A diozmin kettős moduláló hatása a kalcium-oxalát vesekő képződési folyamataira: kristályosodás, növekedés, aggregáció, kristálysejt-adhézió, internalizáció a vese tubuláris sejtjeibe és az extracelluláris mátrixon keresztüli invázió
Mar 16, 2022
további információ:ali.ma@wecistanche.com
Supaporn Khamchuna,b,c,1, Sunisa Yoodeea,1, Látogassa meg Thongbonkerda,*
aOrvosi proteomikai egység, Kutatási és Fejlesztési Hivatal, Siriraj Kórház Orvostudományi Kar, Mahidol Egyetem, Bangkok 10700, Thaiföld
bOrvosi Technológiai Tanszék, Szövetséges Egészségtudományi Iskola, Phayao Egyetem, Phayao 56000, Thaiföld
cIntegratív molekuláris biomedicina kiválósági egysége, Szövetséges Egészségtudományi Iskola, Phayao Egyetem, Phayao 56000, Thaiföld
Kulcsszavak: Bioaktív vegyület, Flavonoid, Inhibitor, Modulátor, Nephrolithiasis, Promoter, Urolithiasis
ABSZTRAKT
Diosminegy természetes flavon-glikozid (bioflavonoid), amely gyümölcsökben és növényekben található, számos farmakológiai hatással. Széles körben alkalmazták étrend-kiegészítőként vagy terápiás szerként különböző betegségek/rendellenességek esetén. Bár ajánlott, bizonyíték a védőmechanizmusai ellenvesekőbetegség (vese- és urolithiasis), különösen a kalcium-oxalát (CaOx)-monohidrát (COM), amely a leggyakoribb típus, tisztázatlan maradt. Ebben a tanulmányban tehát szisztematikusan értékeltük a hatásaitdioszmin(2,5–160 nM-nál) a különböző szakaszokonvesekőképző folyamatok, beleértve a COM kristályosodást, kristálynövekedést, aggregációt, kristály-sejt adhéziót, internalizációt a vese tubuláris sejtjeibe és az extracelluláris mátrixon (ECM) keresztül történő inváziót. Az eredmények azt mutattákdioszmindózisfüggő moduláló hatása volt az összes említett COM vesekő folyamatra.Diosminjelentősen megnövelte a COM kristályok számát és tömegét a kristályosítás során, de csökkentette a kristályméretet és a növekedést. Mígdioszminelősegítette a kristályaggregációt, gátolta a kristálysejtek adhézióját és a vese tubuláris sejtjeibe történő internalizációt. Végül a dioszmin elősegítette a kristályinváziót az ECM-en keresztül. Adataink bizonyítékkal szolgálnak a diozmin COM-ra gyakorolt gátló és elősegítő hatásárólvesekőképződési folyamatok. A diosmin e kettős moduláló hatása alapján az urolithiasis elleni szerepe kétséges, ezért óvintézkedéseket kell tenni avesekőbetegség.
1. Bemutatkozás
Diosmin(3',5,7-trihidroxi-4'-metoxiflavon-7-ramnoglukozid) egy természetes bioflavonoid, amely gyakran megtalálható különféle növényekben és gyümölcsökben, főleg a Citrus spp. [1,2]. Szintetizálható vagy származtatható egy másik flavonoidból, a heszperidinből [1,2]. A diozmint önmagában vagy heszperidinnel kombinálva széles körben használják flebotróp gyógyszerként vénás és nyirokrendszeri betegségek, például krónikus vénás elégtelenség és aranyér kezelésére [3,4]. Ezenkívül a diozmin számos más biológiai és farmakológiai hatást is mutat, beleértve az antioxidáns és gyulladáscsökkentő hatásokat [5,6], antimutagén és antineoplasztikus tulajdonságokat [7,8], antibiotikus hatásokat [9], antihiperglikémiás tulajdonságokat. 10], valamint a többszervi károsodások elleni védőhatások, pl.
kardiovaszkuláris [11], retina [12],vese, máj- és agysérülés [13].
VeseA kőbetegséget (vagy nephrolithiasis/urolithiasis) a vesében kialakult és lerakódott szilárd fogkő okozza, és a földgolyó minden területén nagy kiújulási rátával érinti az embert [14–17]. A különféle kórokozó kristályok közül a kalcium-oxalát (CaOx), különösen a monohidrát forma (COM), a legpatogenikusabb és leggyakrabban előforduló kristályos komponens a kőképzőkben (vesekőben szenvedő betegek) [18]. Mechanikailag a COM-kristályok rendelkeznek a legerősebb tapadóképességgel és a legtöbb citotoxikus hatással a vese tubuláris hámsejtekre [19,20]. A kőpatogenezis során mind a Randall-féle plakkmodell, mind az intratubuláris hipotézis közös jellemzőkkel bír a COM-kőképződési folyamatokban, beleértve a COM-kristályosodást, növekedést, aggregációt, felületi adhézió általi retenciót a vese tubuláris sejtjein vagy a vesemedencen, a sejtekbe való internalizációt és a behatolást vese interstitium az extracelluláris mátrixon (ECM) keresztül [21,22].
A közelmúltban számos tanulmány a gyógynövények/gyümölcsök és azok bioaktív vegyületeinek felhasználásával végzett gyógyszerkutatásra összpontosított, az új és/vagy visszatérő kövek kialakulásának megelőzésére. Számos korábbi jelentés kimutatta, hogy egyes bioaktív vegyületek, különösen a több gyógynövényből/gyümölcsből kivont fenolos vegyületek (polifenol, flavonoid, flavon-glikozid stb.) megelőző hatást fejtenek ki a patogén mechanizmusok ellen.vesekőbetegség mind in vitro, mind in vivo [23–25]. Ezen jótékony anyagok közül néhány jelentés azt sugallta, hogy a diozmin megakadályozhatja a CaOx kristályok lerakódását a veseszövetben állatmodellekben [26,27]. Ennek pontos moduláló szerepét (gátlás vagy promóció) és mechanizmusait (szakaszok vagy kőképződési folyamatok) a COM vesekőképződésben azonban nem vizsgálták. Jelen tanulmány tehát szisztematikusan értékelte a hatásaitdioszmin(2,5–160 nM-nál) a különböző szakaszokonvesekőképződési folyamatok, beleértve a kristályosodást, a kristálynövekedést, az aggregációt, a kristálysejtek adhézióját, a vese tubuláris sejtjébe való internalizációt és az ECM-en keresztüli inváziót.
Kattintson ideCistanche tubulosa adagolása a veseműködésre
2. Anyagok és módszerek
2.1. Diosmin készítmény
Diosmin(Tokyo Chemical Industry; Tokió, Japán) 100 százalékos dimetil-szulfoxidban (DMSO) (Sigma-Aldrich; St. Louis, MO) oldottuk, és a munka alikvotokat 2,5, 5, 10, 20, 40 végső koncentrációban készítettük. 80 és 160 nM a COM kristályokra gyakorolt hatásának vizsgálatához. Ezenkívül minden kísérletben 100 százalékos DMSO-t használtunk negatív kontrollként.
2.2. Sejttenyésztés
A nefron disztális tubuláris szegmenséből (ATCC; Manassas, VA) származó MDCK vesetubuláris epithel sejtvonalat 10 százalékos magzati szarvasmarha szérummal (FBS) kiegészített Eagle minimális esszenciális tápközegében (MEM) (Gibco; Grand Island, NY) szaporítottuk. 60 U/ml penicillin G (Sigma-Aldrich) és 60 ug/ml streptomycin (Sigma-Aldrich). A sejteket párásított inkubátorban tartottuk 5% CO2-val 37 °C-on.
2.3. COM kristályosítási vizsgálat
A COM kristályosítást a korábban leírtak szerint végeztük [28,29]. Röviden: 500 ul 10 mM CaCl2⋅2H2O-t kristályosító pufferben (10 mM Tris-HCl-t és 90 mM NaCl-t tartalmaz) (pH 7,4) adtunk a 24-lyuklemez (Corning Inc.; Corning, NY). Egyenlő térfogatú (4 ul) kristályosító puffer (vak kontroll), DMSO (negatív kontroll) vagydioszmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 vagy 160 nM) CaCl2-vel keverjük össze. Végül 500 ul 1,0 mM Na2C2O4-et adtunk a kristályosítási pufferben, hogy a CaCl2 és Na2C2O4 végső koncentrációja 5 mM, illetve 0,5 mM legyen. A keveréket 25 °C-on 1 órán át inkubáltuk, majd megvizsgáltuk. A kristályképeket véletlenszerűen legalább 15 nagy teljesítményű mezőből (HPF) készítették Nikon Eclipse Ti-S fordított fáziskontraszt fénymikroszkóppal (Nikon; Tokió, Japán). A kristályméretet és -számot minden minta esetében legalább 15 HPF-ből mértük a NIS Element D szoftver 4.11-es verziójával (Nikon). A kristálytömeget legalább 100 kristályból számítottuk ki 15 HPF-ben a következő képlettel: Kristálytömeg (µm2/HPF)=Átlagos kristályméret minden mezőben (µm2) × A kristályok száma az egyes mezőkben (/HPF) ( 1)
2.4. COM kristálynövekedési vizsgálat
A kristálynövekedési vizsgálatot a korábban leírtak szerint végeztük [30,31].
Röviden, azonos térfogatú (500 ul) 10 mM CaCl2⋅2H2O-t és 1,0 mM Na2C2O4-ot kristályosító pufferben kevertünk (1:1) (v/v) a { {12}}kúttányér. Az elegyet 25 °C-on 1 órán át inkubáltuk, hogy lehetővé tegyük a teljes kristályosodást. Ezen a ponton (T0) azonos térfogatú (4 ul) kristályosító puffer (vak kontroll), DMSO (negatív kontroll) ill.dioszmin(2,5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 vagy 160 nM) adtunk minden egyes lyukba, és az elegyet tovább inkubáltuk 60 percig (T60). A T0 és T60 időpontokban a kristályképeket véletlenszerűen rögzítettük legalább 15 HPF-ről Nikon Eclipse Ti-S fordított fáziskontraszt fénymikroszkóp alatt. A kristályméreteket T0-nál és T60-nál a NIS Element D szoftver 4.11-es verziójával (Nikon) mérték, míg a kristálynövekedést (amelyet a Δ kristályméret képvisel) legalább 100 kristályból számítottuk ki 15 HPF-ben a következő képlet alapján: Δ Kristályméret (µm2)=Kristályméret T60-nál − Kristályméret T0-nál (2)
2.5. COM kristály aggregációs vizsgálat
A kristályaggregációs vizsgálatot a korábban leírtak szerint végeztük [32,33]. A COM-kristályokat a fent említett módon, a kristálynövekedési vizsgálatban állítottuk elő, de nagyobb térfogattal egy 50- ml-es kúpos csőben (Corning Inc.), majd 2000 g-vel 5 percig centrifugálással gyűjtöttük össze. A felülúszót eldobtuk, míg a COM-kristályokat háromszor mostuk metanollal. Újabb 2000 g-vel 5 percig végzett centrifugálás után a metanolt eldobtuk, és a kristályokat levegőn szárítottuk egy éjszakán át 25 °C-on. A COM-kristályokat (1000 µg száraz tömeg) 1 ml kristályosító pufferben újraszuszpendáltuk a 6-lyuklemez (Corning Inc.) minden egyes üregében. Egyenlő térfogatú (4 ul) kristályosító puffer (vak kontroll), DMSO (negatív kontroll) vagydioszmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 vagy 160 nM) adtunk a COM-kristály-szuszpenzióhoz minden egyes lyukban. A lemezt rázóinkubátorban (Zhicheng; Shanghai, Kína) 150 ford./perc sebességgel és 25 ◦C-on 1 órán át folyamatosan rázattuk. Ezt követően Nikon Eclipse Ti-S fordított fáziskontraszt fénymikroszkóppal megvizsgálták és leképezték a COM-kristály-aggregátum képződését (a definíció szerint "három vagy több különálló COM-kristály együttese, amelyek szorosan összekapcsolódnak" [32]). A COM kristály aggregátumok számát legalább 15 véletlenszerű HPF-ből számoltuk lyukanként.
2.6. COM kristálysejt adhéziós vizsgálat
A kristálysejt-adhéziós vizsgálatot a korábban leírtak szerint végeztük [34,35]. Röviden, a COM-kristályokat a fent említett módon állítottuk elő egy 50- ml-es kúpos csőben, majd 2000 g-vel 5 percig centrifugálva gyűjtöttük össze. A felülúszót eldobtuk, míg a COM-kristályokat háromszor mostuk metanollal. Újabb 2000 g-vel 5 percig végzett centrifugálás után a metanolt eldobtuk, és a kristályokat levegőn szárítottuk egy éjszakán át 25 °C-on. A sejtekkel való beavatkozás előtt a kristályokat UV-sugárzással 30 percig dekontamináltuk.
Az MDCK sejteket (2 × 105 sejt/lyuk sűrűségben) beoltottuk és növesztjük a 6-lyuklemez (Corning Inc.) minden egyes üregébe 48 órán keresztül, hogy összefolyó egyrétegű réteget kapjunk. A tenyésztőközeget ezután felfrissítettük, mielőtt COM-kristályokat adtunk hozzá (100 µg száraz tömeg kristályok ml-enként). Egyenlő térfogatú (4 ul) kristályosító puffer (vak kontroll), DMSO (negatív kontroll) vagydioszmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 vagy 160 nM) adtunk minden egyes lyukba. A sejteket tovább inkubáltuk párásított inkubátorban 5% CO2-vel 37 °C-on 1 órán át. Ezt követően a sejteket PBS-sel ötször erőteljesen mostuk, és Nikon Eclipse Ti-S fordított fáziskontraszt fénymikroszkóp alatt leképeztük. A vesetubuláris sejtfelszínre tapadt fennmaradó COM-kristályok számát lyukanként legalább 15 véletlenszerű mezőből számoltuk meg.
Cistanche a veseműködésért
2.7. COM kristály internalizációs vizsgálat
A fluoreszcenciával jelölt COM kristályokat a korábban leírtak szerint állítottuk elő [36,37]. A kristályosításhoz használt vegyszerek összetétele/koncentrációja megegyezett a fent említett sima (nem jelölt) kristályokkal, de 0,1 µg/ml fluoreszcein-izotiocianát (FITC) (Thermo Scientific Pierce; Rockford, IL) CaCl2⋅2H2O oldathoz adjuk, mielőtt Na2C2O4-gyel összekevernénk. A következő lépéseket (kristályosítás és betakarítás) a fent említettek szerint végeztük, de sötétben.
A kristályok vese tubuláris epiteliális sejtjébe való beépülésének értékeléséhez MDCK sejteket (2 × 105 sejt/lyuk sűrűségben) oltottunk be, és 48 órán keresztül növesztettük a 6-lyuklemez (Corning Inc.) minden egyes lyukába. összefolyó egyrétegű. A sejt monoréteget FITC-vel jelölt COM kristályokkal (1000 µg kristály/ml táptalaj) párásított inkubátorban inkubáltuk 5% CO2-val 37 ◦C-on 1 órán át. Ezt követően a sejteket PBS-sel mostuk, és tripszin-EDTA oldattal inkubáltuk, hogy eltávolítsuk a nem beépült (tapadó és nem tapadó) kristályokat. Az internalizált kristályokat tartalmazó sejtek százalékos arányát áramlási citométer (BD Accuri C6) (BD Biosciences; San Jose, CA) segítségével összesen 10 000 szerzett eseményből határoztuk meg. A sima (jelöletlen) COM kristályokkal inkubált sejteket használtuk a zaj és a pozitív fluoreszcencia jel küszöbértékének előzetes beállítására. A pozitív fluoreszcens jelekkel rendelkező sejteket ezután megszámoltuk, és felhasználtuk a százalékos számításhoz.
2.8. COM kristály invázió az ECM vizsgálaton keresztül
A COM-kristályokat a kristályaggregációs és kristálysejt-adhéziós vizsgálatokhoz fentebb leírtak szerint állítottuk elő. A kristályinváziós vizsgálatot a korábban megállapított protokoll szerint végeztük [38,39]. Röviden, összesen 20 µg kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll), albuminnal (Sigma-Aldrich) (pozitív kontroll) vagydioszmin(2,5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 vagy 160 nM) hozzáadtunk 200 ul MEM-hez. Ezt követően 200 ul 0,3 pM Lys-plazminogént (Fitzgerald Industries International; Acton, MA) PBS-ben összekevertünk és a kristály-fehérje komplexszel 37 °C-on 1 órán át inkubáltuk. A meg nem kötött plazminogént 2000 g-vel 5 percig végzett centrifugálással eldobtuk, és a pelletet egyszer mostuk PBS-sel. Ezt követően 100 ul 0,15 pM urokináz plazminogén aktivátort (uPA) (Fitzgerald Industries International) PBS-ben összekeverünk a kristály-fehérje-plazminogén/plazmin komplexszel. A keveréket ezután a mátrixgél tetejére adtuk az ECM migrációs kamrában, és 37 °C-on inkubáltuk. 24-órás inkubáció után a vándorkamra felső részén maradt oldatot gézzel vagy selyempapírral eltávolítottuk. A mátrixgél belsejében lévő behatolt COM-kristályokat ezután differenciális interferencia-kontraszt (DIC) üzemmódú fénymikroszkóppal (Nikon H600L) leképeztük. A kristály behatolási távolságát legalább 15 kis teljesítményű mezőből (LPF) mértük és átlagoltuk ugyanabban a kamrában a NIS Element D szoftver 4.11-es verziójával (Nikon).
2.9. Statisztikai analízis
Az összes fenti kísérletet három párhuzamosban végeztük (három független kísérlet), és a kvantitatív adatokat átlag ± SEM értékben adjuk meg. Több összehasonlítást végeztünk egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) Tukey post-hoc tesztjével. A változók közötti kapcsolat meghatározására Pearson korrelációs tesztet végeztünk. Minden statisztikai elemzés SPSS szoftverrel (18-as verzió) (IBM SPSS; Armonk, NY) történt. A 0,05-nél kisebb P értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.
3. Eredmények
3.1. A diozmin hatása a COM kristályosodásra
A kristályosítás az egyik lényeges korai lépésveseminden típusú kőképző folyamat. 1- óra kristályosítás után vagy anélküldioszminKülönböző koncentrációkban (2,5, 5, 10, 20, 40, 80 vagy 160 nM) megmértük a COM-kristályméretet és -számot, és kiszámítottuk a kristálytömeget. A kristályosító puffer és a hígító DMSO szolgált vak és negatív kontrollként. Az adatok azt mutatták, hogy a diszomin minden dózisa (2,5–160 nM) szignifikánsan csökkentette a kristályméretet, de dózisfüggő módon növelte a kristályok számát, összehasonlítva az üres és negatív kontrollokkal (1A–1C. ábra). A kristályszámnak megfelelően a kristálytömeg dózisfüggően nőtt (1D. ábra). Összességében ezek az adatok azt mutatják, hogy a dioszmin elősegíti a COM kristályosodását (neokristályok).
3.2. A dioszmin hatása a COM kristálynövekedésre
A moduláló hatásadioszminA COM-on a kristálynövekedést a kristályméret változásának (Δ kristályméret) mérésével értékeltük 60-perces további inkubáció után a kezdeti kristályosítási lépés befejezését követően, amikor a neokristályok nem voltak jelen. Az eredmények azt mutatták, hogy a diszomin minden dózisa (2,5–160 nM) dózisfüggő módon szignifikánsan csökkentette a Δ kristályméretet a vak és a negatív kontrollokhoz képest (2. ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a dioszmin gátolja a COM kristálynövekedést.
3.3. A diozmin hatása a COM-kristály-aggregációra
A kristálynövekedés mellett egy másik fontos lépés az egyes kristályok aggregációja, amelyek szorosan egymáshoz tapadnakvesekő patogenezise. A nagyfokú kristályaggregáció végső soron kövek megnagyobbodásához és a kis vese tubuláris lumenének elzáródásához vezethet. Összehasonlítva az üres és negatív kontrollokkal,dioszmin10-160 nM-nál dózisfüggően megnövekedett a COM kristály aggregátumok száma (3. ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a dioszmin elősegíti a COM-kristály-aggregációt.
Cistanche a veseműködésért
3.4. A dioszmin hatása a COM kristálysejtek adhéziójára
A kiváltó kristályok visszatartása az egyik döntő lépésvesekőképződés, és a kristály-sejt adhézió indukálható, amely megakadályozza a kristályok kiürülését a vizelet kiáramlásával együtt. Így értékeltük a modulációs tevékenységetdioszminCOM kristály-cella adhézión. Az adatok azt mutatták, hogy a diozmin 5–160 nM koncentrációban dózisfüggő módon szignifikánsan csökkentette a COM-kristályok tapadását a vesetubuláris sejtekhez, összehasonlítva a vak és negatív kontrollokkal (4. ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy a dioszmin gátolja a COM kristálysejtek adhézióját.
3.5. A dioszmin hatása a COM-kristályok internalizációjára a vese tubuláris sejtjeibe
Tapadás után egyes COM-kristályok beépülhetnek a vese tubuláris sejtjébe, és számos későbbi sejtválaszt válthatnak ki [37,40]. A kristályok internalizációját FITC-vel jelölt COM kristályok segítségével értékeltük, és áramlási citometriával számszerűsítettük. Sima COM kristályokat (címkézés nélkül) használtunk a technikai zaj levonására és annak biztosítására, hogy a fluoreszcencia intenzitása a FITC jelből származzon. A vak és negatív kontrollokhoz képest az internalizált kristályokat tartalmazó sejtek százalékos aránya szignifikánsan csökkentdioszmin10-160 nM között dózisfüggő módon (5. ábra). Az eredmények azt mutatják, hogy a disomin gátolja a COM-kristályok beépülését a vese tubuláris sejtjébe.
3.6. A dioszmin hatása a COM-kristály-invázióra az ECM-en keresztül
Az ECM-en keresztüli kristályinvázió patogén/pusztító folyamatvesekő patogenezis, amely különféle gyulladásos válaszokat és kaszkádokat válthat ki, ezáltal rontva a betegség mechanizmusait. Ezt a jelenséget egy, a kristály-fehérje komplex plazminogén-plazmin aktivitásán alapuló protokoll segítségével vizsgáltuk [38,39]. Az eredmények azt mutatták, hogy a diszomin minden dózisa (2,5–160 nM) dózisfüggő módon szignifikánsan fokozta a COM-kristály inváziót az ECM-en keresztül (6. ábra). Érdekes módon,dioszmin160 nM-nál az albuminhoz hasonló módon elősegítheti a COM-kristály-inváziót, amely a COM-kristály-invázió ismert erős promótere [41] (6. ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a diozmin erősen elősegíti a COM kristály inváziót az ECM-en keresztül.
1. ábra Hatásadioszmina COM kristályosításon. A kristályosítási vizsgálatot azonos térfogatú (4 ul) kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll) vagy diozminnal (2,5-160 nM) végeztük. (A): Kristálymorfológia minden körülmények között 1-h kristályosodás után. Az eredeti nagyítás 400× volt minden panelnél. (B): Kristályméret. (C): Kristályszám. (D): A kristálytömeget (lásd az 1. képletet az "Anyagok és módszerek" c. részben) legalább 100 kristályból elemezték 15 HPF-ben. Mindegyik oszlop a 3 független kísérletből származó adatok átlag ±SEM értékét jelenti. *=p< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" dmso.="">
2. ábradioszmina COM kristálynövekedésről. A kristálynövekedési vizsgálatot a kristályosodás befejeződése után végeztük (az újkristályosodás megelőzésére) azonos térfogatú (4 ul) kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll) vagy diozminnal (2,5–16{4}} nM). (A): Kristálymorfológia az egyes állapotokban T0 és T60 esetén. Az összes panel eredeti nagyítása 400 × volt. (B)-(J): A kristályméretek hisztogramja az egyes kristályoktól mérve T0 és T60 értékeknél minden csoportban. (K): Δ A kristályméretet (lásd a 2. képletet az "Anyagok és módszerek" c. részben) legalább 100 kristályból elemeztük 15 HPF-ben. Minden oszlop a 3 független kísérletből származó adatok átlag ± SEM értékét jelenti. *= p < 0,05="" vs.="" üres="" kontroll;="" #="p">< 0,05="" vs.="">
3. ábradioszmina COM kristály aggregációról. A kristályaggregációs vizsgálatot azonos térfogatú (4 ul) kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll) vagy diozminnal (2,5-160 nM) végeztük. (A): Az aggregált COM-kristályok mikroképei (szaggatott körökkel jelölve). Az eredeti nagyítás 400× volt minden panelnél. (B): A kristályaggregátumok számát legalább 15 véletlenszerű HPF-ből számoltuk meg minden egyes lyukban. Minden oszlop a 3 független kísérletből származó adatok átlag ± SEM értékét jelenti. *=p< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="" dmso.="">
4. ábradioszminCOM kristály-cella adhézión. A kristálysejt-adhéziós vizsgálatot azonos térfogatú (4 ul) kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll) vagy diozminnal (2,5-160 nM) végeztük. (A): Mikrográfiák a megmaradt kristályokról, amelyek szorosan tapadtak a sejt monoréteghez, miután a meg nem kötött kristályokat PBS-sel végzett erőteljes mosással eltávolították. Az eredeti nagyítás 200-szoros volt minden panelnél. (B): A megtapadt kristályok számát legalább 15 véletlenszerű mezőből számoltuk meg minden egyes lyukban. Mindegyik oszlop a 3 független kísérletből származó adatok átlag ±SEM értékét jelenti. *= p<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p"><0.05 vs.="">
5. ábra Hatásadioszmina COM-kristályok vese tubuláris sejtjébe történő internalizálására. A kristály internalizációs vizsgálatot FITC-vel jelölt COM kristályokkal (FITC-COM) végeztük, míg a sima (nem jelölt) COM kristályokat a háttér/zaj kivonására használtuk. A vizsgálatot azonos térfogatú (4 ul) kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll) vagy diozminnal (2,5-16{12}}nM) végeztük. (A): A sejtek méretének (y-tengely) és FITC-fluoreszcencia-intenzitásának (x-tengely) áramlási citometriás dot-plot analízise, miután a nem beépült kristályokat 0,1% tripszin/2,5 mM EDTA-val eltávolítottuk. (B): Az internalizált FITC-vel jelölt COM kristályokat tartalmazó sejtek százalékos aránya. Minden oszlop a 3 független kísérletből származó adatok átlag ± SEM értékét jelenti. *= p<0.05 vs.="" fitc-com="" +="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" fitc-com="" +="" dmso.="">
6. ábra Hatásadioszmina COM kristály invázióról az ECM-en keresztül. A kristályinváziót ECM vizsgálaton keresztül kristályosító pufferrel (vak kontroll), DMSO-val (negatív kontroll), albuminnal (pozitív kontroll) vagy diozminnal (2,5-160 nM) bevont COM-kristályokkal végeztük. (A): Az ECM migrációs kamrába behatolt vagy átvándorolt COM-kristályok mikroképei. Az eredeti nagyítás 100× volt minden panelnél. (B): A kristályinvázió távolságát minden kamrában legalább 15 véletlenszerű LPF-ből mértük. Mindegyik oszlop a 3 független kísérletből származó adatok átlag ±SEM értékét jelenti. *= p<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="">
4. Megbeszélés
A vesekőbetegséget a vesekő belsejében kialakuló fogkő okozzaveseés a pelvocalycealis rendszer. A gyakori vesekőképződési folyamatok közé tartozik a COM kristályosodása, növekedése, aggregációja, kristálysejt-adhézió általi retenció és az ECM-ben gazdag vese interstitiumon keresztül történő invázió [21,22]. Számos kísérlet van ennek a betegségnek a megelőzésére különféle gyógyszerekkel és/vagy táplálék-kiegészítőkkel. A legújabb bizonyítékok számos sora beszámol arról, hogy a flavonoidok, flavon-glikozidok és más, citrusfélékből kivont vegyületek megelőzhetik a vesekőbetegséget és más rendellenességeket [23–25]. Ezek között,dioszmin, egy természetes flavon-glikozid és heszperidin-származék, amely főként citrusfélékben található [1,2], és azt feltételezik, hogy megelőző szerepet játszik a sérülések és károsodások ellen.veseszövet [13,42]. Ezenkívül az urolithiasis elleni szerepét néhány korábbi, állatmodellekkel végzett vizsgálat is beszámolt [26,27]. Ennek ellenére a dioszmin jótékony hatásai és mögöttes mechanizmusai a vesekő megelőzésében homályosak maradtak. Így megvizsgáltuk a dioszmin moduláló aktivitását a COM-kristályokon. A szisztematikus elemzések a COM különböző szakaszaiban készültekvesekőképződés, beleértve a kristályosodást, a kristálynövekedést, az aggregációt, a kristálysejtek adhézióját, a vese tubuláris sejtjébe való internalizációt és az ECM-en keresztüli inváziót.
Szájon át történő bevétel utándioszmin, plazmaszintje emberben {{0}},5 és 200 ng/ml (vagy 0,8-300 nM) között mozog [43,44]. A maximális plazmakoncentráció (Cmax) körülbelül 50 ng/ml (vagy 85 nM) [43,44]. Ezért a jelen vizsgálatunkban alkalmazott diozmin dózisok (2,5–160 nM) a farmakokinetikája szempontjából farmakológiailag releváns tartományban voltak. Mivel az ajánlás szerint DMSO-t használtak hígítóként a diozmin teljes feloldásához, ebben a vizsgálatban a DMSO-t használtuk negatív kontrollként a vak kontroll mellett annak biztosítására, hogy magától a hígítószertől ne legyenek olyan hatások, amelyek megzavarhatnák az adatok értelmezését. Az összes vizsgálatban az adatok azt mutatták, hogy a DMSO-nak nem volt szignifikáns hatása, és a negatív kontrollból származó összes kvantitatív adat összehasonlítható volt a vak kontrolléval.
A COM kristályosítási vizsgálat kimutatta, hogy az összes koncentrációbandioszmin(2,5, 5, 10, 20, 40, 80 és 160 nM) csökkentheti a COM-kristályméretet, másrészt viszont növelte a kristályok számát. Mivel a kristálytömeg mind a kristályméret, mind a szám végterméke, és relevánsabb a COM kristályosodás mértékének tükrözésére, ezt követően értékeltük, hogy a dioszmin befolyásolta-e ezt a kristályindexet. Az adatok azt mutatták, hogy a dioszmin minden koncentrációja elősegítette a COM-kristálytömeget, összhangban a kristályszámra vonatkozó adatokkal. A kristályosítás után a COM-kristályok tovább növekedhetnek a következő lépéshezvesekőképződés.
A kristályosítással ellentétben a diozmin minden koncentrációban dózisfüggő módon gátló hatást fejtett ki a COM-kristály növekedésére. Egyes korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a CaOx kristályok oldhatósága növelhető a hidroxi-antrakinonok glikozilációval rendelkező származékaival [45]. Ezenkívül az ilyen bioaktív vegyületekben lévő cukrok kötődhetnek a szabad kalciumionhoz, valószínűleg a molekulaszerkezetben lévő hidroxilcsoportoknak köszönhetően, ezáltal gátolva a CaOx kristályok képződését [45,46]. A dioszmin ezen a mechanizmuson alapuló COM kristályosodási folyamatában is befolyásolhatja a szolubilizált kalcium és oxalát ionok átalakulását a vese tubuláris folyadékában lévő COM kristályos részecskékké.
Ennek ellenére a COM kristály aggregációt 10-160 nM elősegítettedioszmin, ami azt jelenti, hogy a diozmin képes összekötőként vagy tapadó molekulaként működni az egyes kristályok toborzásához, amelyek egymáshoz kötődve kristályaggregátumokat képeznek. Ez a kötődés a tapadóhidak kialakulásához is vezet az egyes kristályok között, és előidézheti a COM-kristályok nagy szerkezetű képződését, amelyek könnyen hozzájárulnak a kőréteg lerakódásához.vese[32].
A vesekőképződés másik fontos lépéseként megállapították, hogy a COM-kristályok visszatartása a kristályoknak a vesetubuláris sejtfelszíneken való tapadásával történik [47]. Adataink azt mutatták, hogy a diozmin csökkentheti a COM-kristályok tapadását az MDCK vese tubuláris sejtjeinek apikális felületéhez. Egyes korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a CaOx kristályokra bevont vagy a vese tubuláris sejtjein expresszált glükózaminoglikánok (poliszacharid vegyületek) megzavarhatják a CaOx kristályok tapadását a vesetubuláris sejtekhez [48]. Ezenkívül a kristályreceptorok expressziója a vesetubuláris sejtekben a kristály-sejt adhéziót meghatározó egyik döntő mechanizmus [21]. Míg a CaOx kristályok az apikális membránok, különösen a mikrobolyhok sérülését okozzák, egyes polifenolok, például az epigallocatechin-gallát (EGCG) megakadályozhatják a kristálysejtek adhézióját és a sejtkárosodást [49]. Ezenkívül a különböző növényi kivonatokban lévő flavonoid anyagokról korábban beszámoltak arról, hogy növelik a vizelet pH-értékét, ami a kristálysejtek adhéziójának gátlásához vezet [50,51]. Talán,dioszmingyengítheti a COM által kiváltott sejtkárosodást is, ezáltal csökkentve a kristály-sejt adhéziót.
Kimutatták, hogy a COM-kristályok internalizációja főként endocitózis útján jelenik meg az aktin citoszkeleton által közvetített makropinocitózis útján [40]. A flavonoidokról, például a kvercetinről számoltak be, hogy befolyásolják a makropinocitózishoz szükséges aktin citoszkeletont [52,53]. Eredményeink azt mutatták, hogy a dioszmin jelentősen csökkentette az MDCK sejtek azon képességét, hogy internalizálják a COM kristályokat. A diozmin ilyen gátló hatása összefüggésbe hozható a sejteken belüli aktin citoszkeleton felépítésével vagy szerveződésével, amely közvetlenül befolyásolja a makropinocitózis útvonalat [54,55].
Az internalizáció után a COM-kristályokat az endolizoszómák lebontották, ami a szabad kalcium- és oxalát-ionok növekedését eredményezte a vese interstitiumában [37]. A kalcium- és oxalát-ionok ilyen növekedése a vese interstitiumában a COM neokristályosodásához vezethet [56,57]. Ezen túlmenően, az intersticiális COM-kristályok jelenléte a szoros csatlakozás és a paracelluláris adhéziós gát hibáiból eredhet, ami fokozott paracelluláris permeabilitást és kristálytranszlokációt eredményez [58–60]. Ezek a kristályok azután az ECM-en keresztül behatolhatnak a vese interstitiumba, és ezt követően számos gyulladásos választ és szövetkárosodást válthatnak ki [58–60]. Ebben a tanulmányban megfigyeltük, hogy a COM-kristályok invázióját az ECM migrációs kamrán keresztül a diozmin összes koncentrációja indukálta. A diozmin kötődhet a COM-kristályfelületekhez, és kölcsönhatásba léphet a plazminogén-plazmin rendszerrel, amely az ECM-migrációs kamrában a kristályvándorlást vezérelte [38,39].
Cistanche a vesére
MertdioszminA COM kőképződés különböző folyamataiban egyaránt indukált gátló és elősegítő hatásokat, ezért ezek kapcsolatát Pearson korrelációs teszttel határoztuk meg. A korrelációs elemzés kimutatta, hogy a kristályok száma fordítottan korrelált mind a kristálymérettel, mind a kristálynövekedéssel (Δ kristályméret) (7A és B ábra). A kristályméret erősen korrelált a kristálynövekedéssel (7C. ábra), de fordítottan korrelált a kristálytömeggel (7D. ábra). Végül a kristálytömeg erősen korrelált mind a kristályszámmal, mind a kristályaggregációval (7E. és F. ábra). A korrelációs elemzésből az adatok azt mutatják, hogy a kristályszám és a kristálytömeg fontosabb a kristályosodás tükrözésében, mint a kristályméret (7A, D és E ábra). Ezenkívül a kristályosodás során a neokristályok mérete összefügg az előre kialakított kristályok növekedésével (7C. ábra), míg a kristályosodás mértéke (amit a kristályszám és a kristálytömeg tükröz) szorosan összefügg a kristályaggregáció mértékével (7E. ábra és F). Ezek a korrelációk azonban nagy valószínűséggel a diozmin hatásokra specifikusak, míg más modulátorok hatásai lehetnek vagy nem ugyanazok az összefüggések. Például a fibronektin csökkenti a kristálytömeget és gátolja a kristálynövekedést, de elősegíti a kristályaggregációt [31]. Ezenkívül az ép, életképes Escherichia coli növeli a kristályméretet és -tömeget, de nincs hatással a kristályszámra [33]. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a különböző COM-kristály-vizsgálatok közötti összefüggések nem minden modulátor esetében univerzálisak.
Végül összefoglaltuk a különböző vizsgálatok eredményeit, és integráltuk azokat a patogén mechanizmusokkalvesekőbetegség (lásd a vázlatokat a 8. ábrán). A korrelációs elemzés alapján a diozmin elősegíti a kristályosodást (8A. ábra). A kristályosodás és a kristálynövekedés közöttdioszminjó egyensúlyt tart a kristályosodás elősegítésével, másrészt gátolja a kristálynövekedést (8B. ábra). Ami önmagában a COM-kristályokra gyakorolt összes hatást illeti (a sejtek és a szintén beavatkozó ECM figyelembevétele nélkül), a dioszmin elősegítő aktivitása kiemelkedőbb, mint a COM-kristályokon kifejtett gátló hatása, mivel elősegíti a kristályosodást és a kristályaggregációt is, de csak a kristálynövekedést gátolja. 8C. ábra). Bár a kristályosodás növekszik, a kristály mérete csökken, és a növekedés gátlásával jár (7C. ábra). Ezek az adatok összhangban vannak Kavanagh és munkatársai által közölt eredményekkel. [61–63], amely azt bizonyítja, hogy a kristályosodás növekedése az oldatban lévő kalcium- és oxalát-ionok túltelítettségének csökkenéséhez vezet, ezáltal csökkenti a növekedést. A kristálynövekedés azonban nem az egyetlen tényező, amely meghatározza avesekő patogenezis [64], különösen akkor, ha a kristálytömeg túlterheli, és a kristályaggregáció növekedésével jár (7F. ábra), ami növelheti annak esélyét, hogy a kristályanyagok kis csőszegmensekben ragadjanak (az intratubuláris hipotézisben), ezáltal növelve a kőképződés esélye. Ezen túlmenően egy korábbi tanulmány kimutatta, hogy az adatok összhangban vannak az eredményeinkkel, jelezve, hogy a kristályszám növekedése a kristályaggregáció növekedésével és a kövek megnagyobbodásával jár [63].
7. ábra Korrelációelemzés. (A)–(F): A COM-kristályszám, a kristályméret, a Δ kristályméret, a kristálytömeg és számos kristályaggregátum közötti összefüggéseket Pearson korrelációs teszttel elemeztük..
8. ábra. A modulációs hatásokat összefoglaló sémadioszmina COM-onvesekőképződési folyamatok. (A): A diozmin hatása a COM kristályosodásra. (B): A dioszmin hatása a COM kristályosodására és a kristálynövekedésre. (C): A dioszmin hatása a COM kristályosodására, növekedésére és aggregációjára. (D): A diozmin hatása a teljes COM vesekőképződési folyamatokra.
Ha figyelembe vesszük a vesetubuláris sejtekkel és az ECM-mel való kölcsönhatásokat, akkor a kettős hatások globális képedioszminCOM-on a vesekőképződés sokkal tisztábbá válik (8D. ábra). A diozmin gátolja a kristálysejtek adhézióját, ezáltal csökkenti a kristályok sejtbe való beépülését. Ez azzal magyarázható, hogy a kisebb méretű COM-kristályok kevésbé tapadnak meg a vesetubuláris sejtekhez képest, mint a nagyobbak, amint azt legutóbbi tanulmányunkban [34] és egy másik csoport korábbi tanulmányában [65] közöltük. A kisebb COM-kristályok kevésbé tapadó képessége annak köszönhető, hogy kisebb a tapadóerejük a sejtfelszínhez, és kevesebb a hozzájuk kötődő COM-kristály-receptor atomerő-mikroszkóppal, illetve proteomanalízissel [34]. A dioszmin gátolja a kristályok internalizációját is. Vegye figyelembe, hogy az internalizálási folyamat kétélű fegyver, amely gondos értelmezést igényel. Az internalizáció vagy endocitózis az egyik védekező mechanizmusban, amelyet a sejtek a kristályok endolizoszómák általi eltávolítására használnak. Az ép kristályok lebomlása azonban szabad kalcium- és oxalát-ionokat hoz létre, amelyek az intracelluláris kompartmentből a vese interstitiumába mozoghatnak, ahol újkristályokat generálhatnak [56,57]. Másrészt a diozmin elősegíti a kristályinváziót az ECM-en keresztül, amely a vesekő patogenezisében az egyik fontos mechanizmus (különösen a Randall-plakk modellben) [58–60]. Összességében a 8D. ábra összefoglalja a dioszmin COM-ra gyakorolt összes kettős moduláló hatásátvesekőképződési folyamatok. Megjegyzendő, hogy ezen elősegítő és gátló hatások egyensúlyát nem lehet pontosan kiszámítani (ellentétben a matematikai egyenletekkel). Ezenkívül számos egyéb endogén és exogén tényező is beavatkozhat a kőképződési folyamatokba. Végül a diozmin számos közvetett hatást is mutat a vesekőképződésre, beleértve antioxidáns és gyulladáscsökkentő tulajdonságait [5,6], amelyeket figyelembe kell venni. Ezért ennek a kettős moduláló hatásnak a végeredményedioszmina COM-onveseA kőképződés további in vivo vizsgálatot és nagy kohorszos prospektív vizsgálatot igényel.
5. Következtetések
Összefoglalva, itt beszámolunk a diozmin kettős hatásáról a COM-kristály modulációra dózisfüggő módon. Míg gátolja a COM-kristályok növekedését, a kristálysejtek adhézióját és a vese tubuláris sejtjébe való beépülést,dioszminelősegíti a COM kristályosodását, aggregációját és az ECM-en keresztüli inváziót. Ezért urolithiasis elleni szerepe kétséges, és vesekőbetegségben való alkalmazásakor óvatosságra van szükség.
CRediT szerzői hozzájárulási nyilatkozat
Supaporn Khamchun: Koncepció, Módszertan, Szoftver, Érvényesítés, Formális elemzés, Vizsgálat, Adatkezelés, Írás – eredeti vázlat, Vizualizáció, Sunisa Yoodee: Koncepció, Módszertan, Szoftver, Validálás, Formális elemzés, Vizsgálat, Adatkezelés, Írás – eredeti vázlat, Vizualizálás, Látogasson el a Thongboonkerdre: Koncepció, Módszertan, Szoftver, Validálás, Erőforrások, Írás – áttekintés és szerkesztés, Felügyelet, Projektadminisztráció, Finanszírozás.
Összeférhetetlenségi nyilatkozat
A szerzők kijelentik, hogy NINCS összeférhetetlenség.
Köszönetnyilvánítás
Hálásak vagyunk Kittiya Suwannakud technikai segítségéért. Ezt a munkát a Nemzeti Felsőoktatási Tudományos Kutatási és Innovációs Politikai Tanács (NXPO) a PMU-B-n keresztül és a Thaiföldi Kutatási Alap (IRN60W0004) támogatta. A VT-t a "Chalermphrakiat" Grant, az Orvostudományi Kar Siriraj Kórháza is támogatja.
Hivatkozások
[1] A. Bogucka-Kocka, M. Wozniak, M. Feldo, J. Kockic, K. Szewczyk,Diosmin– izolálási technikák, meghatározás növényi anyagokban és gyógyszerkészítményekben, valamint klinikai felhasználás, Nat. Prod. Commun. 8 (2013) 545–550.
[2] Y. Zheng, R. Zhang, W. Shi, L. Li, H. Liu, Z. Chen, L. Wu, Metabolism and pharmacological activities of the natural health-befiting composed diosmin, Food Funct. 11 (2020) 8472–8492.
[3] MR Cesarone, G. Belcaro, L. Pellegrini, A. Ledda, G. Vinciguerra, A. Ricci, A. Di Renzo, I. Ruffini, G. Gizzi, E. Ippolito, F. Fano, M. Dugall , G. Acerbi, U. Cornelli, M. Hosoi, M. Cacchio, Venoruton vs Daflon: Az életminőségre gyakorolt hatások értékelése krónikus vénás elégtelenségben, Angiology 57 (2006) 131–138.
[4] KA Lyseng-Williamson, CM Perry, Mikronizált tisztított flavonoid frakció: áttekintés a krónikus vénás elégtelenségben, vénás fekélyekben és aranyérben való alkalmazásáról, Drugs 63 (2003) 71–100.
[5] AS Shalkami, M. Hassan, AG Bakr, Anti-inflammatorical, the antioxidant and anti-apoptotic activity of diosmin in ecetsav-induced ulcerative colitis, Hum. Exp. Toxicol. 37. (2018) 78–86.
[6] M. Berkoz, A Diosmin elnyomja a proinflammatorikus mediátorokat a lipopoliszacharidok által kiváltott RAW264.7 makrofágokban NF-kappaB és MAPK jelutak révén, Gen. Physiol. Biophys. 38 (2019) 315–324.
[7] M. Rajasekar, K. Suresh, K. Sivakumar, A Diosmin apoptózist indukál a STAT-3 jelátvitel modulálásával a 7,12 dimetilbenz(a)antracén által kiváltott ártalmas bukkális tasak karcinogenezisében, Biomed. Pharm. 83. (2016) 1064–1070.
[8] A. Lewinska, J. Adamczyk-Grochala, E. Kwasniewicz, A. Deregowska, M. Wnuk, Diosmin által kiváltott öregedés, apoptózis és autofágia különböző p53 státuszú és ERK aktivitású emlőráksejtekben, Toxicol. Lett. 265 (2017) 117–130.
[9] AC Pushkaran, V. Vinod, M. Vanuopadath, SS Nair, SV Nair, AK Vasudevan, R. Biswas, CG Mohan, Combination of repurposed drug diosmin with amoxicillin-clavulanic acid izraisa szinergetikus gátlást a mikobaktériumok növekedésében, Sci. Rep. 9 (2019) 6800.
[10] CC Hsu, MH Lin, JT Cheng, MC Wu. A dioszmin, egy citrusfélék flavonoidjának antihiperglikémiás hatása endogén béta-endorfin révén indukálódik I-es típusú diabéteszes patkányokban, Clin. Exp. Pharm. Physiol. 44 (2017) 549–555.
[11] O. Senthamizhselvan, J. Manivannan, T. Silambarasan, B. Raja,Diosminaz előkezelés javítja a szívműködést és elnyomja az oxidatív stresszt patkányszívben ischaemia/reperfúzió után, Eur. J. Pharm. 736 (2014) 131–137.
[12] N. Tong, Z. Zhang, Y. Gong, L. Yin, X. Wu, A Diosmin védi a patkány retináját az ischaemia/reperfúziós sérüléstől, J. Ocul. Pharm. Ott. 28 (2012) 459–466.
[13] AE Elhelaly, G. AlBasher, S. Alfarraj, R. Almeer, EI Bahbah, MMA Fouda, SG Bungau, L. Aleya, MM Abdel-Daim, A heszperidin és a dioszmin védő hatása az akrilamid által kiváltott máj, vese ellen, és agy oxidatív károsodása patkányokban, Environ. Sci. Szennyez. Res. Int. 26 (2019) 35151–35162.
[14] C. Thongprayoon, AE Krambeck, AD Rule, A valódi terhek meghatározásavesekőbetegség, Nat. Rev. Nephrol. 16 (2020) 736–746.
[15] K. Bishop, T. Momah, J. Ricks, Nephrolithiasis, Prim. Gondozás 47 (2020) 661–671.
[16] A. Viljoen, R. Chaudhry, J. Bycroft, Renal stones, Ann. Clin. Biochem 56 (2019) 15–27.
[17] PM Ferraro, R. Marano, A. Primiano, J. Gervasoni, M. Bargagli, G. Rovere, PF Bassi, G. Gambaro, Stone composition and vascular calcifications in patients with nephrolithiasis, J. Nephrol. 32 (2019) 589–594.
[18] G. Schubert, Stone analysis, Urol. Res. 34 (2006) 146–150.
[19] A. Vinaiphat, S. Aluksanasuwan, J. Manissorn, S. Sutthimethakorn, V. Thongboonkerd, Response of renal tubularis cells to different types and doses of kalcium-oxalát kristályok: integrative proteome network analysis and functionings, Proteomics 17 (2017). ), 1700192.
[20] P. Peerapen, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Protein network elemzés és funkcionális vizsgálatok a kalcium-oxalát kristály által kiváltott citotoxicitásról vese tubuláris epiteliális sejtekben, Proteomics 18 (2018), 1800008.
[21] KP Aggarwal, S. Narula, M. Kakkar, C. Tandon, Nephrolithiasis: a vesekőképződés molekuláris mechanizmusa és a modulátorok kritikus szerepe, Biomed. Res. Int. 2013 (2013), 292953.
[22] VN Ratkalkar, JG Kleinman, A kőképződés mechanizmusai, Clin. Csontbányász tiszteletes. Metab. 9 (2011) 187–197.
[23] X. Zeng, Y. Xi, W. Jiang, Protective roles of flavonoids and flavonoid-rich plant extras against urolithiasis: a review, Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 59 (2019) 2125–2135.
[24] MC Nirumand, M. Hajialyani, R. Rahimi, MH Farzaei, S. Zingue, SM Nabavi, A. Bishayee, Diétás növények a betegségek megelőzésére és kezelésérevesekövek: preklinikai és klinikai bizonyítékok és molekuláris mechanizmusok, Int. J. Mol. Sci. 19 (2018) 765.
[25] S. Ahmed, MM Hasan, H. Khan, ZA Mahmood, S. Patel, A polifenolok mechanisztikus betekintése a kalcium-oxalát urolithiasis enyhítésében, Biomed. Pharm. 106 (2018) 1292–1299.
[26] VV Prabhu, D. Sathyamurthy, A. Ramasamy, S. Das, M. Anuradha, S. Pachiappan, Evaluation of protection effects of diosmin (a citrus flavonoid) in chemical-induced urolithiasis in experimental rats, Pharm. Biol. 54 (2016) 1513–1521.
[27] A. Noorafshan, S. Karbalay-Doust, F. Karimi,Diosmincsökkenti a kalcium-oxalát lerakódását és a szöveti degenerációt patkányok nephrolithiasisában: sztereológiai vizsgálat, koreai J. Urol. 54 (2013) 252–257.
[28] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Chutipongtanate, A kalcium-oxalát kristályok típusait és morfológiáját meghatározó tényezők: moláris koncentrációk, pufferelés, pH, keverés és hőmérséklet, Clin. Chim. Acta 367 (2006) 120–131.
[29] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Sinchaikul, ST Chen, A kalcium-oxalát-monohidrát kristály által kiváltott citotoxicitás proteomikai elemzése disztális vesetubuláris sejtekben, J. Proteome Res. 7 (2008) 4689–4700.
[30] P. Amimanan, R. Tavichakorntrakool, K. Fong-ngern, P. Sribenjalux, A. Lulitanond, V. Prasongwatana, C. Wongkham, P. Boonsiri, WJ Umka, V. Thongboonkerd, Tu elongációs faktor az Escherichia colin vesekő betegek vizeletéből izolálva elősegíti a kalcium-oxalát kristályok növekedését és aggregációját, Sci. Rep. 7 (2017) 2953.
[31] S. Khamchun, K. Sueksakit, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, A fibronektin moduláló hatásai a kalcium-oxalát kristályosodására, növekedésére, aggregációjára, adhézióra a vese tubuláris sejtjein és az extracelluláris mátrixon keresztüli invázióra, J. Biol. Inorg. Chem. 24 (2019) 235–246.
[32] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Az aggregációs indexek meghatározása és szisztematikus elemzése a kalcium-oxalát kristály aggregáció mértékének értékelésére, Front. Chem. 5 (2017) 113.
[33] R. Kanlaya, O. Naruepantawart, V. Thongboonkerd, Flagellum felelős az életképes Escherichia coli kalcium-oxalát kristályosodásra, kristálynövekedésre és kristályaggregációra gyakorolt hatásának elősegítéséért, Front. Microbiol 10 (2019) 2507.
[34] P. Peerapen, V. Thongboonkerd, Különböző méretű kalcium-oxalát-monohidrát kristályok differenciálisan kötött fehérjéi és adhéziós képességei, Int. J. Biol. Macromol. 163 (2020) 2210–2223.
[35] K. Fong-ngern, K. Sueksakit, V. Thongboonkerd, A Surface heat shock protein 90 potenciális receptorként szolgál a kalcium-oxalát kristályok számára a vese tubuláris epiteliális sejtjeinek apikális membránján, J. Biol. Inorg. Chem. 21 (2016) 463–474.
[36] S. Chaiyarit, S. Mungdee, V. Thongboonkerd: Kalcium-oxalát kristályok nem radioaktív jelölése kristály-sejt kölcsönhatás és internalizáció vizsgálatához, Anal. Methods 2 (2010) 1536–1541.
[37] S. Chaiyarit, N. Singhto, V. Thongboonkerd, A vese tubuláris sejtjeibe internalizált kalcium-oxalát-monohidrát kristályokat endolizoszómák lebontják és feloldják, Chem. Biol. Egymásra hat. 246 (2016) 30–35.
[38] W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, A fehérjék kalcium-oxalát kristályinvázióra kifejtett, extracelluláris mátrixon keresztüli, plazminogén/plazmin aktivitáson alapuló újszerű vizsgálata, Talanta 101 (2012) 240–245.
[39] W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, A kalcium-oxalát kristályok fokozták az enoláz-1 szekréciót a vese tubuláris sejtjeiből, ami ezt követően fokozta a kristály- és monocita inváziót a vese interstitiumon keresztül, Sci. Rep. 6 (2016) 24064.
[40] R. Kanlaya, K. Sintiprungrat, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, A macropinocytosis a fő mechanizmus a kalcium-oxalát kristályok vese tubuláris sejtjébe történő endocitózisában, Cell Biochem. Biophys. 67 (2013) 1171–1179.
[41] S. Sassanarakkit, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, StoneMod: adatbázisvesekőmoduláló fehérjék kísérleti bizonyítékokkal, Sci. Rep. 10 (2020) 15109.
[42] G. Eraslan, ZS Sarica, LC Bayram, MY Tekeli, M. Kanbur, M. Karabacak, The Effects of diosmin on aflatoxin-induced máj- és vesekárosodás, Environ. Sci. Szennyez. Res. Int. 24 (2017) 27931–27941.
[43] R. Russo, D. Chandradhara, N. De Tommasi, Comparative bioavailability of Twodioszminegészséges önkénteseknek szájon át történő beadást követő készítmények, Molecules 23 (2018) 2174.
[44] JQ Silveira, TB Cesar, JA Manthey, EA Baldwin, J. Bai, S. Raithore, A flavanonglikozidok farmakokinetikája egyszeri adag frissen facsart narancslé elfogyasztása után a kereskedelmileg feldolgozott narancslével szemben egészséges embereknél, J. Agric . Food Chem. 62 (2014) 12576–12584.
[45] A. Frackowiak, P. Skibinski, W. Gawel, E. Zaczynska, A. Czarny, R. Gancarz, A hidroxiantrakinon glikozidszármazékainak szintézise, amely képes feloldani és gátolja a kalcium-oxalát kristályok képződését. Potenciális vegyületek a vesekő terápiában, Eur. J. Med. Chem. 45 (2010) 1001–1007.
[46] F. Grases, J. Perello, B. Isern, RM Prieto, Study of a mioinozitol-hexafoszfát alapú krém a dystrophiás calcinosis cutis megelőzésére, Br. J. Dermatol. 152 (2005) 1022–1025.
[47] V. Thongboonkerd, Proteomics of kristály-sejt kölcsönhatások: a vesekőkutatás modellje, Cells 8 (2019) 1076.
[48] CF Verkoelen, Kristályretenció vesekőbetegségben: döntő szerepe van a glükózaminoglikán-hialuronánnak? J. Am. Soc. Nephrol. 17 (2006) 1673–1687.
[49] K. Fong-ngern, A. Vinaiphat, V. Thongboonkerd, A kalcium-oxalát kristály által kiváltott mikrovillar-sérülés vese tubuláris epiteliális sejtjeiben és az epigallocatechin-3-gallát védő szerepe, FASEB J. 31 (2017) 120 –131.
[50] J. Zhou, J. Jin, X. Li, Z. Zhao, L. Zhang, Q. Wang, J. Li, Q. Zhang, S. Xiang, Total flavonoids of Desmodium styracifolium attenuates the formation of hydroxi- L-prolin által kiváltott kalcium-oxalát urolithiasis patkányokban, Urolithiasis 46 (2018) 231–241.
[51] J. Manissorn, K. Fong-ngern, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, A vizelet pH-jának szisztematikus értékelése a kalcium-oxalát kristályosodására, a kristálysejtek adhéziójára és a vese tubuláris sejtjébe való internalizációra, Sci. Rep. 7 (2017) 1798.
[52] S. Cui, J. Qian, P. Bo: Inhibitive Effect on phagocytosis of Candida albicans induced by phagocytosis of Candida albicans induced by phagocytosis of Candida albicans induced by előkezelés quercetin via actin cytoskeleton interference, J. Tradit. Áll. Med. 33 (2013) 804–809.
[53] S. Cui, Q. Wu, J. Wang, M. Li, J. Qian, S. Li, A kvercetin gátolja az LPS-indukált makrofág migrációt az iNOS/FAK/paxillin útvonal elnyomásával és a citoszkeleton modulálásával, a Cell Adhes . Migr. 13. (2019) 1–12.
[54] Y. Li, WG Gonzalez, A. Andreev, W. Tang, S. Gandhi, A. Cunha, D. Prober, C. Lois, ME Bronner: A makropinocitózis által közvetített membrán-újrahasznosítás F-kibocsátással ösztönzi az idegi gerinc migrációját. aktint a lamellipodiumba, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 117 (2020) 27400–27411.
[55] H. Inaba, K. Yoda, H. Adachi, Az F-aktint kötő RapGEF GflB szükséges a hatékony makropinocitózishoz in Dictyostelium, J. Cell Sci. 130 (2017) 3158–3172.
[56] A. Khan, Prevalence, patofiziológiai mechanizmusok és az urolithiasist befolyásoló tényezők, Int. Urol. Nephrol. 50 (2018) 799–806.
[57] AP Evan, EM Worcester, FL Coe, J. Williams Jr., JE Lingeman, Mechanisms of human vesekőképződmény, Urolithiasis 43 (Suppl 1) (2015), 19–32.
[58] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Mitokondriális diszfunkció ésvesekőbetegség, Front. Physiol. 11 (2020), 566506.
[59] SR Khan, A kőképződés "fix részecskés" modelljének szövettani vonatkozásai: állatkísérletek, Urolithiasis 45 (2017) 75–87.
[60] VY Bird, SR Khan, Hogyan keletkeznek a kövek? Lehetséges-e egyesíteni a kőképződéssel kapcsolatos elméleteket? Boltív. Esp. Urol. 70 (2017) 12–27.
[61] JP Kavanagh, Módszerek a kalcium-oxalát kristályosodásának vizsgálatára és alkalmazásuk az urolitiasis kutatására, Scanning Microsc. 6 (1992) 685–704, vita 704-5.
[62] JP Kavanagh, L. Jones, PN Rao, Kalcium-oxalát kristályosodási kinetika az emberi és mesterséges vizelet különböző koncentrációinál, állandó kalcium/oxalát arány mellett, Urol. Res. 27 (1999) 231–237.
[63] NK Saw, PN Rao, JP Kavanagh, A. nidus, crystalluria és aggregáció: a kőnagyobbítás kulcsfontosságú összetevői, Urol. Res. 36 (2008) 11–15.
[64] A. Borissova, GE Goltz, JP Kavanagh, TA Wilkins, Reverse engineering the vese: modeling calcium-oxalate monohydrate crystallization in the nephron, Med. Biol. Eng. Comput. 48 (2010) 649–659.
[65] LA Thurgood, ES Sorensen, RL Ryall, Az intrakristályos és felülethez kötött oszteopontin hatása a kalcium-oxalát-dihidrát kristályoknak a Madin-Darby kutyavese (MDCK) sejtekhez való kapcsolódására ultraszűrt emberi vizeletben, BJU Int. 109. (2012) 1100–1109.
