A szaunák hasznosak vagy károsak az autoszomális domináns policisztás vesebetegségre? Vizsga modellegérrel Ⅰ

Absztrakt háttér:Hősokkfehérjék (Hsps), amelyek expresszióját ahőkezelés, funkciója a vesék védelmébenáltalaz apoptózis elnyomásaésa vesetubuláris életképesség fenntartása. Ezenkívül a közelmúltban jelezték, hogy a Hsps expressziója az autoszomális domináns policisztás vesebetegség (ADPKD) terápiás célpontja lehet. Megvizsgáltuk aszáraz szauna terápia hatásaADPKD modell egereken.

KATTINTSON IDE, HOGY TERMÉSZETES SZERVES CISTANCHE KIVONATOT SZEREZZE MEG 25% ECHINAKOZIDOT ÉS 9% AKTEOZIDOT A VESEMŰKÖDÉSÉRT

Módszerek és eredmények:Az egereket (hím DBA/2FG-pay egerek) három csoportba soroltuk: kontrollok, TS: fizető egerek, akiket hosszan tartó szaunázásnak vetettek alá 4% szacharózt tartalmazó vízzel, SW: fizető egerek 4% szacharózt tartalmazó vízzel. A TS csoportot hetente kétszer szaunázták négy héten keresztül. A TS csoport megközelítőleg 39.{5}} fokos végbélhőmérsékletet ért el és tartott fenn, amíg óvatosan eltávolították őket a távoli infravörös sugárzó eszközről. 4 hét szaunázás után a kreatinin és a vér-karbamid-nitrogén (BUN) szintet enzimes módszerrel határoztuk meg. A hősokkfehérjét (HSP) vagy a sejtnövekedést és a mérethez kapcsolódó fehérjéket Western blottal elemeztük. A TS csoport kis mértékben magasabb kreatinin és BUN szintet mutatott, mint a kontroll és az SW csoport, azonban a különbségek nem voltak szignifikánsak. Azonban a ciszta megnagyobbodás a TS csoportban szignifikánsan csökkent a kontroll csoporthoz képest. A HSP90 kifejezés enyhén csökkent a TS és SW csoportban a kontrollcsoporthoz képest (p < 0.01 vagy p < 0,001, vs. kontroll), csakúgy, mint az Erk kifejezés , amely a ciszták fejlődéséhez és proliferációjához kapcsolódik (p < 0,05, TS vs. kontroll). A Hsp27 expressziója és foszforilációs szintje az SW csoportban összehasonlítható volt a kontrollcsoportéval. A TS csoportban azonban megnövekedett a Hsp27 és a foszforiláció (NS) szintje. A pro-kaszpáz-3 expressziója a TS-csoportban kis mértékben alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoportban. A kaszpáz-3 aktivitása azonban egyik csoportban sem mutatott eltérést.

Következtetés:A tanulmány eredményei azt mutatták, hogy a 4 hetes szaunakezelés átmeneti kiszáradást és ezzel összefüggő veseműködési zavarokat okozhat, és a fokozott Hsp27 expresszió által a ciszták növekedésének serkentéséhez vezethet. Ezen túlmenően arra a következtetésre jutottunk, hogy a kiszáradás és a ciszta növekedés megelőzhető, ha megfelelő mennyiségű vizet fogyasztunk közvetlenül a szaunakezelés után.

I. Bevezetés

Autoszomális domináns policisztás vesebetegség(ADPKD) egy genetikai rendellenesség, amelyet mindkét vesében számos ciszta növekedése jellemez. Az ADPKD-t túlnyomórészt a policisztás vesebetegség 1 (PKD1) és PKD2 gének mutációi okozzák, amelyek a policisztin 1-et (PC1) és PC2-t kódolják. A betegség több évtizedes lefolyása során a betegekben nagy, folyadékkal teli vese ciszták alakulnak ki, amelyek károsítják a veseműködést. Jelenleg Japánban az ADPKD-ben szenvedő betegek számát 31,000-ra becsülik, ami az összes dializált beteg körülbelül 3-5%-át teszi ki). Az ADPKD-s betegek körülbelül 50%-ánál 602 éves korukra végstádiumú vesebetegség alakul ki. A tolvaptánt, a vazopresszin receptor 2 (V2) antagonistát az ADPKD első terápiás szereként hagyták jóvá, és klinikai alkalmazása 2014 májusában kezdődött Japánban. Bár ez egy hatékony gyógyszer, amely csökkenti a ciszták növekedési ütemét, jelenleg nincs gyógymód az ADPKD-re, és nem lehet megállítani a cisztaképződést a vesében.

A termikus terápiát, beleértve a balneoterápiát (BT) és a spa terápiát (ST), világszerte gyakran alkalmazzák fizioterápiaként vagy alternatív terápiaként. Klinikai körülmények között a termikus terápia fő célja a hatékony kezelési eredmények elérése a normál szövetek károsítása nélkül. Egy közelmúltbeli szisztematikus áttekintés kimutatta, hogy a BT és az ST jelentős fájdalomcsillapítást és jobb életminőséget biztosít a váz- és izomrendszer vagy a kötőszövet krónikus betegségeiben. A termikus stimuláció hősokk-fehérjéket (Hsps) indukál, amelyek fehérje chaperon funkciójuk révén elengedhetetlenek a sejtek túléléséhez. A Hsps szerepe a vese egészségében és betegségeiben változó. A Hsps-indukció előnyös vagy káros lehet a vesére, az adott Hsps-től, a sejttípustól és a kontextustól függően). A veseszövetben a Hsps fontos része az intracelluláris védelmi rendszernek, amelyet különböző típusú celluláris stressz aktivál. A sejten belüli különböző Hsps-ek stabilizálják a sejtszerkezeteket, és fokozzák a sejtek apoptózissal és nekrózissal szembeni rezisztenciáját6), 7). Az elmúlt években arról számoltak be, hogy a Hsps káros szerepet játszanak az ADPKD-ben, ezért terápiás célpontok8), 9). Ezért célul tűztük ki a szaunák hatásának vizsgálatát ADPKD modellállatokon, amikor a hőterhelés megismétlődik, amely a végbél hőmérsékletét kb. 2 fokkal emeli és kb. 30 percig fenntartja. II Anyagok és módszerek 1. Autoszomális domináns policisztás vesebetegség (ADPKD) modell egér Minden állatkísérletet a Kumamoto Egészségtudományi Egyetem által jóváhagyott, laboratóriumi állatok gondozására és használatára vonatkozó irányelvek szerint végeztek (18-07 sz.) . Hím DBA/2FG-pcy (pcy) egereket10), 11) (8 hetes, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Japán), kezdeti testtömegük 20,9±0,7 g volt ADPKD modell egerekként. kísérlet. Hím DBA egereket (8 hetes, n=3) használtunk referenciaként az ADPKD egérmodellhez. Az 1. ábra a megjelenést és a kimetszett vesét mutatja a pcy egerek tipikus példájaként (1A, B ábra). Valamennyi állatot szabályozott páratartalom és hőmérséklet mellett tartottak 12:12-h fény/sötét ciklus mellett, és szabad hozzáférést kaptak a szokásos egértáphoz és csapvízhez.

Kilenc (8 hetes) pcy egeret véletlenszerűen a következő három csoportba osztottak: kontrollcsoport: pcy egerek kontrollként (n=3), TS csoport: ismételt szisztémás hőstimulációnak kitett pcy egerek (n {{3} }); és SW csoport: pcy egerek, amelyek 4% szacharózt tartalmazó vizet kaptak (n=3). A TS csoportba tartozó egereket egy éjszakán át 4% szacharózt tartalmazó vízzel látták el, szisztémás hőstimulációt követően, hogy megakadályozzák a kiszáradást. Egy korábbi tanulmányunkban azt találtuk, hogy a testsúlycsökkenés körülbelül 3–4% volt a szisztémás termikus stimuláció után12). Amikor 4%-os szacharóz vizet adtak pcy egereknek, az elfogyasztott víz mennyisége jelentősen, 5,6 ± 0,6 ml-ről 7,4 ± 0,7 ml-re nőtt (p < 0,001). 1C ábra). Az éjszakai 4%-os szacharóz vízbevitel valóban magas folyadékbevitel volt, ami a testtömeg 14 ± 7%-ának felel meg. Az SW csoport ugyanolyan gyakorisággal fogyasztott vizet egy éjszakán át, mint a TS csoport.

1A ábra: DBA egér (Lt) és 2FG-pcy egér (Rt). B: DBA (Lt) vagy 2FG-pcy (Rt) vese, skála=1 cm. C: Szaunázás után egy éjszakán át fogyasszuk el a vizet vagy a 4%-os szacharózos vizet 8 hetes korú egereknek. Az adatok átlag ± SD formában jelennek meg. n=3. ＊＊＊ p < 0,001 (A statisztikai elemzés páros T-próbát használt).

2. Szisztémás termikus stimuláció (szauna)

A szauna hőintenzitását egy korábbi tanulmány alapján határozták meg13). Egyes pcy egerek rektális hőmérséklete azonban meghaladta a 42 fokot a normál DBA egerekhez és a 129X1/SvJ egerekhez képest kis testtérfogatuk miatt. Ezért a végbél hőmérsékletét 1 fokkal megkísérelték emelni, de a távoli infravörös sugárzású száraz szauna rendszer (a Kagoshima Egyetem által biztosított) szabályozásának korlátai miatt a rektális hőmérsékletet körülbelül 39 fokra emelték. Nem érkezett jelentés az ADPKD szaunák gyakoriságáról; ezért a szaunázás és a szív- és érrendszeri betegségek, valamint a halálozás egyéb okainak összefüggését vizsgáló tanulmányban megállapított minimális hatékony szaunázási gyakoriságot (heti kétszer) elfogadták Laukkanen és munkatársai14). Pontosabban, az egerek 43 fokos szauna kezelést kaptak 10 percig, majd 37 fokon 35 percig, hogy a végbél hőmérsékletét 37,1 ± 0,1 fokról 39,3 ± 0,3 fokra emeljék a távoli infravörös sugárzású száraz szauna rendszer. Az egerek végbélhőmérsékletét körülbelül 39.{20}} fokon tartottuk, amíg ki nem vették őket a szaunakészülékből. A TS csoport négy hétig volt kitéve a szaunának, hetente kétszer.

3. Analitikai eljárás

A fiziológiai adatokat a négyhetes vizsgálati időszak végén minden egértől nyertük. Huszonnégy órás vizeletmintákat vettünk metabolikus ketrecekben, és meghatároztuk a folyadékbevitelt. Vérmintákat vettünk a vena cava inferiorból, és a plazma kreatinin és vér karbamid nitrogén (BUN) szintjét Hitachi 7180 Biochemistry Automatic Analyzer (Hitachi High-Technologies Corporation, Tokió, Japán) Aqua-auto Kainos CRE készülékkel mértük. -II tesztkészlet vagy UN-II tesztkészlet (Kainos, Tokió, Japán) enzimes módszerrel.

4. Szövettani vizsgálatok

A veséket 4%-os paraformaldehid-foszfát pufferoldattal rögzítettük és paraffinba ágyaztuk. A vesemintákat 2-µm-es időközönként metszettek, és hematoxilinnel és eozinnal (H&E) megfestették, a tubulusok cisztáit pedig egérenként 2 metszeten (jobb vese) határoztuk meg ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, EGYESÜLT ÁLLAMOK). A nagyobb nagyítással (× 40) azonosított szövetszakadásokkal és buborékokkal rendelkező területeket kizártuk az elemzésből, amint azt korábban közöltük15).

5. Western-blot

Nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézist (SDS-PAGE) és blottolást végeztünk standard eljárásokkal. A 15 µg fehérjét tartalmazó alikvotokat SDS-PAGE-nak vetettük alá. A következő fehérjék ellen termelődött antitesteket használtuk: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), phospho-Hsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Technology), total-Akt (1:1,000, #9272, Cell Signaling Technology), phospho-Akt (1:1,000, #9275, Cell Signaling Technology), Erk1 /2 (1:1,000, #9102, Cell Signaling Technology), phospho-Erk1/2 (1:1,000, #9101, Cell Signaling Technology), mTOR (1:1) ,000, #2972, Cell Signaling Technology), phospho-mTOR (1:1,000, #2971, Cell Signaling Technology), kaszpáz 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, Egyesült Királyság), hasított kaszpáz-3 (1:1,000, #9661, Cell Signaling Technology) és -aktin (1:1,000, sc-130656, Santa Cruz Biotechnológia). A blotokat az ECL Prime Western blotting detektáló rendszerrel (GE Healthcare, Egyesült Királyság) detektáltuk a gyártó utasításai szerint. Az adatok relatív kvantifikációt mutattak az -aktinnal szemben, amelyet belső kontrollként használtunk.

6. Statisztikai elemzés

A statisztikai elemzéshez a TS és SW csoportok adatait Mann-Whitney U teszttel hasonlítottuk össze. A csoportokat egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) hasonlították össze, majd Tukey-teszttel a különbségek azonosítására. A különbségeket p < 0,05 értéknél tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Az adatokat átlag ± standard deviáció (SD) vagy átlag ± átlag hibája (SEM) formájában fejezzük ki. A statisztikai elemzéshez GraphPad Prism 6-ot (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) használtunk.

A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszterna exportőre:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

Vásároljon további specifikációkért:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop