Különböző Syringa Vulgaris L. kivonatok kémiai profilja, citotoxikus aktivitása és oxidatív stressz csökkentése, 2. rész

Kérlek keress feloscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

2.5. Antioxidáns aktivitási vizsgálatok

A S.wulgaris kivonatok in vitro antioxidáns kapacitását három különböző módszerrel értékelték: 2, 2-difenil-pikrilhidrazil(DPPH●) leválasztó teszt, vas-redukáló antioxidáns teljesítmény (FRAP) és rézion-csökkentő antioxidáns kapacitás ( CUPRAC)(9. táblázat). A három alkalmazott módszert azért választottuk ki, hogy olyan érveket hozzanak létre, amelyek három különböző mechanizmussal bizonyítják a vizsgált minták antioxidáns kapacitását [31-33].

Toth és mtsai. a DPPH fehérítési tesztet használva, és ezeknek a metanolos kivonatoknak hatékony antioxidáns aktivitását mutatta ki IC50 =65,25 ug/mL és IC50 =67.39 ug/mL értékkel [10]. Ugyanezt a vizsgálatot használják Varga és mtsai. és feljebbvalót mutatottantioxidánsa levelek és a kéregkivonatok aktivitása (ICs0=25.25 ug/mL, ICs0 =40.61 ug/mL) 【11】. Vizsgálatunk kimutatta, hogy a virágkivonat szignifikánsnak bizonyult (p<0.001)higher antioxidant="" activity="" （ic50="36.83" μg/ml）="" compared="" to="" the="" other="" analyzed="" extracts="" in="" the="" following="" order:="" flowers="">leaves >kéreg > gyümölcs (9. táblázat). Hasonló eredményeket kaptunk a virágkivonat esetében a CUPRAC és a FRAP vizsgálatokkal (p<0.001). moreover,="" the="" present="" study="" brings="" originality="" by="" offering,="" for="" the="" first="" time,="" proof="" of="" the="" antioxidant="" capacity="" of="" the="" tested="" samples="" by="" different="" other="" mechanisms="" that="" are="" highlighted="" using="" the="" two="" other="" assays,="" frap,="" and="" cuprac.="" at="" the="" same="" time,="" the="" study="" offers="" for="" the="" first="" time="" a="" comparative="" view="" on="" flowers,="" fruit,="" leaves,="" and="" bark,="" bringing="" evidence="" on="" the="" fact="" that="" flowers="" represent="" the="" most="" important="" antioxidant="">

További információért kattintson ide

Sőt, az elvégzett vizsgálatok által hozott eredetiség, a vizsgált minták antioxidáns kapacitásának vizsgálata még fontosabbá válik, hiszen ez jelenti a citotoxikus aktivitás alapját. Az antioxidáns kapacitás nagymértékben összefügg a vizsgált minták fenolos összetételével [10,11], hiszen nagyrészt ismert és elfogadott, hogy a fenilpropanoidok, flavonoidok, ill.secoiridoidokantioxidáns és antiproliferatív kapacitást mutatnak [34-36], de emellett az antioxidáns kapacitás nagymértékben összefügghet ezen minták citotoxikus aktivitásával, mivel az antioxidáns aktivitás az egyik legfontosabb mechanizmus lehet a citotoxicitás alapja [37].

2.6. Citotoxicitási vizsgálatok

A négy S. vulgaris etanolos kivonat in vitro antiproliferatív potenciáljának vizsgálatára két humán rákos sejtvonalon, a HeLa-n és a B16F10-en, MTT vizsgálatot végeztünk. Az eredményeket a 3. és 4. ábra mutatja be.

4. ábra: A S. Vulgaris levelek, gyümölcsök, kéreg és virágok kivonatainak B16H10 sejtvonalára gyakorolt ​​gátló hatásai öt különböző C1-C5 koncentrációban, az egyes kivonatokra meghatározott TPC (umol GAE/mL) szerint számítva: levelek (11.34-56.7 mmol GAE/mL), gyümölcs (6.66-33.2 μmol GAE/mL), kéreg (9.{12}}.37 μmol GAE/mL) és virágok （11.{15}}.475 μmol GAE/ml）; Negatív kontroll – kezeletlen sejtek, belső kontroll – etanol, pozitív kontroll – ciszplatin. Az értékek három meghatározás átlagát ± SD.*p<><><0.0001(differences between="" extract-treated="" cells="" and="" the="" negative="">

A virágok etanolos kivonata jelentős citotoxikus aktivitást mutatott mind a B16F10, mind a HeLa sejteken (3. és 4. ábra). Mindkettő életképességemelanómaéskarcinómaA sejtsejtek jelentősen csökkentek (p<0.0001) compared="" to="" the="" untreated="" control="" for="" concentrations="" of="" 23.39-58.475="" μmol="" gae/ml="" and="" 11.69-58.475="" μmol="" gae/ml,="" respectively.="" no,="" statistically="" significant="" (p="">0.05) eltéréseket észleltek az ezen koncentrációk által meghatározott életképességi értékek között, ami azt jelzi, hogy a citotoxikus aktivitás nem dózisfüggő. A virágkivonathoz hasonlóan a levélkivonat is jelentős citotoxikus hatást mutatott mindkét sejtvonalon (p<0.001). furthermore,="" when="" tested="" against="" the="" hela="" cell="" line,="" these="" two="" extracts'="" inhibitory="" activity="" was="" comparable="" to="" the="" positive="" control—cisplatin="" treated="" cells="" (figure="" 3).on="" the="" b16f10="" cells,="" similar="" efficacy="" was="" displayed="" only="" by="" the="" flower="" extract,="" while="" the="" leaf="" and="" bark="" extracts="" possessed="" a="" lower="" cytotoxic="" effect="" compared="" to="" cisplatin.="" the="" fruit="" extract="" proved="" the="" lowest="" cytotoxic="" effect="" (figure="">

Eredményeink tehát azt mutatják, hogy az in vitrocitotoxikusA S. vulgaris kivonatok tulajdonságai két daganatos sejtvonalon. A HeLa sejtvonal érzékenyebbnek bizonyult, mint a B16F10 sejtek; Az irodalom dokumentálja az eltérő in vitro és in vivo érzékenységet a különböző tumorsejttípusok között [38,39].

A dózis-válasz görbe nemlineáris regressziós elemzése a citotoxikus aktivitás fele-maximális gátlókoncentrációját (ICs0) határozta meg, és az eredményeket a 10. táblázat ismerteti.

Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a legalacsonyabb ICso értékek a S. vulgaris esetébenetanoloskivonatokat kaptunk a gyümölcsről, illetve a kéregről. Ezeket az értékeket azonban kiszámítják

az egyes kivonatokra meghatározott TPC (umol GAE/mL) szerint. Így, figyelembe véve a mind a négy kivonat esetében megállapított összetett kémiai összetételt, összefüggést határoztunk meg az in vitro antiproliferatív aktivitás és az azonosított csoportok és/vegyületek között. Nem találtunk összefüggést a sejt életképessége és a TPC（r²{{0}}.4） között. Erős összefüggés volt megfigyelhető a sejtek életképességére kifejtett gátló hatás és bizonyos azonosított és számszerűsített vegyületek között, amelyek az 1. táblázatban találhatók. a virágkivonat kémiai összetételére, míg a többi vegyület a kéregkivonatban volt a legnagyobb mennyiségben (1. táblázat). Ezen vegyületek közül az acetonid és az echinakozid mennyisége erősen korrelál a virág citotoxicitásával (r²= 0.84-0.97, illetve 0.87-0.99). ) és a kéreg (r2=0.87-0.94 és 0.{22}}.99) kivonódik a B16H10 sejtvonal felé. A HeLa sejtvonal esetében a korrelációt figyelték megligstrozid（r-=0.89-0.99）, sziringalakton A （r²=0.90-0.99） és oleuropein-aglikon （r²=0.{{ 8}}.98). Bár mindhárom szekoiridoid vegyületet a kéregkivonat esetében találtuk a legnagyobb mennyiségben, a kéregkivonatban lévő tartalmuk és az antiproliferatív aktivitás közötti korrelációs együttható viszonylag alacsony volt (r²=-0).80-0.49 ）.

A Cistanche javíthatja az immunitást

Ezek az eredmények aláhúzzák a fenilpropanoidokat (akteozid és echinakozid) és a szek-iridoidokat (ligstrozid, sziringalakton A, oleuropein-aglikon) azon vegyületek között, amelyek felelősek az S. Vulgaris etanolos virágkivonat B16H10 és HeLa sejtvonallal szembeni antiproliferatív hatásáért. Ezek az eredmények összhangban vannak a secoiridoidok in vitro antiproliferatív hatékonyságát igazoló korábbi jelentésekkel [4].

Korábbi tanulmányok számos Syringa faj esetében kimutatták az antioxidáns és daganatellenes potenciált, ami arra utal, hogy ezek a tulajdonságok bizonyos főbb azonosított vegyületekkel, nevezetesen iridoidokkal és lignánokkal kapcsolódhatnak 4,5]. A S. pubescens virágaiból és leveleiből nyert vizes kivonatok in vitro citotoxikusak voltak az L2215 sejtvonallal szemben, míg a S. patula virágbimbó-kivonat és két izolált vegyület, a syringarezinol és az oleozid 11-metil-észter képes volt gátolni a HepG2-t sejtproliferáció [4,5]. Hasonlóképpen az oleuropein és a 3,4-dihidroxifenil-etil-alkohol 8-O- -D-glükopiranozid, két vegyület, amelyet a S.pubescens subsp. patula, kifejezett citotoxicitást P-388, L-1210, SNU-5 és HL-60 sejtek ellen [5].

Számos S. vulgaris levelekből izolált vegyületről számoltak be, amelyek daganatellenes potenciált mutattak [4,40]. Viszonylag gyenge citotoxicitást mutattak ki az izooleoakteozid és a sziringopikrosid B esetében a LOX-IMVI melanoma sejtvonallal és az NCI-H522 tüdőrák sejtvonallal szemben [4,18]. Ezenkívül az oleuropein hidrolízisterméke mérsékelt citotoxikus aktivitást mutatott a DMS273 és DMS114 tüdőrák sejtvonalakkal szemben [4,40].

Mindezeket figyelembe véve és megerősítve a fitokémiai analízisben, a citotoxicitási vizsgálatokban és az antioxidáns vizsgálatokban kapott eredményeket, nyilvánvalóvá válik a kapcsolat ezek között, és megállapítható, hogy a vizsgált minták antiproliferatív aktivitása jelentős és egy antioxidáns mechanizmusnak köszönhető. Legjobb tudomásunk szerint ez az első olyan vizsgálat, amelynek célja a S. Vulgaris virágaiból, leveleiből, kéregéből és terméséből nyert etanolos kivonatok kémiai profiljának, antioxidáns és antiproliferatív tulajdonságainak értékelése és összehasonlítása.

3. Anyagok és módszerek 3.1. Vegyszerek és reagensek

A HPLC-DAD-MS elemzéshez az acetonitrilt a Merck (Darmstadt, Németország) vásárolta, míg a vizet Direct-QUV rendszerrel a Millipore (Darmstadt, Németország) tisztította. A klorogénsavat, a rutint és az oleuropeint (analitikai tisztaság) a Sigma Aldrich-től (Darmstadt, Németország) vásároltuk. Az összes többi felhasznált vegyszert az Alfa-Aesartól (Karlsruhe, Németország) vásároltuk. A citotoxicitást két tumorsejtvonalon tesztelték: rágcsáló melanomasejteken (B16F10 sejtek) és humán rákos sejtvonalakon (HeLa). A kiválasztott sejtvonalakat az American Type Cell Collection-től (ATCC) (Manassas, VA, USA) szereztük be. A B16F10 sejteket RPMI 1640 tápközegben tartottuk (Sigma Aldrich, Darmstadt, Németország)

kiegészítve 10 százalék magzati szarvasmarha szérummal (EuroClone, MI, Pero, Olaszország) és 1 százalék Antibiotic-Antimvcotic 100× (Sigma Aldrich, Darmstadt, Németország). A Hela sejteket DMEM/F-12 tápközegben (Gibco Life Technologies, Paisley, Egyesült Királyság) tartottuk fenn, amelyet 10% magzati szarvasmarha-szérummal (EuroClone, MI, Pero, Olaszország) és 1% Antibiotikum-Antimycotic 100× (Sigma Aldrich) egészítettek ki. , Darmstadt, Németország). A két sejtvonalat 5 százalékos CO-tartalmú inkubátorban (Advantage-Lab, Schilde, Belgium) tenyésztettük 37 fokos hőmérsékleten, párásított atmoszférában. A citotoxicitási vizsgálathoz standard pozitív kontrollként ciszplatint (Ebewe Pharma Ges. mb H.Nfg. KG, Unterach am Attersee, Ausztria) alkalmaztunk.

3.2.Növényi anyagok és kivonatok készítése

A növényi anyagot Kolozs megyéből, Északnyugat-Romániából szedték be. A virágok és a levelek betakarítása 2020 április-májusában, a faj virágzási időszakában, a gyümölcs és a kéreg 2020 szeptemberében történt. A betakarított fajok utalványpéldányai a Farmakognóziai Osztály herbáriumában vannak letétben. Kolozsvári Gyógyszerészeti Kar (83-as utalvány).

A begyűjtött mintákat levegőn szárítottuk. A kivonatok előállításához minden minta őrölt növényi anyagát hidegen maceráltuk 70% o/v etanollal, 1:10 arányban. Az oldatot ezután átszivárogtatjuk, szűrjük, és fitokémiai analízisre, valamint az antioxidáns kapacitás és citotoxikus aktivitás biológiai aktivitásának vizsgálatára használjuk [41].

3.3. HPLC-DAD-ESI plusz polifenolvegyületek elemzése

A polifenolos vegyületek kiértékelését HP{{0}} folyadékkromatográfiával végeztük, amely kvaterner pumpával, automatikus mintavevővel, DAD detektorral és MS-6110 egynégypólusú API-elektrospray detektorral (Agilent-Technologies) volt felszerelve. , Santa Clara, CA, USA). A fenolos vegyületek kimutatása pozitív ionizációs módban történt. Más, 50-100 V tartományba eső töredéket alkalmaztunk. A vegyületek szétválasztása Eclipse XDB-C18 (5 μm; 4,5 × 15{13}} mm id）oszlopon (Agilent) történt, mozgófázisként 0,1 százalékos ecetsav vízben (A) ) és 0,1% ecetsav acetonitrilben (B). Az eluáláshoz többlépéses lineáris gradienst alkalmaztunk, a következő összetétellel: 5% B 2 percig; 5 százalékról 90 százalékra B 20 perc alatt, tartsa 4 percig 90 százalék B-n, majd 6 percig, hogy elérje az 5 százalék B-t. Az áramlási sebességet 0,5 ml/perc értéken, a hőmérsékletet 25±0,5 fokon tartottuk. A kivonat fenolos vegyületeit úgy elemeztük, hogy az egyes elválasztott vegyületek retenciós idejét, UV látható és tömegspektrumát három referencia standarddal hasonlították össze, az alábbiak szerint: a flavonoidok esetében a vegyületek mennyiségi meghatározását a rutin öt különböző koncentrációval kapott kalibrációs görbéje alapján végeztük. 10 és 80 ug/ml között változott, és rutin ekvivalensben kifejezve (mg rutin/g növényi anyag (R2=0.9973)), a fenilpropanoidok esetében a vegyületek mennyiségét a klorogénsav öt különböző felhasználásával kapott kalibrációs görbéjének segítségével határoztuk meg. koncentrációk, amelyek 10 és 50 ug/ml között változtak, és klorogénsav/növényi anyag ekvivalensében fejezték ki (R2=0.9937), míg az iridoidok esetében a vegyületek mennyiségi meghatározása az oleuropein öt különböző koncentrációval kapott kalibrációs görbéje alapján történt, 10 és 100 ug/ml között változik, és klorogénsav/g növényi anyag ekvivalensében van kifejezve (R-=0.9966). A pozitív töltésű ionokat tömegspektrometriával detektáltuk, a Scan módot használva. A tömegspektrometriához a következő feltételeket alkalmaztuk: gázhőmérséklet 3500 C, nitrogénáram 7 L/perc, porlasztónyomás 35 psi, kapilláris feszültség 3000 V, fragmens 100 V és m/z 120-1200. A kromatogramokat λ=280 és 340 nm-en vettük fel. Az adatgyűjtés az Agilent ChemStation szoftverrel történt [42,43].

3.4. FT-IR spektroszkópia

A Fourier infravörös transzformációs spektroszkópia a kolozsvári "I. Mihály Román Király" Élettudományi Intézet spektroszkópiai laboratóriumában készült. Az FT-IR elemzés előtt a S. Vulgaris levél-, virág-, kéreg- és gyümölcskivonatokat tiszta mikroszkóp tárgylemezen 12 órán át szobahőmérsékleten szárítottuk. A szárított kivonatokat ezután eltávolítottuk a mikroszkóp tárgylemezéről, és 1:100 arányban összekevertük a KBr-porral, majd spektrális pelletpréskamrás acélkészletbe helyeztük. Az áttetsző KBr pellet kialakításához 10 t/2 perc nyomást alkalmaztunk. Az FT-IR spektrumokat Jasco FT-IR4100 spektrométerrel (Jasco, Németország) gyűjtöttük a 4000-400 cm' spektrumtartományban, 256 pásztázás/minta alkalmazásával 4 cm-es felbontás mellett. Továbbá a kapott Ft-IR spektrumokat CO-ra és H2O-ra korrigáltuk ugyanazon szoftver Spectra Manager programjával. Végül az FT-IR adatelemzést OriginPro Version 8.5.1 szoftverrel (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) végeztük.

3.5. Az összes polifenol-, flavonoid- és fenolsav-tartalom mennyiségi meghatározása

A teljes fenoltartalmat (TPC) spektrofotometriás módszerrel határoztuk meg, amely a polifenolok és a Folin-Ciocalteu reagens színreakcióján alapult, az Európai Gyógyszerkönyv szerint, galluszsav kalibrációs görbéjét (R2= 0.9928) használva. ). Az eredményeket mg galluszsav-ekvivalens (GAE)/g szárított növényi anyagban fejeztük ki. Az összes flavonoid (TFC) meghatározását spektrofotometriával, alumínium-klorid módszerrel is elvégeztük, a rutin kalibrációs görbéjén (R-=0.9981) alapulva, és az eredményeket mg rutozid ekvivalens (RE)/g-ban fejeztük ki. szárított növényi anyag. Az összes fenolsavat (TPA) spektrofotometriás módszerrel, Arnow-féle reagens segítségével határoztuk meg, hasonlóan a Román Gyógyszerkönyv 10. kiadásában (Cynarae folium monográfiában) szereplőhöz. A TPA-meghatározás eredményeit mg kávésav-ekvivalensben (CAE)/g szárított növényi anyagban fejeztük ki, és egy kávésav-kalibrációs görbe segítségével számítottuk ki (R2= 0.9956). Mindezeket a kísérleteket három párhuzamosban végeztük [31, 33, 44].

3.6. GC-MS analízis

A GC-MS analízist Dani Master GC-MS rendszeren végeztük. A vegyületek elválasztására SH-Rxi-5 ms oszlopot használtunk, melynek mérete 30 m ×0,25 mm×0,25 μm. Vivőgázként nitrogént használtunk 10 ml/perc áramlási sebességgel. A rendszer hőmérséklete a 11. táblázatban található gradienst követte.

Minden mintából öt μl-t, abszolút etanollal 1-10 arányban hígítva injektáltunk. Az EIS-MS detektor 50-600 dalton molekulatömegű vegyületeket azonosított. Az ionforrás 200 fokon működött. A vegyületeket az illesztési faktor alapján, a NIST MS 2.2 spektrumadatbázis segítségével kísérletileg azonosították. A 80 százaléknál magasabb egyezési pontszámot elfogadhatónak tekintették a vegyületek azonosításához. A kvantitatív elemzést területnormalizációs módszerrel végeztük, és az eredményeket területszázalékban ( százalék ) fejeztük ki [31,45]. 3.7. Antioxidáns aktivitási vizsgálatok

3.7.1. DPPH gyökfogó tevékenység

A S. Vulgaris kivonatok antioxidáns kapacitásának felmérésére a DPPH fehérítő tesztet alkalmaztuk. Ez egy spektrofotometriás módszer, amely a DPPHe reagens és a vizsgált kivonatokban jelenlévő antioxidánsok reakcióján alapul, az egyes kivonatokból mL-t különböző koncentrációban adtunk 2 ml0.1 g/l DPPH·metanolos oldathoz, és fenntartottuk. 40 fokon, termosztált fürdőben, fél óráig. Az abszorbanciát és azok változását 517 nm-en mértük. A DPPHe-gyök gátlását a következő képlettel számítottuk ki: DPPH-fogóképesség százalékos =(A kontroll- A minta/A kontroll) × 100, ahol A kontroll a DPPH· gyök oldatából álló kontroll abszorbanciája plusz metanol (a tinktúra kivételével minden reagenst tartalmazó keverék) és A minta a DPPH gyök plusz minták abszorbanciája. A DPPH-csökkenés százalékos arányát Trolox-ekvivalensben fejeztük ki (TE, R2=0.987).

A tinktúra DPPH gyökfogó aktivitását IC50-ben (ug/ml) fejeztük ki. A vizsgálatokat három párhuzamosban végeztük [32, 33, 46].

3.7.2. Vascsökkentő antioxidáns teljesítmény vizsgálat (FRAP)

A FRAP módszer egy spektrofotometriás módszer, amely egy 2,4,6-tri(2-piridil)-1,3,5-triazin (TPTZ) gyök színváltozásán alapul. komplex Fe3 plusszal. Ezt a színváltozást a vas-ion (Fe3) vas-ionná (Fe2 plusz) redukálásával értékelik ebben a komplexben[47]. A FRAP reagens 2,5 ml 10 mM TPTZ-oldat 40 mM HCl-ban készült elegyéből áll, 2,5 ml 20 mM vas(III)-klorid-oldattal és 25 ml acetát-pufferrel pH=3,6-on keverve. Mindegyik vizsgált mintából 4 ml-t vízzel 1,8 ml-re hígítottunk, és 6 ml-rel összekevertük ezzel a reagenssel. Ugyanígy készítettünk vakoldatot is, de az extraktumok vízzel való helyettesítésével az antioxidáns kapacitást a színváltozással összefüggésben értékeltük, 450 nm-en mérve az abszorbanciákat, referenciaként Troloxot és kalibrációs görbét (R2=0). 992). Az eredményeket uM Trolox ekvivalens/g száraz tömeg növényi termékben fejeztük ki, és a vizsgálatokat három párhuzamosban végeztük [48].

3.7.3. Réz-hosszú csökkentő antioxidáns kapacitás (CUPRAC)

A CUPRAC-módszer egy spektrofotometriás módszer, amely a rézion (II) redukálásán alapul a neoprénben (2,9-dimetil-1,10-fenantrolin) rézvassá (I). összetett. Ez a redukció határozza meg a színváltozást világoszöldről vörös-narancsra. A színváltozást az abszorbancia mérésével 450 nm-en korreláltuk az antioxidáns kapacitással. A kalibrációs görbét a Trolox standard koncentrációival ábrázoltuk, és az eredményeket mM Trolox-ekvivalens/g száraz tömeg növényi termékben fejeztük ki [32,49,50]. 3.8. Citotoxicitási vizsgálatok A tumorsejtvonalakon végzett citotoxicitási vizsgálatot MTT-teszt segítségével végeztük (3-(45-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólium-bromid; Sigma Aldrich) [51,52]. Mindkét sejtvonal esetében a sejteket (1 × 10 fokos sejt/lyuk) 96-lyukú lemezekre szélesztettük 24 órára normál szaporítóközegben (200 µl sejtszuszpenzió minden lyukban). A kivonatokat öt különálló térfogatban (5 μL, 10 μL, 15 μL, 20 μL, 25 μL) adtuk a komplett táptalajhoz, és a kapott koncentrációkat (C1, C2, C3, C4 és C5) az alábbiak szerint számítottuk ki. az egyes kivonatokra meghatározott és umol GAE/mL-ben kifejezett TPC az alábbiak szerint: virágok (C1-11,69 umol GAE/mL, C2-23,39 umol GAE/mL, C3-35,08 umol GAE/mL, C4-46,78 umol GAE/mL, GAE C5–58,475 μmol GAE/mL), levelek (C1-11,34 μmol GAE/mL, C2–22,68 umol GAE/mL, C3–34,02 μmol GAE/mL, C4–45,36 μmol GAE/mL, C4–45,36 μmol GAE 56,7 μmol GAE/ml), kéreg (C1–9,875 μmol GAE/ml, C2–19,75 umol GAE/mL, C3–29,625 umol GAE/mL, C4–39,5 umol GAE/mL, C4–39,5 umol GAE/mL és 3,7 μmol CGAE/4mm gyümölcs (C1-6,66 umol GAE/mL, C2-13,32 umol GAE/mL, C3-19,98 umol GAE/mL, C4-26,64 umol GAE/mL, C5-33,2 umol GAE/mL). A negatív kontrollt normál expanziós tápközegben (kezeletlen sejtek) tenyésztett sejtvonalak képviselték, míg belső kontrollként 70% o/v etanolt és pozitív kontrollként ciszplatint (0,2 uM) használtunk.

A sejtek életképességét 24 órás, 37 °C-on, párásított atmoszférában, 5% CO-val inkubáltuk, egy korábban publikált protokoll szerint MTT vizsgálattal értékeltük [51,52]. Az egyes lyukakba 0,5 mg MTT hozzáadásával képződött formazánrészecskéket dimetil-szulfoxidban (DMSO) oldottuk (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA), és az abszorbanciát 450 nm-en olvastuk le mikrolemez segítségével. olvasó (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). A sejtek életképességi százalékát (százalék) a kivonatokkal kezelt sejttenyészetek és a negatív kontrollok (kezeletlen sejtek) közötti abszorbanciaarány l00 szorzata alapján számítottuk ki. Minden egyes kivonat esetében a sejtproliferáció 50%-os gátlásához szükséges kivonatkoncentrációt képviselő IC5so-értékekben kifejezett citotoxikus aktivitást a nemlineáris regresszióval kapott dózis-válasz görbéből számítottuk ki. Minden kísérletet három párhuzamosban végeztünk.

3.9. Statisztikai analízis

Minden statisztikai elemzést az ANOVA GraphPad Prism szoftver 6-os verziójával végeztünk.{1}}(GraphPad, San Diego, CA, USA). Az eredményeket átlagos szórással (SD) fejeztük ki. A statisztikai szignifikancia meghatározására egyutas varianciaanalízist (ANOVA), majd Tukey post hoc tesztjét alkalmaztuk. A Pearson-féle korrelációs elemzést a kivonatok citotoxikus aktivitása, a teljes fenoltartalom és az azonosított vegyületek közötti összefüggés meghatározására végeztük. A 0,05-nél alacsonyabb p-értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.

4. Konklúziók

Legjobb tudomásunk szerint ez az első olyan tanulmány, amelynek célja a S. Vulgaris virágaiból, leveleiből, kéregéből és gyümölcséből nyert etanolos kivonatok kémiai profiljának, antioxidáns és antiproliferatív tulajdonságainak értékelése és összehasonlítása. Az elvégzett módszerek rávilágítottak arra, hogy a S.vulgaris kivonatok, különösen a virágokból és levelekből nyert kivonatok értékes forrásai a jelentős antioxidáns és citotoxikus potenciállal rendelkező vegyületeknek.

Ez a cikk a Molecules 2021, 26, 3104-ből származik. https://doi.org/10.3390/molecules26113104 https://www.mdpi.com/journal/molecules