A Cistanche Deserticola poliszacharidok javítják a bél öregedését az NLRP3 gyulladásos aktiváció gátlásával
Nov 12, 2025
Az öregedés több élettani funkció fokozatos hanyatlásához vezet, és növeli az életkorral összefüggő betegségek kockázatát [1]. Tanulmányok kimutatták, hogy az öregedés jelentős hatással van a bél szerkezetére és működésére [2]. Az emésztés, az anyagcsere és az immunvédelem központi szerveként a bél öregedése tápanyag-felszívódási zavarokat, anyagcserezavarokat és károsodott immunfunkciót okozhat [3–4], ezáltal növelve a gyomor-bélrendszeri betegségekre való hajlamot [5]. A krónikus gyulladás a bél öregedésének egyik jellemzője, de molekuláris mechanizmusai még nem teljesen tisztázottak. Jelenleg az öregedésgátló szerek főként a béta-nikotinamid-mononukleotidot (NMN), a rapamicint, a dasatinibet és a kvercetint tartalmazzák [3]. Ezek közül az NMN az esszenciális NAD+ koenzim kulcsfontosságú prekurzora, és számos tanulmány megerősítette, hogy jelentősen késlelteti a természetes idős egerek bélrendszeri öregedését; a területen széles körben elismert hatékony beavatkozásként [4–5]. Ezért nagy jelentőséggel bír a releváns mechanizmusok és beavatkozási stratégiák feltárása.
Cistanche szájon át szedhető ital öregedéssel összefüggő betegségekre
Vegye fel a kapcsolatot most, hogy ismerje meg a kínai ciszternatermesztőket
A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszternaexportőre:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
A nukleotid-kötő oligomerizációs doménszerű receptorcsalád pirin domént tartalmazó 3 (NLRP3) gyulladása a veleszületett immunitás kulcsfontosságú szabályozója, és fontos szerepet játszik az öregedéssel összefüggő betegségekben. Aktiválása két jelet igényel. Az első jel: patogén-asszociált molekuláris minták (PAMP-ok) és károsodással összefüggő molekuláris minták (DAMP-k) indukálják az NLRP3 és az interleukin-1 prekurzora (pro-IL-1) expresszióját. A második jel (mint például a káliumkiáramlás és a mitokondriális károsodás) gyulladást vált ki, aktiválja a kaszpáz-1-et, és hasítja a pro-IL-1 és pro-IL-18 érett IL-1 és IL-18, ezáltal gyulladást okoz [6]. Az öregedés során a bél homeosztázis megbomlik, ami gyulladást elősegítő faktorok, például lipopoliszacharid (LPS) felszabadulásához vezet, amely tartósan aktiválja az NLRP3 gyulladást, és krónikus, alacsony fokú gyulladást hoz létre. Ez tovább súlyosbítja a bélgát károsodását és a diszbiózist, megváltoztatja a szoros junction fehérjék expresszióját, növeli a bél permeabilitását és felgyorsítja a bél öregedését [7–10].
A Cistanche deserticola, a „sivatag ginzengjeként” ismert, nagyra becsült hagyományos kínai gyógy- és élelmiszer-homológ gyógynövény tonizálja a vese yangot, táplálja az esszenciát és a vért, valamint nedvesíti a beleket, hogy enyhítse a székrekedést. Aktív poliszacharidjai öregedésgátló, antioxidáns és bélvédő tulajdonságokat mutatnak [11–12]. A bélrendszer védelmét illetően a Cistanche deserticola poliszacharidok (CDP-k) módosíthatják a bél mikrobióta egyensúlyát azáltal, hogy gátolják a Toll-like receptor 4 (TLR4)/nukleáris faktor-kappa B (NF-κB) útvonal aktiválódását, ezáltal csökkentve az LPS szintjét és helyreállítva a bélgát funkcióját [13–14]. A CDP-k az AMP-aktivált protein kináz (AMPK)/sirtuin 1 (SIRT1) útvonal aktiválásával javíthatják a mitokondriális működést, késleltetik a sejtek öregedését, szabályozzák a lipidanyagcserét és enyhíthetik a lipotoxikus károsodást a bélhámsejtekben [15].
Bár a CDP-k bélvédő hatásait kimutatták, továbbra sem világos, hogy javítják-e a bél öregedését az NLRP3 gyulladásos útvonal elnyomásával. Ennek a tanulmánynak az a célja, hogy megvizsgálja azt a mechanizmust, amellyel a CDP-k gátolják az NLRP3 gyulladásos aktiválódását.javítja a bél öregedését.
Anyagok
1.1 Kísérleti állatok
Ötven egészséges hím C57BL/6J egeret (10 db 2 hónapos korban; 40 db 20 hónapos korban) a Beijing Speifu Biotechnology Co., Ltd.-től vásároltunk. Gyártási engedély: SYXK (Peking) 2023-0011. Az állatokat gát környezetben helyezték el a Hebei Tartományi Hagyományos Kínai Orvoslás Kórházának Kísérleti Állatlétesítményében a következő körülmények között: hőmérséklet 22 ± 2 fok, relatív páratartalom 50% ± 10%, és 12 órás világos/12 órás sötét ciklus. Minden egeret 1 hétig akklimatizáltunk. Ezt a tanulmányt a Hebei Tartományi Hagyományos Kínai Orvosi Kórház Állatgondozási és Felhasználási Intézményi Bizottsága hagyta jóvá (IACUC-HPHCM-2025001).
1.2 Műszerek és reagensek
Kriosztát (Thermo Fisher; CryoStar NX50)
Lézeres pásztázó konfokális mikroszkóp (Nikon; AX)
Valós idejű PCR rendszer (Thermo Fisher; 7500)
Multimódusú lemezolvasó (Tecan; Spark)
Béta-nikotinamid mononukleotid (Bontac, Kína; Kat. BT05N120A005)
SA- -gal festőkészlet (Solarbio, Peking; Cat. 250003003)
Egér LPS ELISA készlet (CUSABIO/Huamei, Wuhan; Cat. CSB-E13066m)
TransZol Up Plus RNS kit (TransGen Biotech, Peking; Cat. ER501-01-V2)
MonAmp ChemoHS qPCR Mix (Monad; Kat. MQ00501S)
Lgr5 poliklonális antitest (Wuhan Sanying; Cat. 30007-1-AP)
ZO-1 monoklonális antitest, NLRP3 monoklonális antitest, kaszpáz-1 monoklonális antitest, ASC monoklonális antitest, GAPDH monoklonális antitest, Ki67 monoklonális antitest (Abcam; kat. ab307799, ab263899, ab263899, ab263899, ab179,015, ab179,08 ab15580)
Mód
2.1 Cistanche deserticola poliszacharidok előállítása
A Cistanche anyagot (50 g) kétszer extraháltuk 8-szoros térfogatú vízzel, minden alkalommal 1 órán át. A szűrleteket egyesítjük és szobahőmérsékletre hűtjük. A kicsapás céljából vízmentes etanolt adtunk hozzá 80%-os végső koncentrációig. Centrifugálás után a felülúszót elöntöttük. A csapadékot vízben feloldottuk, dializáltuk, majd liofilizáltuk, hogy megkapjuk a mintát.
2.2 Az állatok csoportosítása és adminisztrációja
Az akklimatizációt követően negyven 20 hónapos C57BL/6J egeret véletlenszerűen besoroltunk a természetes öregedési csoportba, az alacsony dózisú CDP-csoportba (2,5 g·kg-1), a nagy dózisú CDP-csoportba (5,0 g·kg-1) és az NMN-csoportba (200 mg·kg-1). További tíz 2 hónapos SPF C57BL/6J egér szolgált fiatal kontrollcsoportként. Az alacsony és a magas CDP dózisokat orális szondán keresztül adtuk be 2,5 g·kg-1 és 5,0 g·kg-1 értékben. A testfelület-konverziót és a 12-es ember-egér konverziós tényezőt [16] alkalmazva ezek a felnőttkori klinikai egyenérték dózis körülbelül 1-szeresének és 2-szeresének felelnek meg. Az NMN csoport 200 mg·kg-1 NMN-t kapott szondán keresztül. A fiatal kontroll és a természetes idősödő csoportok azonos térfogatú fiziológiás sóoldatot (10 ml·kg-1) kaptak. A kezeléseket 2 hónapig folyamatosan végezték.
2.3 Fagyasztott metszetek előkészítése
Az egereket nátrium-pentobarbitál (30 mg·kg-1) intraperitoneális injekciójával érzéstelenítettük, majd elaltattuk. A hasüreget gyorsan felnyitottuk, a bélfodort elválasztottuk, és a csípőbélszövetet összegyűjtöttük, és 5 μm-es metszetben lefagyasztottuk [17].
2.4 SA- -gal vizsgálat a bél-galaktozidáz aktivitásra
A festést az SA- -gal kit utasításai szerint végeztük. Inkubálás után a festőoldatot eltávolítottuk, és a metszeteket PBS-sel mostuk. A képeket fordított mikroszkóppal gyűjtöttük össze.
2.5 Valós idejű PCR az öregedéssel összefüggő szekréciós fenotípushoz (SASP)
A teljes RNS-t az ileumszövetből a TransZol Up Plus kit segítségével extraháltuk. A reverz transzkripciót GoScript rendszerrel végeztük a következő körülmények között: 42 fok 15 percig, 70 fok 15 percig, 4 fok 10 percig. A valós idejű PCR-t MonAmp ChemoHS qPCR Mix alkalmazásával végeztük, a következő ciklusokkal: 95 fok 10 perc; majd 40 ciklus 95 fok 15 s, 60 fok 1 perc. Olvadási görbe: 95 fok 15 s, 60 fok 15 s, 95 fok 15 s. A GAPDH szolgált belső referenciaként, a relatív mennyiségi meghatározás pedig a 2^-ΔΔCt módszert alkalmazta. Az alapozókat a Promegától vásároltuk. A primer szekvenciákat az 1. táblázat mutatja be.
2.6 Immunfluoreszcens festés a ZO-1 expressziójához
Az ileális szövetet 4%-os paraformaldehidben fixáltuk, és 5 μm-es paraffinmetszettel metszettük. A metszeteket 0,3%-os Tritonnal X-100 permeabilizáltuk 15 percig, majd 10%-os kecskeszérummal blokkoltuk 1 órán át szobahőmérsékleten. A ZO-1 (1:200) elleni elsődleges antitestet egy éjszakán át 4 fokon alkalmaztuk. PBS-mosás után a Cy3-konjugált másodlagos antitestet (1:500) 1 órán át szobahőmérsékleten, sötétben inkubáltuk. A sejtmagokat DAPI-val ellenfestettük 5 percig. A tárgylemezeket fakulásgátló közeggel szereltük fel, és konfokális mikroszkóppal leképeztük. A fluoreszcencia intenzitását Image-Pro szoftverrel határoztuk meg.
2.7 Immunhisztokémia a Ki67 és Lgr5 expressziójához
Az ileális metszeteket Ki67 (1:1000) és Lgr5 (1:200) primer antitestekkel inkubáltuk egy éjszakán át 4 fokon az IHC kit protokollt követve, majd a megfelelő másodlagos antitestekkel. DAB-t használtunk a kromogén fejlődéshez. Az eredményeket fénymikroszkóppal figyeltük meg. Az átlagos optikai sűrűséget Image-Pro szoftverrel határoztuk meg.
2.8 ELISA az LPS-szintekhez
A standardokat és a mintákat (100 μl/lyuk) adtuk a lemezhez, és szobahőmérsékleten 1,5 órán át inkubáltuk. Ezután HRP-konjugált sztreptavidin oldatot (100 μl per lyuk) adtunk hozzá, és 30 percig inkubáltuk. A szubsztrátot fénytől védett körülmények között adtuk hozzá, és 30 percig reagáltattuk. A reakciót leállító oldattal állítottuk le, és az abszorbanciát 450 nm-en mértük.
2.9 Western blot az NLRP3-hoz, a kaszpáz-1-hez és az ASC-hez
Körülbelül 30 mg csípőbélszövetet őröltünk folyékony nitrogénben. Proteáz/foszfatáz inhibitorokat tartalmazó RIPA lízispuffert adtunk hozzá; A lizátumokat 30 percig jégen inkubáltuk, és 12 000 x g-vel, 4 fokon 15 percig centrifugáltuk, hogy összegyűjtsük a felülúszókat. A fehérjekoncentrációt BCA-teszttel határoztuk meg, és 2 ug/μL-re állítottuk be. Egyenlő mennyiségű fehérjét (20-40 ug) SDS-PAGE-val választottunk el, és PVDF membránokra vittük át. A membránokat 5%-os zsírmentes tejjel blokkoltuk 1 órán át szobahőmérsékleten, majd elsődleges antitestekkel (NLRP3 1:1000, Kaszpáz-1 1:500, ASC 1:1000) inkubáltuk éjszakán át 4 fokon, majd HRP-konjugált másodlagos antitestekkel 50100 szobahőmérsékleten. A TBST mosások után jeleket fejlesztettek ki. A sávintenzitást GAPDH-ra normalizáltuk.
2.10 Statisztikai elemzés
Az adatokat átlag ± szórásban fejezzük ki. A statisztikai analízist és az ábrázolást az SPSS 26.0, illetve a GraphPad Prism 8.0.2 segítségével végeztük. Egyutas ANOVA-t használtunk a csoportok közötti különbségek felmérésére, majd Tukey post hoc tesztjét. A statisztikai szignifikancia értéke P < 0,05.
Gyakorlati megjegyzések a bélmotilitás és a táplálékkiegészítők fejlesztése iránt érdeklődő olvasóknak
A Cistanche deserticola funkcionális fókusza: Hagyományosan a belek nedvesítésére és a székrekedés enyhítésére használják; A modern adatok támogatják a gát támogatását, a gyulladás modulációt (TLR4/NF-κB) és a mitokondriális funkciókat az AMPK/SIRT1-en keresztül.
Az itt feltárt potenciális öregedésgátló bélmechanizmus: Az NLRP3 gyulladásos aktivációjának elnyomása; az LPS-vezérelt alacsony fokú gyulladás csökkentése; szoros csomópontok megőrzése (pl. ZO-1); a hámburjánzás/szárszár markerek fenntartása (Ki67, Lgr5).
Tipikus kísérleti orális adagok egerekben: 2,5–5,0 g · kg–1 CDP 2 hónapig; NMN 200 mg·kg-1 pozitív kontrollként.
Fordítási figyelmeztetés: Az egér dózisai nem közvetlen emberi ajánlások. A tanulmány testfelület-skálázást alkalmaz; emberrel egyenértékű összetétel és biztonság, azonosságvizsgálat és GMP gyártás szükséges a termékfejlesztés előtt.
