2 Vizsgálati módszerek

2.1 Hálózati farmakológiai elemzés

2.1.1 A Cistanche deserticola hatóanyagai

A meglévő tanulmányok [7, 22] alapján az "Echinacoside", "Verbaszkozid", "Cisztanozid A", "Tubulozid A", "Izoakteozid", "2-Acetil-lakteozid"és"Tubulozid B" kerültek kiválasztásra bioaktív komponensekként az elemzéshez. Keresse meg a fenti hét összetevő háromdimenziós kémiai szerkezeti adatait a Pubchemen keresztül (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/), és mentse el őket sdf formátumban.

2.1.2 A potenciális célpontok előrejelzése és szűrése

Importálja a háromdimenziós szerkezeti fájlokat ahatóanyagokat a PharmMapper adatbázisába(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Válassza ki a "csak humán fehérje célpontok" célfajt, és tartsa meg a többi lehetőséget alapértelmezettként, hogy megkapja a különböző összetevők megfelelő adatait. Megfelelő célcél.

Az UniProt adatbázist (https://www.uniprot.org/) használtuk az egyes célpontokhoz tartozó fehérjenév és génnév információ megszerzéséhez. Egyesítse a 7 komponensnek megfelelő célpontokat.

A GeneCards adatbázisban (https://www.genecards.org/) használja a "gyulladásos bélbetegség" kulcsszót a gyulladásos bélbetegséggel kapcsolatos gének kereséséhez és a keresési eredmények rendszerezéséhez.

Cistanche kiegészítő Gyulladáscsökkentő kiegészítő PhGs75% Ech 30% Act 12%

2.1.3 Fehérje-fehérje kölcsönhatás (PPI)

Hálózatépítés A jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) segítségével rajzoljon online Venn-diagramot, hogy megkapja a Cistanche deserticola hatóanyag-célpontok és az IBD-célpontok metszéspontját. Töltse fel a kapott kereszteződési célokat a String adatbázisba a PPI-szűrési elemzéshez. Töltse le a PPI hálózat TSV fájlját, importálja a Cytoscape 3.8-ba.0, számítsa ki a fehérje kölcsönhatási hálózat fokértékét, majd szépítse meg a PPI hálózati diagramot a fokérték alapján.

2.1.4 Génontológia (GO)

A funkcionális dúsítás és a Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) útvonal dúsítási elemzését a DAVID adatbázis (https://david.ncifcrf.gov/) segítségével végezték el, hogy azonosítsák a Cistanche deserticola hatóanyagok IBD-re kifejtett védőhatásának célpontjait. A pontokon GO analízist végeztünk, majd a DAVID adatbázis segítségével KEGG útvonal dúsítási elemzést végeztünk azokon a célpontokon, ahol a Cistanche deserticola hatóanyagai védő szerepet töltenek be az IBD-ben.

2.1.5 A Cistanche deserticola „hatóanyag-célútvonal” hálózat kiépítése

A Cistanche deserticola hatóanyagait, a Cistanche deserticola hatóanyagok és az IBD metszéspontjait, valamint a KEGG-vel dúsított útvonalakat használtuk fel egy hatóanyag-célút-úthálózat kialakítására.

2.2 Állatmodell érvényesítése

2.2.1 Állatmodell felállítása

SPF minőségű hím BALB/c egereket (5-8 hetes, 18-21 g) használtunk, amelyet a Beijing Union University Iparművészeti és Tudományos Iskola Egészségügyi Élelmiszervizsgáló Központja biztosított [Kísérleti Állathasználati Engedélyszám: SYXK (Peking). ) 2017-0038], SPF-minőségű állathelyiségben (23±2) fokos hőmérsékletű, 50-70% relatív páratartalommal és 12 órás fluoreszkáló fényforrással, nappal és éjszaka váltakozva tartották őket. . Az állatkísérleti protokollokat a Pekingi Union Egyetem Iparművészeti és Tudományos Iskola Egészségügyi Élelmiszer Vizsgáló Központjának Állatlaboratóriuma hagyta jóvá. 3 napos adaptív táplálás után 20 egeret véletlenszerűen 4 csoportba osztottunk testtömeg szerint, minden csoportban 5 egeret. ① Kontroll csoport (CZ): igyon szabadon steril vizet, és szondázzon steril vizet 7 egymást követő napon; ②DSS vezérlőcsoport

(DZ): Ingyenesen innivaló 3%-os DSS oldat naponta elkészítve 7 egymást követő napon; ③ A Cistanche deserticola (LZ) összes glikozidjainak alacsony dózisú csoportja (folyadék koncentrációja: 0,1 g/mL): Ingyenesen iható 3%-os DSS oldat, naponta elkészítve 7 napon keresztül; , szondán keresztül 7 egymást követő napon át; ④ Cistanche deserticola összes glikozid nagy dózisú csoportja (HZ) (folyadék koncentrációja 0,4 g/

ml): Igya meg a frissen készített 3%-os DSS-oldatot minden nap szabadon, és az oldatot szondán keresztül adja be 7 egymást követő napon. 7 napos folyamatos modellezés után 12 órán át koplalták, majd nyaki diszlokációval feláldozták őket. A csirke vörösvértesteit intraperitoneálisan fecskendezték be 4 órával a végrehajtás előtt. Közvetlenül a kivégzés után a szemgolyókat eltávolították, hogy vért gyűjtsenek. A peritoneális folyadékot kivontuk és a hasüreget kinyitottuk. Megmértük a vastagbél hosszát, és eltávolítottuk az egérlépet, a Peyer-csomót és más szerveket.

Cistanche kiegészítő Gyulladáscsökkentő támogató kiegészítő

2.2.2 Betegségaktivitási index (DAI)

Az egereket az intragasztrikus beadás előtt minden nap meghatározott időpontban lemértük, és megfigyeltük az egerek mentális állapotát és széklet tulajdonságait. Megmérték a széklet rejtett vérét, és ennek megfelelően pontozták. A pontozási standardok az 1. táblázatban láthatók. DAI-pontszám=(testsúly-pontszám + székletkarakter pontszám + széklet rejtett vér pontszáma)/3 (1)

1. táblázat A DAI pontozási kritériumai

2.2.3 Valós idejű fluoreszcencia kvantitatív PCR kimutatás immunszignál útvonal (qRT-PCR) detektálása

Az egérlépeket összegyűjtöttük, 0,5 cm-es szövetblokkokra vágtuk, és tárolás céljából szöveti RNS-stabilizáló oldatba áztattuk. Távolítsa el a szövetet és vágja darabokra, adjon hozzá RNS extrakciós oldatot, és darabokra őrölje a teljes RNS kinyeréséhez. Reverz transzkripciót és PCR-amplifikációt követően két kulcsfontosságú immunszignalizációs útvonal, az mTOR és a TGF- aktiválódását mutatták ki egérlépekben. A qRT-PCR-ben használt primer szekvenciákat a 2. táblázat mutatja be.

2. táblázat: Primer szekvencia táblázat