A Cisztanche-alapú Xian Fang Huo Ming ital mechanikus vizsgálata a krónikus prosztatagyulladás kezelésében: Integrált hálózati farmakológia és kísérleti validáció, amely a PI3K/Akt/NF-κB útvonalat célozza
Oct 27, 2025
2. Módszerek
2.1 Hálózati farmakológia és molekuláris dokkolási elemzés
2.1.1 Az aktív összetevők és a betegség célpontjainak azonosítása
A TCMSP adatbázis segítségével a Cistanche-alapú Xian Fang Huo Ming Drink (XFHY) hatóanyagait ADME kritériumok szerint szűrték: orális biohasznosulás (OB) 30% vagy annál nagyobb és gyógyszerszerűség (DL) 0,18 vagy nagyobb. Ezen vegyületek potenciális célpontjait a SwissTargetPrediction segítségével azonosítottuk (valószínűség nagyobb vagy egyenlő, mint 0,1). A Cytoscape 3.9.1 segítségével egy "gyógynövény-vegyület-célpont" hálózatot építettek fel, és az öt legfontosabb vegyületet a fokos központiság alapján azonosították. Ezzel egyidejűleg a CP/CPPS-hez kapcsolódó betegségek célpontjait összegyűjtötték a GeneCards-tól, az OMIM-től és a DisGeNET-től olyan kulcsszavak használatával, mint a "krónikus prosztatagyulladás" és a "prosztatagyulladás".
Cistanche kivonat-kiegészítők a prosztata és a vese egészségére PhGs75% Ech 30% Act 12%
Vegye fel velünk a kapcsolatot, vásároljon most
2.1.2 A kereszteződési célok azonosítása
Az XFHY vegyület célpontjai és a CP/CPPS betegségcélpontjai közötti metszéspontot Venny 2.1 szoftverrel határoztuk meg a Venn diagram létrehozásához, amely azonosítja a kulcsfontosságú potenciális terápiás célpontokat.
2.1.3 PPI hálózatépítés
A kereszteződési célpontokat a STRING adatbázisba importáltuk (faj: Homo sapiens; interakciós pontszám > 0,9). Az így létrejövő protein-protein interakciós (PPI) hálózatot a Cytoscape-be importáltuk, és az alapvető célpontokat a CytoHubba segítségével azonosították a hálózati topológiai paraméterek, például a fok, a közöttiség és a közelség alapján.
2.1.4 A "Gyógynövény–Vegyület–Célútvonal" hálózat kiépítése
A Cytoscape 3.9.1 segítségével hálózati modellt építettek az XFHY, aktív vegyületei, célpontjai és jelátviteli útvonalai közötti kapcsolat megjelenítésére. A kulcscsomópontok meghatározásához a hálózati paramétereket elemeztük.
2.1.5 GO és KEGG dúsítási elemzés
A kereszteződési célpontokat feltöltöttük a DAVID adatbázisba a Gene Ontology (GO) és a Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) útvonalgazdagítási elemzéséhez (P < 0,05). Az eredményeket bioinformatikai eszközökkel vizualizáltuk.
2.1.6 Molekuláris dokkolás
Az öt legfontosabb vegyületet (pl. kvercetin, kaempferol) ligandumként, a tíz legfontosabb célpontot pedig receptorként használták a PPI hálózatból. A fehérjeszerkezeteket a Protein Data Bank-ból (PDB) szereztük be, az AutoDockTools 1.5.6-os verziójával előfeldolgoztuk (beleértve a dehidratálást, a hidrogénezést és a töltés hozzáadását), és PDBQT formátumba konvertáltuk. A MOL2 formátumú ligandumstruktúrákat a TCMSP-től szereztük be és hasonló módon alakítottuk át. A molekuláris dokkolást AutoDock segítségével végeztük, a kötési affinitásokat pedig GraphPad Prism 8 segítségével vizualizáltuk.
2.2 Állatkísérlet
2.2.1 Modell létrehozása
A CP/CPPS modellezésére kémiai indukciós módszert alkalmaztunk. A patkányokat 3%-os pentobarbitál-nátriummal (50 mg/kg) érzéstelenítettük. Középvonali bemetszést végeztünk az alsó hasban, és 80 µl 3%-os λ-karragenánt fecskendeztünk a prosztata minden oldalsó lebenyébe (összesen 160 µl). Az áloperált patkányok sóoldatot kaptak. A posztoperatív ellátás helyi antibiotikum alkalmazást tartalmazott. A 7. napon a modellezés sikerét a prosztata durva és szövettani vizsgálata (ödéma, pangás, hámdegeneráció és gyulladásos infiltráció) igazolta.
2.2.2 Csoportosítás és kezelés
Hetven hím SD patkányt véletlenszerűen hét csoportra osztottak (n=10):
Normál vezérlés
Álműtét
Modellvezérlés
Alacsony, közepes és nagy dózisú XFHY csoportok
Tamsulosin csoport
A dózisokat humán ekvivalens dózis (7,29 g/ttkg/nap) alapján számítottuk ki. Az XFHY-t orális szondán keresztül adtuk be 0,3645 g/ml (alacsony) és 1,458 g/ml (magas) mennyiségben. A tamszulozint 0,0018 mg/kg dózisban adtuk be. Minden kezelés 28 napig tartott, a modellezést követő 8 nappal kezdve.
2.2.3. Szövettani értékelés
A bal prosztata lebenyeket 4%-os paraformaldehidben fixáltuk, paraffinba ágyaztuk, metszettek és hematoxilin-eozinnal festették. A szövettani változásokat fénymikroszkóppal értékeltük.
2.2.4 ELISA a gyulladásos markerekre
A hasi aortán keresztül gyűjtött vért centrifugáltuk, és a TNF-, IL-1 és COX-2 szérumszintjét ELISA kittel mértük a gyártó utasításai szerint.
2.2.5 qRT-PCR a génexpresszióhoz
A teljes RNS-t a prosztataszövetből extraháltuk, és reverz transzkripcióval cDNS-vé írtuk át. A valós idejű PCR-t PI3K, Akt és NF-κB p65 specifikus primerek alkalmazásával végeztük. A GAPDH-t belső kontrollként használták. A relatív expressziót a 2^-ΔΔCt módszerrel számítottuk ki.
2.2.6 Western-blot fehérjeexpresszióhoz
A fehérjét a fagyasztott prosztataszövetből RIPA pufferrel extraháltuk. A mennyiségi meghatározás után a fehérjéket SDS-PAGE-val elválasztottuk, PVDF membránokra vittük át, és PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65 és p-NF-κB p65 elleni primer antitestekkel vizsgáltuk. HRP-konjugált másodlagos antitesteket és ECL kimutatást alkalmaztunk. A sávok intenzitását ImageJ segítségével határoztuk meg.
2.2.7 Statisztikai elemzés
Minden kísérletet három párhuzamosban végeztünk. Az adatokat GraphPad Prism 8 segítségével elemeztük, és átlag ± standard deviációban fejeztük ki. A többcsoportos összehasonlításhoz egyutas ANOVA-t, majd LSD-t vagy Dunnett-tesztet alkalmaztunk. P < 0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.
3. Eredmények
3.1 Hálózati farmakológia és molekuláris dokkolás
Összetett–cél kereszteződés:912 összetett célpont és 2197 betegségcélpont 374 átfedő célpontot eredményezett.
Legfőbb azonosított vegyületek:Kvercetin, kaempferol, pelargonidin, naringenin és byakangelicol – mind ismert gyulladáscsökkentő és antioxidáns hatással.
PPI elemzés:A legfontosabb célpontok a TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1 és NFKB1 voltak.
GO és KEGG dúsítás:A dúsított útvonalak közé tartozott a PI3K/Akt, MAPK, RAS és a gyulladással kapcsolatos biológiai folyamatok.
Molekuláris dokkolás:Erős kötődési affinitást figyeltek meg a fő célpontok és a főbb vegyületek között (kötési energia -5,0 kcal/mol vagy annál kisebb), ami magas bioaktivitásra utal.
3.2 Kísérleti érvényesítés
3.2.1 HE-festés
A modellcsoport patkányai mirigyhám-degenerációt, stromaödémát és kiterjedt gyulladásos infiltrációt mutattak. Az XFHY-val kezelt csoportok csökkent gyulladást mutattak, különösen a közepes és nagy dózisú csoportokban.
3.2.2 Gyulladásjelző szintek
A modellcsoporthoz képest az XFHY szignifikánsan csökkentette a szérum TNF-, IL-1 és COX-2 szintet (P < 0,01), ami gyulladásgátló hatékonyságot jelez.
3.2.3 Génexpresszió (qPCR)
Az XFHY dózisfüggő módon szignifikánsan csökkentette a PI3K, Akt és NF-κB p65 mRNS szintjét. Csak alacsony dózisú csökkentett Akt és p65; a közepes és nagy dózisú csoportok szélesebb szuppressziót mutattak.
3.2.4. Fehérje expressziója (Western-blot)
A PI3K, Akt (Ser473, Thr308) és NF-κB p65 foszforilációs szintje szignifikánsan megemelkedett a modellcsoportban, és csökkent az XFHY-vel kezelt patkányokban, különösen közepes és nagy dózisok esetén.
4. Megbeszélés
A klinikai tapasztalatokra építve ez a tanulmány megerősíti eztCistanche alapú XFHYjelentős gyulladáscsökkentő hatása van a CP/CPPS-re. A hálózati farmakológia különösen a kulcsfontosságú hatóanyagokat azonosítottakvercetin, bizonyítottan gyulladáscsökkentő és antioxidáns tulajdonságokkal. A PPI elemzés olyan célokat emelt ki, mint plTNF, IL6, ésAKT1, amelyek központi szerepet töltenek be a prosztatagyulladás gyulladásában.
A KEGG elemzése aPI3K/Akt/NF-κBjelátviteli útvonal széles körben elismert a gyulladásban és az immunszabályozásban. Az XFHY terápiás hatást fejthet ki azáltal, hogy gátolja ezt az utat, így csökkentve a gyulladást elősegítő citokin expressziót.
Ezenkívül az Akt (Ser473 és Thr308) kettős foszforilációja kritikusnak tűnik az NF-κB aktiválásához. Az XFHY mindkét helyen gátolta a foszforilációt, ami az NF-κB jelátvitel gátlására utal az upstream Akt-szuppresszió révén.
Következtetés
Az XFHY enyhítheti a CP/CPPS-t azáltal, hogy blokkolja a PI3K/Akt/NF-κB útvonalat, csökkentve aIL-1 , TNF-, ésCOX-2és enyhíti a gyulladásos válaszokat a prosztataszövetben. Az útvonal részvétele, különösen az Akt foszforilációja a Ser473-nál és a Thr308-nál, potenciális mechanikus magyarázatot ad az XFHY hatékonyságára. További kutatások szükségesek annak megerősítésére, hogy a PI3K/Akt/NF-κB az a végleges út, amelyen keresztül az XFHY kifejti terápiás hatását.
Összeférhetetlenség:
A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről.
Szólj, ha szeretnél agrafikus absztrakt, összefoglaló táblázat, vagyPowerPoint bemutatóa tanulmány alapján!
