Az echinakozid HPLC meghatározása Cistanche Herba vizes kivonatában
Jul 21, 2025
Absztrakt: Cél: HPLC-módszert dolgoztak ki a Cistanche deserticola vizes kivonatában található echinakozid meghatározására. Módszerek: Az echinakozidot HPLC-vel határoztuk meg. Az elválasztást Inertsil ODSSP C18 oszlopon acetonitrilből (A) és 0,4%-os foszforsavoldatból (B) álló mozgófázissal gradiens eluálással végeztük. A detektálási hullámhosszt 333 nm-re állítottuk be, és az oszlop hőmérséklete 30 °C volt. Az áramlási sebesség 1,0 ml·perc-1, az injekció térfogata 10 μL volt. Eredmények: Az echinakozid lineáris kapcsolata a 44,93977-539,2764 ug ·m koncentrációtartományon belül jó volt (r=0.9998). A megtérülések 94,59%-105,31% voltak (RSD= 2.93%,n=9). A Cistanche herba vizes kivonatának echinakozid tartalma 15.527, 7.347, 12.267 mg·g-1
Következtetés: A jól megismételhető HPLC módszer pontos, egyszerű és megvalósítható. Alkalmas echinakozid meghatározására a Cistanche deserticola vizes kivonatában.
Kulcsszavak: HPLC; water extract of Cistanche deserticola; echinakozid; a tartalom meghatározása
A Cistanche deserticola a hagyományos kínai gyógyászatban a klinikai gyakorlatban általánosan használt tonik, és a "sivatagi ginzeng" hírneve. A Kínai Gyógyszerkönyv 2015-ös kiadásában szereplő Cistanche deserticola a Cistanche deserticola YC Ma vagy Cistanche tubulosa (Schenk) Wright Orobaceae növény szárított, pikkelyes, húsos szára. Meleg természetű, édes-sós ízű, a vese és vastagbél meridiánjaihoz tartozik. Tonizálja a vese yangot, jótékony hatással van az esszenciára és a vérre, nedvesíti a beleket és enyhíti a székrekedést [2].
Sivatagi ginzeng
A "Shennong Materia Medica Classic" kijelenti, hogy "táplálja a középsőt, táplálja az öt belső szervet, erősíti a jint és táplálja az esszenciát". A Cistanche deserticola főként fenil-etanol-glikozidokat, iridoidokat és glikozidokat, lignánokat és glikozidokat, poliszacharidokat, észtereket és alkaloidokat tartalmaz [3]. A fenil-etanol-glikozidok a Cistanche deserticola fő aktív komponensei, ezek közül az echinacea és a medencepart a Cistanche deserticola azonosításának és tartalmának meghatározásának indikátorkomponensei a kínai gyógyszerkönyvben.
A fenil-etanol-glikozid a Cistanche deserticola fő aktív összetevője
Farmakológiai tanulmányok [4] azt mutatják, hogy a Cistanche deserticola különféle farmakológiai hatásokkal rendelkezik, például nedvesíti a beleket és enyhíti a székrekedést, védi a májat, ellenáll a csontritkulásnak, antioxidáns, öregedésgátló és fáradtsággátló hatású. A Cistanche deserticola vizes kivonata elősegítheti az osteoblasztok csontmorfogenetikus protein 2 génjeit patkányokban, valamint a tartarát-rezisztens savas foszfatázt és az oszteokalcint a petefészek-eltávolított egerek szérumában, valamint a Smad1 és Smad5 géneket és transzformáló növekedési faktorokat a csontvelőben{, stb. [5-6]. Az echinozid elősegítheti az oszteoblasztok proliferációját és elősegítheti a csontvelői mezenchimális őssejtek oszteoblasztokká történő differenciálódását in vitro [7-9].
Echinozid, a Cistanche deserticola fő kémiai összetevője
Kattintson ide a Natural Cistanche Echinacoside termékek megtekintéséhez
【Kérjen többet】 E-mail: xue122522@foxmail.com /WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Az elmúlt években számos jelentés született a Cistanche deserticola alkoholos kivonatában és összetett készítményeiben az echinakozid és polizid tartalom meghatározásáról [10-12], de a Cistanche deserticola vizes kivonatának indikátor komponensek tartalmának meghatározásáról kevés jelentés született. Ebben a vizsgálatban nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát (HPLC) alkalmaztak a Cistanche deserticola vizes kivonat echinakozid tartalmának meghatározására.
1. Anyag
1.1 Berendezés
LC-20AT nagy teljesítményű folyadékkromatográfia, SPD-20A detektor, SIL-20A automatikus mintavevő, CTO-10ASvp oszlophőmérséklet-doboz, LCsolution folyadékkromatográfiás munkaállomás, Shimadzu Corporation of Japan; MES125P-OCE-DU elektronikus analitikai mérleg, Sartorius, Németország; SHZ-D (III) keringető víz többcélú vákuumszivattyú, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.
1.2RC2BSO25 rotációs elpárologtató hűtőcirkulációs rendszer, RV10DS96 rotációs elpárologtató, IKA, Németország; DK-S26 Elektromos termosztatikus vízfürdő, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR sorozatú ultra-tiszta vízgép, Sichuan Youpu Ultra Pure Technology Co., Ltd.
1.2 Gyógyászati anyagok és reagensek
Meat Rong gyógyászati anyag, a Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Slices Co., Ltd.-től vásárolt, tételszám: 18010011806001, 181001. A Leobaceae Cistanche deserticola nevű növény szárított, pikkelyes, húsos szárát a Third Affiming Chinese Herbalist Kórházi Kórházi Egyetem vezetője azonosította. a Hagyományos Kínai Orvoslás A Kuangcsou Hagyományos Kínai Orvostudományi Egyetem Harmadik Társult Kórházának Gyógyszervizsgáló helyiségében tárolják; Echinozid referenciaanyag, tartalom 89,7%, Kínai Élelmiszer- és Gyógyszerellenőrzési Intézet, tételszám: 111670-201706; Az acetonitril kromatográfiailag tiszta (Merck, Németország); A metanol és a foszforsav analitikailag tiszta (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); A víz rendkívül tiszta víz.
2. Módszerek és eredmények
2.1 Vízkivonat készítése Cistanche deserticolából
Vegyük a cisztanche port, adjunk hozzá 10-szeres mennyiségű desztillált vizet, melegítsük és forraljuk, hogy kétszer extraháljuk, minden alkalommal 1 órán keresztül. Szűrjük, egyesítsük a szűrletet, és forgó bepárló segítségével töményítsük be a szűrletet 0,100 g · ml-1 nyers gyógyszertartalomra. Készenléti állapothoz 4 fokon tárolandó. 2.2 Kromatográfiai feltételek és rendszeralkalmasság Kromatográfiás oszlop: InertsilODS SPC18 oszlop (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); Mozgófázis: acetonitril (A) - 0.4%-os foszforsav oldat (B), gradiens elúció: 0-5 perc, 17% A; 5-25 perc, 20%A; 25-30 perc, 17%A; Érzékelési hullámhossz: 333 nm; Oszlop hőmérséklet: 30 fok ; Áramlási sebesség: 1,0 ml · min-1; Befecskendezési térfogat: 10 μL. Ilyen kromatográfiás körülmények között az echinacea csúcsai és a szomszédos komponensek közötti felbontás nagyobb, mint 1,5, és az oszlopok elméleti száma nem lehet kevesebb 4000-nél az echinacea csúcsok esetében. A kromatogramot az 1. ábra mutatja.
1. ábra Az echinakozid(A) és a Cistanche herba(B) vizes kivonat HPLC-kromatogramja
2.3 Az oldat elkészítése
2.3.1. Összehasonlító oldat
Mérjünk ki megfelelő mennyiségű Echinacetin referenciaanyagot, mérjük le pontosan, helyezzük egy 10 ml-es mérőlombikba, adjunk hozzá metanolt, hogy feloldódjon, és 898,794 Echinacetint tartalmazzon milliliter μG referenciaoldatban, 4 fokon, készenléti állapotban tárolva.
A Cistanche deserticola echinosideája
2.3.2 Tesztoldat
Pontosan mérjünk ki 2,0 ml Cistanche deserticola vizes kivonatot, párologtassuk be vízfürdőben, oldjuk fel metanolban, állítsuk állandó térfogatra egy 10 ml-es mérőlombikban, és jól rázzuk össze . 0.22 μm mikroporózus membránszűréssel, nevezetesen.
2.4 Lineáris kapcsolat vizsgálata
Pontosan mérjünk ki 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 2,50 és 3,00 ml-t a 2.3.1. pont szerinti referenciaoldatból, és tegyük egy 5 ml-es mérőlombikba, adjunk hozzá állandó térfogatig metanolt, és jól rázzuk össze, hogy a gradiens koncentrációja 44,9397,8,948,8,9397,8,8. 359,5176, 449,3970 és 539,2764 μG · mL-1 referenciaoldat, 0,22 μM Mikroporózus membránszűrés. Végezze el a meghatározást a 2.2. pontban leírt kromatográfiás körülményeknek megfelelően, és jegyezze fel a csúcsterületet. A referenciaanyag tömegkoncentrációját használva abszcisszaként (X, μ G · mL-1), a csúcs területe az ordináta (Y), és megkapjuk a lineáris regressziós egyenletet: Y=13185.0X-32273,0, r=0.9998. Az eredmények azt mutatták, hogy az echinacea 47,6439 μ-től 24,6439 μ-ig terjedt. A lineáris összefüggés a g · mL-1 koncentrációtartományon belül jó.
2.5 Precíziós teszt
Vegyünk 539,2764 μG · mL-1 referenciaoldatot, fecskendezzük be a mintát folyamatosan 6-szor a 2.2. pont szerinti kromatográfiás körülményeknek megfelelően, és jegyezzük fel a csúcsterületet. Eredmények: Az echinacea csúcsterületének RSD-je 1,81% volt, ami a műszer jó pontosságát jelzi.
2.6 Stabilitási vizsgálat
Mérjünk ki pontosan 2,0 ml Cistanche deserticola vizes kivonatot, pároljuk szárazra vízfürdőben, oldjuk fel metanolban, 10 ml-es mérőlombikban állítsuk állandó térfogatra, jól rázzuk fel, 0,22 μ Mikroporózus membránnal szűrjük le, mintákat fecskendezünk be a meghatározáshoz 0, 2, 2, 4 óra és 8, 2, 42 óra között. feltételeket a 2.2-ben, és rögzítse a csúcsterületet. Eredmények: Az echinacea csúcsterületének RSD-je 1,16% volt, ami azt jelzi, hogy a tesztoldat 24 órán belül jó stabilitást mutatott.
2.7 Ismételhetőségi vizsgálat
Pontosan mérjünk ki 6 adag 2,0 ml-es Cistanche deserticola vizes kivonatot, készítsünk párhuzamosan 6 adag vizsgálati oldatot a 2.3.2. pontban leírt módszer szerint, fecskendezzünk be mintákat a meghatározáshoz a 2.2. pontban leírt kromatográfiás feltételek szerint, és jegyezzük fel a csúcsterületet. Eredmények: Az echinacea tömegkoncentrációjának RSD értéke 1,28% volt, ami azt jelzi, hogy a módszer jó ismételhetőségű.
Cistanche deserticola kísérlet
2.8 Minta hozzáadása helyreállítási teszt
Pontosan mérjünk ki 9 adag 1,0 ml-es Cistanche deserticola vizes kivonatot, adjunk hozzá 0,8, 1,0 és 1,2 ml referenciaoldatot (101,552 mg · ml - 1), párologtassuk be vízfürdőben, oldjuk fel metanolban, és öntsük térfogatra egy ml-es mérőlombikban; Jól rázza fel, 0,22 μ Szűrje m mikropórusos szűrőmembránnal a nagy, közepes és alacsony koncentrációjú vizsgálati oldat elkészítéséhez. Minden koncentrációból készítsünk 3 részt párhuzamosan, mérjük meg a 2.2. pontban leírt kromatográfiás körülményeknek megfelelően, jegyezzük fel a csúcsterületet, és számítsuk ki a minta hozzáadásának visszanyerését. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza.
2.9 A mintatartalom meghatározása
Mérjünk ki pontosan 3 adag 2,0 ml-es Cistanche deserticola vizes kivonatot, pároljuk szárazra vízfürdőben, oldjuk fel metanolban, 10 ml-es mérőlombikban állítsuk állandó térfogatra, rázzuk fel jól, 0,22 μ Mikroporózus membránnal szűrjük meg, mérjük ki a kromatográfiás körülmények szerint, és számoljuk ki a 2-es borsóterületet. Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza.
1. táblázat: Az echinakozid visszanyerési tesztjeinek eredményei
2. táblázat Az echinakozid-tartalom meghatározásának eredményei a Cistanche herba vizes kivonatában
3. Megbeszélés
3.1 A vizsgálati cikk elkészítési módja
A Cistanche deserticola vizes kivonata különféle kémiai komponenseket, például fenil-etanol-glikozidokat és poliszacharidokat tartalmaz, amelyek bizonyos interferenciát okoznak a vizsgálandó komponensekkel. Ez a tanulmány két különböző koncentrációjú oldószert, az 50%-os metanolt és a metanolt vizsgálta. Az eredmények azt mutatták, hogy a teszttermék kromatogramján a csúcsok elválasztó hatása 50% metanolt alkalmazva oldószerként gyenge volt az echinacea és a szomszédos komponensek között. Oldószerként metanolt használva az echinacea-glikozid csúcs felbontása jó, és nincs interferencia más szennyeződéscsúcsoktól. Ezért a metanolt választottuk a vizsgálati oldat oldószereként. Oldószerként metanolt használva a Cistanche deserticola vizes kivonatát vízfürdőben szárazra pároltuk. Két kezelési módszert alkalmaztunk: metanolos oldást, állandó térfogatú rázatást és metanolos ultrahangos (10 perc) oldást. Az eredmények azt mutatták, hogy nincs szignifikáns különbség a két módszer között. Ezt a módszert választottam a tesztoldat elkészítéséhez a metanolos oldás és az állandó térfogatú rázás egyszerű működése miatt.
Kínai gyógynövény-cistanche
3.2 A mozgófázis kiválasztása
Ebben a tanulmányban a kínai gyógyszerkönyvben (I. kötet) (2015) a Cistanche deserticola tartalom meghatározásához használt mozgófázisra (metanol-0,1% hangyasav) hivatkoztak. Az eredmények azt mutatták, hogy az echinacea glikozid csúcsa kiszélesedett, és egy élvonalbeli jelenség mutatkozott, ami összefüggésben lehet a mozgófázis gyenge elúciós képességével; A vonatkozó irodalomra hivatkozva [12-13] acetonitril-0,5%-os ecetsavat használtunk mozgófázisként, de az echinacea csúcsformája gyenge volt, és farokhatás is előfordult. A mozgófázis pH-értékét figyelembe véve végül 0,4%-os acetonitril-foszforsavat használtunk mozgófázisként. Ennek eredményeként az echinacea csúcsok elméleti lemezszáma nagyobb volt, mint 4000, és az echinacea és a szomszédos komponenscsúcsok közötti felbontás nagyobb, mint 1,5. A csúcs alakja szimmetrikus volt, a szennyezőcsúcsok zavarása nélkül, és az alapvonal stabil volt. Ezért ebben a vizsgálatban acetonitril-0,4% - 0.4% foszforsavat használtunk kromatográfiás mozgófázisként az echinacea-tartalom meghatározásához. Ebben a vizsgálatban HPLC módszert alkalmaztunk az Echinacea meghatározására Cistanche deserticola vizes kivonatban.
Cistanche kivonat por
A módszer egyszerű, pontos és reprodukálható. Alkalmas echinacea meghatározására cistanche deserticola vizes kivonatban, és minőségellenőrzési módszerként használható a cistanche deserticola vizes kivonathoz. Ez a vizsgálat csak az echinacea tartalmát határozta meg a Cistanche deserticola vizes kivonatában. A jövőben tervezik a Cistanche deserticola összetett főzet echinacea tartalmának meghatározását, hogy feltárják a különböző tényezők echinacea tartalomra gyakorolt hatását, referenciaként szolgálva a Cistanche deserticola tartalmú főzet minőségellenőrzéséhez.
