A Cistanche leveleinek kémiai összetevői

Absztrakt: CistancheA leveleket régóta használják hagyományos orvosláskéntkezelésébenischaemiás stroke, angina, ésmagas vérnyomásés egészséges italként éskozmetikai számáraöregedésgátló. Ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy a lehető legtöbb vegyületet izolálják az etanolos kivonatbóla datolyaszilva leveleiből a biológiailag aktív vegyületek azonosításához. Az antioxidáns hatása datolyaszilva levelek etanolos kivonatából származó etil-acetátos réteget mutattuk be2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) vizsgálat és online nagy teljesítményű folyadékkromatográfia-2,20 -kazinó-bisz (3-etilbenzotiazolin-6-szulfonsav) (HPLC-ABTS) elemzés. Egy új flavonoid,Kaempferol-3-O- -D-2"-kumaroilgalaktozid (1), valamint egy új természetes vegyület, a kaempferol-3-O- -D-2"-feruloil-glükozid (3) izoláltuk az etil-acetátos rétegből, a korábban 25 vegyülettel együttismert vegyületek, beleértvetizennégy flavonoid, egy ionon, két kumarin, hét triterpenoid,és egy acetofenon. A spektrometriai és spektroszkópiai adatok értelmezése határozta meg szerkezetüket. Minden izolált vegyületet gyorsan kiértékeltünk egy online módszerrelHPLC-ABTSpróba, és ezek közül vegyületek4–8, 11, 13, 15, és16 világosan megmutattaantioxidáns hatások. Aezen vegyületek mennyisége a kivonat {{0}},3-0,65 százaléka volt.

Kulcsszavak:Dioszpirosz kaki; datolyaszilva levelek; flavonoid; antioxidáns

Kattintson ide, hogy flavonoidokban gazdag Cistanche kozmetikai öregedésgátló

1. Bemutatkozás

Diospyros kakiThunb. (datolyaszilva) az Ebenaceae családjába tartozik, és széles körben elterjedtKoreában, Kínában és Japánban terjesztik. Gyümölcsét frissen vagy szárítva fogyasztják, míg a levelei igenrégóta hagyományos gyógyszerként használják ischaemiás stroke, angina, magas vérnyomás,érelmeszesedés és fertőző betegségek [1]. Ezenkívül a leveleit hasznosítottákmint egészséges italok és kozmetikumok öregedésgátló tulajdonságaik és képességük miattsegít megelőzni a koleszterin és a melanin felhalmozódását [1]. A legújabb kutatások azt sugalltákhogy a datolyaszilva levelek kivonatai biológiai tulajdonságok széles skálájával rendelkeznek,beleértve a gyökfogást, a neuroprotekciót, a trombózisgátlást, az érelmeszesedés elleni küzdelmet,és allergiaellenes [2–6]. Egy korábbi fitokémiai vizsgálat arra utalt, hogy különbözőtípusokflavonoidokés a terpenoidok a fő összetevők [7] és számos tannin,naftokinonokat, kumarinokat, iononokat és zsírsavakat is jelentettek [8–12]. A reaktív oxigénfajták (ROS) olyan reaktív molekulák, amelyek biológiai rendszerekben keletkeznek,és a ROS képződése és eliminációja közötti egyensúly normál körülmények között jól szabályozottsejtfiziológia [13]. A ROS túlzott képződése azonban oxidatív károsodást okoz,és viszont az öregedés és az életkorral összefüggő betegségek, köztük a rák, a cukorbetegség és a Parkinson-kórbetegség [14]. Ezért az antioxidánsok, például a flavonoidok és a fenolos vegyületek felfedezéseígéretes stratégia lehet e betegségek kezelésére.

A biológiailag aktív vegyületek felkutatására irányuló folyamatos projektünk részeként [15], aa datolyaszilva etanolos (EtOH) kivonatának és oldószeres megoszlásának antioxidáns hatásaa leveleket 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) teszttel és online nagy teljesítményű teszttel értékeltékfolyadékkromatográfia-2,20 -kaszinó-bisz (3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsav)(HPLC-ABTS) elemzés. A datolyaszilva levelein végzett fitokémiai vizsgálat vezetett az izoláláshozegy új flavonoid (1), egy új természetes vegyület (3), és25 korábbanismert vegyületek. A spektroszkópiai és spektrometriai módszerek alkalmazása jellemezte a szerkezeteket. Az összes izolált vegyületet gyorsan szűrtükantioxidáns hatás az online HPLC-ABTS segítségével. Továbbá a mennyiségi elemzésaz összes izolált vegyületet elvégeztük a jelen vizsgálatban.

2. Eredmények és megbeszélés

2.1. A datolyaszilva leveleinek antioxidáns hatása

A datolyaszilva levelek etanolos (EtOH) kivonatának antioxidáns hatását értékeltüka DPPH-n keresztüli előzetes szűréshez (ábra1A). A 0.125 mg/ml aa kivonat a DPPH gyök körülbelül 80 százalékát, míg az aszkorbint 0,025 mg/mlsav tette ki a gyök 94 százalékát. Az online HPLC-ABTS vizsgálatot gyorsan elvégeztükbiztosítsa ezen eredmények megbízhatóságát (ábra1D). Belső anyagként gallusavat és Troloxot használtunkszabványoknak. A kromatogram 734 nm-en (negatív csúcs) azt sugallta, hogy kbkilenc összetevőnek lehet antioxidáns hatása. galluszsav és trolox (6-hidroxi- 2,5,7,8-tetrametil-kromán-2-karbonsavsav) belső standardként használták annak biztosításáraaz eredmények megbízhatósága. Arra a következtetésre jutottak, hogy ezeknek a csúcsoknak a többsége flflavonoid származék voltmint a flavonoid glikozid és a flavanol, az elvégzett dereplikációs elemzés alapjána vegyületek ultraibolya (UV) és tömegspektrumának összehasonlításával a publikáltadat. A bioassay által irányított frakcionálás arra utalt, hogy ezek az antioxidáns vegyületekbőséges az etil-acetátos (EtOAc) rétegben, míg a víz (H2O) réteg gyengének mutatkozotttevékenység (ábra1B,C). 

1. ábra: A datolyaszilva levelek EtOH-kivonatának (A), EtOAc-rétegének (B) és HO-rétegének (C) DPPH-megkötő hatásai: (D) Az EtOH-kivonat online ABTS-HPLC kromatogramja.

2.2. Fitokémiai vizsgálat

Ezen antioxidáns vegyületek azonosítására különböző kromatográfiás és spektroszkópiaimódszereket végeztünk a sejtek izolálására és szerkezeti jellemzésérevegyületek. Egy új flflavonoid (1) és egy új természetes vegyület (3) aaz etanolos kivonat etil-acetátos rétege 25 korábban közölt vegyülettel együtt,nevezetesen kaempferol-3-O- -2"-kumaroil-glükozid (2) [16], ( plusz )-katekin (4) [17], hiperozid(5) [17], izokvercitrin (6) [18], kvercetin-3-O- -2"-galloilgalaktozid (7) [19], kvercetin-3-O- -2"-galloil-glükozid (8) [20], trifolin (9) [18], asztragalin (10) [18], kaempferol-3-O- - 2"-galloilgalaktozid (11) [21], kaempferol-3-O- -arabinozid (12) [22], kaempferol-3-O- - 2"-galloil-glükozid (13) [23], kvercetin-3-O- -2"-kumaroil-glükozid (14) [24], kvercetin(15) [15], kempferol (16) [25], (6S,9S) - rozozid (17) [26], skopoletin (18) [27], umbelliferon(19) [28], 1-(2,4-dihidroxi-6-metilfenil)etanon (20) [29], barbinersav (21) [30], dioszpirsav B (22) [7], rotungénsav (23) [31], pomolsav (24) [32], sziarezinolsav(25) [33], oleanolsav (26) [25] és urzolsav (27) [25] spektroszkópiai ésspektrometriai és fizikai adatok összehasonlítva a publikált adatokkal és vékonyrétegkromatográfiás (TLC) analízis (ábrák).2 és3). Ezek közül a vegyületek2, 16, 17, 19, 20, és24 először izoláltákD. kaki. 

Az 1. vegyületet sárga por formájában kaptuk, amelyben a molekulaképletet C3olO3-ként határoztuk meg nagyfelbontású tömegspektrometriás (HRMS) adatok alapján. A spektrum abszorpciós sávokat mutatott 207 és 315 nm-nél, ami azt jelzi, hogy az 1. vegyületnek flavonolváza van. A 'H mágneses magrezonancia (NMR) adatok (1. táblázat, S1. ábra) a kumaroilezett flavonol-glikozid tipikus mintázatát mutatták, két AA'BB' típusú jelet ({{10}}) mutatva.{11 }} (2H, d, J= 8,5 Hz, H-2' és H-6), 6,87 (2H, d, J{{20}} 0,5 HzH-3' és H-5')) a kaempferol B gyűrűjében, valamint a jelek (0 7,45 (2H, d, J=8). 5 HzH-2 és H{{3{{104}}}}", 6,81 (2H, d, J=8,5 Hz, H-3 és H-5 százalék) a kumaroilcsoport aromás gyűrűjében. Két dublett jel (8H 7,65 (1H, d, J=15,5 Hz, H-7"") és 6,35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8") figyelték meg, ami az országcsoport transz-olefines protonjait jelzi, továbbá egy anomer protonjelet (0H 5,57 (1H, d, J=8,0 Hz, H-1) volt megfigyelhető a cukorrégióban, ami a B-konfigurációjú ciklusos cukorcsoport jelenlétére utal. Az S2. ábra 30 rezonanciát mutatott, amelyek két transz-olefin szénatomot, tíz aromás szénatomot és hat glükozilcsoport szénatomot tartalmaznak, és tíz nem protonált szénatomot, köztük két karbonilszénatomot. Különösen a C-2, C-3 és C-4 (8c 158,1, 134,9 és 179,2) kémiai eltolódásai voltak a flavonol3-0-glikozid jellemző jelei. Ezenkívül a karbonil-szén jel C-1"-on (8c 168,7) és két transz-olefin szén jel C-2'" és C-3"(6 146.9) ponton , 115,2) a kumaroilcsoport tipikus kémiai eltolódásai voltak. Az anomer szénjel C-1(6C 100,4) és a glikozilrész egyéb jelei C-2"-ről C-6"-re ' (6c74,3, 73,4, 70,5, 77,4 és 62,0). Ezek az egydimenziós (1D) NMR-adatok szuperponálhatók voltak a kaempferol-3-0-B-2"-kumaroil-glukozid (2) adataival. (16].) A két vegyület 13C NMR adatainak gondos összehasonlítása azonban arra utalt, hogy az 1. vegyületben van galaktóz rész, amit a nukleáris Overhauser fokozó spektroszkópia (NOESY) NMR adatok is igazoltak (S6. ábra). H-2 és H-4 volt megfigyelhető a 2. vegyületben, az 1. vegyületben nem volt összefüggés ezek között a protonok között. Általában véve a 13C NMR és NOESYNMR adatok értelmezése hatékony módszer a glikozilcsoport típusának meghatározására. A galaktóz rész elhelyezkedését a C-3 helyen lévő C-2 és C-4 lefelé irányuló eltolódása alapján állapítottuk meg, amit a heteronukleáris többszörös kötéskorreláció is bizonyít (HMBC között H{ {123}}" és C-3 (S5 ábra). A kumaroilcsoport helyzete C-2" helyen van a lefelé irányuló eltolódás alapján (0 5,36 (1H, dd, J=10.0, 8,0 Hz, H{) {134}}")) és a HMBC korreláció a H-2' és a C-1 között. Ennek eredményeként az 1. vegyület szerkezetét kaempferol-3-0-B-2"-kumaroilgalaktozidként határozták meg. Bár a 2. vegyületet korábban különböző forrásokból izolálták, beleértve az Ouercus subert (16] és az Alliumporrumot (34) is), Az 1. vegyületet először izoláltuk és szerkezetileg jellemeztük.

Összetett3 sárga por formájában izoláltuk, és megállapították a molekulaképletetmint C31H28O14 a HRMS adatok elemzésével. Az UV-spektrum UV-t mutatottabszorpció 210 és 327 nm-en a vegyületekkel azonos aglikon miatt1 és2. A1H NMR adatok (táblázat).1, S10 ábra) hasonlóak voltak a vegyületéhez2, hanem összetett3 a kumaroilcsoport helyett feruloilcsoportot tartalmazott, amit az an jelenléte bizonyíttovábbi metoxicsoport (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Ezenkívül egy anomer protonjel (δH 5.64 (1H, d, J {{0}},0 Hz, H-100 )) volt megfigyelhető, ami azt jelzi, hogy a glikozil kötésvolt egy- konfiguráció, és a lefelé eltolt jel (5,03 (1H, t,J = 8,5 Hz, H-200 )) a cukorrégióban mutatták, mint a vegyület esetében1. A13C-NMR adatok (táblázat).1, ábraS11) 31 rezonanciát mutatott, amely kettőből álltford-olefifin szén, tíz negyed szénatom,tíz aromás szénatom, hat glükozilrész szénatom és egy metoxiszénatom és tíz nem protonált szénatomszénatomok, köztük két karbonil-szénatom, amelyek megfelelnek a kempferolnak, a feruloilnek,és glükózcsoportok. Különösen a C-2 szén-dioxid jelei00 C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 és 62.5) glükóz rész jelenlétére utalt. A glükózrész elhelyezkedéseés a feruloilcsoportot a H-1 közötti hosszú távú HMBC korrelációk határozták meg.00 ésC-3 (δC 134,8) és H-200 és C-1000 (δC 168,4) (S14. ábra). Egy kiegészítő helyzeteA metoxicsoportot a 3 közötti kulcskorreláció határozta meg000 -OCH3 és C-3000 (δC 149,4). A fenti eredmények a vegyület szerkezetére utalnak3 mint kaempferol-3-O- - 2"-feruloil-glükozid. Legjobb tudomásunk szerint vegyület3 csak mint a jelentették bea 3- hidrolízisének termékeO- -(2-O-feruloil)-glükozil-7,40 -di-O- -glükozil-kempferol, elszigetelveAllium tuberosum[35]. Ezért a szerkezet a3 újként derült kitermészetes vegyület.

Összetett11 sárga por formájában izoláltuk. A1H-NMR adatok (S19. ábra)megjelenített egy AA készletet0 BB0 - típusú jelek (δH 8.06 (2H, d, J {{0}},0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}},0 Hz, H-30, H-50 )) a kaempferol B gyűrűjében és szingulett jel atδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) egy galloil rész aromás régiójában, ami jellegzetes jela kiosztott flavonolból. Egy anomer protonjel (δH 5.78 (1H, d, J {{0}},0 Hz, H-100 )) jelezte, hogy a glikozil kötés a- konfiguráció. Továbbá egy downfieldeltolt protonjel (5,27 (1H, t,J = 9,5 Hz, H-200 )) azt javasolta, hogy a galloilcsoporta C-2 hidroxilcsoportjához kapcsolódott00 mert ez az eltolódás annak tudható beaz anizotrop hatása aO-galloil csoport [21]. A13C-NMR adatok (S20. ábra)26 rezonanciát mutatott ki, jelezve a kiosztott flavonol-glikozidot. A szén jelekinnen: C-200 C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 és 60.1) galaktóz jelenlétére utaltakrész. Ezért a vegyület szerkezete11 megerősítették, hogy kaempferol-3-O- -200 - galloilgalaktozid. Bár összetett11 korábban különböző forrásokból izolálták,beleértveD. kaki[21,36], csak a1A H-NMR és MS adatokat korábban közöltük. És így,a13Ebben a vizsgálatban először közölték a C-NMR adatokat

2.3. Az izolált vegyületek antioxidáns hatásai

Valamennyi izolált vegyület antioxidáns hatását rapid on alkalmazásával értékeltüksor HPLC-ABTS analízissel meghatározzuk, mely vegyületek járultak hozzá az antioxidánshoza datolyaszilva leveleinek hatása. Vegyületek4–8, 11, 13, 15, és16 erős antioxidáns hatást mutatottidatív tevékenységek (ábra4). A legtöbb ilyen vegyület a kempferol és a kvercetin voltszármazékok, de néhány származék (1–3, 9, 10, 12, és14) nem mutatott tevékenységeket. Aszerkezet-aktivitás kapcsolat nem volt teljesen meghatározva, de részben kiderült. Ban benkülönösen kvercetin és kaempferol galloilcsoportokkal (7, 8, 11, és13) találtakerős aktivitással rendelkeznek, de azok, amelyek kumaroil- vagy feruloilcsoportot tartalmaznak (1–3 és16) nembármilyen tevékenységet mutatni.

4. ábra.Az izolált vegyületek gyökfogó aktivitása (4–8, 11, 13, 15, és16) online értékelteHPLC-ABTS vizsgálat.

2.4. Izolált vegyületek kvantitatív elemzése

Az összes izolált vegyület kvantitatív elemzése az EtOAc-oldható kivonatbanelvégezték annak igazolására, hogy a datolyaszilva leveleinek antioxidáns hatása lehetezek a hatóanyagok okozzák. Egy specifikus HPLC módszer diódasoros detektálással éspárolgási fényszórás detektort fejlesztettünk ki az egyidejű meghatározásra27 vegyületből áll. Az összes izolált triterpenoid tartalma körülbelül 5,9 százalék volta sziarezinolsav kivonata és ezek közül25), oleanolsav (26), és az ursolicsav (27) jelentős részét tette ki, amint arról korábbi tanulmányok is beszámoltak [7]. Aa flavonoid-tartalom körülbelül 5,4 százalék volt, és ebből a hatóanyagoké3,2 százalék volt (táblázat).2). Különösen a kaempferol tartalma-3-O- -200 -galloil-galaktozid(9), kaempferol-3-O- -2"-galloil-glükozid (10), izokvercitrin (13), és a kvercetin-3-O- -2"- galloil-glükozid (15) több mint 0,3 százalék volt. Az analitikai módszert aegyszerű validálási eljárás a módszer relevanciájának biztosítására, amely megfelelőnek bizonyultspecifikusság, linearitás, pontosság és precizitás.

Kérdezz többet:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950