Kísérleti tanulmány a Cisztanche-glikozidok előkezelésének védő hatásáról a vese ischaemia-reperfúziós sérülésére

további információ:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Sebészeti osztály, Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai 201900)

【Absztrakt】Cél A vérzéses sokk újraélesztési modelljének felállítása patkányokban, és megfigyelni a vérzéses sokk védő hatását.Cistancheösszglikozidok (CTG) a vese ischaemia-reperfúziós károsodásán. Módszerek Az SD patkányokat véletlenszerűen 3 csoportra osztottuk: álműtétes csoport, kísérleti csoport (sokk újraélesztés csoport), CTG kezelési csoport, minden csoportban 10 patkány. A kísérleti csoport és a CTG-s csoport vese ischaemia-reperfúziós modelleket hozott létre. A kezelt csoportban lévő patkányok intraperitoneálisan 400 mg/kg CTG-t, a kísérleti csoportot és az áloperációs csoportot pedig sóoldattal injektálták. A vesefunkció meghatározására minden csoportban a vér szívizom tartalmát, karbamid-nitrogéntartalmát és cisztatin C-jét, a vesesejtek apoptózisának meghatározására áramlási citometriás analízist alkalmaztunk; enzim-linked immunoassay (ELISA) módszert alkalmaztak az X-kromoszóma kötődés kimutatására patkánybanveseszövet Az apoptózis fehérje X-kapcsolt inhibitorának (XIAP) expressziója. Eredmények A CTG csoportot a kísérleti csoporttal összehasonlítva a vér Cr, BUN és cisztatin C szignifikánsan csökkent (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchevédő hatást fejtenek ki a vese ischaemia-reperfúziós sérülésére patkányokban, ami összefüggésben lehet a XIAP expressziójának elősegítésével.

[Kulcsszavak] vese; ischaemia-reperfúziós sérülés; a cisztanche összes glikozidja; az apoptózis fehérje kromoszómához kötött inhibitora; apoptózis; patkány

[Kínai könyvtár osztályozási száma] R692 [Dokumentumjelölési kód] A [Cikkszám] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Kattintson ide: Cistanche EXTRACT POWDER vese számára

Az ischaemia-reperfúziós (I/R) sérülés a vesekárosodás gyakori patofiziológiai jelensége vérzéses sokk, súlyos trauma,vesetranszplantáció, ésvesedaganat műtét. Tanulmányok kimutatták, hogy az apoptózis az I/R sérülés által okozott vesefunkció károsodásának fontos része (1). Az X-kapcsolt apoptózis fehérje inhibitor (XIAP) az egyik legerősebb endogén apoptózisgátló, amelyet eddig találtak (2). Kevés tanulmány létezik a XIAP anti-apoptotikus hatásáról a veseszövetben I/R sérülés után.CistancheAz összglikozidok (CTG) egy fenil-etanoid összes glikozid vegyület, amelyből kivonjákCistanche, amelynek sokrétű biológiai funkciója van. Kevés tanulmány készült a vese védelméről az I/R sérülés után. . Ez a tanulmány létrehozta a patkányok hemorrhagiás sokk újraélesztésének modelljét, és létrehozta a szisztémás I/R sérülés modelljét, hogy feltárja a hússérv összes glikozidjának védő hatását.veseaz I/R sérüléstől, és vizsgálja meg lehetséges mechanizmusát.

1 Anyagok és módszerek

1.1. Állatok és csoportosítás

A Sanghaji Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem Kísérleti Központja által biztosított 30 tiszta és egészséges hím patkány (320 ± 30) g. Véletlenszerűen 3 csoportra osztva: színlelt műtéti csoport, kísérleti csoport (sokk újraélesztési csoport), CTG csoport, mindegyikben 10 patkány.

1.2 Főbb reagensek és műszerek

A nyálkás rizs összes glikozidját (tételszám: 20081516) a Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.-től vásároltuk; a nátrium-pentobarbitál, a Hoechst 33258 és a propionil-jodid a Sigmától (USA); az egér X kromoszómához kapcsolt apoptózis inhibitor Protein Assay Kit (XIAP) és ELISA Kit a Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.-től vásárolt; mikrolemez-leolvasót a Thermo Company-tól (USA); többparaméteres fiziológiai detektort a Nihon Kohden Company-tól (Japán) vásároltunk; a BDFACSAria áramlási citométert a Becton, USA-tól vásároltuk – Dickinson Company; A 24G trokárt a Shandong Jierui Medical Devices Company-tól vásárolták.

1.3 Kísérleti módszer

1.3.1. Állatmodell készítése Az SD patkányokat 12 órával a kísérlet előtt éheztettük, és nátrium-pentobarbitál (50 mg/kg) intraperitoneális injekciójával elaltattuk.

A patkányt fekvő helyzetben rögzítettük, a bal alsó hasban 3 cm-es bemetszést ejtettünk, a femoralis artériát leválasztottuk, 24G trokárt helyeztünk be, és egy többparaméteres fiziológiai detektort csatlakoztattunk. A patkányok átlagos vérnyomását (113 ± 15) Hgmm-ben mértük, 20 ml-es fecskendő heparin A vérnyomást 40 Hgmm-re (l Hgmm=0. 133 kPa) csökkentettük kémiai összekötő háromutas eszközzel. A sokk kezdetének tekintendő, és a vérnyomást 90 percig tartottuk. A véralvadási térfogat (13 ± 3) ml volt, majd az autológ vér a fecskendőben A lassú reinfúzió körülbelül 30 percig tart, és a vérnyomás visszatér az alapérték több mint 90 százalékára, és az újraélesztés sikeresnek minősül (3) . A trokárt kihúzták, a femorális artériát lekötötték, a bemetszést összevarrták. Miután a patkányok ébren voltak, visszavitték őket a ketrecbe megfigyelésre, és szabadon ehettek és ihattak. 24 órával az újraélesztés után nátrium-pentobarbitál (50 mg/kg) intraperitoneális injekciót alkalmaztunk anesztéziára, laparotomiára, 5 ml vért vettünk a vena cava inferiorából, a patkányokat azonnal leöltük, a bal és jobb vesét pedig eltávolítottuk. használat.

1.3.2. Gyógyszerkezelési módszerek A CTG-kezelési csoportnak CTG-t adtak 2 órával a patkányok véradása előtt, majd a hasüregbe fecskendezték be 400 mg/kg dózisban. A kísérleti csoportnak intraperitoneálisan 3 ml normál sóoldatot injektáltunk 2 órával a vérvétel előtt; az álműtétes csoportban csak érzéstelenítés, laparotomia és a femoralis artéria leválasztása, trokár elhelyezése és a bemetszés varrása esett át, de vérzésre vagy újraélesztésre nem került sor. A többi ugyanaz volt, mint a kísérleti csoport.

1. 4 kimutatási indikátorok és módszerek

1.4.1 A vér BUN-, Cr- és cisztatin-C-tartalmának meghatározása A cisztatin-C a glomeruláris filtrációs sebesség változásainak endogén markere. Veseműködési zavar esetén a glomeruláris filtrációs ráta csökken, a cisztatin C koncentrációja a vérben 10-szeresére emelkedhet, és a cisztatin C diagnosztikai pontossága lényegesen jobb, mint a szérum izommérgezésé. A vér BUN-, Cr- és Cisztatin-C-tartalmát kórházunk laboratóriumába küldtük meghatározásra.

1.4.2 A sejt apoptózis sebességének meghatározása A vesesejtek apoptózisának meghatározására áramlási citometriát használtunk. Vegyük a vesét és vágjuk fel egy pengével, adjunk hozzá egy kevés PBS-t, és vigyük át egy kémcsőbe. Adjunk hozzá 0,3 százalék tripszint az emésztéshez 37 P-es vízfürdőben, inkubáljuk 20 percig, amikor a kémcső tartalma zavarossá válik, adjunk hozzá kétszer PBS-t az emésztés leállításához, szűrjük egy 300 mesh nejlonhálót, dobja ki a szennyeződéseket, és centrifugálja alacsony hőmérsékletű centrifugában. Centrifugálás sugara 8 cm, 12, 000 fordulat/perc, centrifugáljon 5 percig, dobja ki a felülúszót, állítsa be a sejtkoncentrációt 1-1,5 x 106/ml-re, vegyen 0,4 ml-t a fenti sejtszuszpenzióból, és adjon hozzá 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), sötét 37 t: inkubálja vízfürdőben, zárja le a kémcsövet, 5 perc múlva öblítse le PBS-sel, centrifuga sugara 8 cm, 12 000 fordulat/perc, centrifugálás 5 percig , dobja ki a felülúszót, öblítse le újra ugyanúgy. Adjunk hozzá 0,4 ml PI-t, 5 percig festve, és határozzuk meg a normál, nekrotikus és apoptotikus sejtek százalékos arányát a vesében. A különböző típusú sejtek két színezőanyagának affinitása alapján ismert, hogy csak a PI-színű sejtek az elhalt sejtek, csak a Hoechst 33258 színes sejtek apoptotikus sejtek, és egyikük sem színes normál élő sejt.

1.4.3 Enzimhez kötött immunoassay (ELISA) a XIAP expresszió kimutatására patkány veseszövetekben Vegyünk minden vesecsoportot, és kezeljük a friss veseszöveteket szöveti lizátummal. Centrifugálja alacsony hőmérsékletű centrifugában 12 000 fordulat/perc sebességgel 5 percig. Vegye ki a felülúszót, és működtesse a XIAP ELISA Kit készlet utasításai szerint. A Shanghai Jiaotong Egyetem Fenghe Technology Co., Ltd. felelős a tesztelésért.

1.5 Statisztikai feldolgozás

Az egyes csoportok kísérleti adatait Yuan talaj s és SPSS 17 reprezentálja. A statisztikai elemzéshez 0 szoftvert használunk. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

A Cistanche javíthatja a szexuális funkciót

2 eredmény

A vesefunkciós indexek Cr, BUN és cisztatin C értékei statisztikailag szignifikánsak voltak (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

1. táblázat: A vesefunkció indexei az egyes csoportok patkányainak Cr, BUN és cisztatin-C értékei Tab. 1 A vesefunkciós indexek három csoportban

A színlelt műtéti csoporthoz képest *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Az ischaemia-reperfúziós vesekárosodás mechanizmusa nagyon bonyolult. Ez egy kóros folyamat, amely sokféleképpen játszódik le különböző tényezők hatására, mint például a kalciumion túlterhelés, a lipid peroxidációs károsodás, a sejt apoptózis és nekrózis, amelyek közül a kaszpázfüggő sejt apoptózis a vese tubuláris epiteliális sejtjének egyik fő formája. I/R vesekárosodás által kiváltott károsodás (4). Az apoptózis fehérje (IAP) gátlócsaládja az egyetlen olyan endogén kaszpáz inhibitor, amelyet eddig emlőssejtekben találtak, amely hatékonyan képes megakadályozni a sejtapoptózis kialakulását. Az IAP családban a XIAP a legerősebb kaszpázgátló hatással rendelkező tagja. Gátolhatja a különféle kóros ingerek által okozott sejtapoptózist, és védő hatást fejt ki a sérült szervekre (5).

Jelenleg a legtöbb módszer a vese I/R sérülésének állatmodelljére az egyik vese eltávolítása és a vesefej vagy a veseartéria ⑹ másik oldalának szorítása a vesetranszplantáció állapotának szimulálására. Ez a tanulmány egy hemorrhagiás sokk/resuscitációs modellt használ, amely közelebb áll a klinikai traumás sokkban fellépő szisztémás ischaemia-reperfúzió patofiziológiai folyamatához. Ebben a kísérletben SD patkányok vérének BUN-, Cr- és cisztatin-C-szintjei. Jelentős javulás, súlyosan károsodott vesefunkció ideális állatmodell az I/R vesekárosodás tanulmányozására.

A CTG a hagyományos kínai orvoslás húslány paszta fontos gyógyászati ​​összetevője. A meleg természetű, édes és sós padlizsánpaszta visszakerül a vese- és vastagbél meridiánba, és eredetileg a Shennong's Materia Medica tartalmazta. "Ben Sutra": Az öt fő vajúdás és hét sérülés, táplálja a középsőt, táplálja az öt belső szervet, erősíti a jint, táplálja az esszenciát és a qit;Cistanchehazámban kétezer éve használják. A múltban az 1. helyen áll az erőnövelő készítményekben, és a 2. helyen a tápláló készítményekben a ginzeng után. Tanulmányok kimutatták, hogyCistanchetudjavítja a szexuális funkciót, szabályozza a neuroendokrin rendszert, ésjavítja az immunrendszer működését. , Antioxidánsok, elősegíti az anyagcserét, védi az ischaemiás szívizomzatot és egyéb funkciókat. A húscsalád püré fő gyógyászati ​​összetevőjeként a CTG-nek számos funkciója van. Az agyi ischaemia-reperfúziós modelleken végzett kutatások azt találták, hogy a CTG csökkentheti az izgató aminosavak számát az agyszövetben ischaemia-reperfúziót követően, és megvédheti az SD-patkányok agyszövetét (7). A CTG-nek van egyantioxidáns hatásegerek szövetein, és bizonyos védőhatást fejt ki az akut agyi hipoxia ellen egereknél és szívizom-károsodás esetén egereknél (9). A CTG jelentősen javíthatja az idegrendszeri viselkedéstParkinson-kóregereket modelleznek, és gátolják a dopamin neuronok számának csökkenését a substantia nigrában (9). A CTG a szabad gyökfogó enzimek aktivitásának fokozásával, a lipidperoxidáció megelőzésével, a B-amiloid peptid agyban történő lerakódásának gátlásával és az agysejtek apoptózisának gátlásával jelentősen javítja aAlzheimer kórB-amiloid peptid által okozott egerek Memória képesség w. Ez a vizsgálat kimutatta, hogy a CTG előkezelést követően a patkányok vérének BUN, Cr és cisztatin C tartalma jelentősen csökkent, a vesekárosodás pedig csökkent. A CTG növelte az apoptózist gátló XIAP fehérjét az I/R sérült veseszövetben, és blokkolta a sejt apoptózist. A halál bekövetkezése védő hatással van a vesekárosodásra.