A tojáshéj membránja javítja a hiperurikémiát az urát kiválasztásának fokozásával a kálium-oxonáttal injekciózott patkányokban
Mar 16, 2022
Absztrakt:A hiperurikémia a köszvényes ízületi gyulladás és más anyagcserezavarok elsődleges oka. A tojáshéj membrán (EM) hatékony és biztonságos kiegészítő az osteoarthritishez kapcsolódó fájdalom és merevség gyógyítására. Az EM hiperurikémiára gyakorolt hatása azonban nem tisztázott. Ez a tanulmány meghatározza az EM hatásait a kálium-oxonáttal injektált hiperurikémiára. Mérjük a húgysav, a kreatinin, a vér karbamid-nitrogén koncentrációját a szérumban és a xantin-oxidáz aktivitást a májban. A fehérje szintjevese- urát transzporter 1 (URAT1), szerves anion transzporter 1 (OAT1), glükóz transzporter 9 (GLUT9) és ATP-kötő kazettás transzporter G2 (ABCG2)vese-val határozzák megvese-kórszövettan. Az eredmények azt mutatják, hogy az EM csökkenti a szérum húgysavszintjét és növeli a vizelet húgysavszintjét hiperurikémiás patkányokban. Ráadásul az EM leszabályozvese-Az URAT1 fehérje expressziója fokozza az OAT1 és az ABCG2 expresszióját, de nem változtatja meg a GLUT9 expresszióját. Ezenkívül az EM nem változtatja meg a xantin-oxidáz aktivitását a májban vagy a szérumban. Az EM emellett csökkenti a hURAT1-et expresszáló petesejtek húgysavfelvételét. Végül az EM jelentősen csökkenvese-gyulladás és a szérum interleukin{0}} szintje. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az EM antihiperurikémiás hatást fejt ki azáltal, hogy elősegíti vese-urát kiválasztás és szabályozásvese-urát szállítók. Ezért az EM hasznos lehet a köszvény és a hiperurikémia megelőzésében és kezelésében.
Kulcsszavak:Vese; vese; köszvény; urát transzporter 1; húgysav; kálium-oxonát
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESEDIALÍZIS
A tojáshéj membrán (EM) a tojáshéj belsejéhez tapadt film, amely a tojások egyik összetevője, az emberi egészség egyik fő tápláléka. Lehetővé teszi az oxigén bejutását és blokkolja a mikroorganizmusok invázióját. Az EM szerves anyagokból (70 százalék), nem szerves anyagokból (10 százalék) és vízből (20 százalék) áll, és a szerves anyagok 80 százaléka fehérje. Ezenkívül 2,3 százalék zsírt és 3,4 százalék szénhidrátot tartalmaz [1,2]. A tojás összetevői közül a tojássárgáját és a tojásfehérjét élelmiszer-alapanyagként használják, a tojáshéj pedig a kalcium-kiegészítők alapanyaga a fogak és csontok kialakításához és fenntartásához [3]. Az EM azonban hulladéknak minősül, és nem gyakran hasznosítják. Az EM ízületi gyulladás elleni hatásáról a közelmúltban számoltak be lipopoliszacharidok által kiváltott állatmodellben és humán klinikai vizsgálatokban [4,5]. Az EM javította a gyulladást is kollagén által kiváltott rheumatoid arthritisben szenvedő patkányokban [6]. Ezen túlmenően, az EM mononátrium-jód-acetát-indukált osteoarthritisben szenvedő patkányokban ízületi gyulladás elleni hatást mutatott [7]. A mononátrium-jódacetát a köszvényes ízületi gyulladás indukálója, és a mononátrium-urát kristályok felhalmozódása az ízületekben gyulladáshoz vezethet, ami köszvényes ízületi gyulladáshoz vezethet. A hiperurikémia húgysav (vagy urát) kristályok képződését okozhatja, és ezeknek a kristályoknak az ízületekben történő lerakódása köszvényt, az ízületi gyulladás egy formáját, amely nagyon fájdalmas lehet. Az EM a kollagén, a kondroitin-szulfát, a glükózamin, a hialuronsav és a kalcium forrása, amelyeket alaposan megvizsgáltak az osteoarthritis kezelésében [8]. E vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy az EM potenciálisan hasznos lehet a köszvény és a hiperurikémia megelőzésében és kezelésében.
A hiperurikémia az inzulinrezisztencia, a cukorbetegség, az elhízás, a magas vérnyomás, az atherosclerosis és a szív- és érrendszeri betegségek, valamint a köszvényes ízületi gyulladás előrehaladásának fő kockázati tényezője [9–11]. A hiperurikémia megfelelő kontrollja hozzájárul e betegségek megelőzéséhez és kezeléséhez. A hiperurikémia fokozott húgysavtermelés vagy károsodott húgysavkiválasztás esetén fordul elő [12]. A húgysav termelésének csökkentésével és a kiválasztás fokozásával az urátcsökkentő kezelés döntő szerepet játszhat a hyperuricemia és a hyperuricemia okozta rendellenességek kezelésében [13]. Az általánosan használt urátcsökkentő gyógyszereket, például az allopurinolt és a febuxosztátot, amely a húgysavszintézis gátlója, széles körben alkalmazzák a köszvény kezelésére; ezek a xantin-oxidáz (XO) gátlók azonban súlyos mellékhatásokkal járhatnak, például allopurinol-túlérzékenységi szindrómával [14–16]. A benzbromaron egy uricosuric gyógyszer, amelyet az elmúlt 30 évben a köszvény leküzdésére használtak, de súlyos hepatotoxicitási mellékhatások miatt kivonták az európai piacról [17]. Ezért szükség van olyan természetes termékekből származó, toxicitás nélküli gyógyszerek kifejlesztésére, amelyek hatékonyabbak a hiperurikémiával összefüggő rendellenességek megelőzésére és hosszú távú kezelésére. Ezért ez a tanulmány azt vizsgálja, hogy az EM véd-e a hiperurikémiával szemben. Ez a vizsgálat az EM antihiperurikémiás aktivitását értékeli kálium-oxonát (PO) által kiváltott hiperurikémiában szenvedő patkányokban. A PO egy szelektíven kompetitív urikáz inhibitor, amelyet széles körben alkalmaznak a máj urikáz hiperurikémiához vezető hatásának gátlására [18,19]. Így a PO-kezelt patkányok gyakorlati állatmodellek nemcsak a hiperurikémia patológiájának vizsgálatára, hanem a lehetséges gyógyszerek értékelésére is [20]. Az EM hiperurikémiára gyakorolt aktivitásának és mögöttes mechanizmusainak vizsgálatára az EM kettős mechanizmusát vizsgálják a húgysavtermelés gátlásán és a húgysavkiválasztás fokozásán keresztül hiperurikémiás állatokban.
A CISTANCHE JAVÍTJA A vese-/veseelégtelenséget
2. Anyagok és módszerek
2.1. ÁllatokHét hetes hím Sprague Dawley patkányokat az Orient Bio-tól (Seongnam, Korea) vásároltunk. Légkondicionált, 22 ± 1 ◦C-os, 50 ± 10 százalékos páratartalmú állatszobában alkalmazták őket. A patkányok ad libitum hozzáférést kaptak a szokásos étrendhez és vízhez. Az állatkísérleteket a Koreai Keleti Orvostudományi Intézet Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága hagyta jóvá, és a kísérleteket a bizottság irányelveinek megfelelően végezték (jóváhagyási kód: 19-024).
2.2. Hyperuricemia indukciója és EM beadásaA tanulmányban használt EM-et szárított por formájában a JU-HWAN BIO CELL Co., Ltd. (Cheonan, Korea) biztosította. A hyperuricemia indukálására 150 mg/kg PO (urikáz inhibitor) injekciót adtunk intraperitoneálisan az állatokba. A következő pozitív kontroll gyógyszereket alkalmaztuk: allopurinol (Sigma, St. Louis, MO, USA) és benzbromaron (TCI, Tokió, Japán). Az injekció beadása előtt a PO-t feloldottuk 0,5% karboxi-metil-cellulózban (CMC, Sigma, USA) és 0,1 M nátrium-acetátban (Sigma, USA). Az EM antihiperurikémiás aktivitásának vizsgálatához (1. kísérlet, előzetes akut vizsgálat) a patkányokat öt csoportra osztották (csoportonként 5 állat): egy normál csoport; PO-injektált hiperurikémia csoport (PO); egy PO plusz 10 mg/kg allopurinollal kezelt csoport; egy PO plusz 100 mg/kg EM-kezelést kapott csoport; és egy PO plusz 200 mg/kg EM-kezelést kapott csoport. Az 1. kísérletben a mintákat CMC-ben oldottuk fel, és orálisan (egyszer) adtuk be a patkányoknak 1 órával a PO injekció után 1 napig. Az EM dózisfüggő aktivitásainak és molekuláris mechanizmusainak vizsgálatához (2. kísérlet) a patkányokat 7 csoportra osztottuk (mindegyik n=5): normál csoport (N); PO-injektált hiperurikémiás csoport; egy PO plusz 10 mg/kg allopurinollal kezelt csoport; egy PO plusz 50 mg/kg benzbromaronnal kezelt csoport; egy PO plusz 50 mg/kg EM-kezelésben részesülő csoport; egy PO plusz 100 mg/kg EM-kezelést kapott csoport; és egy PO plusz 200 mg/kg EM-kezelést kapott csoport. A mintákat 0,5%-os CMC-oldatban oldottuk fel, és orálisan (minden nap) adtuk be a patkányoknak 1 órával a PO injekció után 5 napig.
2.3. Vér-, vizelet- és szövetminták gyűjtéseA gyógyszer beadása után 2 órával vért vettünk, és 2 óra múlva vizeletet is gyűjtöttünk metabolikus ketrec segítségével a mintakezelést követően. A vér és a vizelet, a szövetek levétele után(veseés máj) mintákat gondosan felosztottuk és 80 ◦C-on tároltuk további vizsgálatokhoz. A szérumot centrifugálással választottuk el (2000 × g, 15 perc, 4 °C). A szérum- és vizeletmintákat ezután biokémiai elemzéshez használták fel.
2.4. A szérum és a vizelet húgysavkoncentrációjának elemzéseA szérumból és a vizeletből származó húgysavkoncentrációt kereskedelmi forgalomban lévő húgysav-elemző készlettel (Biovision, Milpitas, CA, USA) határoztuk meg a gyártó utasításai szerint.
2.5. A gyulladást okozó citokinek szintjének mérése a szérumbanA szérum interleukin (IL)-1 koncentrációját patkány IL-1 enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) segítségével mérték.
2.6. In vitro xantin-oxidáz aktivitás májból és szérumbólA májszövetben és a szérumban az XO-aktivitást az XO-aktivitás-vizsgálati kittel határoztuk meg a gyártó protokollja szerint (Sigma, USA). Az XO-aktivitást egy Spectra Max M3 mikrolemez-leolvasóval (Molecular Devices, San Jose, CA, USA) mérték a korábban publikált protokollok segítségével [21]. Az enzimreakciót 0,5 mM xantin szubsztrát hozzáadásával indítottuk be, és a húgysav koncentrációját percenként mértük 5 percig. Referenciaként az XO-gátló allopurinolt használtuk. A máj XO aktivitását a teljes fehérjeszint normalizálta.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESE FERTŐZÉSÉT
2.7. Vese kórszövettani vizsgálataA veseszöveteket eltávolítottuk, azonnal 1 napig formalinban rögzítettük, majd paraffinba ágyaztuk. Minden mintát 6 µm vastagságúra vágtunk, és a metszeteket hematoxilin és eozin reagenssel megfestettük. A megfestett metszeteket ezután mikroszkóppal tettük láthatóvá.
2.8. Western Blot analízisVeseA szöveteket pro-prep extrakciós oldatban homogenizáltuk (Intron, Szöul, Korea), majd centrifugáltuk (13,000× g, 4 ◦C) 15 percig. A felülúszót a megcélzott fehérjék Western-blot analíziséhez használtuk. A teljes fehérjeszintet szarvasmarha-szérumalbuminnal (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) végzett DC fehérje vizsgálattal határoztuk meg. Az elsődleges antitestek a következők voltak: -aktin (Santa Cruz, Dallas, TX, USA), glükóz transzporter 9 (GLUT9, MyBioSource, San Diego, CA, USA), urát transzporter 1 (URAT1; MyBioSource, San Diego, CA, USA) és szerves anion transzporter 1 (OAT1; MyBioSource, San Diego, CA, USA). A membrán sávjait ECL detektáló reagenssel tettük láthatóvá ImageQuant LAS 4000 (GE Healthcare Life Sciences, Szöul, Korea) segítségével. A kapott képek sűrűségét a NIH Image J1.49 szoftverével (Bethesda, MD, USA) határoztuk meg. A látható célfehérje szinteket -aktinra normalizáltuk. Az ATP-kötő kazettás transzporter G2 (ABCG2) expresszióit patkány ABCG2 ELISA kit (MyBioSource) segítségével kaptuk, és a teljes fehérjeszinttel normalizáltuk.
2.9. Az urátfelvétel mérése UART{2}}expressziós petesejt segítségévelA Xenopusból származó hURAT{{0}}expresszáló petesejteket a korábban leírtak szerint állítottuk elő [20]. Az URAT1 inhibitort, a benzbromaront (TCI, Tokió, Japán) referenciaként kezeltük. A petesejteket reakciópufferben inkubáltuk Dulbecco-féle foszfáttal pufferolt sóoldattal (DPBS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) és ND-oldattal (pH 7,4; 5 mM 4-(2-) Hidroxietil)) piperazin-1-etán-szulfonsav puffer, 2 mM KCl, 1 mM magnézium-klorid, 1,8 mM kalcium-klorid és 96 mM nátrium-klorid, 1 mM pirazin-karbonsavval (Sigma-Aldrich, St. Louis) , MO, USA) 37 ◦C-on. A petesejteket tovább inkubáltuk különböző koncentrációjú EM-t (1, 10 és 100 µg/ml) tartalmazó oldatban 50 µM [14C] húgysavval (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) 37 ◦C-on. 60 perc elteltével a húgysavfelvételt hideg DPBS kiegészítéssel leállítottuk. Leállítás után a petesejteket 0,1 N nátrium-hidroxid és 10%-os nátrium-dodecil-szulfát oldatában oldottuk, és a radioaktivitást folyadékszcintillációval számoltuk meg.
2.10. StatisztikaMinden adatot átlag ± átlag standard hibájaként fejeztünk ki. A szignifikáns különbségeket statisztikailag egyirányú varianciaanalízissel, majd a GraphPad Prism 7.{4}}5 szoftverrel végzett utólagos Dunnett-teszttel értékelték ki. A különbséget statisztikailag szignifikánsnak tekintettük, ha a p-érték 0,05-nél kisebb volt.
3. Eredmények
3.1. A tojáshéj membrán hatása a szérum húgysav szekréciójára,Egyetlen PO injekció 1 napig szignifikánsan megnövelte a szérum húgysavszintet PO-injekciót kapott hiperurikémiás patkányokban a normál patkányokhoz képest (1. ábra). Eközben a 100 és 200 mg/kg EM és az allopurinol (pozitív kontroll) hatékonyan csökkentette a szérum húgysavszintet PO-injektált hiperurikémiás patkányokban. Ezért a következő vizsgálatokat az EM dózisfüggő aktivitásainak és mechanizmusainak azonosítására végeztük.
3.2. A tojáshéj membrán hatása a szérum és a vizelet húgysav szintjére,Az 5 napig tartó APO injekció szignifikánsan megemelte a szérum húgysavszintet a PO csoportban a normál csoporthoz képest (2a ábra). Az EM 100 és 200 mg/kg-os kezelése, valamint allopurinol és benzbromaron szignifikánsan csökkentette a szérum húgysavszintet a PO csoportban. Ezen kívül értékelniveseműködés, kreatinin és vér karbamid nitrogén (BUN) koncentrációját mértük. A szérum kreatinin koncentrációja nem különbözött a csoportok között (2b. ábra). A szérum BUN koncentrációk emelkedtek a PO csoportban, de ezek a szintek csökkentek az EM 200 mg/kg csoportban és a pozitív kontroll (allopurinol és benzbromaron) csoportban (2c. ábra).
Az EM húgysavkiválasztásra gyakorolt hatásának értékelésére a vizelet húgysavszintjét vizsgáltuk. A PO csoportban szignifikánsan csökkent a vizelet húgysav szintje, ami az EM (100 és 200 mg/kg) és a benzbromaron beadásával nőtt (2d. ábra). Ezek az adatok azt mutatták, hogy az EM növelheti a vese húgysav-kivonását, hogy csökkentse a szérum húgysavszintjét hiperurikémiás patkányokban.
3.3. A tojáshéj membrán hatása a vesegyulladásraEnyhe tubuláris dilatációt, a tubuláris epiteliális sejt vakuoláris degenerációját, duzzanatot és gyulladásos sejtek beszűrődését figyelték meg avesePO-injekciót kapott hiperurikémiás patkányok (3a. ábra). Az EM azonban ezeket hatékonyan javítottavese-kórszövettani változások hiperurikémiás patkányokban. Ezen túlmenően a hiperurikémiás patkányok a gyulladást okozó citokin IL-1 emelkedett szérumszintjét mutatták (3b. ábra). Az EM minden koncentrációban jelentősen csökkentette a szérumszinteket hiperurikémiás patkányokban. A benzbromaron alkalmazása nagyobb mértékben növelte a szérum IL-1 szintet, mint a PO-injekcióval kezelt hiperurikémiás patkányoknál, bár nem szignifikánsan, és valószínűleg ez a gyógyszer mellékhatása. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az EM hatékonyan javultvesegyulladás és működés hiperurikémiás patkányokban.
3.34. A tojáshéj membrán hatása az XO aktivitásra
A májban lévő XO húgysavtermelést indukál. Így az EM hiperurikémiára kifejtett gátló hatásának mechanizmusának meghatározásához a szérum és a máj XO aktivitását értékeltük, a máj XO aktivitása szignifikánsan megnőtt a PO csoportban (4a, b ábra). Az XO inhibitor, az allopurinol szignifikánsan csökkentette az XO aktivitást a szérumban és a májban. Az EM azonban egyik dózisnál sem változtatta meg az XO aktivitást. Ezek az adatok azt mutatják, hogy az EM nem gátolja az XO aktivitást és nem csökkenti a húgysavtermelést.
3.5. A tojáshéj membrán hatása az urát kiválasztásáraAz EM urátkiválasztásra gyakorolt hatásának értékelésére, számosvese transzporterekmegvizsgálták. A 100 és 200 ug/ml-es EM, valamint a benzbromaron jelentősen csökkentette az URAT1 fehérje szintjét avese(5a, b ábra). Az EM azonban nem változtatta meg a GLUT9 fehérje szintjét (5c. ábra). A 200 ug/ml-es EM növelte az OAT1 fehérje szintjét, és az EM beadása minden koncentrációban növelte az ABCG2 szintet (5d, e ábra).
3.6. Az EM hatása a petesejtek in vitro URAT1 felvételéreEzenkívül megerősítették az EM hatását az in vitro urátfelvételi rendszerre. Az 1, 10 és 100 ug/ml-es EM-kezelés erős húgysav-felvétel gátlást mutatott in vitro a hURAT{3}}túltermelő petesejtekben (6. ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy az EM szabályozza az urát transzporterek expresszióját, hogy növelje az urát kiválasztását.
Vita
Emberben a vesék fontos szerepet játszanak a húgysav homeosztázisában, mivel az urát kiválasztásának több mint 70 százalékavese,míg a fennmaradó 30 százalék a széklettel ürül a bélből [22,23]. Az urát kiválasztását azonban károsíthatjavese-rendellenességek, amelyek hiperurikémiához vezetnek. A húgysav kiválasztódása a proximális tubulusokban található transzporter fehérjéken alapulvesea húgysav szekréciójának szabályozására a vérben és a szűrletben [24].VeseURAT1 urát transzporterek a luminalis membránon és GLUT9/ az apikális membránonveseproximális tubulusok alkotják az urát reabszorpció elsődleges útvonalát avese[25,26]. A proximális tubulus bazolaterális membránjában található OAT1 és az apikális membránon elhelyezkedő ABCG2 elsősorban a vérből a hámsejtekbe történő urát szekrécióért felelős [27•]. Ezen urát transzporterek szabályozását a hiperurikémia fő terápiás célpontjának tekintik. Ebben a vizsgálatban az EM hatékonyan csökkentvese-URAT1 szintek PO-injektált hiperurémiás patkányokban, bár a GLUT9 fehérje expressziója nem változott. Ezenkívül az OAT1 és az ABCG2 fehérje expressziója felfelé szabályozott volt aveseEM kezelés után, ezáltal uricosuricus hatást fejt ki. Ez a vizsgálat megerősítette az EM gátló hatását az URAT1 általi urátfelvételre az URAT1-túlexpresszáló oocitákban, és hogy ez a hatás hatékony volt az URATl által elősegített urátfelvétel visszafordításában. Összességében az urát reabszorpció 90 százaléka keresztül történikvese-URAT1 [28]. Ezek ellenőrzéseveseurát transzporterek az EM kezeléssel hozzájárulhatnak avese-húgysav-kiválasztás hiperurikémiás patkányokban. A kreatinin és a karbamid-nitrogén az abnormális biomarkereivesefunkciót, jelezve a képességét avesefehérje metabolitok kiválasztására [24]. Az eredmények azt mutatták, hogy a PO növeli a szérum húgysav és a BUN koncentrációjátvese-diszfunkció. A 200 mg/kg EM azonban ezt a növekedést javulással megfordítottaveseműködés. Az XO enzim katalizálja a hipoxantin vagy xantin húgysavvá történő oxidációját [28]. Az XO-gátlók, mint például az allopurinol, csökkentik a szérum húgysavkoncentrációját és a reaktív oxigénfajták túltermelését, amely elsősorban az XO-túlműködéshez kapcsolódik, ami gyakran gyulladásos sejtkárosodást okoz a vaszkuláris endotéliumban, hozzájárulva a metabolikus szindróma és a kardiovaszkuláris rendellenességek kialakulásához [29]. ]. Ezért az XO túlaktiváció gátlása terápiás cél lehet a húgysavfelesleg káros hatásainak szabályozására. Vizsgálatunk azonban azt mutatta, hogy az EM nem fordította meg a szérum és a máj XO aktivitását PO által kiváltott hiperurikémiában szenvedő patkányokban.
A hiperurikémia kockázati elem lehetvesediszfunkció [23]. A jelen tanulmánybanvesea diszfunkciót a megnövekedett szérum BUN és a gyulladásos citokin IL-1p szint ésvese-gyulladás hiperurikémiás patkányokban. Ezekvese-a diszfunkciókat az EM-kezelés enyhítette, ami a vesegyulladás javulására utal. A benzbromaron gyógyszer azonban megemelte a szérum IL-1p-szintjét hiperurikémiás patkányokban, és vesekárosodásról számoltak be, mint az uricosuricum gyógyszerek, köztük a benzbromaron és a probenecid elsődleges mellékhatásaként [30]. Az EM természetesen előforduló glükózamint, kondroitin-szulfátot, hialuronsavat, kollagént, peptideket és más kéntartalmú aminosavakat tartalmaz [8]. Korábbi tanulmányok arról számoltak be, hogy a glükózamin és a kondroitin gyulladáscsökkentő és osteoarthritis-ellenes hatást mutattak [31,32]. A hialuronsav gyulladáscsökkentő és antihiperurikémiás hatást mutatott a mononátrium-urát kristály által kiváltott állatmodellekben akut köszvényes ízületi gyulladás és hiperurikémia esetén [33]. E vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy ezek az összetevők potenciálisan hasznosak a hyperurikémia megelőzésében és kezelésében. Vizsgálatunk azonban nem mutatta ki, hogy az EM mely komponensei fokozták a húgysav kiválasztását. Az EM-ből származó bioaktív összetevők hatásait tovább kell vizsgálni. Ebben a vizsgálatban kimutattuk, hogy a PO által kiváltott hyperuricemia illvesegyulladásEM kezelés gátolta. Ezért az EM ígéretes antihiperurikémiás szer lehet. Tegyük fel, hogy az EM hatékony dózisa patkányokban 100 mg/kg (maximális dózis; 200 mg/kg). A testfelület alapján az EM humán ekvivalens dózisa 16,2 mg/kg (972 mg/nap felnőtteknél). Ezekből az in vivo vizsgálatokból az EM javasolt napi adagja enyhe állapotok esetén 486 mg vagy 972 mg naponta, és a maximális dózis napi 1944 mg súlyos állapotok esetén. Az adag azonban a kezelés időtartamától és életkorától függően eltérő lehet. Ezen eredmények alapján a közeljövőben az EM humán klinikai vizsgálata folytatódik.
