A magas P16INK4a, a sejtek öregedésének jelzője a vesekárosodáshoz, a vesekárosodáshoz és a lupus nephritis kimeneteléhez kapcsolódik
Mar 24, 2022
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEBETEGSÉGET
BEVEZETÉSA lupus nephritis (LN) a szisztémás lupus erythematosus (SLE) súlyos szövődménye, amelyet immunkomplexek vagy autoantitestek lerakódása a glomeruláris bazális membránban, majd gyulladásos sejtek felszaporodása okoz.Vese sérülésvisszafordíthatatlan fibrózishoz vezet, ami a vesefunkció elvesztését eredményezi. Az LN-t nagy dózisú kortikoszteroidokkal és egyéb immunszuppresszív szerekkel kezelik. A betegek egyharmada ennek ellenére csökkenést mutatveseműködés, 5 százalék -10 százalék fejleszti a végstádiumotvesebetegség10 éven belül." Ezért buzgón keresik azokat a prognosztikai markereket, amelyek lehetővé teszik a kezelés időben történő fokozását vagy módosítását, akárcsak az új terápiás célpontokat. A sejtek öregedése, amelyet olyan ingerek váltanak ki, mint a telomer erózió, az oxidatív stressz és a krónikus gyulladás, végül visszafordíthatatlan növekedéshez vezet a ciklin-dependens kináz (CDK) gátlók, köztük a pl6Na fehérje (CDKN2A) felhalmozódása miatti leállás: a celluláris tudomány egyik fő jellemzője. Az öregedő sejtek metabolikusan aktívak maradnak, és számos morfológiai és fiziológiai változáson mennek keresztül, beleértve a -galaktozidáz aktivitásának és akvizíciójának növekedését egy proinflammatorikus, profibrotikus öregedéssel összefüggő szekréciós fenotípus (SASP). Noha nélkülözhetetlen a szövetek helyreállításában és újjáépítésében (pl. az embriogenezis során), a sejtek öregedése káros hatással lehet az öregedéssel összefüggő és krónikus betegségekre, valamint a rákra. pl6Nk vagy -galaktozidáz pozitív sejteket figyeltek megvese-öregedés és bizonyos vesebetegségek, valamint szövettani elváltozásokkal ésvese-értékvesztés. A -galaktozidáz pozitív sejtek jelenléte korrelált proteinuriával MRL/lprlupus-ra hajlamos egerekben; a sejtes öregedés azonban még egyértelműen kimutatható pozitív LN-ben. Itt a pl6ka előfordulásáról számolunk be. n=40) aktív LN-ben szenvedő betegek vesebiopsziáiban szereplő sejtek, és ennek összefüggése avesekárosodásés funkcionális károsodás.
Kulcsszavak:veseműködés; vesebetegségek; vese biopsziák; vesekárosodás; vese-
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESEDIALÍZIS
MÓD:Betegek és vesebiopsziákA betegeket a Cliniques Universitaires Saint-Luc (Brüsszel, Belgium) Reumatológiai Osztályán vették fel. Mindegyik megfelelt az SLE 1982-ben felülvizsgált ACR besorolási kritériumainak, és biopsziával igazolt LN-t kaptak. A formalin-fixált paraffinba ágyazott (FFPE) vesebiopsziák diagnosztikai célokra 1996. január és 2019. november között gyűjtött testmaradványok voltak. A becsült glomeruláris filtrációs ráta (eGFR) értékeit a Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration (CKD-EPI) képlet alapján számítottuk ki. A visszamaradt testanyag felhasználásához nem volt szükség a beteg beleegyezésére, összhangban a humán vizsgálatokra vonatkozó belga szabályozással.
Szövettan és immunhisztokémiaAz SLE ISN/RPS 2003 osztályozásavese-a biopsziákat, a szemi-kvantitatív szklerózis pontszámokat, valamint a National Institute of Health (NH) aktivitási indexét (AI) és a krónikussági indexet (C) vettük le az orvosi feljegyzésekből. Az immunrendszer edzését anti-CD8 (C8/144B, Dako) és anti-p16INK4 (E6H4, Roche Ventana CINtec Histology) és Picrosirius Red (PSR) festéssel 5 μm-es FFPE sorozatmetszeteken végeztük. A tárgylemezeket SCN400 szkennerrel (Leica Biosystems, Németország) vagy Pannoramic Confocal diaszkennerrel (3DHistech, Magyarország) 20-szoros nagyítással digitalizáltuk. A metszetek teljes felületének számítógéppel segített számszerűsítését a Author V2017.2 (Visi Biopharm, Dánia) segítségével végeztük. A bemutatott eredmények a pl6K- vagy CD{18}}pozitív sejtek száma szövet μm²-enként. A félkvantitatív PSR-pontszámok (skála:2-6) három (vak) pontozó medián (glomeruláris és intersticiális fibrózis) pontszámai. További részleteket az 1. online kiegészítő módszerek, az 1. online kiegészítő 1. ábra tartalmaz.statisztikai elemzésekA statisztikai elemzéseket GraphPad Prism V.9.1-en végeztük.{2}}: Mann-Whitney vagy Wilcoxon egyező pár előjeles rang tesztek kétcsoportos összehasonlításokhoz, Kruskal-Wallis többcsoportos összehasonlításokhoz és Spearman rangsor szerinti korrelációs együtthatója.
EREDMÉNYEK:p16k4-pozitív sejtek aktív LN-ben szenvedő betegek vesebiopsziájábanA p16Nk fehérjét immunhisztokémiai módszerrel értékeltükvese-a diagnóziskor vett biopsziák 40 aktív LN-ben szenvedő betegtől, beleértve az incidens nephritist (n=31) és a visszaesést (n=9). A demográfiai, biológiai és klinikai adatokat az 1.p16INkA online kiegészítő táblázat foglalja össze. pozitív sejteket mindenben kimutattunk, de a minták között jelentős eltérések mutatkoztak: gyakorlatilag semmitől az esetenként szétszórt sejtekig, az erősen pozitív területekig (lA ábra, online kiegészítő 2A-D ábra). A pl6-festődés mennyiségi meghatározása megerősítette az LN-biopsziák heterogenitását (tartomány: 1,76 × 10 ~ -260 × 10 ~, medián: 14,7 × 10- sejt/μm) (1B, C ábra). endoteliális sejtek vagy podociták a glomerulusokban, parietális hámsejtek a Bowman kapszulákban, proximális vagy disztális tubuláris sejtek és intersticiális sejtek (ID ábra). Bár a pl6-pozitív sejtek sűrűsége (per μm) szignifikánsan magasabb volt a glomerulusokban, mint intersticiumban (1C. ábra) ezek az értékek (mintánként) szignifikáns pozitív korrelációt mutattak (r=0.7591, p<0.0001)(online supplemental="" figure="" 3).="" importantly,="" pl6ka="" accumulation="" was="" not="" associated="" with="" patient="" age,="" gender,="" or="" ethnicity="" (online="" supplemental="" figure="">
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESE FERTŐZÉSÉT
A p16"K4 vesekárosodással jár a kezelés kezdetekor és 5 évvel a kezelés utánA p16INKEa pozitivitás szignifikánsan összefüggött a károsodássalveseműködés: eGFR-ben szenvedő betegek biopsziái<60 at="" the="" time="" of="" sampling="" had="" significantly="" higher="" pl6inf-positive="" cells/μm²,="" and="" conversely,="" samples="" with="" high(="">A 75. percentilis) p16a szignifikánsan alacsonyabb kiindulási eGFR-hez társult (2AB. ábra). Az eGFR-rel való kapcsolat mind a glomeruláris, mind az intersticiális pl6a esetében igaz volt (online kiegészítő 5A, B ábra). Érdekes módon, míg a magas glomeruláris p16 szignifikánsan magasabb proteinuriával (vizeletfehérje/kreatinin arány) társult, ami főként a csillogást tükrözi, de nem volt (online hajlékony sérülés, intersticiális pl6ka mentális ábra 5C,D). Ellentétben a társulás nem járt szegényekkelveseműködésszisztémás betegségek pl6NK4a paraméterei, mint például a szérum anti-duplaszálú DNS antitest vagy C3 szint, vagy ISN/RPS besorolással (online kiegészítő 6A-D ábra). Enyhén (nem szignifikánsan) magasabb pl6k-értéket figyeltek meg olyan betegek biopsziáiban, akiknél hosszabb volt az SLE- és LN-diagnózis között, és a relapszusban, mint az incidens nephritishez képest (online kiegészítő 7A,B ábra). Fontos, hogy csak az incidens LN esetek elemzése erősítette meg az összefüggést a pl6 és az eGFR között (online kiegészítő 7C ábra), ami arra utal, hogy ez nem kizárólag a vesebetegség időtartamától függ. Végül, a kiindulási biopsziák magas p16Nkia-értéke alacsonyabb eGFR-értékkel is összefüggésbe hozható a kezelés után 5 évvel (de nem az évben), ami arra utal, hogy ez a rossz hosszú távú előrejelzést jelezheti.vese-evolúció (2C, D ábra).
1. ábra p16NK43-pozitív sejtek aktív LN-ben szenvedő betegek vesebiopsziáiban.(A) p16-, CD8- és PSR-festéssel rendelkező FFPE sorozatmetszetek LN-vese alapvonal-biopsziájából. Áttekintés (bal oldali panelek), közeli (jobb) p16 pozitív sejtek egy glomeruluson belül, periglomeruláris CD{7}}pozitív sejtek és kollagénlerakódások ugyanannak a glomerulusnak a Bowman-kapszulájában és környékén. (B) A p16xa mennyiségi meghatározása (pozitív sejtek/μm², amely a minták közötti heterogenitás mértékét mutatja. (C) A p16 mennyiségi meghatározása< （positive="" cells/um²）="" in="" glomerular="" vs="" interstitial="" areas="" of="" the="" same="" samples.p-value:="" wilcoxon="" matched-pair="" signed-rank="" test.="" (d)="" representative="" image="" from="" a="" sample="" showing="" p16-positive="" cells="" within="" glomeruli="" (#),="" in="" bowman's="" capsules="" (filled="" star),="" proximal="" tubules(filled="" arrow),="" distal="" tubules(arrow)="" and="" dispersed="" in="" the="" interstitium="" (arrowhead).ffpe,="" formalin-fixed="" paraffin-embedded;="" ln,="" lupus="" nephritis;="" psr,="" picrosirius="">
A p16NK43 összefüggésben áll a vese CD8* T-sejt-infiltrációjával és a p16Ma fibrózissalKimutatták, hogy a CD8tT-limfociták a domináns immunsejttípusok, amelyek beszivárognak az LN vesébe, és jelenlétük avesebetegségsúlyosság Azt találtuk, hogy a pl6-nagy biopsziák szignifikánsan magasabb CD8t T-sejt-infiltrációt mutattak (3A. ábra). Szignifikánsan összefüggésbe hozhatók a fokozott fibrózissal is: a kollagénnel
a lerakódás, amit a PSR-festés félkvantitatív pontszámai, valamint a szklerózis és az NH CI egy neuropatológus által megadott pontszámai tükröznek (3B-D ábra). Ezzel szemben az NIH AI pontszámok nem különböztek szignifikánsan a p16INK4a csoportok között (az adatokat nem mutatjuk be). Érdekes módon a szövetmetszetek vizsgálatakor azt vettük észre, hogy bizonyos LN biopsziákban térbeli együttoszlásnak tűnt az erős pl6k-festődés (amely általában glomeruláris volt) és a csoportosodott CD{7}}pozitív (leggyakrabban periglomeruláris) sejtek között (ábra IA, online kiegészítő 2. ábra). Mi tehát. számszerűsítette az egyes glomerulusok körül 30 μm-es sugarú körben elhelyezkedő CD8* T-sejtek számát, a Bowman-kapszula vastagságát és a benne lévő pl6k-pozitív sejtek számát (1. online kiegészítő ábra). Ezt a három sorozatos metszeten látható összes glomeruluson elvégezték, minden mintán. A magas pl6K4-pozitív sejtfelhalmozódást mutató glomerulusok szignifikánsan magasabb perigo-macularis CD8 T-sejteket mutattak (3E. ábra), valamint megnövekedett a Bowman-kapszulák vastagsága, ami glomeruláris fibrózist tükröz (3F. ábra).
VITAEz az első bizonyíték a betegek nagy sorozatában, hogy a pl6Na, a sejtes öregedés egyik fő ismertetőjele, összefüggésben áll a betegség súlyosságával az LN-ben. A pl16 fehérje IHC-jét széles körben használják ex vivo öregedés értékelésére, és más betegségek súlyosságával is összefüggésbe hozható.vese-A pl{0}}pozitív sejtek szelektív eliminációja az öregedés és az indukált nefropátia egérmodelljeiben emellett kimutatták, hogy enyhíti a fibrotikus elváltozásokat és javítjaveseműködés”, ami kulcsszerepet sugall ebbenvese-patogenezise. Nem ismert, hogy miért fordulhat elő sejtöregedés az LN-ben. Az LN vese gyulladásos, oxidatív környezete sejtstressz forrása lehet. Számos proinflammatorikus faktor szerepet játszik az öregedés indukciójában,14 beleértve az interferon-B3-at is, ami összefüggésbe hozható az SLE15-ben szenvedő betegek csontvelői mezenchimális őssejtjeinek öregedő fenotípusával.Míg tanulmányunk rávilágít a pl6-pozitív sejtek bősége és az LN súlyossága közötti szignifikáns összefüggésre, a sejtek öregedését jelző további markerek használata egy nagyobb kohorszban elengedhetetlen lesz a LN-ben való relevanciájának megerősítéséhez. Még mindig meg kell vizsgálni, hogy a sejtek öregedése hozzájárul-e a betegség progressziójához (vagy egyszerűen csak szövetkárosodást tükröz-e), és hogyan. Káros hatást fejthet ki az öregedő sejtekre jellemző profibrotic, proinflam-matory secretom (SASP) keresztül. Ezzel a hipotézissel összhangban szoros térbeli eloszlást írunk le a pl6Nk pozitív sejtek, a fibrózis és a CD8* T sejt infiltráció között az LN vesékben. Egy másik patogén mechanizmus magában foglalhatja a funkcionálisan inkompetens sejtek felhalmozódását, pl.vese-progenitor sejtek (RPC, a parietális hámsejtek egy része, amely a glomerulusok Bowman-kapszulájában található).'" Míg az egészséges RPC-k a glomeruláris és tubuláris struktúrákat regenerálják, köszönhetően szaporodási és differenciálódási képességüknek.vese-sejtek alhalmazaiban az „öregedett RPC-k akadályozhatják a szövetek helyreállítását.” Végül, bár a SASP különösen alkalmas az immunrendszer (beleértve a CD8t T-limfocitákat)88 az elöregedő sejtek eltávolítására, az utóbbi felforgathatja a folyamatot azáltal, hogy gátolja. cyto lyic celk." Feltételezték, hogy az öregedő sejtek perzisztenciája (az immunválasz túlerősödése vagy gátlása miatt) a pozitív és a negatív hatás közötti egyensúlyt dönti el." További in vitro kísérletekre lesz szükség a A pl6Nk-pozitív sejtek szerepe az LN patogenezisében. Ennek fontos következményei lehetnek a terápia szempontjából, mivel az első nyílt kísérleti vizsgálat a dasatinib és a kvercetin (DQ) szenolitikus gyógyszerekkel ígéretes eredményeket mutatott az idiopátiás tüdőfibrózis és a diabéteszes vesebetegség terén.Végül a magas kiindulási pl6INk4 és a károsodott kapcsolatveseműködés5 évvel a kezelés megkezdése után azt sugallja, hogy ez a betegség súlyosságának ígéretes előrejelzője lehet. Érdekes lenne felmérni a pl6-ot és a kapcsolódó markereket (fibrózis és CD8 T-sejt-infiltráció) az 1-éves követési biopsziákban, valamint egy nagyobb kohorszban, mivel ezeknek a markereknek az evolúciója az alapvonaltól a Az lév jobban tükrözheti a kezelésre adott választ, mint bármelyik időpont önmagában.
