Kínai orvoslás Cistanche kémiai összetétele és a szervezetben lévő összetevők elemzése Ⅲ

2. fejezet Kvalitatív tanulmány a Cistanche deserticola kémiai összetételéről

A Cistanche a száraz pikkelyes levél húsos száraCistanche deserticola YC.Maés Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Ez az egyik híres vese-yang tápláló hagyományos kínai orvoslás. Ennek a funkciói vannaktápláló vese-yang, eszenciát és vért pótló, nedvesítő Hashajtó hatású, gyakran alkalmazzák impotencia, meddőség, derék- és térdfájás, izom- és csontgyengeség, bélszárazság és székrekedés stb. kezelésére. demencia, Parkinson-kór elleni védelem, agyi ischaemia elleni védelem, valamint a tanulási és memóriaképesség javítása. Az anyagi alap tisztázása érdekében aa Cistanche deserticola hatékonysága, ez a fejezet HPLC és LC-IT-TOF-MS segítségével átfogóan jellemzi aa Cistanche kémiai összetevői. A különböző típusú kémiai komponensek repedési szabályainak szisztematikus összefoglalása alapján a Cistanche deserticola tulajdonságait szisztematikusan elemzik. Kémiai összetétel, megbízható forrásokból származó gazdag adatok biztosítása érdekébenmélyreható felvilágosításgyógyászati ​​tulajdonságairólCistanche deserticolain vivo.

MENNYI IDEIG TELJES, HOGY MŰKÖDIK A CISTANCHE?

1. szakasz Kísérleti anyagok

1.Műszer

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS folyadéktömeg-spektrométer (2 LC-20ADXR szivattyúval, SIL-20AC automatikus mintavevővel, CTO-20AC oszlopkemencével, SPD-M20A UV detektorral, DGU-20A3R dekontamináló gázgép, CBM-20Egy vezérlő, ESI ionforrás, Shimadzu Company, Japán), Milli-Q ultratiszta víztisztító rendszer (Milipore Company, USA): Mettler ME204 elektronikus analitikai mérleg ( Mettler Toledo Company, Svájc).

2. Reagensek

A kromatográfiás és tömegspektrometriás minőségű metanolt, acetonitrilt és tömegspektrometriás minőségű hangyasavat a Thermo-Fisher Company-tól (Pittsburgh, PA, USA) vásároltuk. A víz Milli-Q ultratiszta víz volt, amelyet laboratóriumban készítettek (Millipore, Bedford, MA, USA). A többi reagens mind analitikai minőségű.

Salidrozid, 6-dezoxikatalpol, 8-epi-logánsav, echinakozid, akteozid, izozid Verbaszkozid (izoakteozid) és pinorezinol- -D-glükopiranozid (pinorezinol- -D-glükopiranozid) mindkettőt Tu Pengfei professzor kutatócsoportja biztosította a Pekingi Egyetem Természetes és Biomimetikus Gyógyszerek Kulcslaboratóriumában. A szarkozid F-et (cistanozidF) a Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.-től vásároltuk, a cisztanozid A-t (cisztanozid A), 2'-acetil-lakteozid (2'-acetil-lakteozid), 2'-acetil-poliumosid (2'-acetil-poliumosid), cisztanozid poliglukozid (poliumosid) ), a cisztanozid E (cisztanozidE), az izocisztanozid E (isocistanosideE), a cisztanozid C (cisztanozidC), az izocisztanozid C (isocistanozidC) és a cisztanozid D (cisztanozidD) a Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd.-től, a tubulozid A (tubulozidA) és A tubulozid B-t (tubulozid B) a Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.-től vásárolták.

2. szakasz Kísérleti tartalom

1. Mintaelőkészítés

1.1 Referenciaanyag készítése

Pontosan mérjen le megfelelő mennyiségű különböző referenciaanyagot a fenti "1. szakaszban, a kísérleti anyagokban", és készítsen 10 mM törzsoldatot DMSO-val. Pontosan pipettázzon 2 ml-t mindegyik törzsoldatból, és hígítsa fel 25%-os acetonitrillel, hogy 2 μM vegyes kontrolloldatot kapjon. 1.2 Vizsgálati oldat elkészítése

A Cistanche deserticola vizes kivonatát laboratóriumunk készítette, a mintát a Pekingi Kínai Orvostudományi Egyetem Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetemének Hagyományos Kínai Orvostudományi Karának Modernizációs Kutatóközpontjában tároljuk. Vegyünk 20 mg Cistanche deserticola port, adjunk hozzá 40 ml vizet, hogy feloldódjon, vortexeljük és keverjük össze, centrifugáljuk 10 000 fordulat/perc sebességgel 10 percig, majd vegyük ki a felülúszót. Azaz megkapjuk a tesztoldatot.

3. Tömegspektrometriás körülmények

Elektrospray ion source (ESI), a pásztázási mód a pozitív és negatív ionok egyidejű letapogatása, és a többszintű tömegspektrometria automatikus kiváltása. Az MS'~MS' tömegpásztázó tartománya pozitív ionok esetén m/z50~800, negatív ionok esetén m/z100~1000. A permetezőkamra feszültsége 4,5 kV, illetve -3,5 kV: a porlasztógáz (Nz) áramlási sebessége 1,5 Lmin; a szárítógáz nyomása 110 MPa; az érzékelési feszültség 1,55 kV; az ívelt deszolventáló cső (CDL) és a fűtőmodul hőmérséklete egyaránt 200 fok. Az ütközési kamra nyomása 1,5e-Pa; az ioncsapda nyomása 2,8e-Pa; a pozitív és negatív első szakasz ismétlődéseinek száma 1, az ion akkumulációs ideje 30 ms; a pozitív és negatív második szakasz ismétlődéseinek száma 2, az ion akkumulációs ideje 20 ms. ; Az ütközés okozta disszociáció (CID) energia 50%.

3. szakasz Eredmények és megbeszélés

Oszlop kiválasztása

A jobb kromatográfiás elválasztás érdekében alaposan átvizsgáltuk a különböző gyártóktól és specifikációkkal rendelkező kromatográfiás oszlopokat, mint például az ACEUltraCore 2.5 SuperC8 kromatográfiás oszlopot (3{4}}x150 mm, 2,5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Scotland), Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), Waters Acquity UPLC HSS T3 oszlop (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) és Capcell Core ADME oszlop (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Corporation Japán). A szisztematikus összehasonlítás során kiderült, hogy a Capcell Core ADME kromatográfiás oszlop (2,1x150 mm, 2,7 μm, Shiseido Co., Ltd., Japán) használatával az egyes kromatográfiás jelek jobban elkülöníthetők (3-1 ábra).

2. Folyadékfázisú feltételek kiválasztása

Mivel a fő kémiai összetevők aCistanche deserticolafenil-etanol-glikozidok, lignánok, iridoidok és más vegyületek, általában jobban reagál negatív ionos körülmények között. A Cistanche deserticola vizes kivonatának alacsony szintű kémiai komponenseinek azonosítása érdekében feltételezések szerint savakat kell hozzáadni a mozgófázishoz az erő fokozása érdekében. Ezért ebben a kísérletben víz-metanol, víz-acetonitril, 0,1% hangyasav víz-metanol és 0,1% hangyasav víz-acetonitril mozgófázisú rendszert használtak a vizsgálathoz. Megállapítást nyert, hogy a legjobb elválasztó hatású 0,1%-os hangyasav-víz-acetonitril, jó csúcsformával és nagy csúcskapacitással, ezért a 0.1%-os hangyasav-víz-acetonitril-t választottuk a legjobb elválasztó hatásúnak. mobil fázis. 3. Kémiai komponensek kvalitatív elemzése. Használjon 19 meglévő referenciaanyagot a különböző típusú vegyületek tömegspektrometriás fragmentációs szabályainak felfedezéséhez a Cistanche deserticolában. A kevert referenciaanyagok PDA kromatogramok 340 nm-en az ADME oszlopon és BPC diagramok pozitív és negatív ion módban. Lásd: 3-1. ábra. Áttekintettük a releváns irodalmat a PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP és Wanfang stb. segítségével, és elkészítettük a Cistanche deserticola kémiai összetevőinek saját készítésű adatbázisát. Az ismert vegyületek tömegspektrometriás fragmentációs szabályainak és retenciós idejeinek összehasonlítása alapján előzetesen 45 vegyületet azonosítottunk a Cistanche deserticolában. vegyületek, köztük 31 fenil-etanol-glikozid, 9 iridoid, 3 benzil-glikozid és 2 lignán, amint az a 3-1 táblázatban látható.

A 11., 12., 13., 17., 21., 22., 24., 25., 26., 28., 29., 32., 33., 36., 37., 38. számú vegyületek bizalmas kezelési idejének, MS-spektrumának és MS-spektrumának összehasonlításával egymás után Pontosan azonosították: genipin, cisztanchein F, cisztancheozid E, echinaceaside, krizantozid, cisztanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D glükozid, ökörfarkkóró glikozidok, izokannabinoid glikozid, verkobaszciszid metil-pinorezin-2-acetil-glikozid C, izoszocisztankozid C, tuberosin B és cisztanche glikozid D.

Ez a kísérlet HPLC-IT-TOF-MS technológiát használ a Cistanche deserticola vizes kivonatában lévő összetett kémiai komponensek gyors és pontos szisztematikus elemzésére, amely alapot biztosít a Cistanche deserticola átfogó minőségelemzéséhez és a farmakológiai anyagok in vivo kutatásához.

3-1 ábra Vegyes referenciaanyag kromatogramja Felül: BPC diagram pozitív ion módban: Alul: BPC diagram negatív ion módban

3-1 ábra Vegyes referenciaanyag kromatogramja Felül: BPC diagram pozitív ion módban: Alul: BPC diagram negatív ion módban