A Jianpi Bushen Yiqi főzet hatása az immunrendszerre és a neuromuszkuláris csomópontokra EAMG egerekben

2.3 A csecsemőmirigy és a nyirokcsomók hisztomorfológiai összehasonlítása az egyes egércsoportokban

Ahogy az ábrán látható1. ábra, a csecsemőmirigy kéreg és a velő aüres kontrollcsoportaz egerek egyértelműen elhatárolódnak, rendezett sejtekkel. Ezzel szemben amodell kontrollcsoporttisztázatlan kérgi-medulláris határokat és gyér sejteloszlást mutatott. A modellcsoporthoz képest az egerek aprednizon csoportésalacsony, közepes és nagy dózisú Jianpi Bushen Yiqi főzetcsoportokviszonylag világos kérgi-medulláris határokat és sűrű, jól szervezett sejteket mutatott.

2. ábraazt mutatja, hogy az üres kontrollcsoport nyirokcsomósejtjei teljes szerkezetet és rendezett elrendezést mutattak. A kéregben elsődleges limfoid tüszők voltak láthatók, másodlagos tüszők vagy csíraközpontok nélkül. A modellcsoportban a sejtszerkezet rendezetlen volt, proliferált primer tüszők és látható másodlagos tüszők és csíraközpontok voltak. A prednizon és Jianpi Bushen Yiqi csoportok csökkent limfoid tüsző hiperpláziát mutattak.

3. táblázatazt mutatja, hogy a vak kontrollcsoporthoz képest a modellcsoportban a csecsemőmirigyben csökkent a kéreg-medulla terület aránya, és megnövekedett a csíraközpontok száma a nyirokcsomókban.P < 0,05 vagy P < 0,01). A modellcsoporthoz képest aprednizonésnagy dózisú Jianpi

 

 

 

1. ábra: A csecsemőmirigy-szövet hisztopatológiai morfológiájának összehasonlítása különböző egércsoportok között (HE-festés)

 

3. táblázat: A csecsemőmirigy kéreg-medulláris terület arányának és a nyirokcsomó-csíraközpontok számának összehasonlítása az egyes egércsoportokban

Mértékegysége: (x̄ ± s)

Csoport	n	A csecsemőmirigy kéreg/velő terület aránya	Germinális központ száma (LN-enként)
Üres vezérlőelem	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Modellvezérlés	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednizon	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Főzet Alacsony dózisú	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Főzet közepes dózisú	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Főzet nagy dózisú	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Megjegyzések:

ᵃ: P < 0,01 vs. üres kontroll

ᵇ: P < 0,05 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

Bushen Yiqicsoportok magasabb kéreg-medulla terület arányt mutattak. Minden beavatkozási csoport, beleértve a prednizont és mindhárom főzet adagot, jelentősen csökkentette a csíraközpontok számát (P < 0,01). A prednizon csoporthoz képest a főzetéalacsony és közepes dózisú csoportokmég mindig valamivel több csíraközpontot mutatott, míg anagy dózisú csoportnem volt jelentős különbség.

Megjegyzés: A fekete nyilak a nyiroktüszőkre, a piros nyilak a csíraközpontokra mutatnak.

2. ábra: A nyirokcsomószövetek hisztopatológiai morfológiájának összehasonlítása különböző egércsoportok között (HE-festés)

 

 

 

 

2.4 Th1, Th2, Th17, Treg és Tfh sejtszázalékok összehasonlítása lépsejt-szuszpenziókban

Ahogy az ábrán látható4. táblázat, az üres kontrollcsoporthoz képest amodellcsoportnőtt a Th1, Th2, Th17 és Tfh sejtek százalékos aránya, és csökkent a Treg százalék (P < 0,05 vagy P < 0,01). A modellcsoporthoz képest aközepes és nagy dózisú főzetcsoportokcsökkentette a Th1 százalékot és növelte a Treg százalékot; mindhárom főzetcsoport csökkent Th17 és Tfh százalékot mutatott. Nevezetesen aprednizon csoportcsökkentette a Treg százalékos arányát, ami aggodalmat kelt azzal kapcsolatban, hogy képes megzavarni az immunhomeosztázist.

A prednizon csoporthoz képest minden főzetcsoportban csökkent a Th2, Th17 és Tfh sejtek száma. Aközepes és nagy dózisú csoportoktovább csökkent a Th1 és megnövekedett Treg sejtek (P < 0,05 vagy P < 0,01), kiegyensúlyozottabb immunregulációt jelezve.

 

 

 

Megjegyzés: NMJ, neuromuszkuláris junction; AChR, acetilkolin receptor.

3. ábra: Az AChR morfológiájának összehasonlítása az izomcsoportok neuromuszkuláris csomópontjainál különböző egércsoportok között
(immunfluoreszcens festés, × 100)

 

4. táblázat A Th1, Th2, Th17, Treg és Tfh sejtek százalékos arányának összehasonlítása lépsejt-szuszpenziókban különböző egércsoportokban

Mértékegysége: (% , x̄ ± s)

Csoport	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Üres vezérlőelem	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Modellvezérlés	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednizon	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Főzet Alacsony dózisú	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Főzet közepes dózisú	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Főzet nagy dózisú	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Megjegyzések:

ᵃ: P < 0,01 vs. üres kontroll

ᵇ: P < 0,05 vs. üres kontroll

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs. Prednizon

ᶠ: P < 0,01 vs. Prednizon

 

 

2.5. Az AChR morfológiájának összehasonlítása az NMJ-ben az egyes izomcsoportokban

3. ábraazt mutatja, hogy az NMJ AChR-ek a vak kontrollcsoportban szerkezetileg sértetlenek voltak, és kompakt, perecszerű képződményeknek tűntek. A modellcsoportban a szemizmok, a sternocleidomastoideus, a deltoid és a tibialis elülső izomzatú NMJ-ei töredezettnek és deformáltnak tűntek, míg a rágóizmok, a bordaközti és a rekeszizom izomzata súlyosan sérült szerkezeteket mutatott. Minden intervenciós csoport eltérő mértékű javulást mutatott az AChR morfológiájában.

Ahogy az ábrán látható5. táblázat, a vak kontrollcsoporthoz képest a modellcsoport szignifikánsan csökkentette az AChR terület arányát több izomban (P < 0,05 vagy P < 0,01). A modellcsoporthoz képest aprednizonésközepes dózisú főzetcsoportok megnövekedett AChR területet mutattak a szemizmokban. Aalacsony dózisú főzetcsoportjavult az AChR területek a deltoidban és a tibialis anteriorban. Anagy dózisú csoportjavult az AChR területek a szem, a sternocleidomastoideus, a deltoid és a tibialis anterior izmokban.

A prednizonhoz képest aalacsony dózisú csoportjavult az AChR területek a szem- és rágóizmokban; aközepes dózisú csoportrágóizomban; és anagy dózisú csoportsternocleidomastoideusban és tibialis anteriorban (P < 0,05 vagy P < 0,01).

5. táblázat: Az AChR terület összehasonlítása a neuromuszkuláris csomópontnál az egér izomcsoportjainak egyes csoportjaiban

Mértékegysége: (% , x̄ ± s)

Csoport	n	Szemizmok	Rágóizom	Sternocleidomastoid	Deltoid izom	Bordaközi izom	Diafragma	Tibialis Anterior
Üres vezérlőelem	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Modellvezérlés	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednizon	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Főzet Alacsony dózisú	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Főzet közepes dózisú	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Főzet nagy dózisú	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Megjegyzések:

ᵃ: P < 0,05 vs. üres kontroll

ᵇ: P < 0,01 vs. üres kontroll

ᶜ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs. Prednizon

 

6. táblázat: AChR-Ab, IL-6 és TNF- szérumszintek összehasonlítása különböző egércsoportok között

Mértékegysége: (x̄ ± s)

Csoport	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Üres vezérlőelem	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Modellvezérlés	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednizon	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Főzet Alacsony dózisú	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Főzet közepes dózisú	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Főzet nagy dózisú	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Megjegyzések:

ᵃ: P < 0,01 vs. üres kontroll

ᵇ: P < 0,01 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. Prednizon

ᵉ: P < 0,01 vs. Prednizon

2.6 A szérum AChR-Ab, IL-6 és TNF-szintek összehasonlítása

6. táblázatszemlélteti, hogy az üres kontrollcsoporthoz képest amodellcsoportszignifikánsan megemelkedett az AChR-Ab, a IL-6 és a TNF- szintje (P < 0,01). A modellcsoporthoz képest aprednizonésközepes és nagy dózisú főzetcsoportokjelentősen csökkentette az AChR-Ab-t. Viszont,a prednizon növekedése IL-6, míg anagy dózisú főzet csoport csökkent IL-6. Mind a prednizon, mind aközepes és nagy dózisú csoportokcsökkent TNF- (P < 0,05 vagy P < 0,01).

A prednizonhoz képest aalacsony dózisú főzetcsoportmagasabb volt az AChR-Ab szintje, deminden főzetcsoportcsökkentett IL-6, elkerülve a prednizon gyulladáskeltő hatását.

3. Megbeszélés

Klinikailag az MG okuláris myasthenia gravis (oMG) és generalizált MG (gMG) kategóriába sorolható. Az oMG elsősorban ptosis és diplopia formájában nyilvánul meg, és gMG-vé alakulhat, amelyet szisztémás vázizomgyengeség jellemez [1]. A hagyományos kínai orvoslás (TCM) elmélete az MG patogenezisét az emberi test diszfunkcióinak tulajdonítja.lép és vese. A lép szabályozza az izmokat és a végtagokat, a szülés utáni gyökér, valamint a Qi és a vér forrása. A vese tárolja az esszenciát, és szabályozza a csontokat és a csontvelőt. Mindkettő hiánya izomgyengeséghez vezet, amint az MG-ben is látható [15–16].

A "gyökér kezelése" TCM elve alapjántonizálja a lépet és a vesétközpontivá válik. AJianpi Bushen Yiqi főzetezt a megközelítést testesíti meg. Fő összetevője,Astragalus membranaceus, növeli a lép Qi-t és emeli a Yangot.Teknősbékahéj ragasztóésszarvasagancs ragasztógazdagítja a vese esszenciát és a jangot, erősíti az izmokat és a csontokat.Codonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifuga, ésmézben sült édesgyökérszinergikusan működnek a vér táplálása, a Yang emelése és a képlet harmonizálása érdekében.

Ennek a megfogalmazásnak a kulcsfontosságú kiegészítése azCistanche deserticola, egy híres gyógynövénytonizálja a vese yangot és feltölti a létfontosságú esszenciát. A Cistanche-ról kimutatták, hogy fokozza az immunmodulációt és javítja a fáradtságállóságot, így ideális olyan körülmények között, mint az MG. Az XJCistanche szerint a Cistanche kivonat támogatjaidegek és izmok vitalitása, elősegítineurotranszmitter egyensúly, és javítjaimmunhomeosztázis- az MG patofiziológiájához közvetlenül kapcsolódó mechanizmusok.

Ebben a tanulmányban egy EAMG egérmodellt használtak a főzet viselkedési, immunrendszeri és NMJ szerkezeti dimenziókban kifejtett hatásainak értékelésére. Az eredmények ezt mutattákprednizonjavult a tapadási szilárdság és a Lennon-pontszám, de jelentősfogyás, összhangban a glükokortikoidok ismert mellékhatásaival [19]. Ezzel szemben minden főzetadagmegnövekedett testtömeg, ami jobb biztonságot jelez.

A terápiás hatékonyság az voltdózisfüggő, anagy dózisú csoportösszehasonlítható javulást ért el a markolat erejében és a Lennon-pontszámban, mint a prednizont kínálvahatékonyság és biztonság.

Az immunszervi indexek kimutatták, hogy a prednizon csökkentette a csecsemőmirigy-indexet, és corticalis-medulláris atrófiát okozott, rontva a központi toleranciát [20]. A főzet azonban megőrizte vagy javította a csecsemőmirigy szerkezetét, különösen nagy adagokban. A lépindexek követték akétfázisú szabályozási minta, alacsony és közepes dózisok elnyomják a kóros immunproliferációt, míg a magas dózis megőrizte az egyensúlyt.

Minden főzetcsoport csökkentette a nyirokcsomó-tüsző-hiperpláziát, bár csak a nagy dózisú prednizon felelt meg a germinális centrum elnyomásának, ami arra utal, hogy a nagy dózisok kiválóan szabályozzák mind a központi, mind a perifériás immunitást.

Mivel az EAMG hátterében CD4⁺ T-sejtek egyensúlyhiány áll [4], a főzet képesegyensúlyozza újra a Th1/Th2/Th17/Tfh és a Tregsejtek kulcsfontosságúak. Ellentétben a prednizonnal, amely csökkentette a Treg-et, a főzet (különösen közepes és nagy dózisokban)továbbfejlesztett Tregés elnyomta a gyulladást elősegítő részhalmazokat. Ezimmunmoduláció, az immunszuppresszió helyett jobban igazodik az olyan autoimmun betegségek szükségleteihez, mint az MG.

Az NMJ integritását a főzet bizonyítottatöbb izom AChR javítása, több izomcsoportban felülmúlja a prednizont. Ráadásul hatékonyan csökkentetteAChR-Ab, IL-6 és TNF-, a nagy dózis a legátfogóbb gyulladáscsökkentő hatást mutatja – a prednizon IL-6 emelkedése nélkül.

 

Következtetés

AJianpi Bushen Yiqi főzet, dúsítottCistanche deserticola, többcélú terápiás hatást fejt ki EAMG egerekben. Azt:

Újra kiegyensúlyozza a Th/Treg tengelyt és elnyomja a Tfh által közvetített B-sejt aktivációt

Csökkenti a patogén antitestek és a gyulladásos citokinek mennyiségét

Javítja az NMJ struktúrákat és helyreállítja az izomműködést

A prednizonhoz képest jobbat kínálbiztonság, immunrendszer helyreállítása, éstöbb izom célzása, kiemelve annak lehetőségét, mint aklinikai alternatívavagykiegészítő terápiaaz MG számára.

A jövőbeli tanulmányoknak fel kell tárniuk eztbioaktív vegyületek, anyagcsere utak, ésmolekuláris célpontok, esetleg keresztülhálózati farmakológiaésproteomika, hogy felgyorsítsa fejlődését új, TCM-alapú terápiaként.