A megfelelő gyakorlati szint csökkenti a bélrendszeri diszbiózist és a valeriánsav növekedését, hogy javítsa a neuroplaszticitást és a kognitív funkciókat a műtét után egerekben 3. rész

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

A kísérleti protokollokat és eljárásokat a Virginiai Egyetem Állatgondozási és Felhasználási Intézményi Bizottsága (Charlottesville, VA, USA; protokollszám: 3114) hagyta jóvá.

A memória az egyik olyan képesség, amelyet gyakran használnunk kell mindennapi életünkben. Okosabbá, érzékenyebbé teheti az embereket, és jobban segíti a karriert és az interperszonális kapcsolatokat. Ezért sokan szeretnék javítani a memóriájukon. Kapcsolat van a kísérleti protokollok és a memória között. A továbbiakban vizsgáljuk meg ezt a kérdést.

Először is, a kísérleti protokollok segíthetnek az embereknek javítani a memóriájukat. A kísérlet során az embereknek bizonyos lépéseket kell követniük a kísérleti művelet befejezéséhez. Ez a lépésről lépésre végzett tevékenység fokozott figyelem és koncentráció állapotába hozhatja az emberi agyat, ezzel is elősegítve az agyi funkciók teljesítését. Ugyanakkor a kísérlet során emlékeznie kell néhány kísérleti adatra és kísérleti lépésre, amelyek az agy memóriafunkcióját is gyakorolják. Ha többször is így gyakorol, a memóriája fokozatosan javulni fog.

Másodszor, a memóriafolyamat alatti érzékszervi élmény szintén szorosan összefügg a kísérleti terv kialakításával. A kísérletek során a tervezők gyakran bizonyos konkrét feladatokat határoznak meg a kísérlet során, így a résztvevőknek többször meg kell ismételniük ugyanazt a műveletet, mint például a számok memóriája és írása, a memória és a színblokkok felismerése stb. Ez az ismétlődő tapasztalat erősítheti az embereket. figyelem és memória képességeit, megkönnyítve az emberek számára, hogy ezeket az információkat hosszú távú memóriává dolgozzák fel.

Emellett a kísérletekben reprezentatív ingeranyagok (például képek, hangok, illatok stb.) használata is jó eredményt hozhat. Mert ezek az ingerek beindíthatják az agy izgalmi és memóriafolyamatait, ezáltal javítva az emberek memóriaképességét. Ugyanakkor ezek az ingerek a környezettel és az élethelyzetekkel is párosulhatnak, ezáltal csökkentve a szétválás előfordulását, könnyebben megjegyezhetővé, összefüggőbbé téve az információkat.

Összefoglalva, a kísérleti terv döntő szerepet játszik az emberi memória javításában. Kísérletek elvégzésével az emberek gyakorolhatják kognitív képességeiket, javíthatják memóriaszintjüket, és egyúttal elősegíthetik az agyműködést. Ezért folytatnunk kell az új kísérleti módszerek elsajátítását, és több kísérletben kell részt vennünk, hogy javítsuk memóriaszintünket, és nagyobb mértékben járuljunk hozzá karrierünkhöz, kapcsolatainkhoz és egészségünkhöz. Látható, hogy javítanunk kell a memórián, a Cistanche deserticola pedig jelentősen javíthatja a memóriát, mivel a Cistanche deserticola antioxidáns, gyulladáscsökkentő és öregedésgátló hatással bír, ami segíthet csökkenteni az oxidációt és a gyulladásos reakciókat az agyban, ezáltal védi a az idegrendszer egészsége. Ezenkívül a Cistanche deserticola az idegsejtek növekedését és helyreállítását is elősegítheti, ezáltal javítva a neurális hálózatok összekapcsolhatóságát és működését. Ezek a hatások javíthatják a memóriát, a tanulási képességet és a gondolkodási sebességet, valamint megakadályozhatják a kognitív diszfunkciók és a neurodegeneratív betegségek kialakulását.

Kattintson a Ismerje meg a rövid távú memória javításának módját

Az összes állatkísérletet a National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH kiadványok száma 80–23) végezte, amelyet 2011-ben felülvizsgáltak. A kulcsfontosságú anyagok forrásait a Kiegészítő anyagok kulcsfontosságú forrástáblázata tartalmazza.

Állatok és kísérleti tervezés

Nyolc hetes, 19–22 g tömegű, hím C57BL/6 J egereket állandó környezeti feltételek mellett (hőmérséklet 22–24 fok, 12 órás világos/sötét ciklus és 50 ± 10%-os páratartalom) tartott helyiségben tartottak, ahol szabad hozzáférés biztosított az élelemhez. és vizet.

Mindannyiukat hagyták egy hétig akklimatizálódni a kísérletek előtt. Az első kísérletben véletlenszerűen a következő csoportokba sorolták őket: (1) kontrollcsoport (nem volt kitéve érzéstelenítésnek és műtétnek), (2) gyakorlati csoport (35-40%-os maximális teljesítménnyel edzett, de nem volt kitéve érzéstelenítésnek és műtétnek) , (3) műtéti csoport (a bal nyaki artéria expozíciója 15 percig izoflurán érzéstelenítésben, 2 órán keresztül), és (4)–(6) Exe-l+Sur, Exe-m+Sur és Exe-h+Sur csoportok: 35-kor edzett -40%, 55-60% és 75-80% maximális kapacitással, altatásnak és műtétnek vetették alá őket.

Az állatokat tanulási és memóriatesztekre használták a műtét után 4 nappal kezdődően (n=20), vagy a műtét után 6, 24, 48, 72, 96 és 7 nappal biokémiai vizsgálatokhoz vették az agyukat. (n=9 vagy 14), immunfluoreszcens festéshez a műtét után 48 órával és 19 nappal (n=6), valamint Golgi festéshez a műtét után 19 nappal (n=8).

Az első 4 csoportba tartozó egerek vérét és ürülékét SCFA-k mérésére a műtét után 7 nappal (n=7) és 16 S-analízishez a műtét utáni 3. és 7. napon (n=8) vagy a 4-heti edzésprotokoll végén (n=8) ​​vagy a megfelelő időpontban az első 2 csoportban (n=16). A szövetgyűjtő egerek különböző csoportjai voltak, amelyeket tanulási és memóriatesztekhez használtunk. A második kísérletben az egereket véletlenszerűen besoroltuk (1) a Transcontrol+Sur csoportba és (2) a Trans-exe+Sur csoportba.

Az első csoportba tartozó egerek 500 ul székletoldatot kaptak a kontrollcsoporttól gyomorszondán keresztül, és 600 ul ürüléket kaptak naponta egyszer az antibiotikum-kezelést követően 7 egymást követő napon keresztül, hogy a recipiensekben eltávolítsák a natív bélmikrobiótát. A második csoportba tartozó egerek 500 ul székletoldatot kaptak gyakorló egerektől gyomorszondán keresztül, és 600 ul-t beöntés útján naponta egyszer, 7 egymást követő napon az antibiotikumos kezelés után. A recipiens ürülékét 14 nappal a székletátültetés után gyűjtöttük össze 16S elemzés céljából. Az egereket ezután műtétnek vetették alá.

A tanulást és a memóriát a műtét után 4 nappal (n=15) értékelték. Az agyat biokémiai vizsgálatokhoz gyűjtöttük be, mint az első kísérletben (n=10). A harmadik kísérletben az egereket véletlenszerűen besoroltuk (1) a transzkontroll csoportba és (2) a transzkontroll+sur csoportba. Mindkét csoport egerei ürüléket kaptak a kontroll egerektől. A második csoport 14 nappal a székletátültetés után műtéten esett át. A hippokampuszt 2 nappal a műtét után gyűjtöttük be a GDNF mérésére (n=10). A negyedik kísérletben az egereket véletlenszerűen besorolták (1) a kontrollcsoportba (naív egerek, amelyek nem voltak kitéve semmilyen, ebben a vizsgálatban leírt kísérleti körülménynek), (2) az antibiotikum csoport, amely 7 napig kapott antibiotikumot, és (3) a transz-kontroll csoport, amely kontroll egerekből származó ürüléket kapott.

A tanulást és a memóriát a székletátültetés befejezése után 19 nappal (26 nappal az antibiotikum-kezelés befejezése után az antibiotikum-csoportban) értékelték (n=12). Az ötödik kísérletben az egereket véletlenszerűen besorolták (1) a kontrollcsoportba, (2) a transz-kontroll csoport, amely kontroll egerek ürülékét kapta, és (3) a transz-sebészeti csoport, amely műtéti egerek ürülékét kapott. 

A székletátültetést a második kísérletben leírtak szerint végeztük. A recipiens ürülékét 14 nappal a székletátültetés után gyűjtöttük össze 16 S elemzés céljából (n=10). A tanulást és a memóriát a székletminta begyűjtése után 4 nappal értékelték (n=17). A hatodik kísérletben az egereket véletlenszerűen besorolták (1) műtét plusz normál sóoldat csoportba, akik 200 µl normál sóoldatot (NS) kaptak intraperitoneális injekcióval egyszer. hetente 4 hétig, majd műtét, (2) gyakorlat plusz normál sóoldat plusz műtéti csoport, akik 200 µl NS-t kaptak intraperitoneális injekcióval hetente egyszer a 4-hetes gyakorlat során 35-40%-os maximális kapacitás mellett, majd műtét ) testmozgás plusz valeriánsav plusz műtéti csoport, akik valeriánsavat (200 mg/kg 200 µl-ben) kaptak intraperitoneális injekcióban hetente egyszer a 4-heti gyakorlatok során 35-40%-os maximális kapacitással, majd műtéttel.

Az injekciót a hét első edzésnapjának reggelén adták be. A műtét napján egy további injekciót adtunk be. A viselkedési (n=13) és a biokémiai (n=10) eredményeket a második kísérlethez hasonlóan értékelték. A hetedik kísérletben 13-hetes (23-27 g súlyú) férfi C57BL/ 6 J egeret véletlenszerűen besoroltunk (1) a kontrollcsoportba, (2) az NS csoportba, amely 4 µl NS-t kapott intracerebroventricularis injekcióban naponta egyszer 4 egymást követő napon, és (3) a valeriánsav csoportba, amely 4 mg/kg-ot kapott 4 µl intracerebroventricularisan. injekció naponta egyszer 4 egymást követő napon keresztül. A bal és a jobb agykamrát váltakozó ütemezés szerint fecskendezték be. A tanulást és a memóriát az injekció beadása után 4 nappal értékelték (n=15).

A nyolcadik kísérletben az egereket véletlenszerűen besorolták (1) sebészeti és dimetil-szulfoxid (DMSO) csoportba, akik DMSO-t kaptak intracerebroventricularis injekcióval naponta egyszer 4 egymást követő napon a műtét napjától kezdődően, (2) műtéti plusz C3ar antagonista csoportba, amely C3ar antagonistát (SB290157) kapott. ) intracerebroventricularis injekcióval naponta egyszer 4 napon keresztül, a műtét napjától kezdődően, (3) edzés plusz DMSO plusz műtéti csoport, akik DMSO-t kaptak intracerebroventricularis injekcióban naponta egyszer 4 egymást követő napon, a műtéti naptól kezdődően a 4-hetes gyakorlatot követően 35 évesen. –40%-os maximális kapacitás, és (4) edzés plusz C3ar agonista plusz műtéti csoport, akik C3aragonistát kaptak intracerebroventricularis injekcióban naponta egyszer 4 egymást követő napon, a műtéti naptól kezdődően a 4-hetes gyakorlatot követő 35-40%-os maximális kapacitás mellett . A viselkedési teszteket a műtét után 4 nappal kezdtük, a fent leírtak szerint (n=15).

A kilencedik kísérletben az egereket véletlenszerűen besorolták (1) a kontrollcsoportba, (2) a műtéti csoportba, (3) a műtéti plusz GDNF-csoportba, amelyek a műtét után intracerebroventricularis injekcióval kaptak GDNF-et, és (4) a műtét plusz hővel inaktivált GDNF-et. csoport, akik hővel inaktivált GDNF-et kaptak intracerebroventricularis injekcióval, amikor műtétet hajtottak végre. A hippocampuszokat a műtét után 48 órával gyűjtöttük be ELISA-vizsgálat céljából (n=12). Egy hét akklimatizáció után 30-36 g tömegű öreg egereket (18-hónapos hím C57BL/6 Jegerek) használtunk. három tanulmány. Az első kísérletben az idős egereket véletlenszerűen besorolták (1) a kontrollcsoportba, (2) abba a gyakorlati csoportba, amelyben az egerek 4-hetes gyakorlatot végeztek 35–40%-os maximális kapacitással, (3) a műtéti csoportba, és (4) az Exe+Sur csoport, amelyben az egerek 4-hetes gyakorlatot végeztek 35–40%-os maximális kapacitással a műtét előtt. Az állatokat tanulási és memóriatesztekhez használták a műtét után 4 nappal kezdődően (n=12), vagy agyukat biokémiai vizsgálatokhoz gyűjtötték be a műtét után 48 órával (n=10 vagy 12), immunfluoreszcens festéshez 48 órával. és 19 nappal a műtét után (n=6), Golgfestés esetén pedig a műtét után 19 nappal (n=8).

A 4 csoport egereiből vért és ürüléket vettünk SCFA méréshez a műtét után 7 nappal (n=7) és 16 S elemzéshez a műtét után 3 és 7 nappal (n=8) vagy a végén. a 4-hetes gyakorlati protokollban vagy a megfelelő időpontban az első 2 csoportban (n=16). A szövetgyűjtéshez használt egerek különböző csoportok voltak, amelyeket tanulási és memóriatesztekhez használtak. A második kísérletben az idős egereket véletlenszerűen besorolták (1) a Trans-Old Control+Sur csoportba és (2) a Trans-Old Exe+Sur csoportba. Ezeket az egereket a székletátültetés után 14 nappal műtétnek vetették alá, amint azt a második kísérlet fiatal felnőtt egereken. A tanulást és a memóriát a műtétet követő 4. napon értékelték (n =10).

A harmadik kísérletben idős egereket véletlenszerűen besoroltunk a (1) műtét plusz NS csoportba; (2) gyakorlat plusz NS plusz műtéti csoport; és (3) gyakorlat plusz valeriánsav plusz műtéti csoport. Ezek az egerek kondicionáló gyakorlatot és valeriánsavat kaptak, amint azt a fiatal felnőtt egereken végzett hatodik kísérletben leírták. A viselkedési eredményeket a műtét után 4 nappal kezdődően tesztelték (n=11). A fent leírt mintanagyságok (n) az egyes csoportokba/állapotokba véletlenszerűen besorolt ​​állatok számát reprezentálták. Ez az állatok száma az egyes kísérletek legalább 3 ismétlésének összege volt. Az állatokat véletlenszerűen csoportokba osztottuk számítógéppel generált randomizációs táblázatok alapján minden kísérletben.

Maximális terhelési kapacitás meghatározása és edzésedzés

A műtét előtt a {{0}}hetes és 18-hónapos egereket 4-hetes futópadon végzett aerob gyakorlatnak tették ki, miután meghatározták az egyes egerek maximális gyakorlati kapacitását. Ezt a meghatározást a korábban leírtakhoz hasonló módon végeztük [47, 48]. Röviden összefoglalva, az egereket az első napon hozzászoktattuk a futópadhoz, a lengéscsillapító rács kezdeti beállításai 25 V, 0,3 mA és 2 Hz, a sebesség és a dőlésszög pedig nulla volt 10 percig. A futópad sebességét ezután 10 cm/s-ra növeltük, a dőlésszöget 50-re állítottuk 10 percig. Ezután a futópad sebességét és dőlését 15 cm/homok 100-ra növeltük 5 percre.

The speed was then increased by 5 cm/s every 5 min to an average maximal speed of 70 cm/s in young mice and 60 cm/s in old mice (around 65–75 cm/s and 55–65 cm/s, respectively), as they reached the criteria for exercise-induced exhaustion. These criteria were: (1) 10 consecutive seconds on the electric grid; (2) spending >a rácson töltött idő 50%-a; és/vagy (3) a motiváció hiánya a kézi ingerléshez. Az egeret azonnal eltávolítottuk a megfelelő sávból, amint egy vagy több kritérium teljesült. A következő napon az egerek ugyanazon a futópadon futottak az átlagos maximális sebesség felével (fiatal egereknél 35 cm/s vagy idős egereknél 30 cm/s) és 100 dőlésszöggel, amíg ismét el nem érték a kimerültségi kritériumok egyikét, és a A folyamatos edzést minden egér maximális gyakorlati kapacitásaként rögzítettük. E két protokoll után az egereket 30 percig külön tartottuk, hogy elkerüljük az edzést követő észrevehető agresszív viselkedést.

After resting for 2 days, mice assigned to exercise training groups were subjected to a 4-week protocol of forced treadmill running at 35–40%, 55–60%, or 75–80% of the maximal capacity, respectively, for 5 days a week. Mice that were shocked for >5% of the total daily exercise time in 2 consecutive days or >A 3 egymást követő napon a teljes idő 3%-a kizárásra kerül.

Az ugyanabban a kísérletsorozatban szereplő, nem testedző csoportokat, mint a gyakorlati csoportokat, naponta körülbelül 30-40 percre nem mozgó futópadon helyezték el. Összesen 5 másodpercig 10 ütést kaptak, ez az átlagos sokkmennyiség, amit egy edzéscsoportba tartozó egerek naponta kaptak, a nem mozgó futópadon való tartózkodásuk során. Ha egy kísérletsorozatnak nem volt gyakorlati csoportja, a kísérletsorozatban egyetlen eger sem kapott sokkot.

Antibiotikumos kezelés

Az átültetett mikrobiota megtelepedésének elősegítése érdekében a recipiens egereket naponta egyszer antibiotikumos kezelésben részesítették 7 egymást követő napon, hogy eltávolítsák eredeti bélmikrobiótájukat, ahogyan mi és mások is leírták [11, 36]. Röviden, 10%-os magnézium-szulfáttal (200 ul/10 g, kétszer 3 órás időközönként) végzett öblítés után gyomorszondán keresztül az első napon a C57BL/6 J egerek amoxicillin/klavulánsavat (200 mg/kg), metronidazolt ( 200 mg/kg) és cefazolin (2 g/kg) gyomorszondán keresztül beöntéssel (300 ul gyomorszondával és 400 ul NS-ben beöntéssel) reggel naponta egyszer 7 egymást követő napon, valamint amoxicillin/klavulánsav (20 mg/kg) ), metronidazolt (20 mg/kg) és cefazolint (300 mg/kg) 200 ul NS-ben naponta intraperitoneális injekcióban ugyanazon 7 napon keresztül (16:00 és 17:00 között). A bakteriális keresztszennyeződés elkerülése érdekében az egérkezelést, valamint a ketrec és a vizespalack napi cseréjét tiszta köpenyben és kesztyűben, szellőző kapucniban viselő technikusok végezték. Ezeknek az egereknek az ürülékét 24 órával az utolsó kezelés után 16 S analízishez gyűjtöttük össze, hogy meghatározzuk a hatást.

Székletátültetés

A bélmozgást követő 30 percen belül a kontroll egerektől, közvetlenül a 4-hetes gyakorlat befejezése után egerektől, valamint a műtét után 2-8 nappal az egerektől gyűjtött friss székletpelleteket 100 mg/ml steril sóoldattal hígítottuk. – 10 donort minden kísérleti körülmény között összekevertünk és újra szuszpendáltunk sóoldatban. Röviden, a székletet 5 percig örvénykeverjük, majd egy 70 μm-es nylon sejtszűrőn engedjük át az emésztetlen élelmiszerek és a szemcsés anyagok eltávolítására. A recipiens 500 ul megfelelő székletoldatot kapott gyomorszondán keresztül reggel, és 600 ul-t délután beöntéssel az utolsó antibiotikum adag után 24 órával, 7 egymást követő napon. Az átültetett egereket a székletátültetés után 2 hétig tartottuk, mielőtt székletgyűjtésnek vetették volna alá őket 16S-analízis és műtét céljából.

Érzéstelenítés és műtét

A műtétet a nyaki verőér bal oldali expozíciójával végeztük, amint azt korábban leírtuk [6]. Röviden, az egereket 2%-os izofluránnal érzéstelenítettük, és az eljárás során 100% oxigént tartalmazó maszk segítségével tartották a spontán légzést. A rektális hőmérsékletet figyeltük és 37 fokon tartottuk fűtőtakaró segítségével. Egy 2- cm-es középvonali nyakmetszést és lágyszövet-disszekciót végeztünk 1- cm hosszú közös artériával a vagus ideg károsodása nélkül, miután az egeret legalább 20 percig izofluránnal érzéstelenítettük. A sebet ezután öblítették és lezárták egy 4-0 sebészeti varrat segítségével. A sebészeti beavatkozást steril körülmények között hajtották végre, és körülbelül 15 percig tartott fiatal egerekben és 12 percig öreg egerekben. Az általános érzéstelenítés teljes időtartama 2 óra volt. A műtét után minden állat 3 mg/kg bupivakain szubkután injekciót kapott. Az érzéstelenítés során nem észleltek reakciót a lábujj becsípésére.

Intracerebroventricularis injekciók

Amint fentebb leírtuk, néhány egércsoport intracerebroventricularis injekciót kapott. Röviden, ezeket az egereket sztereotaktikus fejkeretbe helyeztük hason fekvő helyzetben. Az injekció beadási helye a következőképpen volt elhelyezve: 100 mm mediolaterális, −0,3 mm anteroposterior a Bregmától és −2,5 mm dorsoventralis mélység. A műtéten lévő egerek és a GDNF csoport intracerebroventricularis injekciót kapott 1{{ 20}} ug/kg rekombináns egér GDNF 3 ul foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) a korábbi vizsgálatokban leírtak szerint [6, 26], és a műtéti plusz hővel inaktivált GDNF csoport egerei hődenaturált injekciót kaptak (5 min 1000 C). ) GDNF-oldat. A műtéten átesett egerek és a C3ar antagonista csoport 10 ug/kg SB290157-et kaptak 3 ul 5% DMSO-t tartalmazó PBS-ben a műtét után 0, 24, 48 és 72 órával. A gyakorlatban részt vevő egerek, valamint a C3ar agonista és a műtéti csoport 1 ug/kg C3ar agonistát kaptak 3 ul 5% DMSO-t tartalmazó PBS-ben, az SB290157-tel egyidejűleg. A hatodik kísérletben a valeriánsav csoportba tartozó egerek 4 mg/kg valeriánsavat kaptak 4 µl-ben 4 egymást követő napon.

Viselkedési tesztelés

A tanulást és a memóriát újszerű tárgyfelismeréssel és a Barnes-labirintus teszttel értékelték. Minden viselkedési tesztet délelőtt 10:00-17:00kor végeztek egy hangszigetelt szobában. A tanulási és memóriatesztekben használt egereket nem használták semmilyen biokémiai vizsgálathoz, hogy elkerüljék e tesztek hatását.

Újszerű objektum felismerési teszt

Ahogyan mi és mások korábban leírtuk [20, 49, 50], az egereket nyitott terepi kamrába helyeztük 5 percre szoktatás céljából a műtét után 4 nappal. A tesztet a következő módon végeztük el. A tanulás napján két azonos tárgyat a kamra szomszédos szögeiben helyeztünk el. Az egereket a tárgyak felé fordított háttal helyeztük be a kamrába, és hagytuk, hogy 5 percig szabadon felfedezhessék a kamrát. Az állatot akkor távolítottuk el, ha a teljes feltárási idő két objektumon volt<5 s. One of the objects was replaced by a novel object 30 seconds or 24 hours later. The mouse was put into the chamber with their backs turned toward the objects and allowed to explore for 5 min. Animal behavior was recorded by ANY-maze behavioral tracking software (Stoelting Co., IL). Exploratory time of new (T2) and old (T1) objects within 5 min was recorded and the memorization ability of the mouse was quantified by discrimination index: DI = T2 / (T1 + T2). The DIs at 30 s and 24 hours after the training reflected the instant and long-term memory, respectively. The field was always provided with even light, and the objects and fields were cleaned with 70% ethanol after each test.

Barnes labirintus

Hét nappal a műtét után az állatokat Barnes-labirintusnak vetették alá, hogy teszteljék térbeli tanulásukat és memóriájukat, amint azt korábban leírtuk [6, 49]. A Barnes-labirintus egy kör alakú platform 20 egyenlő távolságban elhelyezett lyukkal (SDInstruments, San Diego, CA). Az egyik lyuk egy sötétkamrához volt csatlakoztatva, amelyet céldoboznak neveztek. A teszt azzal kezdődött, hogy állatokat helyeztek el a Barnes-labirintus közepén. Averzív zaj (85 dB) és erős fény (200 W) a platformon arra ösztönözték az egereket, hogy megtalálják ezt a dobozt. 4 napos edzés után a referenciamemóriájukat az 5. és a 12. napon tesztelték. Az időszak alatt nem végeztek tesztet. Az 5. naptól a 12. napig. A céldobozba való belépés késleltetését minden kísérlet során egy ANYMaze videokövető rendszer (SD Instruments) rögzítette.

For more information:1950477648nn@gmail.com