Kétféle Cistanche Deserticola nyers és bor feldolgozott termékének nyolc vegyi összetevője tartalmi különbségeinek összehasonlítása UPLC alapján Ⅱ

2. Módszerek és eredmények

2.1 Kromatográfiai körülmények

Az UPLC analízist aWaters ACQUITY UPLC™ BEH C18 oszlop (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm részecskeméret). A mobil fázis a következőkből álltmetanol (A)és0,1%-os hangyasav vizes oldat (B)a következő gradiens elúcióval:

0–4 perc: 10% → 26% A

4–18 perc: 26% → 40% A

18–20 perc: 40% → 50% A

Áramlási sebesség:0,3 ml/perc
Injekciós mennyiség:3 μL
Oszlop hőmérséklet:35°C
Érzékelési hullámhossz:330 nm

2.2 Megoldások elkészítése

2.2.1 Vegyes referenciaoldat

Pontosan mérje le a következő standard vegyületeket:cistanozid F, echinakozid, cisztanozid A, verbascoside, tubulozid A, isoverbascoside, 2'-acetil-verbaszkozid, éstubulozid B. Oldjuk fel 50%-os metanolban, hogy elkészítsük a következő koncentrációjú referenciakeveréket (µg·mL-1):

Cisztanozid F: 32,7

Echinakozid: 102,4

Cisztanozid A: 50,2

Verbascoside: 80,6

Tubulozid A: 25,6

Isoverbascoside: 86.3

2'-Acetil-verbaszkozid: 77,3

Tubulozid B: 60,8

2.2.2 Mintaoldat

Nyers Cistanche szeleteka gyógynövény lágyításával, szeletelésével és szárításával készültek.
Borban párolt Cistancheúgy készült, hogy a nyers szeleteket 30%-os rizsborba áztatták, a keveréket 12 órán át gőzölték, majd lehűtötték és ismét szárították.

Hozzávetőlegesen0.2 gA szárított port (65 mesh-es szitán átpasszírozva) bemértük egy 50 ml-es borostyánsárga mérőlombikba, 25 ml 50%-os metanollal extraháltuk, 40 percig ultrahanggal kezeltük (250 W, 35 kHz), majd visszaállítottuk a tömeget. Az oldatot a0,22 μm membránés a szűrletet használtuk fel az elemzéshez.

Megjegyzés: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola nyers szeletek; RG. Cistanche tubulosa nyers szeletek; WH. Cistanche deserticola borral párolva; WG. Cistanche tubulosa borral párolva; A 4–7. ábrák ugyanazok.
1. ábra Cistanche deserticola és Cistanche tubulosa gyógyászati ​​anyagok képei, nyers szeletekkel és borral párolva

híres, Kínában árult cisztanche bor

Vásároljon most

A Wecistanche támogató szolgáltatása – Vegye fel velünk a kapcsolatot, és kérjen mintát vagy nagykereskedelmi részleteket
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

2.3 Nyers és bor feldolgozott Cistanche 8 fő vegyületének kvantitatív elemzése

2.3.1 A rendszer alkalmassága

A leírt kromatográfiás körülmények között az elméleti lemezszám a következőhöz:echinakozid exceeded 6000 with good resolution (>1.5). A vegyes standard, a nyers sivatagi Cistanche és a borral feldolgozott minták kromatogramja a 2. ábrán látható.

Csúcs azonosítás:

Cistanoside F

Echinakozid

Cisztanozid A

Verbascoside

Tubulozid A

Isoverbascoside

2'-Acetil-verbaszkozid

Tubulozid B

cistanche deserticola

cistanche tubulosa

2.3.2 Linearitás és észlelési korlátok

A standard kalibrációs görbéket a referenciakeverék 0,1-5,0 ml koncentrációjú sorozathígításaival hoztuk létre. A kalibrációs görbéket ábrázolással állítottuk előkoncentráció (X)kontracsúcsterület (Y). Meghatároztuk a kimutatási határokat (LOD, S/N=3) és a kvantifikációs határokat (LOQ, S/N=10), és megerősítették a jó linearitást a vizsgált tartományokban.

2.3.3 Pontosság

A kevert referenciaoldat hat ismételt injekciója láthatórelatív szórás (RSD)tól kezdve a csúcsterületek0,48% és 2,14% között, ami a műszer kiváló pontosságát jelzi.

2.3.4 Stabilitás

Minta megoldások anyers Cistanche por (Tételszám:. 160901)0, 2, 4, 8, 12 és 24 órában elemeztük. A csúcsterületek RSD-értéke mind a 8 vegyület esetében tól ingadozott0,71% és 1,93% között, megerősítveaz oldat stabilitása 24 órán belül.

1. táblázat: Mintainformációk a Cistanche anyagokról

2.3.5 Megismételhetőség

Ugyanazon Cistanche tétel hat, egymástól függetlenül elkészített ismétlése jó ismételhetőséget mutatott. Az átlagos tartalom (mg·g⁻¹) és az RSD-k a következők voltak:

2.3.6 Helyreállítási teszt

A felépülést tüskével teszteltékhat ismétlés Cistanche porból (0,1 g)a 8 referenciavegyület ismert koncentrációival. Az átlagos megtérülések között volt95,56% - 102,71%között RSD-kkel1,44% és 2,97%, jelezvekiváló extrakciós és számszerűsítési megbízhatóság.

Megjegyzés: A. Vegyes hivatkozás; B. nyers Cistanche deserticola; C. Párolt Cistanche deserticola borban; 1. Cistancheside F; 2. Echinakozid; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Tubulozid A; 6. Isoverbascoside; 7. 2΄-acetil-verbaszkozid; 8. Tubulozid B.

2.3.7 Aktív vegyületek mennyiségi meghatározása nyers vs. borral feldolgozott cisztánban

Minden mintát két párhuzamosban teszteltünk. A 8 célvegyületet mennyiségileg meghatároztuk10 tétel Cistanche deserticola(nyers és bor feldolgozott) és10 tétel Cistanche tubulosa. Az eredményeket a 3. táblázat foglalja össze, amely betekintést nyújt a következőkbe:

Fajspecifikus különbségek az összetételben

Fitokémiai tartalom változása borfeldolgozás után

Analitikai ujjlenyomat a Cistanche minőségellenőrzéséhez

2. táblázat: Kalibrációs görbék, korrelációs együtthatók (r), lineáris tartományok, LOD és LOQ nyolc vegyületre

2.4 A Cistanche fajok kémiai összetételének összehasonlító elemzése

Kivizsgálni afitokémiai különbségekközöttCistanche deserticolaésCistanche tubulosa, a nyolc kulcs koncentrációjafeniletanoid glikozidok-tól10 tétel nyers és bor feldolgozott mintasegítségével vizualizáltuk az egyes fajokatdobozos parcellák (3. ábra). A statisztikai elemzés kimutatta, hogy kivéve2'-acetil-verbaszkozidéstubulozid B, a legtöbb más vegyület kimutattaszignifikáns különbségek (P < 0,05)a két faj között nyers és feldolgozott formában egyaránt.

Pontosabban:

Innyers Cistanche, tartalmacisztanozid F, echinakozid, izoverbaszkozid, tubulozid A és verbaszkozidvoltlényegesen alacsonyabbbeC. deserticola-hoz képestC. tubulosa(P < 0,05).

Aborral feldolgozott mintákhasonló trendeket tükrözött.

Nevezetesen,cisztanozid Acímen találtákmagasabb szinteken belülC. deserticolaés voltészlelhetetlenbeC. tubulosa, ami arra utal, hogy szolgálhat apotenciális marker vegyületa fajok megkülönböztetésére.

Cistanche fajok PLS-DA kemometriai elemzése

A Részleges legkisebb négyzetek megkülönböztető elemzése (PLS-DA)a nyolc vegyület koncentrációadatainak felhasználásával végeztük. A kapottponttáblázatok (4A. ábra)kimutatta, hogy mindkét fajból származó nyers és feldolgozott minták igenne csoportosuljanak egyértelműen elkülönülő csoportokba.

Viszont,véletlen permutációs tesztek (4B. ábra)kiderült, hogy a modell aznem túl felszerelt, mint a valódi értékeiR²Y és Q²magasabbak voltak, mint a permutált modelleké. A viszonylagosalacsony Q² értékekjavasoljakorlátozott kiszámíthatóság, valószínűleg ennek köszönhetőcsoporton belüli változékonyságésátfedő vegyülettartományoknyers és feldolgozott formák között.

További PLS-DA modellezés és VIP elemzés

Külön PLS-DA modellek készültek mindkét faj nyers és borral feldolgozott mintáinak feltárásárafajspecifikus kémiai különbségek. A következőket figyelték meg:

Pontdiagramok (5A és 5C ábra)mutattakülönálló klaszterezésközöttC. deserticolaésC. tubulosanyers és feldolgozott formában egyaránt.

Modellellenőrzés (5B. és 5D. ábra)megerősítette a jó előrejelző erőt túlillesztés nélkül.

Változó fontosság a vetítésben (VIP) diagramok (6A és 6B ábra)azonosított kulcsfontosságú vegyületek, amelyek hozzájárulnak a fajok megkülönböztetéséhez:

Mertnyers minták: Cisztanozid A, cistanozid F, echinakozid, ésverbascosideleginformatívabbak voltak.

Mertborral feldolgozott minták: Cisztanozid Aéstubulozid Bmeghatározó szerepeket játszottak.

2.5 A borfeldolgozás hatása a Cistanche fitokémiájára

A tételenkénti vegyülettartalom jelentős eltérései miatt,páros összehasonlításoknyers és borral feldolgozott minták között készültek augyanaz a tétel. Az eredmények segítségével vizualizálvahegedű cselekmények (7. ábra), a következőket derítette ki:

InC. deserticola, szintjei2'-acetil-verbaszkozid, cisztanozid A, cisztanozid F, echinakozid, tubulozid A és verbaszkozid jelentősen csökkentutófeldolgozás (P < 0,05), mígtubulozid B megnövekedett.

InC. tubulosa, szintjei2'-acetil-verbaszkozid, echinakozid és verbaszkozidiscsökkent, mígizoverbaszkozid és tubulozid B megnövekedettszignifikánsan (P < 0,05).

Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a borfeldolgozás vezethethidrolízis, izomerizáció, vagykémiai átalakulásaktív összetevőkből.

3. Megbeszélés

szerint aA Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása, Cistanche deserticolanem tartalmazhat kevesebbet, mint0.3%együttes tartalmábólechinacoside és verbascoside, mígCistanche tubulosanem tartalmazhat kevesebbet, mint1.5%e két vegyület közül. Ebben a vizsgálatban minden nyers és feldolgozott minta – egy tétel (180710) kivételével – megfelelt ezeknek a szabványoknak.

Ellenérekötegenkénti változékonyságaz egyes fajon belül (egyes vegyületek akár 10-szeres eltérést is mutattak, mint például a tubulozid A és az izoverbaszkozid) a két faj között következetesen statisztikailag szignifikáns különbségek voltak megfigyelhetők a vegyülettartalomban. Ez megerősíti eztfaji eredet a fő tényezőfitokémiai összetétel befolyásolása.

Ezen kívülcisztanozid Avoltcsak ben észlelhetőC. deserticolaés hiányzik benneC. tubulosa, így aértékes marker a fajok azonosításához, különösen a farmakognosztikus vagy minőségellenőrzési beállításokban.

🔬 A borfeldolgozás hatása a kémiai összetételre

A borfeldolgozást követően mindkét faj következetes tendenciát mutatott:

Csökkentett szintek/:
Cisztanozid F, echinakozid, cisztanozid A, verbaszkozid, tubulozid A és 2'-acetil-verbaszkozid

Megnövekedett szintek/:
Tubulozid B és izoverbaszkozid

Ezek a tendenciák abból adódhatnakkémiai hidrolízis, degradáció, vagyszerkezeti átrendeződésa gőzölési folyamat során. Érdekes módon aa változások nagysága és iránya tételenként változott, valószínűleg a következő különbségek miatt:

A vegyület kezdeti koncentrációi

Gyógynövény morfológia (méret, vastagság)

Érzékenység a feldolgozás körülményeire

Ez rávilágít annak fontosságáraa feldolgozási paraméterek szabványosításaés vezényléstételspecifikus minőségértékelésekgyógynövény-készítés során.