Kínai orvoslás Cistanche kémiai összetétele és a test összetevőinek elemzése Ⅲ

3. fejezet A Cistanche deserticola többkomponensű komponenseinek kvantitatív elemzése RPLC-HILIC-MS/MS alapján

A hagyományos kínai orvoslás kémiai összetétele összetett, és számos vegyületet tartalmaz, például elsődleges és másodlagos metabolitokat [55-561. A hagyományos kínai orvoslás kémiai összetevőinek átfogó és megbízható elemzése (beleértve a hidrofil és hidrofób összetevőket is) továbbra is jelentős technikai probléma. Ráadásul a hagyományos kínai orvoslásban az egyes komponensek tartalma nagymértékben változik, és a hagyományos folyadéktömeg-spektrometriás módszerekkel nehéz egyszerre pontosan számszerűsíteni mind a főbb, mind a nyomelemeket. 1571 A hagyományos egyoszlopos elválasztás nem elegendő, és a nyomvegyületek elemzését a hagyományos kínai orvoslásban állandók korlátozzák. A vegyületek interferenciája miatt a csúcsátfedési jelenség súlyos. Bár számos fejlett kromatográfiás technikát alkalmaztak a komplex mátrixok elválasztásának javítására, mint például mag-héj és szubmikron részecskekromatográfiás oszlopok, hidrofil kölcsönhatás kromatográfiás oszlopok stb., még mindig kihívást jelent a különböző vegyületek átfogó szétválasztása egyetlen oszlop [58 -59. A legalább két ortogonális kromatográfiás mechanizmust, például a kétdimenziós LC-t, az oszlopkapcsolós LC-t és a tandem kétoszlopos LC-t kombináló többoszlopos kromatográfiát olyan megvalósítható eszköznek tartották, amely jelentősen bővítheti a metabolitok lefedettségét. Kétségtelen, hogy mind a kétdimenziós LC, mind az oszlopkapcsolós LC jelentősen növelheti a csúcskapacitást 160). Mindazonáltal mindkét módszer szelepfüggő, a műszerek bonyolultak és időigényesek, az összekötő csövek és a szabályozók felszerelése egyszerű. Maradékok léteznek, és ez a két módszer hajlamos egy sor bizonytalansági tényező bevezetésére, amelyek mennyiségi reprodukálhatatlansághoz vezetnek1571. A fordított fázisú hidrofil interakciós kromatográfiás tandem (RPLC-HILIC) ugyan nem tudja jelentősen növelni a csúcskapacitást, de a műszer berendezése egyszerű, a csatlakozó csövekben és a szabályozókban nem maradnak maradékok, és így is megvalósítható a hidrofilből hidrofób állapotba váltás. Nagyszámú, széles körben poláros vegyület átfogó megtartása [61-66. Ezenkívül a tripla kvadrupól (QgQ) tömegspektrométer egyedi többszörös reakciófigyelő (MRM) üzemmódja további elválasztási dimenzióként használható az RPLC-HILIC elválasztási képességének további javítására. Röviden, az RPLC-HILIC-MRM integrálja az RPLC, HILIC és MRM rejlő előnyeit, és várhatóan megbízható analitikai módszerré válik.

MENNYI IDEIG TELJES, HOGY MŰKÖDIK A CISTANCHE?

A hagyományos kínai orvoslás egyes összetevőinek tartalma nagyon eltérő. A fő összetevőkkel összehasonlítva az emberek nagyobb figyelmet fordítanak érzékenyebb módszerek kifejlesztésére, hogy teljessé váljanak ezeknek a nyomelemeknek vagy akár ultranyomos vegyületeknek a kimutatása. Az MRM módot gyakran ajánlják kiváló érzékenysége és jó lineáris dinamikatartománya miatt167. Azonban a QqQ tömegspektrométer Q3 kamrájának terminális elektronszaporodásának telítettsége miatt a lineáris tartomány általában szűkül, és a kvantifikálás felső határa (ULOQ) nem tudja teljes mértékben lefedni néhány főbb vegyület tartalmát megbízható monitorozás nélkül. ezek a nyomelemek. Ezért a termékionok termelésének visszaszorítása kiterjesztheti az ULOO-t. Gyengített vegyületparaméterek, például ionpárok felhasználásával,depotenciális(DP) ésütközési energia(CE) csökkentheti a céltermék-ionok számát, és ezáltal kiterjesztheti az ULOQ-t[68-69]

A hagyományos kínai orvoslásIsztanszok Herbaa szárított húsos szár pikkelyes levelekkel aCistanches növény. Ez az egyik leggyakrabban használt hagyományos kínai gyógyszer, és a "sivatagi ginzeng" néven ismert. A feniletanoid-glikozidok mindig is forró kutatási témának számítottak a Cistanche deserticolában, de az elmúlt években más hidrofil komponensek, például a mannit farmakológiai hatásait is jól felismerték! 70-721. A rutin CH kvantitatív elemzésünk során azonban a főbb komponensek tartalma, mint plechinaceaside,verbascoside, és a mannit néha túl magas volt ahhoz, hogy túllépje az UV-detektor vagy az evaporative light scattering detector (ELSD) mérési tartományát. Ezért az átfogó minőségértékelés szempontjából fontos egy olyan analitikai módszer kialakítása, amely egyszerre képes monitorozni a hidrofil és hidrofób komponenseket, és pontosan számszerűsíteni mind a főbb, mind a nyomelemeket.

Az ebben a fejezetben szereplő kísérlet egy megbízható, komplex mátrixok elemzésére alkalmas módszert hozott létre - RPLC-HILIC-MS/MS folyadéktömeg-spektrometria (soros csatolású fordított fázisú hidrofil interakciós kromatográfia-tandem tömegspektrometria), amellyel 23 polaritás kimutatását sikerült elérni a Cistanche deserticolában. . Vegyületek széles körének (beleértve a hidrofil és hidrofób komponenseket) egyidejű elválasztása, elemzése és tartalom meghatározása; miközben SMRM módot használunk a módszer reprodukálhatóságának biztosítására, megfelelő CE-értékek és különböző ionpárok használatával a fenyőtoboz kiterjesztésére. A főbb komponensek, például az inulin és a verbascoside ULOQ lehetővé teszi a főbb komponensek és nyomelemek egyidejű mennyiségi meghatározását a Cistanche deserticolában, biztosítva megvalósítható eszköz a Cistanche deserticola minőségellenőrzésének javítására és a növények széles körben elterjedt célzott anyagcseréjének elősegítésére. Genomika.

1. szakasz Kísérleti anyagok

1. Eszköz

A HPLC-Qtap-MS folyadéktömeg-spektrométer Shimadzu HPLC-vel van felszerelve (2 LC-20ADxR pumpával, SIL-20ACxR automatikus mintavevővel, SPD-M20A UV detektorral, CTO-20AC termosztát, DGU-20A3R online gáztalanítás Egy gépből, CBM-20A vezérlőből, Shimadzu Corporation, Japán) és SCIEX5500 Qtrap tömegspektrométerből (ESI ionforrás, SCIEX, Foster City, CA, USA) áll . Az adatgyűjtést és számítást az Analyst Software1.6.2 szoftverrel végeztük. Mili-Q ultratiszta víztisztító rendszer (Milipore Company, USA), Mettler ME204 elektronikus analitikai mérleg (Mettler Toledo Company, Svájc), ultrahangos elszívó (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. Anyagok és reagensek

Waters Acquity UPLC HSS T3 oszlop (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), Waters XBridge Amide oszlop (4,6 mm x 150 mm, 3,5 μm).Poliéter-éter-keton(PEEK) vezeték (Agilent Company, USA). A kromatográfiás és tömegspektrometriás minőségű metanolt, acetonitrilt és tömegspektrometriás minőségű hangyasavat a ThermoFishertől (Pittsburgh, PA, USA) vásároltuk, a víz pedig laboratóriumban készült Milli-Q ultratiszta víz (Millipore, Bedford, MA, USA) . A niacint (nikotinsav, cLogP, 0.799), a borostyánkősavat (cLogP, -0.526) a Sigma-Aldrich Company-tól (St. Louis, MO, USA) vásároltuk: uridin (cLogP, -2.219), adenoid adenozin (cLogP, -2.158), inozin (cLogP, {{10}.106) és guanozin (cLogP) , -3.326) a Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd.-től vásárolták. Salidroside (cLogP -0.296), 6-dezoxikatalpol (cLogP, -3.071), fenilalanin (cLogP, -1.556), 8-epi-logánsav (cLogP , -2.366), mannit (cLogP, -2.046), szacharóz (cLogP) , -3.087), glurozid (cLogP, -1.757), alaschaniozid A (alaschaniozid A, cLogP -0.971 ), echinakozid (echinakozid, cLogP, -1 .811), ferulsav (cLogP, 1.421), akteozid (cLogP, -0.890), izoakteozid (cLogP, -0.057) és Pinoresinol- -D-glükopiranozid (cLogP, A -0.384) a Pekingi Egyetem Természetes és Biomimetikus Gyógyszereinek Kulcslaboratóriuma biztosította, a cisztanozidot F (cistanozid F, cLogP, -2.211), amelyet a Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.-től vásároltak, A cisztanozidot (cisztanozidot A, cLogP, -1.365), a 2'-acetil-lakteozidot (cLogP, -0.040) és a liquiritin apiozidot (cLogP, -0.267) Sanghajból vásároltuk A Shidande Biotechnology Co., Ltd.-t és a tubulozid A-t (tubulosideA, cLogP, 0,287) a Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd.-től vásárolták. Az összes referenciaanyag tisztaságát HPLC-DAD-IT-TOF-MS-sel tesztelték, és a tisztasága nagyobb volt, mint 98%. Az összes kontrollanyag cLogP értéket a ChemBioDraw Ultra14.0 szoftverrel (CambridgeSoftCambridge, MA, USA) számítottuk ki.