A vizes enzimes extrakcióból származó tökmagolaj (Cucurbita Moschata) zsírsav-összetételének, antioxidánsainak és farmakológiai hatásainak értékelése 1. rész

May 08, 2023

Absztrakt:A tökmagolaj egy melléktermék, amely tápanyagokban és bioaktív összetevőkben bővelkedik, és számos egészségügyi előnnyel jár. A tanulmány célja a Cucurbita moschata Duch-ból kivont tökmagolajok kémiai összetételének, antioxidáns és farmakológiai aktivitásának összehasonlítása volt. Ex Poir. (PSO1) és Cucurbita moschata (japán sütőtök) (PSO2) vizes enzimes extrakcióval. Az enzimatikus extrakció során pektinázból, cellulázból és proteázból (1:1:1) álló enzimkeveréket használtak. Az olajok zsírsavösszetételét zsírsav-metil-észter/gázkromatográfiás tömegspektrometriával határoztuk meg. Az antioxidáns aktivitást stabil szabad gyökös difenil-pikrilhidrazil, 2-es gyökkation, 20 -azinobisz-(3- etilbenzotiazolin-6-szulfonát, vas(III) redukáló/antioxidáns hatás) és vas(III)-tiocianát vizsgálattal mértük. A bőr öregedési és fehéredési folyamataiban szerepet játszó enzimeket vizsgálták. A linolsav minden tökmagolaj fő összetevője volt, emellett jelentős mennyiségű olajsavat, palmitinsavat és sztearinsavat is kimutattak. A PSO2 rendelkezik a legmagasabb antioxidáns hatással A PSO1 és a kereskedelmi forgalomban kapható tökmagolajok (COM1 és COM2). Mind a PSO1, mind a PSO2 nagyobb gátló hatást fejtett ki a hialuronidázra, kollagenázra és tirozinázra, mint a reklámokban, ezért vizes enzimes extrakcióval magasabb antioxidáns, öregedésgátló és öregedésgátló hatású tökmagolajokat kaphat. Ez előnyös a további farmakológiai vizsgálatokhoz, és funkcionális táplálékként használható a bőr számára.

A vonatkozó tanulmányok szerintcistancheegy közönséges gyógynövény, amelyet "az életet meghosszabbító csodanövényként" ismernek. Fő összetevője azcisztanozid, melynek különféle hatásai vannak, mint plantioxidáns, gyulladáscsökkentő, ésaz immunrendszer működésének elősegítése. A mechanizmus a cistanche ésbőr fehérítésa cistanche antioxidáns hatásában rejlikglikozidok. Az emberi bőrben a melanint a tirozin oxidációja katalizáljatirozináz, az oxidációs reakcióhoz pedig oxigén részvétele szükséges, így a szervezetben lévő oxigénmentes gyökök a melanintermelést befolyásoló fontos tényezővé válnak. A Cistanche cisztanozidot tartalmaz, amely antioxidáns, és csökkentheti a szabad gyökök képződését a szervezetben, ígygátolja a melanin termelését.

cistanche para que serve

Kattintson a Cistanche Tubulosa Supplement elemre

További információért:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Kulcsszavak:Cucurbita moschata; japán sütőtök; tökmag olaj; vizes enzimes extrakció; zsírsavak; antioxidáns; öregedésgátló

1. Bemutatkozás

A sütőtök a Cucurbita nemzetségbe és a Cucurbitaceae családjába tartozik, egy gyakori és híres növény, amelyet Észak-Mexikóban termesztettek, és elterjedt Európába, Nyugat-Amerikába és Ázsiába [1]. A sütőtököt funkcionális élelmiszernek tekintik, amely bőséges tápanyagot, például fehérjét, szénhidrátot, lipidet, rostot stb., valamint olyan fitokémiai vegyületeket tartalmaz, mint a tokoferolok, karotinoidok és -szitoszterin [2]. A tök különböző részeiről származó fitonutrienseknek farmakológiai hatásuk van [2]. A sütőtök héja kivonat jótékony égési sebeket mutatott állatmodellekben [3]. A sütőtök pép antioxidáns, gyulladásgátló és angiogenezis-ellenes aktivitást mutatott [2], valamint egerekben [4]. Ezenkívül a tökmag jó természetes forrása az esszenciális zsírsavaknak és fitoszteroloknak, amelyek csökkentik a szív- és érrendszeri halálozás kockázatát [5,6]. A tökmagolaj a tökmag feldolgozásának mellékterméke, amely gazdag különféle zsírsavakban és bioaktív vegyületekben, mint például -karotinok, -tokoferol, B-vitamin, lutein, fitoszterolok és egyéb ásványi anyagok [7,8]. Az olaj antioxidáns, gyulladásgátló, antibakteriális és sebgyógyító hatást fejt ki [1,9]. Ezenkívül számos egészségügyi előnnyel rendelkezik olyan betegségek ellen, mint például a magas vérnyomás, a cukorbetegség és a rák [8,10].

Különféle módszereket fejlesztettek ki a magolaj extrahálására, beleértve a mechanikai módszereket, például a hidegsajtolást [11] és a nagynyomású extrakciót [12]. A magolaj oldószeres extrakcióját szerves oldószerekkel, például hexánnal, etil-acetáttal, acetonnal és metanollal is dokumentálták [13,14]. Az enzimekkel segített extrakció alternatív módszer a növényi olajipar számára, mert környezetbarát és biztonságos technológia. A vizes enzimes extrakció fő mechanizmusa a növényi anyagok sejtfalának hidrolizálása és feltörése, ami nagyobb permeabilitást és bioaktív komponensek, köztük az olajos fázis felszabadulását eredményezi [15]. Az extrakció során alkalmazott különféle enzimkeverékek pektinázokból, cellulázokból, hemicellulázokból, arabinózból, -glukanázból és xilanázból állnak [16,17]. Az enzimkeverék optimalizált körülményei, például hőmérséklet, pH, reakcióidő, részecskeméret és enzimkoncentráció szintén fokozták az enzimaktivitást [16]. Napjainkban ezt a módszert széles körben alkalmazzák számos gyümölcsből és növényi magból olaj kinyerésére [18,19]. Néhány korábbi tanulmány kimutatta, hogy a tökmagolaj optimalizált állapota magas hozam és hatékony farmakológiai hatás elérése érdekében [20,21].

Jelenleg a tökmagolajat desszertekben vagy salátaöntetekben fogyasztják az emberek, emellett a kozmetikumok kedvelt alapanyaga. A bőr öregedése egy összetett biológiai folyamat, amelyet az oxidatív stressz, a DNS-károsodás és a glikációs végtermék előrehaladott felhalmozódása okozta ráncosodás, rugalmasságvesztés, nedvességvesztés és érdes textúra jellemez [22]. A bőr fontos alkotóelemei, a hialuronsav, a kollagén és az elasztin a hialuronidáz, a kollagén és az elasztáz enzimek hatására lebonthatók, ami a bőr öregedéséhez vezet. Számos növényi olajat, például olívaolajat, napraforgómagolajat, szőlőmagolajat és jojobaolajat használtak a bőr kozmetikai tulajdonságaira, hogy megtartsák a nedvességet, javítsák a bőr védőfunkcióját és megakadályozzák a bőr öregedését [23]. Ezenkívül a bőr pigmentációja változó és észrevehető fenotípus az emberben, amely melanogenezissel jár, és amelyet a tirozináz enzim szabályoz [24]. Jelenleg különféle növényi kivonatokat teszteltek kozmetikai és gyógyszerészeti termékekben, hogy csökkentsék a melanintermelést, és fehérítőszerként működnek [25,26].

cistanche tubulosa supplement

A közelmúltban C. moschata Duch. Az Ex Poir egy olyan tökfajta, amelyet gyakran termesztenek és népszerűek Thaiföldön, de kevés tanulmány foglalkozik funkcionális értékeivel és farmakológiai tulajdonságaival. Ezenkívül a vizes enzimes extrakció érdekes módszer az olaj kinyerésére a tökmagból a magas hozam és hatékonyság érdekében. Ezért ez a tanulmány a C. moschata Duch-ból származó tökmagolaj fő összetevőinek, antioxidánsainak és farmakológiai hatásainak meghatározására összpontosított. Ex Poir. (Thai fajta) és C. moschata (japán sütőtök) vizes enzimes extrakciós módszerrel.

2. Anyagok és módszerek

2.1. Növényi anyagok

A C. moschata Duch friss gyümölcsei. Az Ex Poir és a C. moschata (japán sütőtök) 2020 decemberében a thaiföldi Chiang Mai helyi piacáról vásárolták. A magokat összegyűjtöttük, és az összes rostos szálat eltávolították. A maghéj eltávolítása után a hántolt tökmagokat mostuk és szobahőmérsékleten szárítottuk. A magokat lezárt műanyag zacskóban tartottuk a további kísérletezésig. Ezenkívül két kereskedelmi forgalomban lévő tökmagolaj mintát (COM1 és COM2) vásároltak egy Chiang Mai-i szupermarketben, Thaiföldön. Minden kísérletet a kereskedelmi forgalomban kapható olajok fogyasztásra való alkalmasságának időpontján belül végeztünk.

2.2. Vegyszerek és reagensek 

Kollagenáz Clostridium histolyticumból (ChC-EC.3.4.23.3), elasztáz sertés hasnyálmirigyből (PE-EC 3.4.21.36), N-szukcinil-Ala-Ala-p-nitroanilid, vas-szulfát (FeSO4), hialuronsav nátriumsója Streptococcus equi, szarvasmarha tesztekből származó hialuronidáz, Aspergillus niger pektináz (EC 3.2.1.15, 5 egység/mg fehérje vagy annál nagyobb, optimális pH=4.{{20}}, optimális hőmérséklet=61 ◦C), Aspergillus nigerből származó celluláz (EC 3.2.1.4, nagyobb vagy egyenlő, mint 0,3 egység/mg szilárd anyag, optimális pH=6,5, optimális hőmérséklet {{ 30}}–55 ◦C), Aspergillus Saito proteáz (EC 3.4.21.112, nagyobb vagy egyenlő, mint 0,6 egység/mg szilárd anyag, optimális pH=5,1, optimális hőmérséklet=57,2 ◦) C), 2,20 -azinobisz 3-etilbenzotiazolin-6-szulfonát (ABTS), 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilhidrát (DPPH), 2,4,6 tripiridil-s-triazin (TPTZ), 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilkromán-2-karbonsav (Trolox), szarvasmarha szérumalbumin, kojsav, L -tirozint, L-DOPA-t, linolsavat, egybázisú nátrium-foszfátot (NaH2PO4·2H2O), kétbázisú nátrium-foszfátot és gombából származó tirozinázt a Sigma-Aldrrich-tól (St. Louis, MO, USA). Ezenkívül 37 százalékos sósavat, 95 százalékos etanolt, desztillált (DI) vizet, dimetil-szulfoxidot (DMSO) és metanolt vásároltunk az RCI Labscan Co., Ltd.-től (Bangkok, Thaiföld). Az ammónium-tiocianátot (NH4SCN) és a vas(II)-kloridot (FeCl2) a Loba Chemie Pvt.-től vásároltuk. Ltd. (Mumbai, India). A trisz(hidroxi-metil)-amino-metánt a Mercktől (Darmstadt, Németország) vásároltuk.

2.3. Vizes enzimes extrakció

Tökmagolajok mindkét C. moschata Duch. Az Ex Poir és a C. moschata (japán sütőtök) vizes enzimes extrakciós módszerrel extraháltuk Kanopka és munkatársai korábbi tanulmányának enzimatikus hidrolízis paramétereit. (2016), beleértve az enzimkoncentrációt, az enzim/szubsztrát arányt, a reakcióhőmérsékletet, a pH-t és a reakcióidőt [21]. Három különböző típusú enzimet, köztük a pektinázt, a cellulázt és a proteázt kombinálták 1:1:1 tömegarányban, hogy koncentrált enzimkoktélt hozzanak létre. Ezt követően a kapott koncentrátum-koktélt ionmentesített vízzel hígítottuk, hogy 2 tömegszázalékos vizes enzimes keveréket kapjunk. A héj nélküli tökmagot ezután a kapott vizes enzimes keverékhez adtuk 1:1 tömegarányban. Az elegyet ezután Moulinex DB81 keverővel szobahőmérsékleten finomra őröljük homogenitásig. A kapott szuszpenzió pH-ját ezután 0,1 M sósavval 4,7-re állítottuk be, és 54 °C-on 15 órán át inkubáltuk. Miután a szuszpenziót szobahőmérsékletre hűtöttük, 11 500 x g-vel 10 percig centrifugáltuk. A felülúszó felső rétegét, amely az olajos fázis volt, összegyűjtöttük. Az extrakció során keletkezett krémet nem emulgeálták, hanem mikropipettával szifonálással távolították el. A tökmag maradékát Whatman No.1 szűrőpapíron, vákuumban történő szűréssel távolítottuk el [21]. C. moschata Duch tökmagolaj. Ex Poir (PSO1) és C. moschata (japán sütőtök) (PSO2) jól zárható, fényálló edényekben, szobahőmérsékleten tartottuk a további kísérletezésig.

2.4. A tökmagolaj kémiai összetételének meghatározása zsírsav-metil-észter/gázkromatográfiás-tömegspektrometriás (FAME/GC/MS) módszerrel

A tökmagolaj zsírsavösszetételét zsírsav-metil-észter/gázkromatográfiás-tömegspektrometriás (FAME/GC/MS) módszerrel határoztuk meg. A FAME egyfajta zsírsav-észter, amelyet zsírok metanollal történő savkatalizált átészterezésével állítanak elő. Ebben a vizsgálatban a tökmagolajokat (PSO1, PSO2, COM1 és COM2) 0,5 M metanolos NaOH-oldat hozzáadásával 100 ◦C-on 15 percig elszappanosították. . Lehűlés után az olajmintákat bór-trifluoriddal (BF3) metanolos oldatban 100 ◦C-on 1 percig derivatizáljuk, így FAME termékeket képezünk. Lehűtés és telített NaCl és hexán hozzáadása után a FAME-t hexános fázisra osztjuk, és injekciós üvegekbe gyűjtjük. A FAME kivonatokat GC/MS technikával elemeztük a következő körülmények között: kapilláris oszlop mérete (TR-FAME, mérete 60 m × 0,25 mm, 025-µm részecskeméret), 50 ◦C-os futóhőmérsékletű program. ; tartsa 2 percig 10 ◦C/perc sebességgel 180 ◦C-ig, tartsa 15 percig; 2. rámpa sebessége 4 ◦C/perc, végső hőmérséklet 230 ◦C, tartás 22,50 perc. Héliumot használtunk vivőgázként 1,0 ml/perc áramlási sebességgel. Az olajmintákat splitless módban (1:20 osztási arány és 20 ml/perc osztási arány) 235 ◦C-on automata mintavevővel fecskendeztük be. Egy elektropermet ionizációs (ESI) forrással felszerelt MS-detektor, amely 70 eV-on működött, az ionforrás és az átviteli vezeték hőmérséklete 200 ◦C, illetve 220 ◦C, az m/z tartományban rögzített tömegspektrumokat. 38–600. Az elemzett vegyületek hozzárendelése tömegspektrumukat publikált adatokkal (Nemzeti Szabványügyi és Technológiai Intézet, 2008) hasonlította össze. A százalékos összetételt úgy számítottuk ki, hogy integráltuk a csúcsokat a teljes ionkromatogramokba (TIC). Az összes mérést a Kutatási és Szolgáltató Laboratórium, a Halal Tudományos Központ, a Chulalongkorn Egyetem, Bangkok, Thaiföld végezte a Halal GMP/HACCP és a Halal-QHS/ISO 22000 szerint.

cistanches herba

2.5. Az antioxidáns aktivitás meghatározása

2.5.1. 2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil (DPPH) gyökfogó vizsgálat

A DPPH gyök (DPPH• ) befogó aktivitását Chaiyana és munkatársai által megállapított módszerrel határoztuk meg. (2017) [27]. Röviden: 20 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) és DMSO-ban oldott linolsavat 180 µl 167 µM DPPH etanolos oldattal kevertünk össze egy 96-lyukú lemezen, majd 30 percig inkubáltuk. szobahőmérsékletű sötétben. Pozitív kontrollként aszkorbinsavat (1 mg/ml) használtunk. Az optikai sűrűséget (OD) 520 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük. A DPPH gátlás százalékát az (1) egyenlet segítségével számítottuk ki:

DPPH-gátlás ( százalék )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

ahol az ODA egy DI vizet és DPPH-oldatot tartalmazó keverék OD értéke; B egy DI vizet és DMSO-t tartalmazó keverék ODB-je; C egy olajmintákat és DPPH•oldatot tartalmazó keverék ODC értéke; az ODD pedig egy olajmintákat és DMSO-t tartalmazó keverék OD értéke.

2.5.2. 2,20 -Azino-bisz-3-etilbenztiazolin-6-szulfonsav (ABTS) vizsgálat

Az ABTS kationos gyök (ABTS• plus) befogó aktivitását kolorimetriás módszerrel mértük Chaiyana et al. (2017) és Paradee et al. (2019) [27,28] kis módosítással. Az ABTS• plus-t 2 ml 7 mM ABTS és 3 ml 2,45 mM kálium-perszulfát hozzáadásával állítottuk elő, és 16-24 órán át szobahőmérsékleten, sötétben inkubáltuk. A kapott ABTS• plus-t ezt követően etanollal hígítottuk, hogy 0,7 ± 0,1 OD-t kapjunk 750 nm-en. Röviden: 20 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) és DMSO-ban oldott linolsavat 180 µL ABTS• plusz etanolos oldattal kevertünk össze egy 96-lyukú lemezen, és 5 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. . Az OD-t 750 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Pozitív kontrollként aszkorbinsavat (1 mg/ml) használtunk. A standard görbét úgy állítottuk elő, hogy a 750 nm-en mért abszorbanciát ábrázoltuk a Trolox különböző, 2,5-30 µg/ml-es koncentrációival szemben. Az ABTS• plusz öblítési aktivitást a Trolox standard görbéből (R2=0.9922) számítottuk ki, és Trolox ekvivalens antioxidáns kapacitásban (TEAC) fejeztük ki. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük.

2.5.3. Vascsökkentő antioxidáns teljesítmény (FRAP) vizsgálat

Az egyes minták vas-redukáló antioxidáns erejét (FRAP) FRAP vizsgálattal határozták meg, amint azt Chaiyana és munkatársai egy korábbi tanulmányában leírták. (2017), amelyet kissé módosítottak Saeio et al. (2011) [27,29]. A FRAP reagenst frissen állítottuk elő 300 mM acetát puffer (pH 3,6), 10 mM 2,4,6 tripiridil-s-triazin (TPTZ) 40 mM HCl-ban és 20 mM FeCl3 10:1:1 arányú összekeverésével. Ebben a vizsgálatban 20 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) és linolsavat 180 µL FRAP reagenssel kevertünk össze egy 96-lyukú lemezen, és 5 percig szobahőmérsékleten, sötétben inkubáltuk. Az OD-t 595 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Pozitív kontrollként aszkorbinsavat (1 mg/ml) használtunk. A standard görbét úgy állítottuk elő, hogy az abszorbanciát 595 nm-en ábrázoltuk a vas-szulfát (FeSO4) különböző koncentrációival szemben, amelyek 0,003-0,5 mM között mozognak. A FRAP értéket a FeSO4 standard görbéből (R2=0.9965) számítottuk ki, és ekvivalens kapacitásként (EC1) fejeztük ki. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük.

2.5.4. Vas-tiocianát (FTC) vizsgálat

A lipidperoxidáció gátlását vas-tiocianát (FTC) módszerrel vizsgáltuk. Ezt a módszert az Osawa és munkatársai által leírt lépések szerint hajtottuk végre. (1981) [30] kis módosítással. A keverék 50 µl olajmintából (PSO1, PSO2, COM1, COM2) és linolsavból, 50 µl 50 százalékos linolsavból DMSO-ban, 50 µl 10 százalékos ammónium-tiocianát (NH4SCN) vizes oldatból állt. és 50 µl 2 mM vas-kloridot (FeCl2). Ezt követően a keveréket 37 ± 2 °C-on 1 órán át inkubáltuk, és az OD-t 500 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). -Tokoferolt (0,025-0,1 mg/ml) használtunk pozitív kontrollként. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük. A lipid-peroxidációt gátló aktivitást a (2) egyenlet segítségével számítottuk ki:
Lipidperoxidáció gátlása (százalék)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
ahol ODA a linolsavat, NH4SCN-t és FeCl2-t tartalmazó keverék OD értéke; Az ODB a DMSO OD-ja; Az ODC az olajmintákat, linolsavat, NH4SCN-t és FeCl2-t tartalmazó keverék OD értéke; és az ODD az olajmintákat és DMSO-t tartalmazó keverék OD-ja.

2.6. Az öregedésgátló tevékenységek meghatározása

2.6.1. Hialuronidáz elleni aktivitás

Az anti-hialuronidáz aktivitás mérését Chaiyana és mtsai. (2020) [31]. Először 20 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) kevertünk össze 100 µL 15 U/mL hialuronidáz oldattal, és 37 ◦C-on 10 percig inkubáltuk. Az inkubálás után 100 µl 0,03 tömeg/térfogat%-os hialuronsavat adtunk hozzá 20 mM foszfátpufferben (pH 5,35), majd 37 °C-on 45 percig inkubáltuk. Ezt követően 1 ml 0,1%-os szarvasmarha-szérumalbumint adtunk hozzá, és szobahőmérsékleten 10 percig inkubáltuk. Az OD-t 600 nm-en határoztuk meg multimódusú detektor (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, USA) segítségével. Pozitív kontrollként oleanolsavat (0,25 tömeg/térfogat%) alkalmaztunk. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük. A hialuronidáz gátlás százalékát a (3) egyenlet segítségével számítottuk ki:

Hialuronidáz gátlás ( százalék )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
ahol az ODA a DI vizet, hialuronidáz oldatot és hialuronsavat tartalmazó keverék OD értéke; ODB a DI vizet és foszfátpuffert (pH 5,35) tartalmazó keverék OD értéke; Az ODC az olajmintákat, hialuronidáz oldatot és hialuronsavat tartalmazó keverék OD értéke; az ODD pedig az olajmintákat és foszfátpuffert (pH 5,35) tartalmazó keverék OD értéke.

2.6.2. Anti-kollagenáz aktivitás

Az anti-kollagenáz aktivitás mérését a Chaiyana és munkatársai által megállapított eljárás szerint végeztük. (2019) és Thring et al. (2009) enyhe módosításokkal [32,33]. Röviden összefoglalva, 20 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) összekevertünk 20 µl 0,1 U/mL-es Clostridium histolyticum kollagenáz oldatával, és 37 ◦C-on 15 percig inkubáltuk. Az inkubálás után 80 µl 50 mM tricin puffer (400 mM NaCl és 10 mM CaCl2, pH 7,5) és 40 µL N-[3-(2-furil)akriloil]-Leu-Gly- Pro-Ala (FALGPA) szubsztrát oldatot adtunk hozzá. Az OD-t azonnal detektáltuk 340 nm-en, majd 20 percig folyamatosan mértük mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Pozitív kontrollként oleanolsavat (1 tömeg/térfogat%) használtunk. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük. A kollagenáz gátlás százalékos arányát a (4) egyenlet segítségével számítottuk ki:

Kollagenáz gátlás ( százalék )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
ahol az ODA az olajmintákat, kollagenáz oldatot, tricin puffert és FALGPA szubsztrátot tartalmazó keverék OD értéke; és az ODB a DMSO-t, kollagenáz oldatot, tricin puffert és FALGPA szubsztrátot tartalmazó keverék OD értéke.

2.6.3. Anti-elasztáz aktivitás

Az anti-elasztáz aktivitás mérését Chaiyana és mtsai. (2019) és Thring et al. (2009) enyhe módosításokkal [32,33]. Röviden összefoglalva, 10 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) összekevertünk 40 µl 0,03 U/ml-es sertéshasnyálmirigy-elasztáz oldattal, majd 50 µl 200 mM Tris-HCL pufferrel (pH 8,0) és 10 µl 0 µl-rel. 0,8 mM N-szukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN) szubsztrát oldatot adtunk hozzá. Az OD-t azonnal detektáltuk 410 nm-en, majd 20 percig folyamatosan mértük mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Pozitív kontrollként oleanolsavat (1 tömeg/térfogat%) használtunk. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük. Az elasztázgátlás százalékos arányát az (5) egyenlet segítségével számítottuk ki:

Elasztáz gátlás ( százalék )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
ahol az ODA az olajmintákat, elasztázoldatot, Tris-HCl puffert és AAAPVN szubsztrátot tartalmazó keverék OD értéke; és ODB a DMSO-t, elasztázoldatot, Tris-HCl puffert és AAAPVN szubsztrátot tartalmazó keverék OD értéke.

2.7. Az anti-tirozináz aktivitás meghatározása

A természetes kivonat fehérítő hatását anti-tirozináz aktivitás méréssel állapították meg, amelyet Saeio et al. (2011) és Laosirisathian et al. (2020) [29,34]. Ebben a vizsgálatban az L-tirozin és az L-DOPA voltak a tirozináz enzim szubsztrátjai. Röviden: 10 µl olajmintát (PSO1, PSO2, COM1, COM2) kevertünk össze 30 µL tirozinázzal egy 96-lyukú lemezen, majd szobahőmérsékleten 10 percig inkubáltuk. Inkubálás után 100 µl szubsztrátot, amely 2,5 mM L-tirozint vagy L-DOPA-t adtunk hozzá, és 30 percig inkubáltuk. Az OD-t 450 nm-en határoztuk meg mikrolemez-leolvasóval (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Pozitív kontrollként Kojisavat (20 µg/ml) használtunk. A kísérleteket három párhuzamosban és három független kísérletben végeztük. A tirozináz gátlás százalékát a (6) egyenlet segítségével számítottuk ki:

Tirozináz gátlás ( százalék )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
ahol az ODA a DMSO-t, tirozináz enzimet és L-tirozint tartalmazó keverék OD értéke; Az ODB a tirozináz enzimet és PBS-t tartalmazó, 6,8 pH-jú keverék OD értéke; Az ODC az olajmintákat, tirozináz enzimet és L-tirozint tartalmazó keverék OD értéke; és az ODD az olajmintákat, tirozináz enzimet és PBS-t tartalmazó keverék OD értéke 6,8 pH-val.

2.8. Statisztikai analízis

Minden adatot átlag ± standard eltérésként (SD) mutattunk be. A statisztikai szignifikanciát egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, majd Tukey post-hoc tesztjét GraphPad Prism (8.0 verzió, GraphPad Software) segítségével végeztük, és a p < 0,05 értéket vettük figyelembe. statisztikailag szignifikáns.

cistanche herb

3. Eredmények és megbeszélés

3.1. Tökmag olaj karakter

Ebben a vizsgálatban a szerves oldószeres extrakció helyett vizes enzimes extrakciót alkalmaztunk a tökmagolaj kinyerésére a C. moschata Duchból. Ex Poir (PSO1) és C. moschata (PSO2), mert ez egy egyszerű, hatékony és produktív eljárás [15,21]. A PSO1 egy sötétbarna, alacsony viszkozitású, míg a PSO2 egy zöldesbarna, alacsony viszkozitású folyadék volt. Mindkét tökmagolajnak megvolt a jellegzetes illata. A PSO1 és a PSO2 hozama 17,7 térfogatszázalék, illetve 15,6 térfogatszázalék volt. A jelentések szerint az olajon kívül a tökmag különféle tápanyagokat is tartalmaz. A C. moschata közeli összetétele főként szénhidrát (39,51 százalék), ezt követte a zsír (28,49 százalék), a fehérje (19,23 százalék), a víz (7,67 százalék) és a hamu (5,18 százalék) [35]. Azonban a korábbi, oldószeres és mechanikus préseléses vizsgálatokkal összehasonlítva a jelen vizsgálat alacsonyabb C. moschata olajhozamot mutatott ki. Bár az oldószeres extrakciót a leghatékonyabb olajkivonási módszernek írták le, amellyel az olajok akár 98 százalékát is kivonják magvakból, vannak problémák az oldószermaradványokkal és az előállított olaj tisztaságával kapcsolatban [36]. Ezenkívül az extrakciós eljárásban alkalmazott oldószer befolyásolta a keletkező olaj hozamát. Hexánnal, petroléterrel, petróleum-benzollal, ciklohexánnal, izopropil-éterrel, etil-acetáttal, tetrahidrofuránnal, propán-2-ollal és acetonnal végzett extrakció 43,4–64,4 százalékot eredményezett [37,38]. Emiatt a hidegsajtolás előnyösebb volt, mint az oldószeres extrakció. A hidegprés azonban bonyolultságot okozhat a csavarprés használatának kezdeti szakaszában [39]. Ezért a vizes enzimes extrakció alternatív extrakciós módszer lehet, mivel magasabb tökmagolaj-tartalmat eredményezett (36.{36}} százalék), mint a hidegen sajtolt olajhoz (33,5 százalék) [21]. Bár a vizes enzimes extrakció folyamata bonyolultabb volt, mint a hidegsajtolás, viszonylag olcsóbb beruházási költséget, a kereskedelemben kapható enzimkészítmények költségének folyamatos csökkenését, egyedi és értékes fitokémiai komponensek egyidejű izolálásának lehetőségét, valamint kezelési lehetőséget rejt magában. a zöld technológiák bevezetésének széles körben elterjedt vágya [21]. Előzetes tanulmányok leírták, hogy számos enzimet, például cellulázokat, pektinázokat, hemicellulázt és proteázt gyakran használtak a növényi sejtfal szerkezetének elpusztítására, hogy fokozzák a növényekből való bioaktív extrakciót [16,17]. Ezért ezt a vizsgálatot úgy terveztük meg, hogy a magolajat pektinázt, cellulázt és proteázt (1:1:1) tartalmazó enzimkeverék alkalmazásával vonjuk ki, amint azt Kanopka és munkatársai korábban leírták. (2016), aki optimalizálta az enzimatikus hidrolízis körülményeit, hogy a tökmagolaj legmagasabb hozamát kapja [21]. Ezenkívül ez a módszer biztonságosabb és környezetbarátabb alternatívákat kínál az oldószeres extrakcióhoz, amelyet itt "zöld extrakciónak" nevezünk.

3.2. A tökmagolaj kémiai összetétele

A zsírsav-összetétel elemzéséhez a tökmagolajat vizes enzimes extrakcióval (PSO1 és PSO2) hasonlították össze és elemezték a hidegen sajtolt extrakcióval előállított kereskedelmi tökmagolajjal (COM1 és COM2). A PSO1, PSO2, COM1 és COM2 zsírsav-összetételét az 1. táblázat mutatja. Minden tökmagolaj-minta többszörösen telítetlen (PUFA), egyszeresen telítetlen (MUFA) és telített zsírsavakat tartalmazott. A cisz-linolsav (C18:2) volt a fő komponens minden olajmintában. A COM2 tartalmazta a legtöbb zsírsavat (51,74 százalék), ezt követte a COM1 (48,0 százalék), a PSO1 (39,5 százalék), a másik pedig a PSO2 (37,63 százalék). Hasonlóképpen, a cisz-olajsav (C18:1) magas százalékban volt jelen, különösen a PSO2-ben (37,45 százalék), ezt követte a COM1 (33,39 százalék), a PSO1 (31,22 százalék) és a COM2 (28,64 százalék). Telített zsírsavak, például palmitinsav (C16:0) és sztearinsav (C18:0) csak kis mennyiségben találhatók az egyes olajmintákban. Nyomnyi mennyiségű egyéb PUFA-t, MUFA-t és telített zsírsavakat is megfigyeltek és azonosítottak.

Az irodalomban a linolsavat omega-6 néven is ismerik, egy esszenciális zsírsav, amelyet az emberi szervezet nem tud szintetizálni, csak étrendi úton jut hozzá. A linolsav az emberi egészség funkcióinak fontos tápanyaga, a ceramidok prekurzora, amely a sejtmembránok, a D-vitamin és számos hormon fő összetevője [40,41]. Állatkísérletek kimutatták, hogy a linolsav hiánya hámló és viszkető bőrt okozhat [23]. Ezenkívül a növényi olajból származó linolsav elősegítette a bőr sebeinek gyógyulását, valamint megelőzte a bőrgyulladást és a pattanásokat [23]. Ezenkívül az olajsav vagy az omega{5}} jótékony hatású a rák, az autoimmun és gyulladásos betegségek megelőzésében [42]. Valójában az olajsav jelentősen csökkentette a nitrogén-monoxid termelést a seb helyén, ami gyorsabb sebzáródást eredményezett [43]. Ezek az adatok alátámasztják, hogy a tökmagolaj, amely gazdagítja a linolsavat (omega{8}}) ​​és az olajsavat (omega-9), potenciális egészségügyi előnyökkel jár.

cistanche tubulosa

Eredményeink szerint a tökmagolaj (PSO1, PSO2, COM1 és COM2) számos zsírsavból állt, beleértve a linolsavat (C18:2), olajsavat (C18:2), palmitinsavat (C16:0). és sztearinsav (C18:0), amelyek a tökmagolaj gyakori összetevői [44]. Az összes olajmintában a linolsav (omega-6) és az olajsav (omega-9) volt a domináns. A legnagyobb mennyiségű linolsav a COM2 volt, ezt követte a COM1, a PSO1 és a PSO2. Emellett a legnagyobb mennyiségű olajsav a PSO2 volt, ezt követte a COM1, PSO1 és COM2. Ezek az eredmények megmagyarázzák, hogy a tökmagolaj vizes enzimes extrakciója valamivel alacsonyabb linolsavat tartalmaz, de az olajsavat nem, mint a hidegen sajtolt extrakció. A vizes enzimes extrakcióból származó tökmagok alacsonyabb linolsav-tartalmának oka, mint a kereskedelmi olajmintákban, az extrakciós folyamat eltéréséből adódóan. Korábbi tanulmányok inkonzisztenciát találtak a telítetlen zsírsavak, különösen az olajsav és a linolsav mennyiségében a különböző extrakciókból származó tökmagolajokban [39]. Az olajsav tartalma a hidegen sajtolt tökmagolaj 28,19 százalékától a pentánnal extrahált tökmagolaj 30,56 százalékáig, míg a pentánnal extrahált tökmagolajban 43,{31}} százalék között mozgott a linolsav tartalma. 46,67 százalékra a hidegen sajtolt tökmagolajban [39]. A különböző extrakciós módszereken túl az extrakciós eljárás során alkalmazott oldószerek és a vetőmag érlelési hőmérséklete is befolyásolta a növényi magvak linolsav tartalmát. Egy korábbi tanulmány rámutatott, hogy a petroléter alacsony linolsav tartalmú lenolajat eredményezett (26,2 százalék), míg az n-hexán 46,5 százalékos linolsavtartalommal ellentmondó eredményeket adott [45]. Ezenkívül a linolsav fordítottan arányos a hőmérséklettel a napraforgómag érése során [46].

Ezenkívül egy relatív tanulmány kimutatta, hogy a zsírsav-összetétel kémiai összetétele azt mutatta, hogy a dietil-éterrel extrahált tökmagolajban (C. maxima) 47,45 százalékban linolsav, olajsav pedig 35 százalékban volt jelen [47]. . Akin et al. (2018) szerint a linolsav tartalom 53,19 százalék és 53,27 százalék között mozgott, ezt követte az olajsav, amely szintén nagy mennyiségben, 27,52 és 27,59 százalék között volt jelen a hidegen sajtolt C. pepo L. magolaj extrakciójában [48 ]. Ezért ebben a vizsgálatban a vizes enzimes extrakció is alacsonyabb zsírsavhozamot eredményezett, mint a korábbi vizsgálatokban említett oldószeres extrakció és hidegsajtolás. A fajták összehasonlítása során azt találtuk, hogy a PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) nagyobb mennyiségű linolsavat mutatott, mint a PSO2 (C. moschata, vagy japán sütőtök). Különféleképpen, a PSO2 nagyobb mennyiségű olajsavat tartalmazott, mint a PSO1. Fontos, hogy a zsírsavprofilok és a tökmagolaj mennyiségének változásai az adott fajták eredetétől, az éghajlati viszonyoktól és a betakarítás utáni kezeléstől függtek [49]. A különböző extrakciós módszerekkel nyert tökmagolajok zsírsavprofiljaiban mutatkozó különbségek mellett a vizes enzimes technológiából származó olajok fitoszterolban és tokoferolban gazdagok [50]. Ezért a zöld extrakciós módszerrel előállított PSO1 és PSO2 alternatív tökmagolajként javasolt további alkalmazásokhoz.


További információ: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Akár ez is tetszhet