egységükkel kapcsolatosak, beleértve a katekolrész jelenlétét és/vagy módosítását. Például a wiedemanniozid D-ről azt találták, hogy elveszti antioxidatív potenciálját a H2O2/Fe-vel kezelt plazmával szemben, miután koffeoil-részét feruloil-csoportra cserélték.

A véralvadási folyamat változásai gyakran abból fakadnakoxidatívfeszültség; ezek a változások módosíthatják a szív- és érrendszer működését, és szív- és érrendszeri betegségek kialakulásához vezethetnek [1]. A jelen tanulmányban vizsgált tíz növényi vegyület és három növényi kivonat közül a tubulozid, a pódiumoldal és az 3-O-metil-poliumosid, valamint az összes vizsgált kivonat szignifikánsan meghosszabbítja a trombin időt minden vizsgált koncentrációnál, ti. 1, 5 és 50 µg/ml (6B. ábra). Azonban ezen kivonatok egyike sem, sem a vizsgált vegyületek egyike sem változtatta meg a PT-t vagy az APTT-t (6A. és C. ábra).

6. ábra: A vizsgált vegyületek (akteozid, krenatozid, 2'-O-acetil-lakteozid, felipozid, arenariozid, tubulozid A, poliumosid, 3-O-metil-poliumosid, 2'-O-cetil-polimuozid, wiedemanniozid D) és növényi hatások. kivonatok (P. arenaria kivonat - PA, P. ramosa kivonat - PR és O. caryophyllacea kivonat - OC) (1-50 µg/mL) a plazma kiválasztott hemosztatikus paraméterein: PT (A), TTn (B) és APTT (C). Az adatok hat független kísérlet átlagát ± SEM jelentik.n* p < 0,05="" (a="" kontrollhoz="" képest),="" ns="" –="" p=""> 0,05 (vs. kontroll).

A 3. táblázat a PPG-k (5 µg/ml) biomarkerekre gyakorolt ​​hatását hasonlítja össze.oxidatívfeszültséga H2O2/Fe-vel kezelt plazmában és azok koagulációra gyakorolt ​​hatása. A tesztelt PPG-k közül nyolc(pfenilpropanoidglikozidok)csak a kezelt humán plazmában mutatott ki antioxidáns potenciált; három tesztelt PPG azonban antioxidáns tulajdonságokkal és véralvadásgátló potenciállal is rendelkezik. Érdekes módon a DPPH teszt eredményei nem egyeztek meg a H2O2/Fe-vel kezelt humán plazmát alkalmazó biológiai modellben kapott eredményekkel: a vizsgált kivonatok antioxidáns potenciálját blokkolhatják a plazmában jelenlévő egyes vegyületek.

Összefoglalva, jelenlegi eredményeink új megvilágításba helyezik a PPG-k antioxidáns potenciálját és véralvadásgátló tulajdonságait(pfenilpropanoidglikozidok). Úgy tűnik, hogy a PPG-k szerkezete(pfenilpropanoidglikozidok), különösen az acil- és katekolrészek jelenléte, főként azok antioxidáns és véralvadásgátló tulajdonságaival függ össze. A kiválasztott PPG-k potenciálisan alkalmasak lehetnek a kapcsolódó szív- és érrendszeri betegségek kezeléséreoxidatívfeszültség. Azonban további kísérletekre van szükség ezen vegyületek in vivo modellekhez szükséges koncentrációinak meghatározásához.

Összeférhetetlenségi nyilatkozat

A szerzők kijelentik, hogy nincsenek ismert versengő pénzügyi érdekeltségeik vagy személyes kapcsolataik, amelyekről úgy tűnik, hogy befolyásolhatták volna a jelen tanulmányban közölt munkát.

Hivatkozások

[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Revisiting pharmacology ofoxidatívfeszültségés endoteliális diszfunkció kardiovaszkuláris betegségekben: bizonyíték a redox-alapú terápiákra, Free Radic. Biol. Med. 157. (2020) 15–37.
[2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker, Biomarkers ofoxidatívfeszültségés ennek összefüggése a buszkarbantartók vizelet-csökkentő képességével, J. Occupat. Med. Toxicol. 6 (2011) 18–23.
[3] P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz,Oxidatívfeszültségés vérzéscsillapítás, Post. Biochem. 56 (2010) 239–247.
[4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, Modulation of Nrf2 by olive oil and wine polyphenols and neuroprotection, Antioxidants 6 (2017) 73.
[5] S. Amor, P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Polifenol-kivonatok vörösborból és szőlőből: lehetséges hatások a rákos megbetegedésekre, Diseases 6 (2018) 1–12.
[6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): a hagyományos kínai orvoslás egyik legjobb gyógyszerészeti ajándéka, a Front. Pharmacol. 7 (2016) 41–49.
[7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Review: analysis of chemical constituents in Cistanche species, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[8] D. Jedrejek, S. Pawelec, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, Fenil-etanol és iridoid glikozidok azonosítása és előfordulása hat lengyel seprűben (Orobanche spp. és Phelipanche spp., Orobanchaceae), Phytocheae (mistry), 170 2020), 112189.
[9] B. Kontek, D. Jedrejek, W. Oleszek, B. Olas, Antiradical and antioxidant activity of in vitro of hops-derived extracts, gazdag keserűsavakban és xanthohumolban, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1–9.
[10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Szabadgyökös módszer alkalmazása az antioxidáns aktivitás értékelésére, Lebensm. Wiss. Technol. 28 (1995) 25–30.
[11] JR Whitaker, PE Granum, Abszolút módszer a fehérje meghatározására a 235 és 280 nm-es abszorbancia különbségén alapuló, Anal. Biochem. 109 (1980) 156–159.
[12] B. Wachowicz, Adenin nukleotidok madarak trombocitáiban, Cell Biochem. Funkció. 2 (1984) 167–170.
[13] Bartosz G., Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Determination of carbonyl content inoxidatively modified proteins, Methods Enzym. 186 (1990) 464–478.
[15] DM Joel, J. Gressel, LJ (szerk.), Musselman, Parasitic Orobanchaceae: Parasitic Mechanisms and Control Strategies, Springer, Heidelberg, Németország, 2013, 1–10.
[16] Y. Ando, ​​M. Steiner, Thrombocyta membránok szulfhidril és diszulfid csoportjai: diszulfidcsoportok meghatározása, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando, ​​M. Steiner, Thrombocyta membránok szulfhidril és diszulfid csoportjai: szulfhidrilcsoportok meghatározása, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 38–44.
[18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, Phenolic fractions from Trifolium pallidum and Trifolium scabrum aerial parts in human plasma védelmet hyperhomocysteinemia által kiváltott változások, Food Chem. Toxicol. 50 (2012) 4023–4027.
[19] J. Heilmann, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Radical scavenger activity offenilpropanoidglikozidokFMLP-stimulált polimorfonukleáris leukocitákban: szerkezet-aktivitás összefüggések, Planta Med. 66 (2000) 746–748.
[20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Free fenolsavak Shanxi öregedő ecetben: változások az öregedés során és szinergikus antioxidáns tevékenységek, Int. J. Food Prop. 19 (2015) 1183–1193.
[21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Flavonoidok és fenolsavak szerkezete-antioxidáns aktivitása, Free Radic. Biol. Med. 20 (1996) 933–956.
[22] A. Lopez-Munguía, Y. Hernandez-Romero, J. Pedraza-Chaverri, A. MirandaMolina, I. Regla, A. Martínez, E. Castillo, Fenilpropanoid-glikozid analógok: enzimatikus szintézis, antioxidáns aktivitás és elméleti szabad gyökfogó mechanizmusuk tanulmányozása, PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, Antioxidation and cytoprotection Az akteozid és származékai: összehasonlítás és mechanikai kémia, Molecules 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling, HM Rawel, Chokeberry (Aronia melanocarpa) – áttekintés a jellemző összetevőkről és a lehetséges egészségügyi hatásokról, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even, Az étrend és a tápanyagok hatása a vérlemezke-funkcióra, Semin. Thromb. Hemost. 40 (2008) 214–226.
[26] B. Olas, A bogyók multifunkcionalitása a vérlemezkék felé és a bogyó fenoljainak szerepe a szív- és érrendszeri betegségekben, Thrombocyta 5 (2016) 1–10.
[27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, US Harput, I. Sahin-Eredemli, Effects of phenylpropanoid and iridoid glycosides on free radical induced impairment of endothelium-dependent relaxation in patkány aortagyűrűk, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193–197.
[28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Etnikai gyógynövények vizsgálata Orobanche, Cistanche és Boschniakia, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552.
[29] K. Hayashi, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Yagita, Y. Suzuki, az Acteoside, a Stachys sieboldii MIQ egyik komponense, ígéretes antinefritisz szer lehet (3): Az acetonid hatása az intercelluláris expresszióra adhéziós molekula-1 kísérleti nephritis glomerulusokban patkányokban és tenyésztett endothelsejtekben, Jpn. J. Pharmacol. 70 (1996) 157–168.
[30] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Hepatoprotective activity of phenylpropanoids from Cistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120–125.
[31] WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside védi az endothel sejteket a szabad gyökök által kiváltottoxidatívfeszültség, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748.
[32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Isolation and farmacological activity of Phenylpropanoid esters from Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392.
[33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, A gátló hatás nak,-nekfenilpropanoidglikozidokés iridoid glükozidok a szabad gyökök termelésére és a 2 integrin expressziójára humán leukocitákban, J. Pharm. Pharmacol. 58 (2006) 129–135.