A megemelkedett neutrofil zselatinhoz kapcsolódó lipocalin a covid-19-ben szenvedő betegek vesekárosodásának súlyosságával és rossz prognózisával jár - I. rész

Kapcsolattartó: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Katherine Xu1 és mtsai

Bevezetés:A vesefunkció elvesztése aCOVID-19fertőzés, de szérum kreatinin (SCr) nem érzékeny vagy specifikus jelölőjeveseSérülés. Teszteltük, hogy a molekuláris biomarkerek a kórházi felvételkor mért csőkárosodás akutveseSérülés(AKI) azokban, akikCOVID-19Fertőzés.

Módszerek:Ez egy prospektív kohorsz-megfigyelési vizsgálat, amely 444 egymást követő betegből áll, akiknél A SARS-CoV-2 beiratkozott a Columbia Egyetem sürgősségi osztályára (ED) a járvány csúcsán New Yorkban (2020. március–2020. április). A vizeletet és a vért egyidejűleg gyűjtötték a kórházi felvételkor (medián idő: 0. nap, interkvartilis tartomány: 0–2 nap), a vizelet biomarkereket pedig enzimhez kötött immunoszorbens vizsgálattal (ELISA) és egy új nívópasszal elemezték. Vesebiopsziákat vizsgáltak biomarkerre RNS és a kórszövettani akut tubuláris sérülés (ATI) pontszámai.

Eredmények:A vizelet vizelet neutrofilzselatázzal összefüggő lipocalin (uNGAL) szintjét összefüggésbe hozták AKI diagnózis (267 +- 301 vs. 96+-139 ng/ml, P< 0.0001)="" and="" staging;="" ungal="" levels="">150 ng/ml-nek 80%-a volt specificitás és 75% -os érzékenység az AKI diagnosztizálására 2-től 3-ig. Felvételi uNGAL szint kvantitatívan hosszan tartó AKI-val, dialízissel, sokkokkal, hosszan tartó kórházi ápolással és kórházon belüli halállal jár, még amikor a felvételi SCr szint nem emelkedett. A dialízis kockázata közel 4-szeresére nőtt az uNGAL SD-jénként a kiindulási SCr-től, a társbetegségektől és a proteinuria-tól függetlenül (esélyarány [OR] [95% CI]: 3,59 [1,83–7,45], P< 0.001).="" in="" the="" kidneys="" of="" those="" with="">COVID-19, az NGAL mRNS-expressziója a következővel párhuzamosan kiszélesedik: súlyos kórszövettani sérülés (ATI). Ezzel szemben az alacsony uNGAL-szint a felvételkor kizárta a 2–3. szakaszt, aki (negatív prediktív érték: 0,95, 95% CI: 0,92–0,97) és a dialízis szükségessége (negatív prediktív érték: 0,98, 95% CI: 0,96–0,99). Bár a proteinuria és a vizelet (u)KIM-1 részt vett a tubuláris sérülésben, sem az AKI szakaszok diagnosztikája sem volt diagnosztikus.

Következtetés:Azoknál a betegeknél, akiknélCOVID-19, az uNGAL szint kvantitatívan összefüggésbe hozható a kórszövettanival sérülés (ATI), a vesefunkció (AKI) elvesztése és a beteg kimenetelének súlyossága.

CISTANCHE ANTI-COVID-19 ÉS VÉDI A VESEFUNKCIÓT

BEVEZETÉS

A vesefunkció akut elvesztése, emelkedéssel mérve az SCr-ben gyakori az akut SARSCoV-2 fertőzés beállításában.1–4 A megemelkedett SCr szint jelen van a a betegek egyharmada került kórházbaCOVID-19.5–11 Az SCr mérése azonban nem tükrözi a teljes teherCOVID-19 veseSérülés. Például Az SCr csak utólag képes kimutatni a veseműködési zavarokat, miután elegendő idő telt el az SCr diagnosztikai küszöbértékre. Ezenkívül előfordulhat, hogy az SCr-ben nem fordulnak elő klinikailag jelentős változások a részösszegben vagy a fokális vesekárosodás a kompenzáció következtében a nem sérült nefronok változásai, amelyek enyhíthetik az SCr-szint emelkedése. Még akkor is, ha az SCr-szint emelkedése nyilvánvaló, a cső alakú sérülés bizonyítékai hiányozhatnak, például térfogatcsökkenés jelenlétében,12,13 gyakori megjelenítés azoknál a betegeknél, akiknélCOVID-19–kapcsolódó hasmenés.10,14 Az SCr-szint emelkedése a rabdomiolízis előfordulása is megzavarhatja aCOVID-19amely fokozza a kreatininszintet termelés.15,16 A teherveseSérülésa túlfeszültségek során A Covid19 megterhelte a kórházi erőforrásokat, többek között Sürgősségi orvoslás, kritikus ellátás és nefrológia, sürgősen szükségessé teszi a kockázatnak kitett személyek azonosításában mutatkozó késedelmek korlátozásátveseSérülés, az vesefunkció és vesepótló terápia. Mint egy eredmény, osztályozási döntések a betegek és az erőforrások számára az allokációk számára előnyös lenne a gyors felhasználás reszponzív, érzékeny és specifikus noninvazív marker bólveseSérülésés az ezzel járó eredmények közösek aCOVID-19Fertőzés.

Korábbi kutatások ember- és egérmodelleken kimutatta, hogy 2 molekuláris marker a cső sérülésére, Az uNGAL és az uKIM-1 különböző szegmenseiveseés lehetővé teszi az érzékeny észlelést és a térfogatérzékenység valós idejű megkülönböztetését és térfogatérzékeny belső csöves belső formák kár.12,17–19 Ezek hasznosságának korábbi bizonyítékai markerek az AKI kimutatásában a Az ED12,20–22 felveti azt a kérdést, hogy vajon lehetnek-e értéke azoknál a betegeknél, akiknélCOVID-19. Az új a diagnosztikai vizsgálatok különösen nyilvánvalóak, mert sokan azoknál a betegeknél, akiknélCOVID-19a kórházban mutatkoznak be első alkalommal, és nincsenek korábbi feljegyzéseik Scr.

Itt tanulmányozzuk az uNGAL teljesítményét és uKIM-1 akut betegek nagy csoportjábanCOVID-19előadás a Columbia Egyetem ED-nek a A járvány csúcsa New Yorkban (2020. március – 2020. április). Teszteltük az uNGAL és a uKIM-1 a későbbi diagnózissal, időtartammal és az AKI súlyossága az akutVeseSérülésHálózati (AKIN) kritériumok és a kórházon belüli halál, dialízis, sokk, légzési elégtelenség és a kórházi tartózkodás hossza. Mind a standard ELISA módszereket, mind a egy újszerű nívópálca, amely képes mérni az uNGAL-t a Éjjeli. Végül megvizsgáltuk, hogy az NGAL és a KIM-1 Az RNS korrelál az ATI kórszövettani mutatóivalvesebiopszia leletek azoktól a betegektől, akikCOVID-19.

MÓDSZEREK

Emberi alanyok

A ColumbiaCOVID-19A Biobank egymást követő felvételeket kapottCOVID-19esetek (az orrnyálkahártya pozitív eredménye SARS-CoV-2 polimeráz láncreakció teszt), függetlenül attól, hogy életkor, nem vagy faji/etnikai hovatartozású, aki a Columbia Egyetem Irving Orvosi Központ. A Biobank a maradék vér- és vizeletmintákat tárolta klinikai vizsgálat minden olyan betegtől, akinekCOVID-19beleértve a kezdeti vizeletmintát és a kapott szérumot kórházi felvételkor, amelyet biomarkerhez használtak Mérések. Elemzésünkhöz 444-et azonosítottunk egymást követő betegek, akiket a 2020. március 24., 2020. április 27. és 2020. április 27.COVID-19. Ez 371 olyan beteget tartalmazott, akiknek nemcsak vizeletük volt minta a prezentációból, de az alábbiakra vonatkozó információk is: kiindulási SCr és teljes SCr mérések a a stádium és az időtartam meghatározásához szükséges kórház az AKI-tól (1. ábra). Ezenkívül 4 végstádiumú beteg a vesebetegséget kizárták.Vesebiopsziákat csatlakozott a Columbia Irving Egyetem Orvosi Központ Vesepatológia Laboratórium, köztük 13 vesebiopszia a COVID-19 esetekből23 és 4 nem-COVID-19a mintákat a következők elemezték: in situ hibridizáció NGAL és KIM-1 RNS-hez. A COVID (+) kohorszot a COVID-hoz hasonlították össze (-) kohorsz, amelyet azonos módon toboroztak a Columbia Egyetem Irving Orvosi Központja ED 2017 júniusa és 2019 januárja között.20 Hasonló a COVID (+) kohorsz, 426 egymást követő COVID (-) beteg beiratkoztak a bemutatóra, kortól, nemtől vagy fajtól/etnikai hovatartozástól függetlenül. Ez 318 beteget tartalmazott, akiknek teljes SCr-mérésük volt a kórházban, hogy meghatározza az AKI stádiumát és időtartamát. Vizeletminták az ED-be való megérkezéstől számított 24 órán belül gyűjtötték össze. A végstádiumú vesebetegségben szenvedő betegeket kizárták.

1. ábra. Vizeletminta-gyűjtés: A maradék vizeletminták 444 egymást követő COVID-19-ben szenvedő betegtől gyűjtötte be a Columbia Egyetem COVID-19 vizelet Biobank március 24. között, 2020 és 2020. április 27. Összesen 4 végstádiumú betegvesebetegségdialízis esetén kizárták a végső kohorszból (N 1/4 440). Azokat a betegeket, akiknek teljes nyilvántartása volt az SCr mérésekről, színpadra állították az AKIN-kritériumok szerint (n 1/4 371). Összesen 69 beteg hiányzik a megfelelőbőlvesefunkcióaz adatokat "ismeretlen" címkével látták el. AKIN, akutVeseSérülésHálózat; SCr, szérum kreatinin.

Az elsődleges eredmények meghatározása Az elsődleges eredmények közé tartozott az SCr-alapú AKI, AKIN szakaszban, valamint a megemelkedett SCr-szint időtartama következetesen mind a COVID (+), mind a COVID (-) kohorszokban. Mindkét esetben meghatározták az alapérték SCr szintet szabványosított algoritmus használatával, mint korábban írta le Stevens et al., 20 a következő sorrendben:

A medián SCr 365-31 nappal a vizeletgyűjtés előtt. Ha nem áll rendelkezésre, akkor:

Minimális SCr a vizeletgyűjtést megelőző 30 naptól a a gyűjtés napja. Ha nem áll rendelkezésre, akkor:

Minimális SCr a vizeletgyűjtéstől 7 napig a kórház

A betegeket "Ismeretlenek" kategóriába sorolták, ha egyik sem a fent említett kritériumok teljesültek. Az AKIN23 szakaszait a következőképpen osztályoztuk:

AKIN 1. szakasz: $0.3 mg / dl SCr növekedés 48- on belül óraablak VAGY 1,5-2-szeresére nőtt az SCr a kiindulási értékhez képest.

AKIN 2. szakasz: >2-3-szoros növekedés az SCr-ben összehasonlítva alapvonallal.

AKIN 3. szakasz: $0.5 mg / dl növekedés az SCr-ben egy 48- on belül óraablak, amikor az SCr $4.0 mg/dl VAGY >3-szoros növekedést jelent az SCr-ben az alapértékhez képest.

Az SCr csúcsszint mérése 48 órán belül azt követően a vizeletgyűjtést az AKIN szakasz diagnosztizálására használták. Ban válasszon eseteket, az 1. nap AKIN pontszámát imputálták, amikor az előző és az azt követő AKIN pontszámok a következők voltak: azonos.

A további kategorizálás a SCr magasság az alapvonal felett:

Nincs AKI (AKIN 0) – nem felel meg az AKIN kritériumainak 2 nap a bemutatás után (mindkettőhöz SCr-értékekkel kell rendelkeznie nap).

Átmeneti AKI – megfelelt az AKIN kritériumainak az 0. vagy 1. napon bemutatás, de az AKIN detektálás alatt normalizálva küszöbértékek az első észlelést követő 2 napon belül (összesen AKI időtartam<72>

Tartós AKI (sAKI) – 2-en belül megfelelt az AKIN kritériumainak a bemutatás napja, de az AKIN alatt normalizálódott kimutatási küszöbértékek csak az elsőtől számított 2 nap elteltével felismerés (teljes AKI időtartam >72 óra).

Ismeretlen – hiányzó alapvonal SCr vagy nem elegendő SCr mérések az SCr kinetika meghatározására, vagy hiányzik mérések a 0. vagy 1. napon, amelyek nem lehetnek a diszkrét AKIN-pontszámok miatt imputált (1. ábra).

A megemelkedett SCr-szint további kategorizálása alapult az SCr alapszint feletti emelkedésének időtartamára, beleértve az átmeneti AKI gyorsan normalizáló SCr szintet (<72 hours)="" and="" sustained="" (saki)="" delayed="" normalization="" of="" scr="" level="" (="">72 óra).

A vizeletkibocsátást nem használták az AKI definíciójához a Foley katéterek változó használata miatt, és a vizeletkibocsátás hiányos rögzítése az ED-ben.

A másodlagos eredmények meghatározása

A másodlagos eredmények közé tartozott a dialízis, a sokk, a légzési elégtelenség, a kórházi tartózkodás hossza és a kórházban halál. A sokkot a vazopresszorok szükségessége határozta meg, és a légzési elégtelenséget a szükséglet határozta meg invazív vagy nem invazív pozitív nyomás esetén Szellőzés. A krónikus színpadra állításavese betegségVolt a krónikusVese BetegségEpidemiológiai Együttműködés becsült glomeruláris szűrés sebességképlet és a kiindulási kreatinin a leírtak szerint korábban.24

Laboratóriumi elemzés

Minden vizeletmérés elvakított a klinikai adatokra. Az NGAL-t és az uKIM-1-et ELISA-val (KIM-1: Enzo, ADI-900-226-0001; NGAL: BioPorto, KIT036). Proteinuriát mutattak ki a Chemstrip 10 SG (Roche) alkalmazásával Diagnosztika). A vizeletet centrifugálták (12 000 fordulat / perc; 10 perc), és NGAL gRAD dipstickekre (BioPorto) alkalmazva, és a színfejlődést összehasonlították a színskála, amely 2-vel jelöli az NGAL (ng/ml) koncentrációját független olvasók. Elemeztük a vizeletsejt pelleteket LRP2-hez és UMOD-hoz immunoblottal SDS-PAGE-vel (Bio-Rad Laboratories), nyúl anti-LRP2 (1:1000, Abcam, ab76969), juhellenes UMOD (1:2000, Meridián) Life Science, K90071C) és a HRP-hez konjugált poliklonális másodlagos antitestek (1:10 000, Jackson ImmunoResearch).

Az ATI szövettani azonosítása

Az ATI szövettani jellemzői közé tartozott az ecset elvesztése határ, hám-egyszerűsítés, intracitoplazmatikus vakuolizáció, nyílt nekrózis, apoptózis és sejt vedlés. Az ATI mértékének mérésére kikvantitatív skálát használtunk, amely a következő volt: nincs (<5% of="" tubules="" involved),="" mild=""><25%), moderate="" (25%–50%),="" and="" severe="" (="">50%).

Patológiai elemzés

In situ hibridizáció formalinnal rögzített, paraffinba ágyazott emberenvesea kromogént használta RNAscope 2.5 HD duplex reagenskészlet (fejlett cellacella) Diagnosztika, 322430). NGAL:Hs-LCN2 szondák (559441) és Hs-LCN2-C2 (559441-C2 1:600-nál); KIM-1: Hs-HAVCR1-O1 (538081 és 538081-C2 1:100-nál); és aquaporin 2: Hs-AQP2 (434861) és Hs-LRP2 (532391).

Megerősítő vese ischaemia-reperfúzió Kárelemzés

Hím és nőstény vadon élő C57Bl/6 egerek, 8 és 10 év közöttiek heteket (Jackson Labs) izofluránnal anesztetizáltak és melegítőasztalra helyezve (rektális hőmérséklet: 37°C). A mikrovaszkuláris bilincsek (Fine Science Tools) voltak a bal vese pedikulusra alkalmazva 10, 20, 30 vagy 40 jegyzőkönyv. Avese24 óra alatt betakarították. In situ hibridizáció formalinnal rögzített, paraffinbe ágyazottveseaz NGAL szondát használta: Mm-Lcn2-C2 (313971-C2) és a KIM–1 szonda: Mm-Havcr1 (472551).

Statisztikai elemzés

A folytonos változók normalitását a következőkkel teszteltük: Shapiro–Wilk-teszt. Általában folyamatosan elosztva a változókat egy 2-mintás t-teszttel hasonlítottuk össze, és összegezve, mint átlagos SD. Nem normálisan elosztott a folytonos változókat mediánként foglaltuk össze, és tartományokat, és összehasonlították a nem paraméteres Mann- Whitney U teszt. A hatás értelmezhetőségének javítása többváltozós regressziós modellekből származó becslések, amelyek mindegyike nem normálisan elosztott előrejelző (beleértve az uNGAL-t és az uKIM-1 szintek) a statisztikai vizsgálatok előtt log-transzformálták és standardnormálissá tették. Az effektméretek a biomarkereket a normalizált prediktorok SD-egységére vonatkoztatva fejeztük ki. Kategorikus változókat hasonlítottunk össze a c2 vagy Fisher pontos vizsgálattal. A bináris eredmények teszteléséhez logisztikai regressziót használtunk. Sorszámos eredmények, mint például az AKIN szakasz, sorszámos logisztikával tesztelték regresszió. Sorszám-előrejelzők, például vizelet-dipstick kategóriát vagy proteinuria fokozatot vizsgáltak a lineáris hatások feltételezése lejtési teszttel egy általánosított lineáris modell kerete, amely a következőre van szabva: az érdeklődés eredménye (pl. logisztikai vagy sorszám-logisztika bináris vagy sorszámos kimenetelek esetén). Használtuk Cox arányos veszélymodell az eseményhez szükséges időhöz a halálozási eredmények elemzése. Kihasználtuk a versengő kockázatokat regressziós modell a kórház hosszának elemzésére a tartózkodásról, ahol a halál mint versengő kockázat.25,26 Az arányos veszélyek feltételezését teszteléssel ellenőrizték skálázott Schoenfeld-maradványok minden egyes előrejelzőhöz megfigyelési idő. A vizelet biomarkerek társulásai a klinikai eredményeket a következőképpen igazították ki: kovariánsok: kor, nem, faj, etnikum (minimálisan kiigazítva) modell), kiindulási SCr, és már meglévő elhízás, cukorbetegség, magas vérnyomás, transzplantáció (bármely szerv), rák, szív- és érrendszeri betegségek (koszorúér-betegség, szívelégtelenség, agyi infarktus), tüdőbetegség (asztma, krónikus obstruktív tüdőbetegség, intersticiális tüdőbetegség, primer pulmonális hipertónia, t idiopátiás tüdőfibrózis) (teljesen beállított 1. modell), és proteinuria (teljesen beállított 2. modell). Az elemzésben az elsődleges eredmények közül 2-oldalas P-t vettünk figyelembe< 0.05="" as="" statistically="" significant.="" in="" the="" analysis="" of="" secondary="" outcomes,="" we="" considered="" p="">< 0.01="" as="" statistically="" significant="" (bonferroni-corrected="" for="" 5="" independent="" outcomes="" tested).="" we="" additionally="" stratified="" patients="" by="" both="" ungal="" ($150="" ng/ml)="" and="" scr-based="" aki="" into="" the="" following="" 4="" groups:="" ngal-ak-i,="" ngal+aki,="" ngal-aki+,="" and="" ngal+akiþ.="" we="" used="" the="" c2="" test="" for="" pairwise="" comparisons="" of="" proportions="" with="" a="" clinical="" outcome="" between="" the="" groups="" and="" the="" cochran="" armitage="" test="" for="" trend="" in="" proportions="" between="" low-risk="" (ngal-aki-),="" intermediate-risk="" (ngal+aki-="" or="" ngal-aki+),="" and="" high-risk="" (ngal+aki+)="" groups.="" furthermore,="" each="" group="" was="" tested="" as="" a="" categorical="" predictor="" of="" outcome="" using="" logistic="" regression="" with="" the="" low-risk="" (ngal-ak-)="" group="" as="" the="" reference.="" all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" r="" (cran="" version="" 4.0.4),="" including="" r="" add-on="" packages="" mass="" (version="" 7.3-53.1),="" odds="" ratio="" (version="" 2.0.1),="" survival="" (version="" 3.2-7),="" cmprsk="" (version="" 2.2-10),="" and="" proc="" (version="" 1.17.="" 0.1).="" our="" study="" was="" reported="" according="" to="" strengthening="" the="" reporting="" of="" observational="" studies="" in="" epidemiology="" guidelines="" for="" cohort="">

A tanulmányok felügyelete

A Columbia Egyetem BiobankjaCOVID-19Tanulmányok a Columbia University Medical jóváhagyta Központ Intézményi Felülvizsgálati Testület (AAAS7370 és AAAS7948). A betegek egy részhalmaza a közegészségügyi válság intézményi felülvizsgálati testületének lemondása kifejezetten a következőre vonatkozó hozzájárulásrólCOVID-19betegeknél végzett vizsgálatok elhunytak voltak, nem tudtak beleegyezni, vagy elvesztették érintkezés. Az egereket az Intézményi Állatgondozási és -felhasználási Bizottság (AC-AAAY7464) szerint használták, és tartsa be a Nemzeti Egészségügyi Intézetek útmutatóját a laboratóriumi állatok gondozása és felhasználása.

Kattintson ide a cikk II. részének letöltéséhez.

Feladó: "Emelkedett neutrofilzselinázzal összefüggő lipocalin a vesekárosodás súlyosságához és a COVID-19-ben szenvedő betegek rossz prognózisához kapcsolódik"--byKatherine Xu1 és mtsai

---Kidney International Reports (2021) 6, 2979–2992 KLINIKAI KUTATÁS