ABSTＲACT

Cél: annak tisztázása, hogy általános-ecisztanozidok(GC) javítjakognitív diszfunkciógyorsan öregedő egerek (SAMP8) specifikus androgénreceptorok (AＲ) közvetítésével aa szinaptikus fehérje expressziójának szabályozása． 

Módszerek: Összesen 76 7-hónapos hím SAMP8 egeret véletlenszerűen osztottak fel a modellcsoportra, a GC-csoportra, a GC-k + flutamid (F) csoportra, a GC-k + fulvesztrant (ICI) csoportra, az F-csoportra és az ICI-csoportra. Az egerek tanulási és memóriafunkcióit minden csoportban a Morris vízi labirintussal tesztelték. Western blot-ot és RT-PCR-t használtunk a vizsgálathozszinaptofizin expressziós szintje(SYN), posztszinaptikus denzitás - 95 (PSD - 95) és az agyból származó neurotróf faktor (BDNF) minden csoportban.

Eredmények: A GC-k jelentősen javították a SAMP8 egerek tanulási és kognitív funkcióit.

A GCs-csoporthoz képest az egerek tanulási és memóriafunkciója a GCs + F csoportban és a GCs + ICI csoportban jelentősen csökkent. Western blot és RT-PCR eredmények azt mutatták, hogy a BDNF, SYN és PSD-95 expressziós szintje szignifikánsan megnövekedett fehérje- és génszinten a GC-csoportban a Model-csoporthoz képest (P ＜ 0． {{ 11}}5) A SYN expressziós szintje nőtt a GCs + F és GCs + ICI csoportban, és a BDNF és PSD -95 expressziós szintje szignifikánsan csökkent a GCs + F és GCs + ICI csoportban a GCs csoporthoz képest (P ＜ 0 - 05) ．

Következtetés: A GC-k specifikusan közvetíthetik az AＲ-t, hogy fokozzák a szinaptikus plaszticitást SAMP8 egerekben, ami viszont javítja a tanulást és a kognitív funkciókat.

KULCSSZAVAK:Általános cisztanozidok; androgén receptor; Szinaptikus plaszticitás; SAMP8 egerek

Cistanche kiegészítő Kognitív Funkciót Javító Étrend-kiegészítő PhGs75% Ech 30% Act 12%

Alzheimer kór(AD) gyakorineurológiai degeneratív betegségklinikailag a kognitív funkciók progresszív hanyatlása, valamint a mentális és pszichológiai állapot változásai jellemeznek [1]. Tanulmányok kimutatták, hogy a férfi AD-betegek tesztoszteronszintje jelentősen alacsonyabb, mint a normál férfiaké.

Aa betegek kognitív funkciójaután különböző mértékben javultketonpótló terápia[2], ami azt jelzi, hogy az androgénszintek életkorral összefüggő csökkenése az idősebb férfiaknál az AD kockázati tényezője lehet.

Cistanche deserticola összes glikozidja (általános cisztanozidok, GC) a Cistanche deserticola egyik fő kivonata, amely javíthatja az AD-vel kapcsolatos tanulást éskognitív diszfunkció[3]. Ezenkívül a GC-k szondán keresztül történő beadása szignifikánsan növelte az állatok tesztoszteronszintjét [4]. A GC-k a yang előmozdítását is szolgálják, és gyakorolhatnak is

Androgénszerű farmakodinámiás hatások. Korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a tesztoszteron javíthatja az AD modellállatok tanulási és kognitív funkcióit, és ez a folyamat specifikus androgénreceptor (androgénreceptor, AR) által közvetített [5].

Köztudott, hogy az AD-betegek kognitív diszfunkciója szorosan összefügg a szinaptikus plaszticitással. Még mindig nem tisztázott azonban, hogy a GC-k milyen specifikus mechanizmuson keresztül szabályozzák a szinaptikus plaszticitást, és ezáltal javítják a tanulási és kognitív funkciókat. Ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy feltárja, vajon a GC-k közvetítik-e a specifikus ARＲ-t, hogy befolyásolják-e a szinaptikus plaszticitást, és ezáltal javítsák az AD tanulási és kognitív funkcióit.

1 Anyagok és módszerek

1. 1 Kísérleti állatok és berendezések

A hím 3-hónapos SAMP8 egereket a Pekingi Egyetem Orvostudományi Karától (SCXK [Peking] 2016-0010) vásároltuk, és 7 hónapos korukig nevelték őket. Az állatokat tiszta környezetben tartottuk (24 ± 1) fokon és

Az állatokat természetes megvilágításban, élelemhez és vízhez való szabad hozzáférést biztosítottuk, valamint humanitárius ellátásban részesültek a kísérleti állatok felhasználására vonatkozó 3R elvek szerint. Ezt a kísérleti vizsgálatot a Baotou Medical College Kísérleti Állat-etikai Bizottsága (Baotou Medical College No. 20201102) hagyta jóvá.

A kísérletben a fő reagensek a következők:Cistanche deserticola összes glikozidja(GCs, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); androgénreceptor antagonista-flutamid (Sigma Company, USA); ösztrogénreceptor antagonista-fulvesztrant (ICI 182780, USA) Med Chem Express; Nyúl anti-egér BDNF antitest,

PSD-95 antitest, SYN antitest, -aktin antitest (Proteintech Company of the United States); fehérje elektroforézis oldat, fehérje transzfer oldat, TEMED, akrilamid puffer, ammónium-perszulfát, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNS szintézis kit, Talent fluoreszcencia kvantitatív kimutatás

Reagenskészlet (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.) stb. A fő kísérleti berendezés tartalmaz egy függőleges lemezes elektroforézis tartályt, elektroforézis készüléket, transzfer tartályt, színtelenítő rázógépet (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), fehérjegél képalkotó elemző rendszert (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), valós idejű fluoreszcens kvantitatív PCR műszer (USA Roche) stb.

1. 2 Csoportosítás és ügyintézés

Két egér természetesen elpusztult az etetési folyamat során, és a fennmaradó 78 egeret véletlenszerűen modellcsoportra, GC-csoportra, GC-k + flutamid (F) csoportra, GC-k + fulvesztrant (ICI) csoportra, F-csoportra, ICI-re osztották.

Egyenként 13 állatból álló csoportok. A modellcsoport, az F csoport és az ICI csoport kivételével a többi csoport folyamatosan 50 mg/(kg·d) GC-t kapott 30 napon keresztül.

A GC beadását követő 24. naptól a GCs + flutamid (F) és a GCs + fulvesztrant (ICI) csoport intraperitoneális F injekciót kapott (5 mg/kg/nap) 30 perccel a GC beadása után. szondával. ), ICI (1 mg/kg/nap), folyamatos injekció 7 napig. Állítsa be az adagolási koncentrációt úgy, hogy az egerek maximális gyomortérfogata 0,5 ml legyen, naponta 1 alkalommal.

1. 3 Morris vízlabirintus teszt

Az egerek egy nappal korábban alkalmazkodtak a vízi környezethez. A Morris vízi labirintus 6 napig tartott. Az első 5 nap a helymeghatározási és navigációs teszt volt. Az egereket naponta egyszer, mind a négy kvadránsban, 1 percig edzették. Minden edzési intervallum 15 perc volt, és a rekordokat egyidejűleg rögzítették. Az állatok helymeghatározási és navigációs tesztjének menekülési késleltetése; a 6. napon távolítsa el a platformot a vízből, és végezzen űrkutatási tesztet. Jegyezze fel a platformátlépések számát és az egér célnegyedében eltöltött idő százalékos arányát. a célkvadráns) és a térbeli feltáró úszási pálya (Swimming trajectory of spatialprobe test) és egyéb mutatók.

1. 4 Western blot kimutatás

SYN, PSD-95 és BDNF szinapszissal kapcsolatos fehérjék expressziója. A Morris vízi labirintus-teszt után minden egeret rutinszerűen elaltattak, fejüket lefejezték, agyukat eltávolították, és a hippokampuszukat lecsupaszították. A hippocampális szövetet fehérjét lizáltuk, 4 fokos ultrahanggal felbontottuk, 30 percig jégen hagytuk, és 12, 000 fordulat/perc sebességgel 15 percig 4 fokon centrifugáltuk. A felülúszót vettük, és a fehérjekoncentrációt BCA módszerrel mértük. A fehérje betöltése után végezzen halmozási gélelektroforézist 80 V állandó feszültséggel, elválasztó gélelektroforézist 120 V állandó feszültséggel, és nedves átvitelt 300 mA állandó áramlással; vegyük ki a PVDF membránt, zárjuk le 5%-os sovány tejjel 80 percig szobahőmérsékleten, és mossuk át háromszor TBST-vel. 15 perc/idő, a primer antitestet egy éjszakán át inkubáltuk rázóasztalon 4 °C-on; másnap a membránt háromszor mostuk TBST-vel.

15 perc/idő, a másodlagos antitestet szobahőmérsékleten 2 órán át inkubáltuk, majd ECL színfejlesztést végeztünk, és kemilumineszcenciás képalkotó rendszerrel képalkotást végeztünk. -aktint használtunk belső referenciaként, és a sáv optikai sűrűségének értékét Image J szoftverrel elemeztük.

1. 5ＲRT-PCRＲdetektálás

A SYN, PSD-95 és BDNF mRNS expresszióját a hippocampális szövet teljes RNS-éből vontuk ki a Trizol extrakciós módszerrel, és a cDNS-t fordított transzkripciót követően állítottuk elő. A Talent fluoreszcencia kvantitatív detektáló készletet használtuk a relatív fluoreszcencia kvantitatív kimutatására. A kísérletet háromszor megismételtük, és az eredményeket 2 - ΔΔCT-vé konvertáltuk. Az egér -aktin, SYN, PSD-95 és BDNF primereket a Shanghai Sangon Company tervezte, és a primer szekvenciák az 1. táblázatban láthatók.

1. 6 Statisztikai elemzés

Az SPSS 25-ön keresztül. 0 statisztikai szoftver a feldolgozáshoz, a Graphpad Prism 8 szoftvert a statisztikai grafikonok rajzolásához, az egyutas ANOVA-t pedig több minta páronkénti átlagainak összehasonlításához. P < 0. A 05 azt jelenti, hogy a különbség statisztikailag szignifikáns.