A Rehmannia Glutinosa öt komponensének meghatározása és a HPLC ujjlenyomat létrehozása

Absztrakt:Öt komponens tartalmának meghatározására szolgáló módszerRehmannia glutinosa, nevezetesen,rehmannozid D, leonurin,echinakozid,cisztanchesid Aésverbascoside, létrehozták, és a Rehmannia glutinosa nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) ujjlenyomatát azért hozták létre, hogy tudományos alapot nyújtson a Rehmannia glutinosa minőségellenőrzéséhez. A Shiseido CAPCELL PAK C18 oszlopot használtuk, acetonitril-0,1%-os hangyasavoldattal mozgófázisként, gradiens elúcióval, 30 fokos oszlophőmérséklet, változó hullámhossz meghatározás és 1,0 áramlási sebesség. ml/perc. A Rehmannia glutinosa HPLC ujjlenyomatát a "A kínai orvoslás kromatográfiás ujjlenyomat-hasonlóság-értékelő rendszere (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{0}.999 0), a precíziós teszt, az ismételhetőségi teszt és a stabilitási teszt RSD értéke 0,12%~1,58% volt, az átlagos mintavisszanyerési arány pedig 96,5% volt ~98,6%; a megállapított Rehmannia glutinosa HPLC ujjlenyomat 23 közös csúcsot azonosított, és a Rehmannia glutinosa minta és a kontroll ujjlenyomat közötti hasonlóság 0,904~0,950 volt. Az eredmények arra utalnak, hogy a kialakított tartalommeghatározási módszer és a HPLC ujjlenyomat alkalmas a Rehmannia glutinosa minőségének értékelésére, valamint a nyers Rehmannia glutinosa és a főtt Rehmannia glutinosa azonosítására, nagy pontossággal és jó reprodukálhatósággal, és technikai támogatást nyújthat a rehmannia glutinosa minőségének ellenőrzéséhez. Rehmannia glutinosa gyógyászati ​​anyagok.

Kulcsszavak:Rehmannia glutinosa; tartalom meghatározása; ujjlenyomat; minőségi értékelés

ÚJ GYÓGYNÖVÉNY CISTANCHE VELECHINACOSIDE,CISTANCHESIDE AÉSVERBASCOSIDE

Rehmannia glutinosaa Rehmannia glutinosa Libosch Scrophulariaceae növény friss vagy szárított gyökérgumója. Az eltérő feldolgozási módok miatt főként friss rehmanniára, nyers rehmanniára és főtt rehmanniára osztják [1-2]. A fő termelési területek Henan, Shanxi, Shaanxi stb. Közülük a nyers rehmannia glutinosa hőt eltávolít és hűti a vért, táplálja a yint és elősegíti a folyadéktermelést, és főként a vérben lévő hő, meleg méreganyagok és foltok kezelésére használják; A főtt rehmannia glutinosa vér- és yin-tápláló, esszenciális és csontvelő-utánpótlás hatású, főként vérhiány, klorózis stb. kezelésére használják. Palpitatio, nyugtalanság stb.[1-2]. A kettőnek eltérő tulajdonságai és ízei vannak, de mindkettő a máj és a vese meridiánjaihoz tartozik. A Rehmannia glutinosa összetett kémiai komponenseket tartalmaz, főleg iridoidokat, iononokat, fenil-etanol-glikozidokat, flavonoidokat stb. [3-5].

A Rehmannia glutinosa különböző feldolgozási módszerekkel történő feldolgozása után az egyes feldolgozott termékekben a kémiai komponensek típusa, tartalma és aránya nagymértékben eltérő, ami jelentős eltéréseket eredményez a farmakológiai aktivitásában [6-10]. szerint

Kapcsolódó tanulmányok[11-12] azt mutatják, hogy a Rehmannia glutinosa „nyersről” „főttre” való átváltása során a kémiai összetevők, például a katalpol, az anyafű, a sztachióz és az aminosavak tartalma jelentősen csökkent, és a tartalom fruktóz, 5-hidroxi-metil-furfurol stb. tartalma jelentősen megnőtt. A nyers és főtt rehmannia glutinosa minőségellenőrzése jelenleg elsősorban a katalpol és a rehmanniasid D tartalmát használja értékelési indikátorként. Az értékelési rendszer mutatói viszonylag egységesek, ami megnehezíti a rehmannia glutinosa minőségének átfogó ellenőrzését. Ezenkívül a vizsgálatok kimutatták, hogy a rehmannia glutinosa D tartalma a feldolgozás előtt és után is változik. Kicsi, és gyenge specifitású a feldolgozás utáni összetételváltozások és a feldolgozás mértékének jellemzésében [12-13].

Ezért a Rehmannia glutinosa minőségének átfogóbb értékelése érdekében ez a tanulmány megállapította a kapcsolatot a rehmanniasid D és a Yimu között Rehmannia glutinosa-ban.

Öt általános komponens, köztük a glükozid, echinaceasid, cisztancheozid A és verbaszkozid tartalmának meghatározására szolgáló módszerek, valamint a Rehmannia glutinosa HPLC-ujjlenyomatának létrehozása a Rehmannia glutinosa fő összetevőinek tartalmának elemzésére a különböző termelési területekről, valamint a feldolgozás előtt és után, a Rehmannia glutinosa minőség-ellenőrzéséhez szükséges információk biztosítása érdekében. Technikai támogatás.

Műszerek, reagensek és teszt gyógyszerek

Agilent 1260 nagy teljesítményű folyadékkromatográf (a detektor diódasoros); változó tartományú elektronikus analitikai mérleg (METTLER TOLEDO); digitális ultrahangos tisztító (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). A metanol (Sinopharm Group) analitikai minőségű; az acetonitril (Merck) kromatográfiás minőségű; a víz Watsons palackozott víz. Rehmannia glutinosa D referenciaanyag (tételszám: RFSD8401909016, tisztaság 98,0%), leonurus glikozid referenciaanyag (gyártási szám: RFS-Y22002208010, tisztaság 98,0%) és cisztanchesid A referenciaanyag (gyártási tétel RFS-R05002009014 számú, 96,0%-os tisztaságú, mindegyiket a Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.-től vásárolták; Az echinakozid referenciaanyagot (tételszám: 111670-201907, tisztaság 91,8%) és a verbakozid referenciaanyagot (tételszám: 11530-201914, tisztaság 95,2%) a China Food and Drug Inspection Institutes-tól vásárolták. A Rehmannia mintákat (SX1~SX4, HN1 és HN2) különböző termőterületekről gyűjtöttük (lásd 1. táblázat), amelyek közül az SX4-et és a HN2-t SX1 és HN1 gőzölte, az SX2-t és az SX3-at pedig ugyanarról a termőterületről. Minden mintát hitelesnek azonosított Song Pingshun, a Gansu Tartományi Gyógyszerellenőrző Intézet vezető kínai orvosa.

1. táblázat A Semen Rehmanniae minták adatai

2.1 Kromatográfiás körülmények

Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm×4,6 mm, 5 μm) oszlopot, A mozgófázisként acetonitrilt, B mozgófázisként 0,1%-os hangyasavoldatot használtunk. A gradiens elúciós körülményei a következők voltak: 0-3 perc, 1%A; 3-9 perc, 1%A→5%A; 9-24 min, 5%A→35%A; 24-35 min, 35%A→65%A; 35-40 perc, 65%A→90%A. Változó hullámhosszú érzékelés (0-24 min, 203 nm; 24-40 min, 330 nm). Az injekció térfogata 15 μl referenciaoldat és 20 μL mintaoldat volt.

2.2 Oldatkészítés

2.2.1. Összehasonlító oldat elkészítése

Vegyünk megfelelő mennyiséget a fenti öt referenciaanyagból, és adjunk hozzá 70%-os metanolt, hogy 0,4 mg/ml tömegkoncentrációjú vegyes referenciaoldatot készítsünk.

2.2.2 Vizsgálati oldat elkészítése

Mérjünk le kb. 1.{1}} g Rehmannia port (2-es szitán átpasszírozva), pontosan mérjük le, helyezzük egy dugós Erlenmeyer-lombikba, adjunk hozzá pontosan 25 ml 70%-os metanolt, zárjuk le, mérjük le, ultrahangos kezeléssel (300 teljesítmény) W, frekvencia 50 kHz) 30 percig, hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni, ismét lemérjük, a vesztett tömeget 70%-os metanollal pótoljuk, szűrjük, és a szűrletet kivesszük.

2.3 Módszertani vizsgálat

2.3.1 Specifikussági vizsgálat

Vegyük a kevert összehasonlító oldatot a "2.2.1" ponthoz, és a vizsgálati oldatot (SX1 minta) a "2.2.2" ponthoz, és fecskendezzük be és mérjük meg a kromatográfiás körülményeknek megfelelően a "2.1" pontban. Az eredmények azt mutatják, hogy a Rehmannia minta kromatogramja egy kromatográfiás csúcsot mutat, amelynek retenciós ideje megegyezik a Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A és Verbascoside referencia standardjaival (lásd az 1. ábrát), jelezve, hogy ez a módszer erős. sajátosság.

2.3.2 Lineáris kapcsolat vizsgálata

Adjunk 70%-os metanolt a kevert referenciaoldathoz, hígítsuk rendre 5-ször, 10-szer, 25-ször, 50-szer, 100-szor és 250-szeresre, és fecskendezzük be és mérjük meg a kromatográfiás körülményeknek megfelelően a „2.1. A standard görbéket minden referencia tömegkoncentrációjával vízszintes tengelyként (x) és a megfelelő kromatográfiás csúcsterülettel függőleges tengelyként (y) húztuk. Az eredményeket a 2. táblázat mutatja be, jelezve, hogy minden komponens jó lineáris kapcsolattal rendelkezik a megfelelő tömegkoncentráció-tartományon belül.

1.rehmanniozid D; 2. leonurid; 3. echinakozid; 4. kasztanozid A;5. akteozid

1. ábra Specificitásvizsgálat kromatogramja

2. táblázat A Semen Rehmanniae 5 komponensének lineáris kapcsolata

2.3.3 Precíziós vizsgálat

Vegyük a vizsgálati oldatot (SX1 minta) a „2.2.2” pontra, és végezzük el az injekciós tesztet a „2.1” pont szerinti kromatográfiás körülményeknek megfelelően. Fecskendezze be a mintát 6-szor folyamatosan, rögzítse az egyes komponensek csúcsterületét, és számítsa ki a rehmannia glutinosa D, az anyafű-glikozid, az echinacea-glikozid, a cistanche-glikozid A és a verbaszkozid csúcsterületének RSD-jét a vizsgálati mintában 0 értékre. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48%, illetve 0.82%, ami azt jelzi, hogy a műszer jó pontossággal rendelkezik.

2.3.4 Megismételhetőségi tanulmány

Ugyanabból a Rehmannia gyökérmintából (SX1) párhuzamosan hat mintát állítottunk elő a „2.2.2” módszer szerint, majd injektáltuk és meghatároztuk a „2.1” pont szerinti kromatográfiás körülmények szerint. A rehmannia gyökérglikozid D, anyafű glikozid, echinacea glikozid, citanche glikozid A és verbaszkozid RSD-értéke a hat mintában 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}},48%, illetve 1,58%, ami azt jelzi, hogy a módszer jó ismételhetőségű.

2.3.5 Stabilitási tanulmány

Vegye ki a vizsgálati oldatot (SX1 minta) a "2.2.2" pontra, és fecskendezze be, és mérje meg a kromatográfiás körülményeknek megfelelően "2.1" alatt 0 óra, 2 óra, 4 óra, 6 óra, 8 óra, 1{{ 15}} óra, 12 óra, 18 óra, illetve 24 óra. A rehmannia glutinosa D, az anyafű-glikozid, az echinakozid, a cistanche-glikozid A és a verbakozid csúcsterületeinek RSD értéke 0,94%, 1.04%, 0,73% volt 0,83%, illetve 0,71%, ami azt jelzi, hogy a tesztoldat 24 órán belül jó stabilitást mutat.

2.3.6 Minta-visszanyerési arány

{{0}},5 g Rehmannia gyökérmintát (SX1) ismert 5 komponens tartalommal pontosan bemértünk egy dugós Erlenmeyer-lombikba, és hozzáadtunk 6 párhuzamos adagot, valamint 5 meghatározott koncentrációjú referenciaoldatot. illetőleg. A mintákat a „2.2.2” módszer szerint készítettük el, és a mintákat a „2.1” pont szerinti kromatográfiás körülményeknek megfelelően injektáltuk és mértük. A visszanyerési arányt kiszámítottuk, és az eredményeket a 3. táblázat mutatja. Az egyes komponensek átlagos mintavisszanyerési aránya 96,5%~98,6%, az RSD 0,73%~1,52% volt, ami azt jelzi, hogy a módszer jó pontossággal rendelkezik.