A cistanche poliszacharidok gátolják a prosztatarák sejtszaporodását és apoptózist indukálnak a ROS-generáción és az antioxidáns génelnyomáson keresztül
Jun 10, 2025
Absztrakt:
Célkitűzés:A hatások és a mögöttes mechanizmusok vizsgálataCisztanche poliszacharidokproliferációjáról és apoptózisárólprosztatarák sejtek.
Mód:
Humán prosztatarák DU145 sejteket kezeltünk alacsony, közepes és magas koncentrációbanCisztanche poliszacharidok(20, 40 és 80 mg/ml). A sejtproliferációt aMTT vizsgálat, és az apoptózist aáramlási citometria. Intracellulárisreaktív oxigénfajták (ROS)szinteket áramlási citometriával mértük, mígglutation (GSH)segítségével határoztuk meg a szinteketELISA. Az mRNS és fehérje expressziós szintjeiglutamát-cisztein ligáz katalitikus alegység (GCLC), glutamát-cisztein ligáz módosító alegység (GCLM), éstioredoxin-reduktáz 1 (TXNRD1)által elemeztékRT-PCRésWestern blot, ill.
Eredmények:
A fele-maximális gátló koncentráció (IC50).Cisztanche poliszacharidoka DU145 sejteken 40,35 mg/ml volt, így a következő kísérletekhez 40 mg/ml-t választottunk táptalajként. Az alacsony, közepes és nagy dózisokat az IC50 50%-aként, 100%-aként és 200%-aként határoztuk meg.
Minden kezelési csoport szignifikánsan megnövekedett apoptózist mutatott a kontrollcsoporthoz képest. Anagy dózisú Cistanche csoporta sejtproliferáció legnagyobb gátlását és a legmagasabb apoptózis arányt mutatták, ezt követték a közepes és alacsony dózisú csoportok (P< 0,01). A ROS szintek szignifikánsan emelkedtek, és a GSH szintek mindegyikében szignifikánsan csökkentekCistanche-kezelt csoportoka vezérléssel szemben. Nevezetesen anagy dózisú csoportjelentősen magasabb ROS- és alacsonyabb GSH-szinttel rendelkeztek, mint a közepes és alacsony dózisú csoportokban.P< 0,05); a közepes dózisú csoport hasonló különbségeket mutatott az alacsony dózisú csoporthoz képest (P< 0,05).
Kifejezési szintjeiGCLC, GCLM, ésTXNRD1(mind az mRNS, mind a fehérje) szignifikánsan lecsökkent az összes Cistanche-kezelt csoportban a kontrollhoz képest (P< 0,05). Anagy dózisú csoportEzen antioxidánsokkal kapcsolatos gének és fehérjék legjelentősebb szuppresszióját mutatták, ezt követték a közepes és alacsony dózisú csoportok (P< 0,05).
Következtetés:
Cisztanche poliszacharidokgátolja az antioxidáns faktorok expressziójátGCLC, GCLM, ésTXNRD1, ezáltal csökkentveGSH szintézis, elősegítéseROS felhalmozódás, és végül indukáljaapoptózis a prosztatarák sejtjeiben. Ezek a megállapítások arra utalnakCistancheszolgálhat atermészetes terápiás szerprosztatarák esetén keresztüloxidatív stressz által közvetített mechanizmusok.
Magas poliszacharid tartalmú Cistanche kivonat
A Wecistanche támogató szolgáltatása – Lépjen kapcsolatba velünk nagykereskedelmi árért
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950
Háttér és módszerek
ProsztatarákkbAz összes férfi rosszindulatú daganat 7,1%-a, a csúcs incidencia 60 éves kor után következik be. Kína lakosságának tovább öregedésével e betegség előfordulása várhatóan tovább fog emelkedni [1]. A tanulmányok azt sugallják, hogy a prosztatarák magas prevalenciája idősebb férfiaknál összefüggésben állhat adegeneratív változások a prosztatában, genetikai hajlam, étkezési szokások, éséletmódbeli tényezők [2].
Sebészeti reszekciótovábbra is a prosztatarák kezelésének alappillére, amelynek célja a daganattömeg nagy részének eltávolítása. Ugyanakkor jelentős szövődményekkel jár, mint plvizelet inkontinencia, szexuális diszfunkcióés ami a legkritikusabb,daganat kiújulása és metasztázis, amelyek a rossz prognózis fő okai [3].
Az elmúlt évekbenHagyományos Kínai Orvoslás (TCM)egyre nagyobb figyelmet kapott a rákterápiában betöltött szerepe miatt. A TCM segíthetfokozza az immunitást, ellensúlyozza a kemoterápia/sugárterápia mellékhatásait, ésfokozza a méregtelenítést. Néhány gyógynövény is bemutatásra kerülközvetlen daganatellenes tulajdonságok, beleértve a tumornövekedés gátlását ésapoptózis indukálása a rákos sejtekben [4].
Ezek közöttCistanche (Cistanche deserticola)egy hagyományos tonik gyógynövény, amelyről ismertimmunmoduláló, antioxidáns, ésdaganatellenes hatások. Főbb bioaktív összetevői apoliszacharidokésfeniletanoid glikozidok. Ez a tanulmány a hatásokat és a mögöttes mechanizmusokat vizsgáljaCisztanche poliszacharidok-onprosztatarák DU145 sejtek proliferációja és apoptózisa.
1. Anyagok és módszerek
1.1 Főbb anyagok és reagensek
DU145 humán prosztataráksejteka Tongpai Biotech-től (Sanghaj, Kína) szerezték be.
Cisztanche poliszacharidok(Tételszám: 0287181) a Weikeqi Bio Co., Ltd.-től (Sichuan, Kína) vásároltuk.
Magzati szarvasmarha szérum, penicillin/sztreptomicin, ésDMEMa Zeta Life (USA) biztosította.
MTT vizsgálat, Annexin V/PI apoptózis készletek, RIPA lízispuffer, BCA fehérje kvantifikációs készletekaz Elabscience-től (Sanghaj, Kína) szerezték be.
Reaktív oxigénfajták (ROS) érzékelő készletésGSH ELISA készleteka BioLab-tól (Sanghaj, Kína) vásároltuk.
Trizol reagens, fordított átírási készletek, ésPCR készleteka NeuroSym-től (Hangzhou, Kína) szerezték be.
Elleni antitestekGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktin, és a megfelelő másodlagos antitesteket az UnivBio-tól (Sanghaj, Kína) vásároltuk.
1.2 Sejttenyésztési és -proliferációs vizsgálat
DU145 sejteket tenyésztettünkDMEM 10% FBS-sel és 1% penicillin/sztreptomicinnel kiegészítveCO₂ inkubátorban. AMTT vizsgálat, a logaritmikus fázisú DU145 sejteket 96 lyukú lemezekre oltottuk, ésCistanche poliszacharid oldatokkoncentrációinál10, 20, 40 és 80 mg/ml. A kontrollcsoport csak DMEM táptalajt kapott.
24 órás kezelés után,20 µl 5 mg/ml MTT-tminden lyukba adtunk, és 4 órán át inkubáltuk. A felülúszót eltávolítottuk, és150 µl DMSO-tkerült hozzáadásra. 10 perces rázás után az abszorbanciát a következő helyen mérjük490 nmmikrolemez-olvasó segítségével. AIC50számították, és20, 40 és 80 mg/mlmint lettek kiválasztvaalacsony, közepes és nagy dózisokbana későbbi kísérletekhez. Asejtproliferáció gátlási sebességeígy számították ki:
Gátlási arány (%)=(OD_kontroll - OD_kezelt) / OD_kontroll × 100
1.3 Apoptózis vizsgálat
A log-fázisú DU145 sejteket különböző koncentrációkkal kezeltükCisztanche poliszacharidokcsoportosítások szerint. Rögzítés és festés utánAnnexin V-FITCésPIapoptotikus sejtek jelölésére használták.Áramlási citometriafluoreszcens jelek kimutatására végeztük, és feljegyeztük az apoptotikus sejtek százalékos arányát.
1.4 Az intracelluláris ROS és GSH szintek kimutatása
A ROS szinteket aROS fluoreszcens szondaés áramlási citometria. A GSH szinteket számszerűsítettükELISA. Egy standard görbét készítettünk ismert koncentrációjú GSH standardok felhasználásával, és abszorbanciát mértünk a minták GSH-koncentrációinak kiszámításához.
1,5 RT-PCR a GCLC, GCLM, TXNRD1 mRNS expressziójához
A teljes RNS-t extraháltukTrizolés cDNS-t szintetizáltunk. A PCR-t specifikus primerekkel végeztük:
GCLC:
Előre: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3"
Fordítva: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3
GCLM:
Előre: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'
Fordított: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Előre: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3
Fordított: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
-aktin (belső kontroll):
Előre: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Fordított: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'
Erősítési feltételek: 95 fok 60 másodpercig, majd 30 ciklus 95 fokos 30 másodpercig, 60 fok 30 másodpercig és 72 fok 60 másodpercig. A PCR-termékeket agélelektroforézis, és a relatív génexpressziót normalizálták-aktin.
1.6 Western-blot fehérjeexpresszióhoz
A teljes fehérjét a következővel extraháltukRIPA puffer, a fehérjekoncentrációt pedig aBCA vizsgálat. A fehérjéket aSDS-OLDAL, áthelyezve idePVDF membránokelleni elsődleges antitestekkel, blokkolva és éjszakán át 4 fokon inkubáltukGCLC, GCLM, TXNRD1, és-aktin. -val való inkubálás utánHRP-konjugált másodlagos antitesteksegítségével a sávokat vizualizáltukkemilumineszcenciaés számszerűsítveImageJ szoftver.
1.7 Statisztikai elemzés
Minden adatot a segítségével elemeztünkSPSS 25.0. Egyirányú ANOVA ésLSD-t tesztekstatisztikai szignifikancia meghatározására használták.
