A Cistanche Deserticola mannoglukán kémiai tulajdonságai

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

1. Anyagok

Két különböző gyártótól származó, lovak számára készült szájpépeket használtunk, amelyek 10 mg/g (A), illetve 20 mg/g (B) ivermektint tartalmaztak. Az ivermektin kvantitatív assay-ját elvégezték, és a tartalom a bejelentett koncentráció 104,4–107,7 százaléka volt.

2. Oldódási teszt

A vizsgálatot Ph. Eur. lapátos készülék (Pharma Test, Heinberg, Németország), 75 fordulat/perc vagy 5 0 fordulat/perc keverés mellett, 37 -0,5 C-on. Nátrium-lauril-szulfát (BDH Chemicals, Poole, Anglia) 0,5% (w) /v) vizes oldatot használtunk oldóközegként (900 ml). A pasztát (4 g A vagy 2 g B) kanüllel ellátott fecskendővel (A) vagy a mintát az oldóközeg felületére (B) csepegtetve az edénybe helyeztük. Az időintervallumok (15, 30, 45, 60 perc és 2 óra) elteltével az oldóközegből mintát vettünk (2 ml), üvegszűrőn átszűrtük és analizáltuk.

3. HPLC analízis

Az ivermektin meghatározását módosított HPLC módszerrel végeztük, a Ph. Eur. Az elemzett oldatokat metanollal (1:10) hígítottuk. A HPLC rendszer egy oktadecil oszlopból (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), egy D-12500 A integrátorból, egy UV-Vis L{{7} detektorból állt. }, L-6200A szivattyú (Merck-Hitachi, Darmstadt, Németország). Acetonitril:metanol:víz (64:24:16) elegyét használjuk mozgófázisként 1,9 ml/perc áramlási sebességgel. A beinjektált minta térfogata 20 ml volt, a detektálást 254 nm-en végeztük.

4. Oldhatósági vizsgálatok

Az anyagot szorosan lezárt üveglombikban megfelelő oldószerrel (1. táblázat) rázattuk 20 órán át 37 0,1 C-on. A szuszpenziókat leszűrtük, és a szűrletet metanolos hígítás után HPLC-vel analizáltuk. .

5. Stabilitás savas oldatban

Az ivermektin HCl-os {{0}},1 M oldatait szorosan lezárt üvegfiolákban tároltuk 20 C-on és 37 C-on. Az oldatok kromatogramjait t ¼ 0-nál és 1, 2 és 6 óra elteltével rögzítettük. Kiszámoltuk az ivermektin területét (retenciós idő 10,5 perc) és a további csúcsokat.

Hivatkozások

FDA útmutató az ipar számára: SUPAC-SS nem steril, félig szilárd adagolási formák. Nagyítási és jóváhagyás utáni változások: kémia, gyártás és ellenőrzések; in vitro felszabadulási vizsgálat és in vivo bioekvivalencia dokumentáció. 1997. május. FIP-irányelvek szilárd orális készítmények oldódási vizsgálatához (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) FIP/AAPS irányelvek az új/speciális adagolási formák oldódási/in vitro felszabadulási vizsgálatához, AAPS PharmSciTech, 4 (1) cikk 7 Hagyományos Kínai Orvoslás Modern Kutatóközpontja, Iskola Pharmaceutical Sciences, Pekingi Egyetem Egészségtudományi Központ, Peking, Kína

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Beérkezett: 2004. február 13., elfogadva: 2004. április 4., Prof. Dr. Pengfei Tu, Hagyományos Kínai Orvoslás Modern Kutatóközpontja, Gyógyszertudományi Iskola, Pekingi Egyetem Egészségtudományi Központ, 38. szám, Xueyuan Road , Haidian District, Peking 100083, Kína Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Egy új mannoglukán innenCistanche deserticolaKínából jellemző. A vegyület felelős a mitogén által kiváltott T- és B-limfocita-proliferáció enyhe stimulációjáért.

Cistanche deserticolaA YC Ma egy holoparazita, amely a Haloxylon ammodendron Bunge kétszikű növény gyökerén nő, amely Kína északnyugati részén széles körben elterjedt. Mivel fontos tonik a keleti gyógyászatban, számos aktív komponenst és farmakológiai hatást állítottak fel (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Ezek a tulajdonságok egyes poliszacharid komponensekkel hozhatók összefüggésbeCistancheamelyeket még nem vizsgáltak ki. Mitogén pektin poliszacharidokat és semleges poliszacharidokat izoláltak és jellemeztekCistanche deserticolaMongóliából (Radna és mtsai 1996; Anna és mtsai 1997; Bozena et al. 1999). Itt egy új mannoglukán kémiai tulajdonságairól számolunk beCistanche deserticolaKínából, amely a mitogén által kiváltott T és B limfocita proliferáció enyhe stimulálásáért felelős. Miután a száraCistanche deserticolaAz YC Ma-t 95%-os etanollal extraháltuk, a maradékot hideg desztillált vízzel extraháltuk. A hideg vizes extraktumot EtOH-val kicsaptuk, a fehérjét eltávolítottuk és dializáltuk, így a nyers CCDP poliszacharidot kaptuk. A nyers poliszacharidot DEAE oszlopon és Sephadex G-150 oszlopon frakcionáltuk, így fehérjementes poliszacharidot (CDP-6) kaptunk, amely glükózt (89,2 százalék) és mannózt (1{{58}) tartalmazott. },4 százalék ), és ebből az átlagos Mr-t 6-ra becsülték.8 -104. A CDP{10}} poliszacharid [a 20 D 42 (c 1, H2O) értéket mutatott. A cukrok abszolút konfigurációját TMS (– )-2-butil-glikozidok GC-vel határoztuk meg. A CDP-6-t metiláltuk (Needs et al. 1993), hidrolizáltuk, alditol-acetáttá alakítottuk, és GC-vel és GC-MS-sel analizáltuk (táblázat). Ez az eredmény a metilációs elemzésből származó mólarány-adatokkal együtt arra utal, hogy a CDP-6 túlnyomórészt 1,6-kapcsolt Glcp-vel és egy 1,6- gerinchálózattal rendelkezik, amely kisebb mértékben elágazó az O{{ 24}} mannóz. A részleges hidrolízisből származó két polimer (CDP-6-1, CDP-6–2) metilációs analízise megerősítette, hogy a CDP-6 gerince 1,6-kapcsolt glukozil-maradékból és 1,6-kapcsolt mannozil-maradékok, amelyek a mannóz O-3 helyén olyan elágazásokkal vannak helyettesítve, amelyek a terminálisból, 1,6- kapcsolt glukozil-maradékokból és 1,3,{{38} }kapcsolt mannozil-maradékok. A mólarányok és a szakirodalom szerint (Bozena et al. 1999; Bacon és mtsai 1996) a CDP-6 13C NMR spektruma az a-d-Glcp anomer szénatomjainak tulajdonítható jeleket mutatott (C{{45). }} 98,4 ppm-nél), bd-Map (C-1, 104,3–104,9 ppm) és ad-Map (C-1, 100,0 ppm). A CDP-6-21H-NMR-spektruma D2O-ban az ad-Glcp-nek (H-1 4,94-4,95 ppm-nél) és a-d-Map-nek (H-1) megfelelő protonjeleket mutatott 4,96–5,00 ppm). A CDP-6-2 13C NMR spektruma D2O-ban az aD-Glcp-nek (C-1 98,6 ppm-nél) és az ad-Map-nek (C-1, 98,4 ppm) megfelelő protonjeleket mutatott. A mannoglukánokról a jelentések szerint 1,4-kapcsolt glükopirannan és 1,4-kapcsolt mannopirannan gerince van (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). A CDP-6 különböző szerkezeti jellemzőkkel rendelkezik az a-1,6-kapcsolt Glcp és b-1,6-kapcsolt térkép gerince révén, és mannoglükán ágak helyettesítik (Ábra.). Használatának kivizsgálása érdekébenCistanche deserticolaa népi gyógyászatban a CDP-6 T- és B-sejtrendszerre gyakorolt ​​hatását értékelték. Azt találták, hogy enyhén stimulálja a mitogén által kiváltott T- és B-limfocita proliferációt.

Kísérleti

1. Általános eljárások

Az optikai elfordulást W{0}}S automatikus polariméterrel mértük. Az IR-spektrumokat Perkin-Elmer 599B spektrométerrel határoztuk meg. A GC analízist FID detektorral felszerelt Agilent HP6890N készüléken végeztük. A GC-MS-t Finnigan Trace GC-MS készüléken végeztük. A homogenitást és a CDP -6 Mr-értékét a standard dextránok elúciós térfogatának kalibrációs görbéjéből becsültük meg, amelyet

Agilent 1100 sorozatú készülék Shodex KS-805 oszloppal. Az1H NMR és 13C NMR spektrumokat INOVA-500 műszerrel vettük fel. A fehérjetartalmat Bradford módszerével elemeztük (Andre et al. 1975). A monoszacharidok alditol-acetátjukat hidrolizáltuk (2 M TFA, 2 óra, 110 C), redukáltuk és acetáltuk. A hidrolizátumokat vékonyréteg-kromatográfiával elemeztük szilikagél lemezen, amely 5% nátrium-dihidrogén-foszfátot tartalmazott BuOH-EtOAc-izopropil-alkohol-HOAC--H2Opiridinben (3,5:10:6:3,5:3:3), és a cukrokat orcinollal történő permetezéssel detektáltuk. -H2SO4. A kapott alditol-acetátokat GLC-vel analizáltuk HP-5 kapilláris oszlop (30 m 0,32 mm) alkalmazásával. A CDP-6-t Ciucanu-módszerrel metiláltuk, majd hidrolízissel végeztük, és részlegesen metilált alditol-acetátként elemeztük GC-MS-sel. Részleges hidrolízis után a termékeket dializáljuk és elválasztjuk, így két polimert kapunk, a CDP-6-1 és CDP-6–2.

2. Növényi anyag

A növényt a kínai Belső-Mongólia tartományból gyűjtötték be 2001 augusztusában, és Hu-Biao Chen, a Pekingi Egyetem Egészségtudományi Központjának Gyógyszertudományi Iskola Természetgyógyászati ​​Tanszéke azonosította. Ennek a növénynek az utalványmintáját [E-1-(9)] a Pekingi Egyetem Gyógyszertudományi Iskolában helyezték letétbe. 3. A CDP poliszacharid extrakciója, izolálása és tisztítása-6Cistanche deserticola1500 g YC Ma-t 95%-os etanollal (6 liter) extraháltunk visszafolyató hűtő alatt. A szárított, etanolban oldhatatlan maradékot 12 óránként háromszor hideg desztillált vízzel maceráljuk. A hideg vizes extraktumot szűrjük, és a szűrletet centrifugáljuk. Négy térfogat etanollal végzett kicsapás után (keverés és 24 órán át 4 °C-on állva) 35,5 g csapadékot kapunk. A csapadékban lévő fehérjét Savage módszerével távolítottuk el. Desztillált vízben való feloldás után a maradékot (25,5 g) dializáljuk és liofilizáljuk (hozam: 10,6 g). A nyers poliszacharidot (8 g) desztillált vízben (100 ml, 8 tömeg/térfogat%) feloldottuk, és DEAE oszlopon (70 5 cm, gradiens 0-2 M NaCl, 1,5 liter) elválasztottuk. 600 mg vízzel eluált frakciót kapunk. Egy mintát (250 mg) oszlopos gélpermeációs kromatográfiával tisztítottunk Sephadex G{24}} oszlopon (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml frakciónként). A CDP-6 frakcióit (1500–1600 ml) egyesítettük, dializáltuk és fagyasztva szárítottuk. A Sephadex G-25 (60 1 cm) sótalanítása után. CDP-6-t (110 mg) kaptunk, és HPSGC-vel egyetlen csúcsként határoztuk meg.

Elismerés:A szerző köszönetet mond Dr. Baomei Shao-nak és Prof. Xiaoming Gao-nak, a Pekingi Egyetem Egészségtudományi Központjának Orvosi Alaptudományi Karának munkatársa, hogy megmérték a CDP immunmoduláló aktivitását-6.