A fenil-etanol-glikozid bioszintézisben részt vevő hidrogén-peroxidra reagáló EST-ek azonosítása Cistanche Salsa sejtkultúrában

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Absztrakt
A hidrogén-peroxid hatékony abiotikus kiváltó, amely másodlagos metabolit bioszintézist indukálhat a növényekben. Megmutatjuk, hogy egy sótűrő gyógynövény sejtszuszpenziós tenyészetébenCistanchesalsa, bioaktív komponensek előállításafeniletanoidglikozidok(PeGs) emelkedett a H2O2 kezelés után. A PeG-kkel kapcsolatos gének azonosítása(feniletanoidglikozidok)A H2O2 által befolyásolt bioszintézis során elkészítettük a H2O2-re reagáló gének szuppressziós szubtraktív hibridizációs könyvtárát egyCistanchesalsasejtvonalat, és 105 expresszált szekvencia címkét (EST) és 85 gént azonosított. Az EST könyvtár funkcionális annotációi és génontológiai elemzései különböző stresszválaszokhoz, másodlagos metabolitok bioszintéziséhez és transzkripciós szabályozáshoz kapcsolódó géneket mutattak ki. Közülük két, a PeG-hez kapcsolódó gént azonosítottunk(feniletanoidglikozidok)bioszintézis útvonal (4-kumarát koenzim A ligáz és cinnamát 4-hidroxiláz), valamint két WRKY típusú transzkripciós faktor. A kiválasztott gének expresszióját a H2O2 kezelés után RT-qPCR-rel elemeztük. A PeG korai megnövekedett transzkripciója(feniletanoidglikozidok)bioszintézis útvonal gének a kezelés után felfedték, hogy a H2O2 PeG-ket indukált(feniletanoidglikozidok)bioszintézis kulcsgénjeinek felszabályozása révén.
További kulcsszavak: cinnamát-4-hidroxiláz, 4-kumarát koenzim A ligáz, szubtraktív hibridizáció elnyomása.Cistanchesalsa. feniletanoidglikozidok.

Bevezetés

Cistanchesalsaegy évelő növényi parazita a Haloxylos ammodendrun gyökerén, és Nyugat-Kína sivatagi területén nő. Évszázadokig,Cistanchefajt hagyományos gyógynövényként használták (Wang et al. 2012). A bioaktív összetevőkfeniletanoidglikozidok(PeG-k), amelyek figyelemre méltó hatással vannak a reaktív oxigénfajták (ROS) kiürülésére, a sugárvédelemre, az immunitás fokozására és az öregedésgátlásra (Nan et al. 2013). PeGs(feniletanoidglikozidok)bioszintézisbenCistanchefenilalaninból indul be (1. ábra, kiegészítés), és a szintetizált kávésav tovább glikozilálódik, hogy különféle PeG-eket képezzen.(feniletanoidglikozidok)(Wang et al. 2012). Három fő PeG(feniletanoidglikozidok)Az echinakozid, az akteozid és a 2'-acetil-lakteozid a legaktívabb komponensek.Cistanche(Kobayashi et al. 1984). Annak érdekében, hogy javítsák tartalmukatCistanchesejttenyészetet, különféle kiváltókat teszteltek, beleértve a kitozánt, a putreszcint, az Ag plust és az ozmotikus stresszt (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng és mtsai 2005, 2006, Liu és mtsai 2007, Liu és Cheng 2008). A PeG-ekben részt vevő gének azonban(feniletanoidglikozidok)bioszintézisbenCistanche, főleg a fenilalanin metabolizmus útvonalának génjeit ritkán azonosították. Csak egy fenilalanin ammónia-liázt (PAL) kódoló gént azonosítottak a közelmúltban a Cistanche deserticolában (Hu et al. 2011). Más gének kódolják például a cinnamát-4-hidroxilázt (C4H), amely katalizálhatja a cinnamát kumársavvá történő átalakulását, és a 4-kumarát koenzim-A ligázt (4CL), amely a lignin és a flavanoidok nélkülözhetetlen génje. bioszintézisben nem találhatók megCistanche.
A sejttenyészetet használtukCistanchesalsaa PeG-ek tanulmányozására(feniletanoidglikozidok)bioszintézis és a kapcsolódó gének expressziója. Megvizsgáltuk egy hatékony H2O2 kiváltó hatását is a PeG-ekre(feniletanoidglikozidok)bioszintézis. Továbbá a PeG-ekben szerepet játszó korai reagáló gének megtalálása(feniletanoidglikozidok)bioszintézis során szuppressziós szubtraktív hibridizációt (SSH) hajtottunk végre, hogy felállítsuk a H2O2-reszponzív gének cDNS-könyvtárát.

1. ábra: RT-qPCR-rel meghatározott relatív génexpresszió H2O2 kezelés után. CsWRKY1 - WRKY transzkripciós faktor (Contig07), CsC4H1 - cinnamát 4-hidroxiláz (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumarát: ligáz (Contig03), CsHSP1 - hősokkfehérje 70 kDa (Contig 01) és CsSOD1 - szuperoxid-diszmutáz (Contig16). A sejteket 80 ug dm-3 H2O2-vel kezeltük folyékony tápközegben 2 órán keresztül, és az expressziót összehasonlítottuk egy vízzel kezelt kontrollal. Azt jelenti, plusz - SD három biológiai ismétlés; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Anyagok és metódusok

A CS2001 sejtvonalat a szirmokból hozták létreCistanchesalsa(CA Mey.) Beck Neimenggu tartományban gyűjtötte és szubkulturált. A tenyésztési módszer hasonló volt egy korábban publikált protokollhoz (Liu et al. 2007). Általában szilárd Murashige és Skoog (1962; MS) táptalajt használtak a szubkultúrához és folyékony táptalajt a PeG-ekhez.(feniletanoidglikozidok)bioszintézis (ez a módosított MS táptalaj volt, kiegészítve 30 g dm-3 glükózzal és 20 mg dm-3 indol-3-ecetsavval). H2O2-kezeléshez 50 ± 0,2 g sejtet gyors növekedési periódusban, rendszerint 20-30 nappal azután, hogy a szilárd táptalajba tenyésztették, 50 cm3-es folyékony táptalajba oltottak be 250 cm3-es Erlenmeyer-lombikban. és sötétben tenyésztjük különböző H2O2-koncentrációkkal vagy anélkül. A PeG-ek(feniletanoidglikozidok)A 10 napos H2O2-indukció után mért tartalmat egy korábban publikált módszerrel (Liu et al. 2007) elemeztük, amely fordított fázisú, nagy teljesítményű folyadékkromatográfián alapul, metanolos gradiens elúcióval.

A sejteket 2 órával a H2O2 kezelés után szűrőpapírral Büchner tölcsér segítségével gyűjtöttük ki a táptalajból, majd folyékony nitrogénben lefagyasztottuk és porrá őröltük. Minden 2 g sejtport lizáltunk 1 cm3 2-merkaptoetanol és 1 cm3 200 g dm{{10}} szarkozil keverékével, és 8 cm3 GTC puffert (5 M guanidinium-izotiocianát, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiokarbamid és 10 mM ditiotreitol). A sejteket ezután jégen 15 percig inkubáltuk, majd 1/3 térfogat 8,5 M CH3COOK-ot (pH 6,0) adtunk hozzá, és a sejteket jégen inkubáltuk 15 percig, majd centrifugáltuk 15 000 g-vel 15 percig. . A felülúszót azonos térfogatú izopropanolhoz adtuk a teljes RNS kicsapása céljából. A teljes RNS-t tovább tisztítottuk RNeasy mini kittel (Qiagen, Hilden, USA) a gyártó utasításai szerint. Messenger RNS-t izoláltunk a teljes RNS-ből Oligotex mRNS midi kit (Qiagen) segítségével.

feniletanoidglikozidokban benCistancheSalsa

A kontroll és a 30 százalékos H2O2- által kiváltott sejtmintákból 2 órával az előhívás után SSH-könyvtárat állítottunk elő egy PCR-szelektált cDNS-kivonó kit (Clontech, Mountain View, USA) segítségével. A könyvtár felépítéséhez a termékeket külön-külön tisztítottuk géltisztító készlettel (Qiagen), és pGEM vektorba klónoztuk egy TA klónozó készlet (Tiangen, Peking, Kína) segítségével. A független klónokból származó plazmidokat izoláltuk és T7 primerrel szekvenáltuk. A könyvtárból származó összes expresszált szekvencia tag (EST) szekvenciát (a vektorszekvenciákat eltávolítva) felhasználtuk a CAP3-mal való folyamatos összeállításhoz (http://doua.prabi.fr/software/cap3). Az EST-ket kontig és szingli csoportokba csoportosítottuk; homológiakeresésre használták az NCBI BLASTx programjával (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). A szekvenciákat ezután megjegyzésekkel látták el, elemezték, és a génontológia (GO) feltételei szerint osztályozták a Blast2GO (http://www.blast2go.com) segítségével.
A valós idejű kvantitatív polimeráz láncreakciót (RT-qPCR) Bustin és mtsai. (2009). A cDNS-mintákat PrimeScript RT reagenskészlettel (Takara, Dalian, Kína) 0,5 ug teljes RNS-ből szintetizáltuk. Az RT-qPCR-t SYBR Premix Ex Taq II és ROX plus készletekkel (Takara) végeztük egy ABI 7300 valós idejű PCR rendszeren (Applied Biosystems, Foster City, USA), három technikai ismétléssel. Az alapozókat az online Primer3 szoftverrel tervezték a Takara által biztosított utasítások szerint; Az ebben a vizsgálatban használt primerek az 1. táblázatban vannak felsorolva. A génexpressziót 18S RNS-re normalizáltuk, melynek expressziója minden mintában stabil volt.

Az eredményeket az R 3.1.1-es verziójával elemeztük, a különbségek szignifikanciáját Student-féle t-próbával igazoltuk.

Eredmények

A hidrogén-peroxid indukálta mindhárom fő PeG bioszintézisét(feniletanoidglikozidok)ban benCistanchesalsaszuszpenziós sejteket (1. táblázat), de nincs nyilvánvaló hatása a sejtnövekedésre (S2. ábra). Az echinakozid-tartalom már az 10 ug dm-3 H2O2-kezelést követően emelkedett (P < 0.05),="" nagyobb="" növekedést="" a="" 20="" ug="" dm-es="" kezelés="" után="" regisztráltunk.="" -3="" h2o2="" kezelés="" (p="">< 0,01),="" és="" a="" legnagyobb="" növekedés="" a="" 40,="" 80="" és="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" kezelések="" után="" volt.="" hasonló="" eredményeket="" mutattak="" az="" akteozid="" esetében="" is,="" de="" annak="" tartalma="" a="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-kezelés="" után="" érte="" el="" a="" csúcsot.="" a="" 2'-acetil-lakteozid="" bioszintézise="" kevésbé="" volt="" érzékeny="" a="" h2o2-kezelésre;="" 40="" ug="" dm-3="" feletti="" h2o2-koncentrációnál="" szignifikánsan="" nőtt="" a="" tartalma="" (p="">< 0,05).="" a="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" kezelés="" után="" mindhárom="" fő="" peg="">(feniletanoidglikozidok)szignifikánsan nőtt (P < 0,01)="" a="" kontrollhoz="" képest.="" ezért="" ezt="" a="" koncentrációt="" alkalmaztuk="" a="" további="">
A H2O2 által fokozottan szabályozott korai reagáló génekkel dúsított könyvtár létrehozásához cDNS-t használtunkCistanchesalsaszuszpenziós sejteket 80 ug dm -3 H2O2-vel 2 órán át kezelve. Az SSH-könyvtárban található 129 rekombináns klón egyszeri szekvenálása 105 tiszta EST-t eredményezett a vektorszekvencia kizárása után. Ezeket az átlátszó EST-ket a CAP3 használta fel az összeállításhoz, és 18 kontigot és 67 szinglitont generált (2. táblázat). Így 85 gént izoláltak ebben a könyvtárban. A tiszta 105 EST átlagos hossza 527 bp volt, ami megfelelő a szekvencia hasonlóságon alapuló funkcionális osztályozáshoz.

feniletanoidglikozidokban benCistancheSalsa

A könyvtárban található mind a 85 gént a BLASTx lekérte a GenBank nem redundáns fehérje adatbázisával szemben a szekvencia hasonlóság érdekében (E-érték kisebb vagy egyenlő, mint 0.001). Huszonegy gén nem mutatott találatot az adatbázisban, ezek specifikusak lehetnekCistanchesalsa. A BLASThits eredményeit a Blast2GO szoftverbe importáltuk a további GO és KEGG útvonal dúsítási elemzésekhez. A 64 BLAST-találattal rendelkező gén közül 50-et más fajokból származó homológ gének leírása szerint jelöltek meg. Az annotált géneket a BLAST találatok leírása szerint nevezték el. A GO-elemzés (3. ábra kiegészítés) azt mutatja, hogy ezen 50 gén között 14 gén vett részt az ingerekre adott válaszokban, és több mint 30 gén kapcsolódik az anyagcsere folyamatokhoz (1. és 2. táblázat). Ezek közül a gének közül két PeG bioszintézis útvonal génhomológot izoláltunk a várakozásoknak megfelelően: a 4-kumarát koenzim A ligázt (Cs4CL1: Contig03) és a cinnamát 4-hidroxilázt (CsC4H1: Contig14). Továbbá RT-qPCR-t végeztünk a könyvtárból származó gének indukált expressziójának megerősítésére a H2O2 kezelés után.

Annak igazolására, hogy az SSH-könyvtárból azonosított esszenciális gének reagáltak a H2O2-kezelésre, két PeG expressziója(feniletanoidglikozidok)A kezelést követően a bioszintézis útvonalhoz kapcsolódó géneket (Cs4CL1, CsC4H1), két ROS-indukált gént (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) és egy WRKY család transzkripciós faktor-szerű gént (CsWRKY1: Contig 07) mértünk RT-qPCR-rel. H2O2-vel (1. ábra). A CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 és CsWRKY1 kifejezések több mint 15--szeresét, 3--szeresét, 45--szeresét és 4--szeresét szabályozták, rendre 2 órával a H2O2 után. kezelés. A CsHSP1 expressziója csak 1,8-szorosára változott a H2O2 kezelés után.
A H2O2 kezelés után a CsWRKY1, CsC4H1 és Cs4CL1 expressziójának időbeli lefutását RT-qPCR-rel tovább elemeztük (2. ábra). A CsC4H1 és Cs4CL1 expressziója erősen megemelkedett (több mint 80--szeresére, illetve 50--szeresére) a 16- órás kezelést követően, majd 32 óra elteltével lecsökkent. A CsWRKY1 expressziója több mint 20--szeresére emelkedett 4 órával, majd 8 órával később csökkent (2. ábra).

2. ábra: A CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) és Cs4CL1 (C) relatív expressziója különböző időpontokban 80 ug dm-3 H2O2-val végzett kezelés után. A kifejezéseket kontrollra normalizáltuk; (vízzel kezelve). Azt jelenti, plusz - SD három biológiai ismétlés; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Vita

A hidrogén-peroxid egy jól ismert növényi kiváltó, amely különféle hatásokat mutat a növényekre. A ROS-hoz hasonlóan indukálhatja a szuperoxid-diszmutázból, katalázból, peroxidázokból stb. álló ROS-eltávolító rendszert, és a só, az ozmotikus és a kiszáradás jeleként szolgál.

hangsúlyozza (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Feltételezték, hogy a növényekben a H2O2 képződést indukált másodlagos metabolit bioszintézis kíséri aCistanchesalsasejtkultúra. Ahogy az várható volt, eredményeink azt mutatják, hogy a PeGs(feniletanoidglikozidok)bioszintézis aCistanche salsasejtkultúrát indukáltunk a H2O2 kezelés után (1. táblázat). Három fő PeG tartalma(feniletanoidglikozidok)nőtt a H2O2 kezelést követően, jelezve a PeGs bioszintézisben betöltött döntő szerepét. Az SSH-könyvtárban dúsított gének tovább utaltak a PeG-ekre gyakorolt ​​​​hatására(feniletanoidglikozidok)bioszintézis indukciója beCistanche salsa.

Számos ismert H2O2-reszponzív gén, mint például az aszkorbát-peroxidáz (CISTH069, Karyotou és Donaldson 2005), a h-kinon-oxidoreduktáz (CISTH125, Bello és mtsai. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah1 et al.), és betegségrezisztencia-válasz gének (Contig10, Nanda és mtsai, 2010) gazdagodtak az SSH könyvtárban (3. táblázat, 2. táblázat, kiegészítés). A H2O2 kezelés után indukált expressziót mutató tipikus ROS-re reagáló gének némelyikét RT-qPCR is megerősítette (1. és 2. ábra), jelezve, hogy itt egy minősített SSH-könyvtár készült. Két PeG bioszintézis útvonal gén, a CsC4H1 és a Cs4CL1 is megtalálható ebben a könyvtárban, és ezt a két génexpressziót a H2O2 kezelés indukálta időfüggő módon (2. ábra). Azt sugallja, hogy a H2O2 kezelés PeG-eket indukált(feniletanoidglikozidok)bioszintézis genetikai szinten a PAL útvonal gének szabályozásán keresztül. Azonban a PAL és más downstream PeGs bioszintézis gének (Wang et al. 2012) nem voltak azonosítva az SSH könyvtárban; ez azért lehet, mert a könyvtárat nem szekvenálták megfelelően. A CsC4H1 és Cs4CL1 által kiváltott expressziók és a H2O2 kezelés utáni fokozott PeGs bioszintézis közötti összefüggést további elemzéssel kell tisztázni.

A H2O2 kezelés által indukált PAL útvonal gének mellett két WRKY család transzkripciós faktort (CsWRKY1, CsWRKY2) találtunk az SSH könyvtárban (3. táblázat és 2. táblázat kiegészítés), és a CsWRKY1 által indukált expressziót RT-qPCR igazolta. . Expressziója korábban reagált a H2O2-kezelésre, mint a PAL útvonal két génje, a Cs4CL1 és a CsC4H1 (2. ábra). Korábbi tanulmányok alapján néhány WRKY transzkripciós faktor és PAL útvonal gének együttes expresszióját figyelték meg rizsben (Gupta et al. 2012). Ezenkívül a PAL gén expressziója felfelé szabályozott egy OsWRKY03 túlzott expressziós mutánsban (Liu et al. 2005). A fent említett két WRKY család transzkripciós faktora szintén szerepet játszhat a PeG-ekben(feniletanoidglikozidok)bioszintézisbenCistanchesalsa. Érdekes módon dehidratációval kapcsolatos EST-eket (CISTH067, CISTH064) találtak az SSH-könyvtárban, ami arra utalhat, hogy a H2O2-kezelés összefüggésben volt a dehidratációra reagáló gének expressziójávalCistanchesalsaamint azt más növényeknél is megfigyelték (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Egy gibberellin (GA) jelátvitelhez kapcsolódó gént, a gibberellin receptor gid1b-szerű gént (CISTH092) azonosítottak az SSH könyvtárban, ami a GA jelátvitel és a H2O2 kezelés kapcsolatát jelenti.Cistanchesalsa, amelyet árpában is jelentettek (Bahin et al. 2011). Azonban további vizsgálatokra van szükség annak megerősítésére, hogy ezek a gének kapcsolatban állnak-e a PeG-ekkel(feniletanoidglikozidok)bioszintézis. A fent említett géneken kívül az itt felépített SSH-könyvtár BLAST-találattal vagy anélkül is bemutat géneket. Javítja a H2O2 C. salsa-ra gyakorolt ​​hatásának megértését, és először is a PeG-ek bioszintézisében részt vevő génjeinek információit szolgáltatja.

Összefoglalva, értékeltük a H2O2 hatását a PeG-ekre(feniletanoidglikozidok)indukció aCistanchesalsasejtkultúra. Az SSH könyvtárat a H2O2 kezelés után hoztuk létre, és a kiválasztott gének expresszióját RT-qPCR-rel igazoltuk. Két PeG bioszintézis útvonalhoz kapcsolódó gént és más H2O2-reszponzív gént azonosítottak. Ezek az eredmények kibővítik ismereteinket a H2O2-indukált PeG-ekről(feniletanoidglikozidok)bioszintézisbenCistanchesalsamolekuláris szintre, információt szolgáltatva a génmanipulációhozCistanchesalsasejtkultúrák a PeG-ek javítására(feniletanoidglikozidok)Termelés.

Feladó: "A fenil-etanol-glikozid bioszintézisében részt vevő hidrogén-peroxidra reagáló EST-ek azonosítása Cistanche salsa sejtkultúrában"J. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10,1007/s 10535-015-0541-év

Hivatkozások

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: A reaktív oxigénfajták és a hormonális jelátviteli útvonalak közötti áthallás szabályozza a gabonanyugalmat az árpában. - Plant Cell Environ. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Liayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: A hősokk-fehérjét (Hsp) indukáló termék által generált reaktív oxigénfajok hozzájárulnak a Hsp70 és a Hsp termeléséhez{1} }mediált protektív immunitás az Artemia franciscanában a patogén vibriók ellen. - Dev. Összeg. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H: kinon-oxidoreduktáz 1 expressziója HeLa sejtekben  hidrogén-peroxid és növekedési fázis szerepe. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: A qPCR és RT-qPCR szabványosítása. - Genet. Eng. Biotechnol. News 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola sejtszuszpenziós tenyészetek:feniletanoidglikozidokbioszintézis és antioxidáns aktivitás. - Process Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZfeniletanoidglikozidokbioszintézisbenCistanchedeserticola sejtszuszpenziós tenyészetek kitozán-elicitorral. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Az abszciszsav közvetíti a vízstressz által kiváltott földimogyoró hidrogén-peroxid-termelését. - Biol. Növény. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: A Pi54 egyetlen funkcionális blastrezisztencia gén komplex védekezési mechanizmust aktivál a rizsben. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: A fenilalanin ammónia-liáz génjének molekuláris jellemzése innenCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: A növényi reakciók vízstresszre: a reaktív oxigénfajták szerepe. - Növény jelviselkedése 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Aszkorbát-peroxidáz, a hidrogén-peroxid megkötője a glioxiszómális membránokban. - Arc h. Biochem. Biophys. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studies on the constituents ofcistanchea herba. 4. Két új fenilpropanoid glikozid, a cisztanozid-C és a cisztanozid-D izolálása és szerkezete. - Chem. Pharm. Bika. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Javításafeniletanoidglikozidokbioszintézise sejttenyészetekbenCistanchedeserticola ozmotikus stressz hatására. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Jobb felhalmozódásafeniletanoidglikozidokszuszpenziós tenyészetébe való prekurzor táplálássalCistanchesalsa. - Biochem. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, egy rizs transzkripciós aktivátor, amely a védelmi jelátviteli útvonalon működik az OsNPR1 előtt. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Átdolgozott táptalaj gyors növekedéshez és dohányszövettenyészetekkel végzett biológiai vizsgálatokhoz. - Physiol. Növény. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenil-etanolglikozidokszárából származó gyulladáscsökkentő hatásúCistancheTarim sivatagban termesztett deserticola. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktív oxigénfajok a növény-mikroorganizmus korai interakciói során. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Továbbfejlesztett gyártásfeniletanoid glikozidoksejttenyészetébe való prekurzor táplálássalCistanchedeserticola. - Process Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Továbbfejlesztett gyártásfeniletanoidglikozidokáltalCistanchedeserticola sejtek tenyésztve egy belső hurok légi szállító bioreaktorban, szitáló felszállóval. - Enzim mikrobiol. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomical and histochemical characterization of in vitro haustorium from roots of Castilleja tenuiflora. - Biol. Növény. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: A hidrogén-peroxid akklimatizálása fokozza a sótoleranciát azáltal, hogy aktiválja a védekezéssel kapcsolatos fehérjéket Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: A SALTRESPONSIVE ERF1 szabályozza a reaktív oxigénfajtáktól függő jelátvitelt a sóstresszre adott kezdeti válasz során
rizsben. - Növényi sejt 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": áttekintés. - Amer. J. álla. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS A hidrogén-peroxid lerakódási mintája a rizs levélhüvelyében sóstressz alatt. - Biol. Növény. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: A CYCLIN H1 szabályozza az aszályos stresszre adott válaszokat és a kék fény által kiváltott sztómanyitást gátolja a reaktív oxigénfajták felhalmozódását Arabidopsisban. - Plant Physiol. 162: 1030-1041, 2013.