A Cistanche Tubulosa védi a dopaminerg neuronokat az apoptózis és a gliasejtekből származó neurotróf faktor szabályozása révén: in vivo és in vitro

A Parkinson-kór (PD) egy neurodegeneratív betegség, amelynek kóros jellemzője a csökkent nigrostriatális dopamin. A hagyományos kínai orvoslás (TCM) klinikai gyakorlatában a Cistanche tubulosa nanopor terápiás hatással bír a PD-re. A terápiás mechanizmus azonosítása érdekében ez a tanulmány az MPP plusz által kiváltott különböző dózisú toxicitás védőhatását tesztelte MES23.5 sejtekben az MTT-teszt és a 1-metil-4-fenil-1 segítségével. ,2,3,6-tetrahidropiridinnel (MPTP) indukált PD egerek (vivőanyagok). Immunhisztokémiát használtunk a citomorfológia és a tirozin-hidroxiláz (TH) expressziójának értékelésére. A TH, a glia sejtvonalból származó neurotróf faktor (GDNF) és receptorai expressziójának kimutatására vivőanyagokban végzett viselkedési teszteket, dopaminban végzett nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) teszteket, immunhisztokémiát és Western blot analízist alkalmaztak. Eredményeink azt mutatták, hogy a cistanche tubulosa nanopor javította az MPP plusz kezelt sejtek életképességét, növelte a TH expressziót és csökkentette az apoptotikus sejtek számát. Ezenkívül dózisfüggő módon növelte a Bcl2 fehérje expresszióját és elnyomta a Bax fehérje expressziót az MPP plusz-kezelt sejtekben.

Továbbá,cistancheA tubulosa nanopor javította a hordozó egerek viselkedési hiányosságait, csökkentette az úszás stacionárius időtartamát, fokozta a spontán aktivitás képességét, és növelte a GDNF, a GDNF család alfa receptora (GFR 1) és a Ret expresszióját a substantia nigra sejtjeiben. SN).

Ezenkívül a GDNF, a GFR 1 és a Ret fehérje expressziója nőtt a különböző dózisú kezelést követőencistanchetubulosa nanopor, jelentős különbséggel a nagy dózisú és a hordozó csoport között. A Bcl2 és a Bax fehérje expressziója hasonló volt in vivo és in vitro, ami arra utalcistancheA tubulosa nanopor anti-apoptotikus hatást fejt ki a neuronokban.

Kattintson a cistanche violacea termékre

Bevezetés

A Parkinson-kór (PD) egy gyakori neurodegeneratív betegség, amely idős embereknél fordul elő, és a substantia nigra (SN) dopaminerg neuronjainak kóros megnyilvánulása a degeneráció következtében. A betegség súlyossága korrelál a dopamin (DA) idegsejt-veszteséggel az SN-ben, ami összhangban van azzal a nézettel, hogy a neurodegeneratív folyamat sok éven keresztül halad előre, mielőtt bármilyen tünet megjelenne (Sawle és Myers, 1993). A betegség progresszív jellege érdekes terápiás beavatkozási lehetőségeket sugall a mögöttes neurodegeneratív folyamat blokkolásával. Ezért jelentős érdeklődésre tart számot a neurotróf faktorok terápia által kiváltott erős és specifikus hatásainak keresése a DA neuronok túlélésére.

A neurotróf faktorok esszenciális fehérjék, beleértve az idegnövekedési faktort (NGF), az agyból származó neurotróf faktort (BDNF) és a gliasejtekből származó neurotróf faktort (GDNF), amelyek elősegítik az idegek növekedését, a neurológiai fejlődést, az axonális irányítást és az idegsejtek működését. A dopaminerg neuronokat védő és elősegítő neurotróf faktorok közül a GDNF rendelkezik a legerősebb hatással (Hong et al., 2008; Rangasamy et al., 2010; Allen és mtsai, 2013). A GDNF-ről kimutatták, hogy erős neurotróf hatást fejt ki a DA neuronokra in vitro (Lin et al., 1993), és in vivo neuroprotektív hatást fejt ki. Kimutatták, hogy a GDNF megmenti a nigrális DA neuronokat a lézió által kiváltott sejthaláltól patkányokban végzett műtéti vagy toxinok által kiváltott axotómia után (Beck és mtsai, 1995; Kearns és Gash, 1995; Sauer et al., 1995) és részben azután is. N-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) szisztémás beadása egerekben (Tomac et al., 1995). A dopaminerg neuronok degenerációjának hátterében a neuronális apoptózis megnövekedett gyakorisága és a neurotróf faktorok csökkent védőhatása áll, amelyeket potenciálisan különböző kóros tényezők váltanak ki (Holden et al., 2006).

cistancheA tubulosa a Cistanche nemzetséghez tartozó számos növényből származó gyógynövény. Ez a vesehiány-szindróma fő terápiás lehetősége, amely szorosan kapcsolódik az androgén hormonokhoz a hagyományos kínai orvoslásban (TCM). A mai napig rengeteg klinikai és alapkutatáscistanchetubulosa kimutatták a neurodegeneratív betegségek aktivitását. A TCM vese-tonizáló receptek azonosítása a PD kezelésben így alternatív klinikai kezelést jelenthet a PD számára. Az echinakozid (ECH) a gyógynövényekben található fő bioaktív komponenscistanchetubulosa. Tanulmányok kimutatták a Cistanche és az ECH glikozidjai, a verbaszkozid (VER) és az icariin (ICA) terápiás hatásait Alzheimer-kórban (AD), PD-ben és más vaszkuláris demenciában szenvedő betegekben (Urano és Tohda, 2010; Wang és mtsai, 2013). Wu et al., 2014). Wu és mtsai. (2014) azt javasolta, hogy a cistanche. Az elegendő ECH-t és akteozidot tartalmazó tubulosa kivonatok javították az A -42 által okozott kognitív diszfunkciót az amiloid lerakódás blokkolásával és a kolinerg és hippocampalis dopaminerg neuronális működés visszafordításával. Tao et al. (2015) azt találták, hogy a cistanche tubulosa-ból (Ph Gs-Ct) származó fenil-etanoid glikozidok megakadályozták a nagy magasságú agyödémát azáltal, hogy csökkentették az AQP4 fehérje és mRNS expresszióját patkánymodellek agyszövetében.

Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a kínai gyógynövény-vegyületek, beleértve a három összetevőtcistanchetubulosa, epimedium és rhizoma poligonális, enyhítette a dopaminerg neuronok károsodását és növelte a dopamin szintjét a neurotróf faktorok expressziójának szabályozásával (Wu et al., 2013).

Így még nem tudni, hogy acistancheA tubulosa által kiváltott neuroprotektív hatások hosszan tartóak, és a nigrális DA neuronok GDNF beadásával történő megmentése milyen mértékben teszi lehetővé a PD állatok szimptomatológiája szempontjából lényeges motorikus viselkedések jelentős megőrzését. Ez a tanulmány egy TCM vesetonizáló receptet használt,cistanchetubulosa nanopor, amely nemzeti szabadalmat kapott (szabadalmi szám: 2011103028541) Kínában, és korábban bizonyos terápiás hatást mutatott PD-ben. Jelen tanulmány ezért a neuroprotektív és regeneratív hatások vizsgálatára irányultcistanchetubulosa kezelés, valamint a MES23.5 sejtek és a viselkedési definitív patkányok apoptózisának, valamint a GDNF szabályozásának vizsgálata céltesztek sorozatával mérve.

Anyagok és metódusok

Anyagok, reagensek és berendezések

cistancheA tubulosát a Beijing Tong Ren Tang Group, Co., Ltd.-től vásárolták, Peking, Kína. Az ECH, a VER és az ICA a kínai Nemzeti Élelmiszer- és Gyógyszerellenőrzési Intézettől származott. A MES23.5 dopaminerg neuronális sejtvonalat Biao Chen professzor ajándékozta, a Pekingi Fővárosi Orvostudományi Egyetem Neurobiológiai Laboratóriumának munkatársa. Ötven C57BL/6 hím egeret (egyenként 20–25 g tömegű) vásároltunk a Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.-től (engedélyszám: SCXK2012-0002), Shanghai, Kína.

Az MPP pluszt, az MTT-t és a glutamint a Sigma-Aldrich-től (Carlsbad, CA, USA) vásároltuk; A DMEM/F12 táptalajt és a magzati szarvasmarha-szérumot a Gibco Co.-tól (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) vásároltuk; és az MPTP-t, a DA standardot és a homovanillinsav (HVA) standardot a Sigma-Aldrich-től (Carlsbad, CA, USA) vásároltuk. -aktin, Bax, Bcl2, GDNF, GDNF család receptor alfa (GFR 1) és Ret antitesteket a Cell Signaling Technology, Inc.-től (Beverly, MA, USA) vásároltunk; A 3,3'-diaminobenzidin (DAB) festőreagens készletet a Fuzhou Maixin Biotech., Ltd.-től (Fujian, Kína) vásároltuk; és az SDS-PAGE gélminta-előkészítő készletet, az ultraszenzitív fokozott kemilumineszcenciás (ECL) detektáló készletet és a bicinkoninsav (BCA) tesztet a Beyotime Institute of Biotechnology-tól (Peking, Kína) vásároltuk.

Ez a tanulmány a következő eszközöket használta: ELX800 mikrolemez-olvasó (Bio Tek Winooski, VT, USA); CO2 inkubátor (Heraeus, Hanau, Németország); Gel DOC 2000 gél képalkotó elemző rendszer, elektroforézis cella és elektroforézis tartály (Bio-Rad, Hercules, CA, USA); DU-650 fehérjeanalizátor (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA, USA); 5417R nagy sebességű hűtött centrifuga (Eppendorf, Hamburg, Németország); SXQM kettős bolygóműves golyósmalom (Changsha, Tencan Powder Technology Co., Ltd, Hunan, Kína); MM400 keverőmalom (Retsch GmbH, Haan, Németország); Agilent 1200 nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC; Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA); PowerPac Basic elektroforézis, PowerPac Basic transzmembrán transzfer rendszer, Universal Hood II kemilumineszcenciás képalkotó, S1000 Thermal Cycler RNS reverz transzkripciós rendszer (Bio-Rad); Motic Med 6.0 szövet- és sejtképelemző rendszer (Motic China Group, Co., Ltd, Xiamen, Kína).

Előkészítésecistanchetubulosa Nanopor

cistanchetubulosát lemértük, majd tisztítottuk és dehidratáltuk. A hagyományos porítás utáncistanchetubulosa finom port áttört egy 200-hálós szitán, és fagyasztva szárítottuk. Az elkészítéséhez szabályozott hőmérsékletű vákuum- és nagyenergiájú golyósmalmot használtakcistanchetubulosa nanopor. Először is nyersencistanchetubulosa nanoport egy vákuumgolyós őrlőtartályba helyeztük, amely keményfém őrlőgolyókkal volt megtöltve. Az őrlőgolyók és a cistanche tubulosa nanopor közötti arány 15:1 és 5:1 között változott. Finom por előállításához a nagy energiájú golyósmalom sebességét és időtartamát 300 fordulat/percre, illetve 20 percre állítottuk be. A finom port lemértük nanoméretű anyagok feldolgozásához, és keverőmalomban 25/s frekvenciával és 20-as oszcillációval dolgoztuk fel három ismétlésig. PBS-t használtunk a 25 mg/ml-es törzsoldat feloldására és elkészítésére, majd 30 perces ultrahangos kezelést, autoklávozást és végül -20 °C-on történő tárolást.

Az aktív komponensek minőségellenőrzésecistanchetubulosa HPLC-vel

Az ECH és a VER gradiens elúciót tartalmazott, töltőanyagként oktadecil-szilán kötésű szilícium-dioxidot, A-mozgófázisként metanolt és B-mozgófázisként 0,1%-os hangyasavoldatot. A detektálási hullámhossz 330 nm volt. Az ICA gradiens elúciót tartalmazott töltőanyagként oktadecil-szilánhoz kötött szilícium-dioxiddal, mozgófázisként acetonitril-víz (30:70) elegyével. A detektálási hullámhossz 270 nm volt. A mintát, a kontrollt és a negatív kontrollt egyenként 10 μl-re mértük a teszthez.

Sejtkultúra és MTT vizsgálat az MPP plusz kezelt sejtek életképességének mérésére

A MES23.5 sejteket 5% magzati borjúszérummal, 1% glutaminnal, 2% 50× Sato-oldattal és 2% penicillint/sztreptomicint tartalmazó DMEM/F12 táptalajjal oltottuk be. Ezeket 37 fokon inkubáltuk 5 százalékos CO2 inkubátorban, telített páratartalom mellett. A sejteket izoláltuk és 0,25% tripszinnel passzáltuk, és a sejtszuszpenziót a logaritmikus növekedési fázisban összegyűjtöttük. Az 1 × 105 sűrűségű izolált sejteket polilizinnel bevont 96-lyukú lemezekre oltottuk, majd különböző végső koncentrációkat (6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 és 800 μmol/) adtunk hozzá. L) MPP plusz médiát. A normál tápközeggel 24 és 48 órán át inkubált MES23.5 sejteket használtunk negatív kontrollként az in vitro kísérletekben. A különböző kezelési csoportokból származó sejteket MTT reagenssel 4 órán át inkubáltuk. A lyukakban lévő oldatot ezt követően eldobtuk, és 150 μl DMSO-t adtunk hozzá, és 10 percig oszcilláltuk. Az egyes minták abszorbanciáját 570 nm hullámhosszon mértük automatikus mikrolemez-leolvasóval. A sejtek életképességének százalékos aránya ( százalék )=a kísérleti csoport átlagos abszorbanciája / a negatív kontrollcsoport átlagos abszorbanciája × 100 százalék .

Az MPP plusz tápközeg megfelelő koncentrációit adtuk a 24 órás kezeléshez MES23.5 sejtekben, ugyanazt a megközelítést alkalmazva, mint az in vitro tenyészetnél. A kezelés után az üregben lévő oldatot eldobjuk. Különböző koncentrációjú tápközegek (10, 50, 100, 200, 250, 500 és 1000 ug/ml)cistanchetubulosa nanoport adtunk a MES23.5 sejtekhez különböző lyukakban, és 24 és 48 órán keresztül inkubáltuk. A normál tápközeggel 24 és 48 órán át inkubált MES23.5 sejteket negatív kontrollként használtuk. Az MPP plusz tápközeggel inkubált MES23.5 sejteket használtuk vivőanyagként. A méréseket minden mintánál háromszor végeztük. A megfelelő kezelési és kontrollcsoportok abszorbanciáját mértük a sejtek életképességének kiszámításához.

TH expresszió immuncitokémiával mérve

Amikorcistanchetubulosa nanopor 100, 200 és 250 ug/ml-ben volt, a sejtek túlélési aránya jelentősen megnőtt (2G. ábra). Így a következő kísérletekben a három koncentrációt teszteltük: alacsony dózisú, közepes dózisú és nagy dózisú csoportokat. Mindegyikre három replikációt teszteltünkcistanchetubulosa csoportok. Sterilizált, polilizinnel bevont fedőlemezeket helyeztünk 6-lyuklemezekre. Ezután 5 × 104 sejtet oltottunk be minden lyukba, és 24 órán át inkubáltuk. A normál kontrollcsoportban a hagyományos friss tápközeget cseréltük ki, a többi kezelési csoportban pedig 100 μmol/L végkoncentrációjú MPP plusz táptalajt cseréltünk le, hogy 24 órán át inkubáljuk. A hagyományos friss tápközeget ezután kicseréltük a normál kontroll- és vivőanyag-csoportokban, és a végső koncentráció 100, 200 és 250 ug/ml volt.cistanchetubulosa nanoport 24 órán át inkubáltuk a sejtekkel alacsony, közepes és nagy dózisban.cistanchetubulosa kezelési csoportok, ill. A különböző csoportokban lévő MES23.5 sejteket háromszor mostuk PBS-ben, hogy eltávolítsuk a felülúszót, és tovább fixáljuk 4%-os paraformaldehidben 15 percig. PBS-sel történő mosás után a sejteket peroxidáz blokkolóval inkubáltuk 37 fokon 3 0 percig, majd újra mostuk PBS-sel. A sejtpermeabilizáláshoz 0,2%-os Triton X{8}} oldatot használtunk 10 percig, majd PBS-sel mostuk.

Minden mintához normál kecskeszérumot adtunk, és szobahőmérsékleten 30 percig inkubáltuk. A normál kecskeszérumot ezután eltávolítottuk, és minden mintához PBS-ben 1:400 arányban hígított primer antitestet adtunk, és éjszakán át 4 °C-on inkubáltuk. A negatív kontrollcsoport sejtjeit PBS-sel inkubáltuk 4 °C-on egy éjszakán át. PBS-sel történő mosás után a sejteket biotinnal jelölt másodlagos antitestekkel inkubáltuk a nedveskamrában 37 fokon 20 percig. Ezután mindegyik mintát PBS-ben mostuk, és torma-peroxidáz-sztreptavidin konjugátumokkal (C munkaoldat) jelöltük 37 fokon 20 percig. PBS-sel történő mosás után a sejteket DAB reagenssel festettük sötétben körülbelül 1-10 percig, és fénymikroszkóppal követtük a barna szín kialakulását.

Mindegyik mintát kétszer mostuk desztillált vízben 1-2 percig, és a sejtmagokat hematoxilin oldattal ellenfestettük 0,5-1 percig. Miután minden egyes mintát alaposan átöblítettünk vízzel, a sejteket 1 százalékos sósav-alkoholba merítettük a differenciálódás érdekében és 1 százalékos vizes ammóniába, majd a sejteket alaposan átmostuk vízzel. Az egyes minták sejtjeit ezután 70 százalékos etanolban 2 percig, 80 százalékos etanolban 2 percig, 90 százalékos etanolban 2 percig, kétszer 95 százalékos etanolban 2 percig, és 100 százalékos etanolban 2 percig dehidratáltuk. A sejteket ezután kétszer 2 percre xilololdatba merítettük, és semleges gyantával egy tárgylemezre helyeztük. Fénymikroszkóppal minden mintán 5-10 hatékony látómezőt készítettünk és véletlenszerűen kiválasztottunk, hogy meghatározzuk a kiválasztott fehérjék expresszióját a dopaminerg neuronokban, amit a barna részecskék intenzitása jelez, és félig mennyiségileg meghatározzuk a fehérjetartalmat annak átlagos szürkeértékével. .

A MES23.5 sejtek áramlási citometriával mért apoptózisi sebessége

A tapadó sejteket egyszer mostuk PBS-sel. A sejtek izolálásához megfelelő mennyiségű EDTA-mentes tripszin oldatot adtunk hozzá szobahőmérsékleten, és az oldatot óvatosan pipettáztuk, hogy lehetővé tegyük a tapadó sejtek leválását. Ezután sejttenyésztő tápközeget adtunk a tripszinezés leállítására. Az elegyet átvittük egy új centrifugacsőbe, majd 5 percig centrifugáltuk 1500 fordulat/perc sebességgel, hogy összegyűjtsük az izolált sejteket. A felülúszó eldobása után a sejtüledéket óvatosan újraszuszpendáltuk PBS-sel, és megszámoltuk a sejteket. Körülbelül 1 × 105-5 × 105 újraszuszpendált sejtet centrifugáltunk 5 percig 1500 fordulat/perc mellett, és a felülúszót elöntöttük. Öt mikroliter Annexin V-FITC kötőoldatot adtunk a sejtüledékhez, hogy a sejteket finoman újraszuszpendáljuk. További 5 μl Annexin V-FITC-t adtunk hozzá, és alaposan összekevertük. Öt mikroliter propidium-jodid oldatot használtunk a sejtfestéshez, szobahőmérsékleten 10 percig inkubálva röviddel az áramlási citometria előtt.

Western blot analízis in vitro célra

A sejteket normál csoportra osztottuk, MPP plusz kezelési csoportra, alacsony dózisúcistanchetubulosa kezelési csoport, közepes dózisúcistanchetubulosa kezelési csoport, és nagy dózisúcistanchetubulosa kezelési csoport. Mindegyikben mértük a Bcl2 és a Bax expresszióját. Összesen 1 × 105 sejtet használtunk üregenként a 6-lyuklemezen a modellezéshez és kezeléshez minden csoportban a sejtgyűjtés előtt. RIPA puffert, proteáz inhibitort és foszfatáz inhibitort tartalmazó vegyes lizátumot adtunk hozzá, hogy a sejteket 3 0 percig jégen lizáljuk. Centrifugálás után a felülúszót fehérjeanalízishez használtuk. A teljes protein mennyiségét BCA vizsgálattal határoztuk meg, és 10%-os SDS-PAGE-val választottuk el. Az elválasztott fehérjéket membránra vittük, és 5%-os sovány tejblokkoló pufferrel inkubáltuk szobahőmérsékleten 2 órán át. A membránt ezután elsődleges antitestben (Bcl-2 0,34 mg/ml, Bax 0,11 mg/ml, 1:200 hígítás) 4 fokon egy éjszakán át inkubáltuk. Mosási lépés után a membránt egy másodlagos antitestben (0,5 mg/ml, 1:5000 hígítás) inkubáltuk 4 fokon 1 órán át, majd ECL előhívóban 2 percig a hagyományos fejlesztéshez. Quantity One szoftvert használtunk a fehérje expresszió szemikvantitatív elemzésére.

Kísérleti állatmodellezés és gyógyszeradminisztráció

Ötven, specifikus kórokozótól mentes 8-hetes hím egeret véletlenszerűen öt csoportra osztottak: normál csoport, MPTP-kezeléssel kezelt csoport (Vehicle), alacsony dózisú.cistanchetubulosa kezelési csoport, közepes dózisúcistanchetubulosa kezelési csoport, és nagy dózisúcistanchetubulosa kezelési csoport. Az állatokat 20-22 fokos hőmérsékleten tartottuk, szabad hozzáférést biztosítva élelemhez és vízhez. A normál csoport egereit intraperitoneálisan azonos térfogatú normál sóoldattal injekcióztuk hét egymást követő napon. A többi kezelési csoportban lévő egereket intraperitoneálisan MPTP-vel (30 mg/kg/nap) injektáltuk hét egymást követő napon, hogy meghatározzuk a hordozóanyagot.

A PD modellezés során az egerek az alacsony dózisú, közepes dózisú és nagy dózisúcistancheA tubulosa kezelési csoportok intragasztrikusan 4 g/ttkg/nap, 8 g/ttkg/nap és 16 g/ttkg/nap ekvivalens klinikai térfogatot kaptak.cistanchetubulosa nanoporral, 14 egymást követő napon keresztül. A kontroll- és a vivőanyag-csoportba tartozó egereknek intragasztrikusan ekvivalens térfogatú normál sóoldatot adtunk 14 egymást követő napon keresztül. Az összes kísérleti eljárást a Fujian University of TCM etikai bizottsága jóváhagyta, és a laboratóriumi állatok felhasználására és gondozására vonatkozó nemzetközileg elfogadott elvek szerint hajtották végre. Ebben a vizsgálatban minden erőfeszítést megtettünk az állatok szenvedésének minimalizálására.

Viselkedési tesztek

Úszásteszt (Zhu et al., 2014)

A testmozgások koordinációját egereknél az Úszó teszttel mértük. Az egereket egyenként víztartályba helyeztük (25 cm magas és 10 cm átmérőjű), amely 10 cm vizet tartalmazott, és csendes környezetben teszteltük, hogy rögzítsük az 5 perc alatti állóképességüket.

Nyílt terepi teszt (Kawai et al., 1998)

A mozgásszervi aktivitást Open field teszttel mértük. Az egereket csendes és gyengén megvilágított környezetben teszteltük, és egyenként egy 30 cm × 30 cm × 15 cm-es átlátszó akriltartályba helyezték, amelynek alján 6 cm × 6 cm-es elválasztórács található. Az egerek 10 percet kaptak, hogy alkalmazkodjanak a környezethez, majd ötször egymás után megmértük az egyes egerek rácsszámának mozgását és felnevelési gyakoriságát, hogy megkapjuk az átlagértékeket.

Agyszövet-mintavétel

A szövetmintavétel előtt az egereket adlibitum etettük, szabad hozzáférést biztosítva a vízhez, és 14 egymást követő napon keresztül gyógyszeres beavatkozásban részesültek. Mindegyik csoportból négy egeret választottunk ki, és gyorsan lefejeztük. Mindegyik állat SN-jét (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) elkülönítettük és jégre helyeztük. Az agyszöveteket 0,9 százalékos jéghideg nátrium-klorid-oldattal öblítettük, hogy eltávolítsuk a vért, és szűrőpapíron szárítottuk, mielőtt -80 fokon tároltuk volna. Mindegyik csoportból négy egeret intraperitoneálisan érzéstelenítettünk, és a mellkasukat kinyitottuk. Ezután minden állat bal kamrájába infúziós tűt szúrtunk. A vérkeringési rendszerből való vér eltávolítása érdekében a jobb pitvar függelékét levágtuk, és az állatot 4 fokos normál sóoldattal infundáltuk, amíg a máj elsápadt, hogy biztosítva legyen az egymást követő perfúzió. Amint a jobb pitvar kifolyása tisztává vált, minden állatot 4 százalékos paraformaldehid fixálóval perfundáltunk. A perfúzió után az egyes állatok agyszövetét óvatosan kimetszettük, és 24 órán át 4%-os paraformaldehidben utólag fixáltuk. A rögzített agyszöveteket ezután folyó víz alatt leöblítettük, etanolos oldatok fokozatos sorozatában dehidratáltuk, és xilololdatban megtisztítottuk. Ezt követte a paraffinos merítés és a beágyazás.

A DA mennyiségének változásai HPLC-vel mérve

Az egyes csoportokból származó nanopor SN-t jégfürdőbe helyeztük, amely 0,9 százalékos nátrium-klorid-oldatot tartalmazott (1:9 arány). Az agyszövetet ultrahangos sejtroncsolóval homogenizáltuk, és 1200 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 20 percig 4 fokon, hogy megkapjuk a felülúszót. A HPLC-hez Hypersil AA-ODS oszlopot (2,1 mm × 200 mm, 5 μm) használtunk 30 fokos oszlophőmérsékleten. A fluoreszcencia detektálást 280 nm λex és 340 nm λem mellett végeztük. Az injekció térfogata 10 μl volt.

TH, GDNF, GFR 1 és Ret expressziója immunhisztokémiával kimutatva

Mindegyik állatból különálló agyszövetből paraffin metszeteket (5 μm vastag) izoláltunk, és 40 fokos meleg vízfürdőbe helyeztük, hogy elsimítsák és üveglemezekre tapadjanak. Valamennyi szövetlemezt 60 fokos kemencében 3-6 órán át inkubáltuk, majd xilol viaszmentesítést, gradiens etanolos dehidratálást, majd citromsavpufferben való inkubálással és mikrohullámú sütőben 20 perces melegítéssel az antigén visszanyerését követte. A szövetlemezeket ezután 3%-os H2O2-oldatban szobahőmérsékleten 10 percig inkubáltuk. Miután háromszor mostuk PBS-ben, a szövetlemezeket normál szérummal inkubáltuk zárt kamrában szobahőmérsékleten 20 percig. Az immunhisztokémiai festést a gyártó utasításai szerint végeztük. Motic Med 6.0 képanalizátorral számítottuk ki az integrált optikai sűrűség értékét a pozitívan festett sejtekben.

Western blot elemzés egerek agyszövetében

Ez a vizsgálat a tirozin-hidroxiláz (TH), a GDNF, a GFR 1, a Ret, a Bcl2 és a Bax fehérje expresszióját értékelte. Az egyes csoportokból származó agylizátumot 3{{10}} percig homogenizáltuk jégen, majd alacsony hőmérsékleten centrifugáltuk, 20, 000 fordulat/perc, 4 fokon 5 percig. min a felülúszó összegyűjtésére. A fehérjemintákat állandó nyomáson választottuk el 1 0 százalékos SDS-PAGE géllel a fent leírtak szerint. Az elsődleges antitest koncentráció: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml és Bax 0,11 mg/ml. Az eljárás ugyanaz volt, mint fent.

Statisztikai analízis

Ez a tanulmány az SPSS 20.0 statisztikai szoftvert használta az adatfeldolgozáshoz és -elemzéshez. A paraméterértékeket átlag ± szórás (x¯) formában fejeztük ki

± S). Az egytényezős adatok elemzéséhez ANOVA-t használtunk. A csoportok összehasonlítására LSD vagy Games-Howell tesztet használtunk. P < 0.05 (vagy P < 0,01) statisztikailag szignifikáns különbségnek számított.

Eredmények

Az aktív komponensekcistanchetubulosa Nanopor

A 200–400 nm-es letapogatás tartományában ECH becistanchetubulosa és VER 330 nm-en volt a maximális abszorpciós csúcs, amely 20 percen belül megjelent. Az ICA maximális abszorpciós csúcsai 270 nm-en voltak, és 20 perc múlva jelentek meg (1A. ábra). Az eredmények azt mutatták, hogy a negatív minták nem zavarják a kimutatást (1B. ábra). A mintáknak és a kontrollnak ugyanazok a kromatográfiás csúcsai voltak, a negatív mintának pedig egy sem. Ez azt mutatta, hogy a mintában lévő többi összetevő nem zavarja a mérendő komponenst. Ezenkívül a három komponens és a szomszédos csúcsok elérhetik az elválasztási alapvonalat, és az elválasztási fok nagyobb volt, mint 1,5.

cistanchetubulosa Nanopowder Csökkentett MPP plusz - Indukált citotoxicitás MES23.5 sejtekben

A MES23.5 sejtek életképessége szignifikánsan csökkent az MPP plusz növekvő koncentrációjával. A 2F. ábra az MPP plus különböző koncentrációinak jelentős citotoxicitását mutatja.

cistanchetubulosa nanopor csökkentette az MPP plusz által kiváltott citotoxicitást és növelte a MES23.5 sejtek életképességét. A 2G ábra ezt mutatjacistancheA tubulosa nanopor 10-250 ug/ml-es dózisa dózisfüggő védőhatást fejtett ki az MPP plusszal kezelt MES23.5 sejteken.

Citomorfológiai hatásacistanchetubulosa Nanopor

A normál MES23.5 sejtek jó sejtadhézióval rendelkeztek, és orsó alakúak voltak, világos sejthatárokkal és szinapszisokkal. Az MPP plusz károsodott MES23.5 sejtek gyenge sejtadhéziót és zsugorodást mutattak, és sokuk összehúzódott szinapszisokkal szuszpendált a tápközegben. Ezek a sejtek aggregálódtak, összezsugorodtak és gömbölyűek voltak, belül vakuolákkal, és a sejtmagok szétestek vagy összeestek.cistancheA tubulosa nanopor különböző dózisokban különböző mértékben javította a MES23.5 sejtek citomorfológiáját a sejtadhézió és a hordozó csoport szinaptikus clearance-ének javításával. MES23.5 sejtek a nagy dózisbancistanchetubulosa kezelési csoport a normál kontrollcsoporthoz hasonló morfológiát mutatott (2A–E. ábra).

Hatásacistanchetubulosa Nanopor a TH expressziójáról és apoptózisáról a sejtekben

A 3. ábra a TH fehérje expressziójának szignifikáns csökkenését mutatja be a hordozó csoportban. A TH fehérje expressziója eltérő mértékben nőtt a különböző dózisokkal kezelt csoportokbancistanchetubulosa. Az LSD-teszt azonban azt mutatta, hogy nincs szignifikáns különbség a három kezelt csoport között.

A 4. ábra az apoptózis értékelésének eredményeit mutatja áramlási citometriával. Az apoptózis aránya a hordozó csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a többi csoportban. Különböző dózisokkal kezelt sejtekcistanchetubulosa nanopor eltérő mértékű csökkenést mutatott az apoptotikus arányban a hordozó csoporthoz képest. A közepes és nagy dózisú sejtekcistanchetubulosa kezelt csoportban volt a legjelentősebb javulás az apoptotikus arányban a másikhoz képestcistanchetubulosa kezelési csoportok. Az LSD teszt kimutatta, hogy a két kezelt csoport között nem volt szignifikáns különbség, de az alacsony dózisú csoport között szignifikáns különbség volt.

Hatásacistanchetubulosa Nanopowder a Bcl2/Bax fehérje expressziójáról a sejtekben

Az 5. ábra azt mutatja, hogy a Bcl2 fehérje expressziója a vivőanyag-csoport sejtjeiben szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a normál kontrollcsoportban. Ezzel szemben a Bax fehérje expressziója a hordozó csoport sejtjeiben szignifikánsan magasabb volt, mint a normál kontrollcsoportban.cistanchetubulosa kezelt csoportok fokozott Bcl2 fehérje expressziót és csökkent Bax fehérje expressziót mutattak MPP plusz kezelt MES23.5 sejtekben. A három kezelt csoport között szignifikáns különbségek voltak az LSD tesztben. Ezek a hatások dózisfüggőek voltak.

Viselkedési tesztek

Az Swimming teszt eredményei azt sugallták, hogy a vivőanyag-csoportba tartozó egerek viszonylag hosszú stacioner időtartamúak voltak, ami idővel nőtt. A 14. napon a vivőanyaggal kezelt csoport egereinek stacioner időtartama lényegesen hosszabb volt, mint a normál kontrollcsoport egereinek. Az egerek stacioner időtartama az alacsony dózisbancistanchetubulosa kezelési csoport nem különbözött szignifikánsan az egerekétől a hordozó csoportban. Azonban az egerek stacioner időtartama a nagy dózisbancistanchetubulosa kezelést kapó csoportban szignifikánsan kevesebb volt, mint a vivőanyaggal kezelt egereknél.

A nyílt terepen végzett teszt eredményei arra utalnak, hogy az MPTP által kiváltott károsodást követően az egerekben a vivőanyaggal kezelt csoport egerei jelentős csökkenést mutattak a spontán aktivitásra való képességükben, amint azt a felnevelési gyakoriság is mutatja. 14-napos adminisztráció utáncistanchetubulosa nanopor, a mérsékelt és nagy dózisú kezelési csoportban lévő egerek szignifikánsan magasabb felnevelési gyakoriságot mutattak, mint a vivőanyag-csoport egerei (6A. és B. ábra).

Hatásacistanchetubulosa Nanopowder on DA Content in Mice

Az SN DA-tartalmának változásait HPLC-vel határoztuk meg. Azt találták, hogy a DA-tartalom a hordozó csoport agyában jelentősen csökkent. A DA-tartalom PD egerek agyában alacsony dózisbancistanchetubulosa kezelési csoport nem különbözött szignifikánsan az egerektől a hordozó csoportban. Azonban,cistancheA tubulosa kezelés dózisfüggő módon növelte a DA-szintet PD egerek agyában. A nagy dózissal kezelt PD egerek agyacistanchetubulosa szignifikánsan magasabb DA-tartalommal rendelkezett, mint a vivőanyag-csoportba tartozó egerek agyában (6C. ábra).

Hatásacistanchetubulosa Nanopowder on TH Expression egerekben

A TH-pozitív sejtek száma és a TH fehérje expresszió szintje az MPTP-indukált PD egerek SN-ében alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoport egereiben. Azutáncistanchetubulosa kezelés hatására nőtt a TH-pozitív sejtek száma és a TH fehérje expresszió szintje az MPTP-indukált PD egerek SN-ében, szignifikáns különbséggel a nagy dózisú egerek között.cistanchetubulosa kezelési csoport és a vivőanyag csoport LSD-teszttel; és szignifikáns különbségek voltak a három kezelt csoport között (7. ábra).

Hatásacistanchetubulosa nanopor a GDNF és receptorai, a GFR 1 és a Ret fehérje expressziójáról egerekben

A GDNF és receptorai, a GFR 1 és Ret fehérje expresszióját a pozitívan festett sejtekben immunhisztokémiai módszerrel értékeltük. Western blot analízist alkalmaztunk a fehérje expressziós szintjének értékelésére a különböző egércsoportok SN-ében. A különböző csoportok eredményei hasonlóak voltak a két kimutatási módszerrel. A GDNF és receptorfehérjék, a GFR 1 és Ret expressziója a pozitívan festődött sejtekben az egerek SN-ében a hordozó csoportban szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a normál kontrollcsoport egereiben. Különböző adagokcistanchetubulosa kezelés növelte a GDNF-, GFR 1- és Ret-pozitív sejtek számát (8A–S. ábra).

A GDNF, GFR 1 és Ret fehérje expressziója az egerek SN-jében a hordozó csoportban szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoport egereiben. A kezelési koncentrációk növelésecistanchetubulosa nanopor jelentősen fokozta ezen fehérjék expresszióját. A GDNF, a GFR 1 és a Ret fehérje expressziója az egerek SN-ében nagy dózisbancistancheA tubulosa-kezeléssel kezelt csoport szignifikánsan magasabb volt, mint az egerekben a vivőanyaggal kezelt csoportban (P < 0,01; 8T, U ábra).

Hatásacistanchetubulosa Nanopor a Bcl2/Bax fehérje expressziójáról egerekben

A Bcl2 fehérje expressziója szignifikánsan csökkent, és a Bax fehérje expressziója szignifikánsan megnövekedett az egerek SN-ében a hordozó csoportban (P < 0,01), összehasonlítva a normál kontrollcsoport egereivel. Nagy dózisúcistancheA tubulosa kezelés szignifikánsan növelte a Bcl2 fehérje expresszióját és szignifikánsan csökkentette a Bax fehérje expressziót a hordozó egerek agyában (P < 0,01; 9. ábra). Az LSD-teszt azt mutatta, hogy nem volt szignifikáns különbség a közepes és nagy dózisú csoportok között, de szignifikáns különbség volt az alacsony dózisú csoport között.

Vita

PD és apoptózis

A PD egy neurodegeneratív rendellenesség. Zhang et al. (2005) szerint a prevalencia az 55 év feletti kínai lakosság körében 10,7 százalék, a 65 év felettieknél pedig 1,67 százalék. A PD betegek száma a globális öregedés felgyorsulásával évről évre nő, ami súlyos anyagi terhet ró a betegek családjára. és a társadalom egészében.

Az agyban a dopaminerg neuronok főként a DA szintézisében és szekréciójában vesznek részt. Széles körben elterjedtek a központi idegrendszerben, és elsősorban az SN-ben találhatók (80 százalék). A TH a DA szintézisének kulcsfontosságú sebességkorlátozó enzimje.

Így a TH aktivitás gátlása csökkenti a DA szintézist (Huot és Parent, 2007). A PD fő patológiai és biokémiai változásai a dopaminerg neuronok apoptózisa az SN-ben, a nigrostriatális DA jelentős csökkenése, valamint a Lewy testek kialakulása a dopaminerg neuronokban (Dexter és Jenner, 2013). A PD etiológiája a kapcsolódó genetikai tényezőket, környezeti tényezőket és az idegrendszer öregedését foglalja magában (Allam et al., 2005). A PD patogenezise továbbra is tisztázatlan a modern orvostudományban. Az 1960-as évek vége óta a levodopa-pótló terápiát sikeresen alkalmazzák a PD kezelésére, és a PD kezelésének fő fordulópontjaként ismerték el. Ennek a terápiának a hosszú távú alkalmazása azonban mellékhatásokat okoz, és a terápia nem kezeli a PD kiváltó okait (Del Sorbo és Albanese, 2008). Ezért a PD kezelésében kulcsfontosságú a dopaminerg neuronok védelmét célzó új gyógyszerek vagy kezelési módszerek aktív kutatása.

Korábbi vizsgálatokban a terminális dezoxinukleotidil-transzferáz által közvetített dUTP nick end jelölés alkalmazása azt mutatta, hogy a PD betegek SN-ében a dopaminerg neuronok 0,6–4,8 százaléka mutatott apoptózist (Mochizuki és mtsai, 1996). Az elektronmikroszkópos vizsgálat apoptotikus tulajdonságokat mutatott ki, beleértve a kromatikus kondenzációt és az apoptotikus testeket a dopaminerg sejtekben (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) ultrastrukturális elemzést végeztek PD-ben, AD-ben és diffúz Lewy-testbetegségben (DLBD) szenvedő betegek agyszövet-boncolásain. Apoptózisos testeket találtak az SN sűrű rétegében PD és DLBD betegekben, meggyőző bizonyítékot szolgáltatva a neuronális apoptózisra PD és kapcsolódó betegségekben. Ezért a dopaminerg neuronok apoptózisának csökkentése vagy elnyomása alapvető fontosságú a PD kezelésében.

Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy az MPTP PD-szerű tüneteket váltott ki. Az MPTP átjut a vér-agy gáton, és a B típusú monoamin-oxidázok metabolizálják az asztrocitákban. Ezt követően toxikus MPP-vé alakul át, amely a DA transzporter fehérjefelvételén keresztül felhalmozódik a dopaminerg neuronok mitokondriumaiban. Így felesleges oxigén szabad gyököket hoz létre, amelyek gátolják a mitokondriális légzőlánc komplex I aktivitását és az ATP szintézist. Ezek az események tovább elősegítik a szabad gyökök képződését és az oxidatív stressz reakciókat, és végül a dopaminerg neuronok degenerációjához és halálához vezetnek.

Ennélfogva ez a tanulmány MPP plus-t használt in vitro vivőanyag létrehozására MES23.5 dopaminerg neuronokban, és MPTP-t használt vivőegér indukálására a kölcsönös ellenőrzés érdekében. Az MTT assay eredményei szerint az MPP plus jelentősen csökkentette a MES23.5 sejtek életképességét, ami arra utal, hogy az MPP plus citotoxikus volt a dopaminerg neuronokra. Az eredmények is ezt mutattákcistanchetubulosa hatékonyan fokozta az anti-apoptotikus fehérjék expresszióját és gátolta az MPP plusz által kiváltott apoptózis növekedését.

D és GDNF

A GDNF egy neurotróf faktor, amelyet először Lin és munkatársai izoláltak. (1993). Lin és mtsai. (1993) azt is kimutatták, hogy a GDNF-nek specifikus táplálkozási hatásai vannak a patkányok középső agyában lévő dopaminerg neuronokra. A GDNF, a neurturin (NTN), az észlelés (PSP) és az artemin (ART) alkotják a GDNF családot. Szerkezetileg hasonló és funkcionálisan rokon szekréciós fehérjék (Kotzbauer et al., 1996; Baloh és mtsai, 1998; Milbrandt és mtsai, 1998; Woodbury és mtsai, 1998).

A GDNF receptor két komponensből áll. Az első komponens, a GFR, a glikozil-foszfatidil-inozitol (GPI) külső membránjához van rögzítve, és a connexin felületéhez rögzítve van. A második komponens a Ret fehérje. A kutatások kimutatták, hogy a GFR-nek négy különböző típusa van: GFR 1, GFR 2, GFR 3 és GFR 4. A GFR 1 a GDNF nagy affinitású receptora (Onochie et al., 2000; Chen és mtsai, 2001; Lindahl et al., 2001). A Ret fehérje a GDNF funkcionális receptora. A GDNF homodimer molekulája közvetlenül kötődik a GFR 1-hez, és komplexeket képez, és kölcsönhatásba lép a Ret-tel, ami a Ret dimerizációját és aktiválását eredményezi. A Ret autofoszforilációja miatt a Ret számos gyakori TH jelátviteli útvonalat aktivál. Ret fehérje hiányában a GDNF a MAPK, a PI-3 és a PLC- fehérje foszforilációját okozza, az mRNS expressziója és a C-fos funkcionális aktivitása mellett receptorfehérje, a GFR 1 révén (He et al., 2008).

Tanulmányok kimutatták, hogy a GDNF-nek volt a legerősebb védő hatása a dopaminerg neuronokra (Rangasamy et al., 2010; Campos és mtsai, 2012). MPTP-t és 6-hidroxidopamint (6-OHDA) használó hordozókban a dopaminerg neuronok károsodásának kiváltására a GDNF megvédi a dopaminerg neuronokat azáltal, hogy csökkenti az apoptózist, és elősegíti az axonnövekedést az őssejt-differenciáció indukálása érdekében (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). Lin és mtsai. (1993) kimutatták, hogy a GDNF specifikusan elősegítette a dopaminerg neuronok életképességét, differenciálódását és axonális növekedését, hogy elősegítse a DA felvételét az idegsejtekben. A tanulmány azt is kimutatta, hogy a GDNF nemcsak az akut toxicitást akadályozta meg, hanem enyhítette az MPP plusz vagy az 6-OHDA hosszú távú toxicitását is a dopaminerg neuronokban, továbbá megelőzte a sejthalált stresszes vagy sérült sejtekben (Yu et al., 2010). Ezenkívül a GDNF elősegítette a neurális őssejtek proliferációját és a dopaminerg neuronok felé történő differenciálódását a középagyban (Lindsay, 1995), hogy megmentse a dopaminerg neuronokat a retrográd degenerációtól (Hong-Juan és mtsai, 2011).

Tanulmányok kimutatták, hogy a GDNF expressziója az SN-ben szignifikánsan csökkent állati hordozókban (Yang et al., 2010). Ez arra utal, hogy ez lehet a PD patkányok patogenezisének egyik mechanizmusa. 5–15 ug/d GDNF injekció egy MPTP-indukált hordozóállat laterális kamrájába vagy striatumába három egymást követő hónapon keresztül elősegítette a dopaminerg rendszer nigrostriatális helyreállítását a hordozó állatban (Grondin et al., 2002). A PD GDNF-kezelésének állati vivőanyagokkal végzett kezelésével kapcsolatos tanulmányok kimutatták, hogy a GDNF intracerebrális injekciója különböző agyi régiókba, például az SN-be, a nucleus caudatusba és az oldalkamrába, javította a PD állatmodelljeivel kapcsolatos mozgászavarokat, beleértve a csökkent motoros aktivitást, izommerevséget és remegés (Grondin et al., 2002).

A GDNF azonban nem tud közvetlenül átjutni a vér-agy gáton. Ezért a GDNF helyi agyi injekciója jelentős kockázattal és nehézségekkel jár a klinikai alkalmazás során. Az exogén GDNF-nek szabályozott felszabadulású mikrogömbökön, nyújtott hatóanyag-leadású kapszulákon és vírusgéneken keresztül történő bejuttatásának lehetőségeit még tanulmányozzák (Liang és mtsai, 2010; Yang et al., 2010; Qiao és mtsai, 2012). Tekintettel az exogén GDNF agyba történő bejuttatására szolgáló különféle technikák korlátaira, az endogén GDNF felszabadulását elősegítő neuroprotektív szerek jelentősek a klinikai alkalmazásban.

PD éscistanchetubulosa Nanopor

A PD gyakoribb a középkorú felnőtteknél és az időseknél. A TCM elmélete úgy véli, hogy a PD elsősorban az agyban található, és főként a máj- és vesehiánynak köszönhető, az életenergia és a vér elégtelensége mellett. Ezen elmélet szerint a PD-kezelésnek a vese és a csontvelő élénkítésére kell összpontosítania. Yang et al. (2010) randomizált, kettős vak és placebo-kontrollos klinikai vizsgálatokat alkalmaztak, és azt találták, hogy a Madopar és a vese-tonizáló receptek alkalmazásával végzett kombinációs terápia enyhítette a PD-s betegek motoros diszfunkcióit. A kezelés eredménye jobb volt, mint a Madoparral végzett egyszeri terápia. A TCM monoterápia vagy vegyület felírásának kezelési hatékonysága PD-ben PD állatmodellekben és klinikai alkalmazásokban igazolódott. A vese tonizálására és a vérkeringés elősegítésére szolgáló TCM-alkalmazások csökkentették a Madopar-t használó PD monoterápia adagját. Egyes tanulmányok azt sugallták, hogy a TCM javította a PD tüneteit és védett dopaminerg neuronokat, ami szorosan összefügghetett az endogén GDNF expresszió elősegítésével (Hong-Juan és mtsai, 2011; Qiao és mtsai, 2012).

A vizsgálatban használt vese-tonizáló vegyület,cistanchetubulosa nanopor, Cistanche-t, epimediumot és Rhizoma polygonal-t tartalmazott. A modern kutatások szerint a Cistanche kémiai összetétele ECH, amely megvédi a dopaminerg neuronokat az SN-ben az MPTP-indukált PD egerekben, és gátolja a DA és a DA transzporter redukcióját (Zhao et al., 2010). Ezenkívül megakadályozza a DA 6-OHDA által kiváltott csökkenését, és védi a striatális dopaminerg neuronokat (Chen és mtsai, 2007). Az epimedium gátolja a kaszpáz-3 aktiválódását, és neuroprotektív szerepet tölt be (Liu et al., 2011). Az epimedium flavonoidok hatékonyan elősegítik a neurális őssejtek proliferációját és differenciálódását (Yao et al., 2010).

Ebben a tanulmányban,cistanchetubulosa nanopor dózisfüggő módon antagonizálta az MPP plusz által kiváltott apoptózis növekedését. Szignifikánsan javította a TH expressziót az in vitro hordozóban, és jelentős anti-apoptotikus hatást fejtett ki a dopaminerg neuronokban. Az MPTP-indukált hordozó egerek viselkedési rendellenességeket és szignifikánsan csökkent TH expressziót mutattak a középagy szöveteiben és a DA szintet, amelyek a PD tipikus patológiás jellemzői. Különböző adagokcistancheA tubulosa nanopor lerövidítette az állóképesség időtartamát, fokozta az autonóm aktivitást, javította a viselkedési zavarokat, megemelkedett a DA szintje az agyban, és növelte a TH expressziót a hordozókban. Ezek az eredmények arra utaltakcistancheA tubulosa nanopor védő hatást fejtett ki a dopaminerg neuronokon, javítva ezzel a járművek viselkedési zavarait. Különböző adagokcistanchetubulosa nanopor növelte a GDNF fehérje és receptorfehérjék expresszióját a hordozó egerek agyában. A nagy dózisú cistanche tubulosa kezelés jelentősen megnövelte a Bcl2 expresszióját és csökkentette a Bax expressziót, ami arra utalt, hogy a cistanche tubulosa nanopor elősegítheti a GDNF expresszióját és szekrécióját az MPTP-károsodott egéragyban. Ezenkívül neuroprotektív hatást fejthet ki a dopaminerg neuronokban, és minimalizálhatja a neuronális apoptózist a GDNF neurotróf támogató szerepe révén.

Ez a tanulmány azt bizonyítottacistancheA tubulosa nanopor védő hatást fejtett ki a dopaminerg neuronokban mind in vitro, mind in vivo, és növelte a TH expressziót a DA-tartalom javítása érdekében. Ezenkívül javította a viselkedési rendellenességeket MPTP-indukált hordozó egerekben, szabályozta a GDNF és receptorfehérjék fehérje expresszióját az SN-ben, és anti-apoptotikus hatást fejtett ki a PD egerekben. A klinikai hatások hátterében álló mechanizmuscistanchetubulosa nanopor PD-ben magában foglalhatja az endogén GDNF-tartalom növelését az agyban, és ezáltal csökkenti a dopaminerg neuronok károsodását.

Szerzői hozzájárulások

QX és WF a munka első társszerzői, S-FY, Y-BC, WQ és S-YC vett részt a kísérleti munkában, JC tervezte és irányította a munkát.

Összeférhetetlenségi nyilatkozat

A szerzők kijelentik, hogy a kutatást olyan kereskedelmi vagy pénzügyi kapcsolatok hiányában végezték, amelyek potenciális összeférhetetlenségnek tekinthetők.

Köszönetnyilvánítás

A munkát a Fujian Province Grants Természettudományi Alapítványa (2015J01686 projekt), a Kínai Népköztársaság Nemzeti Egészségügyi és Családtervezési Bizottságának Tudományos Kutatási Alapja (WKJ-FJ-38 projekt), Chen Keji támogatta. Alap az Integratív Orvostudomány fejlesztésére (CKJ2014012 projekt), valamint a Fujian Tradicionális Kínai Orvostudományi Egyetem kulcstárgya (X2014010-projekt tárgya).

For more information:1950477648nn@gmail.com