Absztrakt

CélkitűzésA Cistanche fenil-etanol-glikozidok (CPhG-k) mechanizmusának vizsgálata a veleszületett immunfunkcióra, a tumornövekedésre és a tumorsejtek apoptózisára gyógyszerrezisztens osteosarcomát hordozó pucér egerekben.MódA humán osteosarcoma MG-63 gyógyszerrezisztens sejtvonalat gradiens koncentrációs módszerrel hozták létre, és elkészítették a gyógyszerrezisztens osteosarcoma meztelen egér modelljét (összesen 36 egér, csoportonként 6). A modellcsoport normál sóoldatot kapott szondán keresztül; a metotrexátos (MTX) csoport háromnaponta intraperitoneális MTX injekciót kapott (20 mg/kg); a kombinációs csoport háromnaponta intraperitoneális MTX injekciót kapott közepes dózisú CPhG (250 mg/kg) napi gyomorszondával kombinálva; a magas, közepes és alacsony dózisú CPhG-csoportok napi szondán keresztül kaptak CPhG-t magas (500 mg/kg), közepes (250 mg/kg), illetve alacsony (125 mg/kg) dózisban. Megfigyeltük a tumor méretének változásait csupasz egerekben, az átlagos tumortérfogat időbeli görbéit ábrázoltuk, és kiszámítottuk a tumorgátlási arányt; a IL-2 és a TNF- szérumszintjét csupasz egerekben ELISA-val mutatták ki; a tumorsejtek apoptózisát áramlási citometriával mértük; Western blot-ot használtunk az apoptózissal rokon fehérjék Bcl-2, Bax expressziójának, valamint a p-AKT, p-mTOR, p-PI3K expressziójának kimutatására tumorszövetekben.EredményekA modellcsoporttal összehasonlítva a tumor térfogata és tömege minden kezelési csoportban szignifikánsan csökkent (P < 0,001); a modellcsoporthoz és az MTX-csoporthoz képest a szérum IL-2 és TNF-szintje szignifikánsan megemelkedett az összes CPhG-csoport és a kombinációs csoport csupasz egereiben (P < 0,01); a modellcsoporthoz képest a Bax expressziója minden kezelési csoportban szignifikánsan felfelé volt szabályozva (P < 0,001), és a Bcl-2 expressziója a nagy és közepes dózisú CPhGs csoportokban és a kombinációs csoportban szignifikánsan csökkent (P < 0,001); A modellcsoporthoz és az MTX csoporthoz képest a tumor apoptózis aránya szignifikánsan megnőtt az összes CPhG-csoport és a kombinációs csoport csupasz egereiben, míg a p-AKT, p-mTOR és p-PI3K szintje szignifikánsan csökkent (P < 0,05).KövetkeztetésA CPhG-k szignifikánsan javíthatják az immunfunkciót gyógyszerrezisztens oszteoszarkómát hordozó meztelen egerekben, és elősegíthetik a tumorsejtek apoptózisát a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonal, valamint a Bax és Bcl-2 apoptotikus fehérjék expressziójának szabályozásával, ezáltal hatékonyan gátolják a tumor növekedését.

Kulcsszavakosteosarcoma;Cistanche feniletanol-glikozidok; MG-63; tumorsejtek; apoptózis; hatásmechanizmus; PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonal

 

A CISTANCHE TUBULOSA ELŐNYÖK

 

 

 

 

 

 

Osteosarcoma (OS)egy erősen rosszindulatú elsődleges csontdaganat, a serdülőkori primer rosszindulatú csontdaganatok között a legmagasabb előfordulási gyakorisággal, rendkívül magas rokkantsági és mortalitási arányokkal. Jelenleg a nagy dózisú metotrexát (MTX) önmagában vagy más kemoterápiás szerekkel kombinálva műtét után hatékonyan javíthatja az OS betegek túlélési arányát [1]. Néhány OS-beteg azonban a gyógyszerrezisztencia miatt érzéketlen a kemoterápiára, ami a daganat progressziójához vezet. Ezenkívül a daganatos betegek T-limfocita alcsoportjai gyakran immunrendszeri egyensúlyhiányban vannak, és a kemoterápia rövid távon tovább súlyosbíthatja az immunrendszeri rendellenességeket és az immunszuppressziót [2]. Tanulmányok kimutatták, hogy a humán immunválasz fokozása javíthatja az OS-betegek prognózisát az OS biológiai jellemzőinek szempontjából [3]. A kemoterápiás rezisztencia az egyik leggyakrabban előforduló és kezelhetetlen probléma, amely a kezelés sikertelenségéhez vezet az OS-ben szenvedő betegeknél, és az immunszuppresszió is az egyik kulcsfontosságú tényező, amely a tumor gyors progresszióját okozza [4].

A foszfatidil-inozitol 3-kináz (PI3K)/protein kináz B (AKT)/emlős célpontja a rapamicin (mTOR) jelátviteli útvonala az egyik legfontosabb onkogén útvonal az emberi rákos megbetegedésekben. Ez az útvonal gyakran túlaktiválódik az operációs rendszerben, ami elősegítheti az operációs rendszer sejtproliferációját, invázióját, metasztázisát és angiogenezist, gátolja az apoptózist, és tovább vezethet az OS kemoterápiás gyógyszerekkel szembeni rezisztenciájához [5]. Tanulmányok megerősítették, hogy a Cistanche fenil-etanol-glikozidok (CPhG-k), aCistanche deserticola, fokozhatja az immunfunkciót és gátolhatja a tumor növekedését hepatómát hordozó egerekben [6].In vitrotanulmányok kimutatták, hogy a CPhG-k jelentősen gátolhatják a HepG2 hepatomasejtek proliferációját és indukálhatják apoptózisukat [7]. A sejtapoptózis indukálása a jelenlegi daganatellenes gyógyszerek fő mechanizmusa, és az elmúlt években az OS kezelésének kutatási pontja. A csupasz egerek anatómiai, fiziológiai és biológiai szempontból sok hasonlóságot mutatnak az emberrel, és nagymértékben elfogadhatók az átültetett daganatok esetében, lehetővé téve bizonyos heterológ tumorsejtek xenotranszplantációját, így széles körben alkalmazzák daganatmodellek létrehozásában [8-9]. Jelen tanulmány célja a gyógyszerrezisztens osteosarcoma meztelen egér modelljének megalkotása, a CPhG-k immunfunkcióra és a PI3K/AKT/mTOR útvonalra gyakorolt ​​hatása ebben a modellben, valamint a tumornövekedésre és farmakológiai mechanizmusra gyakorolt ​​gátló hatásának vizsgálata, hogy referenciaként szolgáljon a klinikai kezelési elképzelések és az OS alapkutatásának bővítéséhez.

 

A CISTANCHE TUBULOSA ELŐNYÖK A CSONT NÖVEKEDÉSÉRT

 

CISTANCHE ELADÓ

A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszternaexportőre:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel.:+86 15292862950

 

 

1 Anyagok és módszerek

1.1 Kísérleti állatok

Harminchat SPF-minőségű csupasz egeret (6–8 hetes, 19–25 g tömegű) vásároltunk a Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd.-től, 202367524 számú állattanúsítvánnyal. Ezt a kísérletet a Northwest Minzu University Laboratóriumi Állat-etikai Bizottsága hagyta jóvá (Xbmu-3m-202306).

1.2 Cell Line

MG-63 sejtet a Kínai Tudományos Akadémia Sejtbankjától vásároltunk Sanghajban.

1.3 Gyógyszerek és reagensek

Magzati szarvasmarha szérum, magas glükóz tartalmú DMEM táptalaj, 0,25% tripszin-EDTA, MTX (Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd., tételszámok: PWL001, MA0212, MA0233-1, MB1156-1); CPhG-k (Shaanxi Senyuan Biotechnology Co., Ltd., tételszám: SY20231212605); anti-p-mTOR antitest, anti-p-PI3K antitest, anti-p-AKT antitest, anti-Bcl-2 antitest, anti-Bax antitest (Hangzhou Huaan Biotechnology Co., Ltd., tételszámok: HA600094, HA721673, ET1607-73, ET1607-73, ET1702-03-3-, ET1702-03); ELISA készletek TNF-hez és IL-2-hez (Hangzhou Lianke Biotechnology Co., Ltd., EK282, EK202 tételszámok).

1.4 Műszerek

CT14RD asztali nagy sebességű hűtött centrifuga (Shanghai Tianmei Biochemical Instrument Co., Ltd.); SW-CJ-1FD tiszta pad (Suzhou Purification Co., Ltd.); CO-5AC sejtinkubátor (Sanyo, Japán); AE31 fluoreszcens inverz mikroszkóp (Xiamen Motic Industrial Group Co., Ltd.); RT-6100 mikrolemez-olvasó (Shenzhen Rayto Life Sciences Co., Ltd.); PowerPoc gélelektroforézis rendszer, ChemiDoc™ gél képalkotó elemző (Bio-Rad, USA).

 

1.5 Kísérleti módszerek

1.5.1 Humán osteosarcoma MG-63 gyógyszerrezisztens sejtvonal (MG-63/MTX) létrehozása

MG-63 sejteket logaritmikus növekedési fázisig tenyésztettünk 80%-os sejtösszefolyás mellett. Előre elkészített, 100 ng/ml MTX-et tartalmazó sejttenyésztő tápközeget adtunk hozzá, és a táptalajt 48 óra múlva cseréltük. Amikor a sejtek ismét elérték a 80%-os konfluenciát, ugyanolyan koncentrációjú MTX-tartalmú táptalajt adtunk hozzá. A fenti lépéseket megismételtük, hogy lehetővé tegyük az MG-63 osteosarcoma sejtek stabil növekedését 100 ng/ml MTX-et tartalmazó tápközegben. Ezután a MTX koncentrációját a táptalajban fokozatosan növeltük, ugyanezzel a módszerrel, 200 ng/mL, 500 ng/mL, 1000 ng/mL, 2000 ng/mL, 5000 ng/mL és 10000 ng/mL sorrendben. 5 hónapos tenyésztés után 10000 ng/ml MTX-ben stabilan növekvő osteosarcoma gyógyszerrezisztens sejtvonalat (MG-63/MTX) választottunk ki a további kísérletekhez.

 

 

1.5.2 Gyógyszerrezisztens osteosarcomát hordozó meztelen egér modell létrehozása

Az osteosarcoma állatmodellt az irodalomra hivatkozva hozták létre [10]. MG-63/MTX sejteket 4×10⁶/100 µl sejtszuszpenzióvá készítettünk, és 100 µl-t szubkután injektáltunk meztelen egerek hónaljába, hogy megfigyeljük a daganatképződést.

1.5.3 Az állatok csoportosítása és beavatkozása

A daganatos csupasz egereket véletlenszerűen modellcsoportra, MTX-csoportra, CPhG-kkel kombinált MTX-csoportra (MTX-CPhG-k) csoportra, nagy dózisú CPhG-k (CPhGs-H) csoportra, közepes dózisú CPhG-k (CPhGs-M) csoportra és alacsony dózisú CPhG-k (CPhGs-L) csoportra osztották. A szondát a modellezés utáni 6. napon kezdtük meg. A modellcsoportba tartozó egerek naponta 10 μL/g normál sóoldatot kaptak szondán keresztül; az MTX-csoport háromnaponta 20 mg/kg MTX intraperitoneális injekciót kapott; az MTX-CPhGs csoport naponta 250 mg/kg CPhG-t kapott szondán keresztül háromnaponta 20 mg/kg MTX intraperitoneális injekcióval kombinálva; a CPhGs-H csoport napi 500 mg/kg CPhG-szondát kapott; a CPhGs-M csoport napi 250 mg/kg CPhG-t kapott szondán keresztül; a CPhGs-L csoport napi 125 mg/kg CPhG-t kapott szondán keresztül. Minden csupasz egeret folyamatosan kezeltünk 15 napig.

1.5.4 A daganat térfogatának és tömegének mérése gyógyszerrezisztens osteosarcomát hordozó pucér egerekben

Mindegyik csoportban megfigyeltük és rögzítettük a csupasz egerek tumor térfogatát, és a tumor növekedési görbéit ábrázoltuk. Huszonnégy órával az utolsó beadás után az egereket nyaki diszlokációval leöltük, a daganatokat kimetszettük és lemértük, és kiszámítottuk a tumorgátlás mértékét. A képletek a következők: Tumortérfogat=1/2 (hosszú daganat átmérő × rövid tumorátmérő²) Tumorgátlási arány=[(a modellcsoport átlagos tumortömege − a kezelési csoport átlagos tumortömege)/a modellcsoport átlagos tumortömege] × 100%

1.5.5 A szérum IL-2 és TNF-szintek kimutatása ELISA-val

A szérumot az egyes csoportokban lévő csupasz egerekből vontuk ki, és a IL-2 és a TNF- szérumszintjét ELISA-val detektáltuk a gyártó utasításai szerint.

1.5.6 A tumorsejtek apoptózisának kimutatása áramlási citometriával

Az egyes csoportokból származó tumorszöveteket feldarabolták, őrölték, szűrték, centrifugálták, és a vörösvértesteket lizáltuk, hogy centrifugacsövekben egysejtű szuszpenziókat készítsenek. A sejtkoncentrációt 1 × 106/ml-re állítottuk be, a sejteket 100 μL kötőpufferben szuszpendáltuk, 5 μL AV-FITC-vel és PI-vel adtuk hozzá, 15 percig sötétben inkubáltuk, centrifugáltuk, újraszuszpendáltuk, és 400 µl kötőpufferrel adtuk hozzá. Keverés után a mintákat áramlási citometriával detektáltuk.

1.5.7 p-AKT, p-mTOR, p-PI3K és Bcl-2, Bax apoptotikus fehérjék kimutatása Western blot segítségével

Az egyes csoportokból származó tumorszöveteket feldaraboljuk, homogenizátorba helyezzük, fehérjelízis pufferrel lizáljuk és homogenizáljuk. A lízis után a felülúszót centrifugálással gyűjtöttük össze 12 000 fordulat/perc sebességgel. Elektroforetikus gélt készítettem a fehérjeleválasztáshoz, majd a membrántranszfert és a blokkolást. A membránokat primer antitestekkel inkubáltuk 4 fokon egy éjszakán át, mostuk, és másodlagos antitestekkel inkubáltuk szobahőmérsékleten 1 órán át. Miután rázógépen TBST pufferrel mostuk, ECL lumineszcens oldatot adtunk hozzá az előhíváshoz. Rögzítés után gél képanalízist végeztünk, és a fehérjesáv szürke értékeit Image J szoftverrel elemeztük.

1.6 Statisztikai elemzés

A statisztikai elemzést GraphPad Prism 7 és SPSS 25.0 szoftverrel végeztük. A mérési adatokat átlag ± szórással (x ± s) fejeztük ki. A normál eloszlású és homogén varianciájú csoportok összehasonlítására egyutas ANOVA-t, a nem normál eloszlású adatokhoz pedig nem paraméteres tesztet használtunk. Páros t-tesztet alkalmaztunk a tumorgátlási arány elemzésére. P < 0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.

 

 

1. ábra: MG-63 és MG-63/MTX sejtek morfológiai összehasonlítása (×200)

2 Eredmények

2.1 Osteosarcoma MG-63 gyógyszerrezisztens sejtvonal (MG-63/MTX)

Az eredeti MG-63 sejtek tapadtak, közepes méretűek, többnyire orsó alakúak, esetenként szabálytalanok, nagy magokkal és tiszta magvakkal (1-A. ábra). Az MG-63/MTX sejtek megnyúltak, orsók vagy szabálytalanok, nyilvánvaló pszeudopodiákkal (1-B. ábra).

2.2 A tumornövekedés összehasonlítása az egyes csoportok egereiben

A gyomorszondával végzett 6. naptól kezdve a tumor térfogata a kezelt csoportokban szignifikánsan kisebb volt, mint a modellcsoportban. A gyomorszondával végzett szonda 21. napján minden csoportban 3 csupasz egér daganatait hasonlítottuk össze (2-A ábra). A tumor térfogata minden kezelési csoportban kisebb volt, mint a modellcsoportban (P < 0,001). A tumortérfogat a CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L és MTX-CPhGs csoportokban kisebb volt, mint az MTX csoportban (P < 0,001). A CPhGs csoportok között a tumor térfogata fokozatosan csökkent a gyógyszerkoncentráció növekedésével, és a modellcsoporthoz képest szignifikánsabbá vált a különbség (2-B ábra). Az eredmények azt mutatták, hogy a CPhG-k szignifikánsan gátolhatják a tumor növekedését gyógyszerrezisztens daganatot hordozó egerekben, és a gátló hatás pozitívan korrelált a CPhG-koncentrációval.

A modellcsoporthoz képest az átlagos tumortömeg az MTX, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L és MTX-CPhGs csoportokban szignifikánsan csökkent (P < 0,001). Az MTX csoporthoz képest a tumorgátlás mértéke a CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L és MTX-CPhGs csoportokban szignifikánsan megnőtt, a CPhGs-H, CPhGs-M és CPhGs-L csoportokban pedig a tumorgátlás mértéke dózisfüggő módon nőtt a gyógyszerkoncentráció növekedésével (table1).

2.3 A CPhG-k hatása a szérum IL-2 és a TNF-szintre gyógyszerrezisztens daganatot hordozó meztelen egerekben

A modellcsoporthoz képest az MTX csoportban a szérum TNF-szint szignifikánsan emelkedett (P < 0,05), a szérum TNF- és IL-2 szintje pedig az MTX-CPhGs csoportban szignifikánsan emelkedett (P < 0,01). Ezenkívül a szérum TNF-szintek a CPhGs-H, CPhGs-M és CPhGs-L csoportokban szignifikánsan magasabbak voltak, mint a modellcsoportban (P < 0,001), a szérum IL-2 szintje a CPhGs-M csoportban emelkedett (P < 0,01), és a szérum IL-2 szintje szignifikánsan megemelkedett a CPhGs-H csoportokban (

 

2. ábra: Nude egerek tumortérfogatainak összehasonlítása a tumorokkal az egyes csoportokban a beavatkozás után (x ± s, n=3, mm3)

Megjegyzés: Modellcsoport; MTX csoport; CPhGs-L csoport; kis dózisú Cistanche deserticola feniletanol összes glikozid csoport; CPhGs-M csoport; közepes dózisú Cistanche deserticola feniletanol összglikozidok csoportja; CPhGs-H csoport; nagy dózisú Cistanche deserticola feniletanol összglikozidok csoportja; MTX-CPhGs csoport; összehasonlítva a Model csoporttal, ***P<0.001; compared with the MTX group, ###P<0.001

1. táblázat: A Cistanche-fenil-etanol-glikozidok hatása a tumor tömegére daganatos csupasz egerekben (n=3)

Csoport	A daganat átlagos tömege (g)	Gátlási arány (%)
Modell	0.79 ± 0.04	-
MTX	0.49 ± 0.03	35.73 ± 4.61
CPhGs–L	0.33 ± 0.01	58.55 ± 4.02
CPhGs–M	0.31 ± 0.02	60.50 ± 0.98
CPhGs–H	0.28 ± 0.01	64.58 ± 1.77
MTX-CPhGs	0.18 ± 0.01	75.77 ± 1.78

*Megjegyzés: A "Modell" csoportnak nincs gátlási aránya a forrástáblázatban (em kötőjelként látható). Ha akarod, hozzáadhatom a jelentőségjelzőket is (pl. *, ## stb.) lábjegyzetként pontosan úgy, mint az ábrán.

2.4 A CPhG-k hatása a tumorsejtek apoptózisára gyógyszerrezisztens daganatot hordozó meztelen egerekben

A modellcsoporthoz képest az MTX és CPhGs-L csoportokban szignifikánsan megnőtt a tumor apoptózis aránya (P < 0,05), a CPhGs-H, CPhGs-M és MTX-CPhGs csoportokban pedig szignifikánsan (P < 0,001). Az MTX csoporthoz képest a tumor apoptózis aránya a CPhGs-H, CPhGs-M és MTX-CPhGs csoportokban megnőtt (P < 0,001) (3. ábra, 3. táblázat). A fenti eredmények azt mutatják, hogy a CPhG-k elősegíthetik a tumorsejtek apoptózisát gyógyszerrezisztens daganatot hordozó csupasz egerekben.

2.5 A CPhG-k hatása a p-AKT, p-mTOR és p-PI3K expressziójára gyógyszerrezisztens tumort hordozó meztelen egerek tumorszöveteiben

A modellcsoporttal összehasonlítva a p-AKT expressziója szignifikánsan csökkent a gyógyszerrezisztens csupasz egerek tumorszöveteiben az MTX csoportban (P < 0,001). A p-AKT, p-mTOR és p-PI3K expressziós szintjei meztelen egerek tumorszöveteiben MTX-CPhGs, CPhGs-H és CPhGs-M csoportokban szignifikánsan csökkentek (P < 0,001), a p-AKT expressziója a CPhGs-L csoportban szignifikánsan csökkent (P < 0,01 és p-3 p-mKTOR expresszió csökkenés) 0,001). Az MTX-csoporttal összehasonlítva a p-AKT, p-mTOR és p-PI3K expressziós szintje meztelen egerek tumorszöveteiben az MTX-CPhGs és CPhGs-H csoportokban is szignifikánsan csökkent (P < 0,001), a p-AKT expressziója a CPhGs-M csoportban szignifikánsan csökkent (P < 0,05 pPI expresszió csökkenés volt (p-3 több volt). 0,001), a p-AKT expresszió a CPhGs-L csoportban csökkent (P < 0,01), és a p-mTOR és p-PI3K expresszió szignifikánsan csökkent (P < 0,001) (4-A-4-D ábra).

 

2. táblázat: Szérum TNF- és IL-2 expressziós szintek az egyes csoportokban (n=3)

Csoport	TNF- (pg/ml)	IL-2 (pg/ml)
Modell	79.90 ± 3.60	28.36 ± 2.35
MTX	93.71 ± 2.86*	28.87 ± 1.60
MTX-CPhGs	118.00 ± 3.78***###	40.92 ± 1.54***###
CPhGs–H	122.76 ± 2.97***###	45.03 ± 4.95***###
CPhGs–M	117.52 ± 3.60***###	41.44 ± 3.87***###
CPhGs–L	124.19 ± 8.37***###	44.77 ± 2.31***###

 

Megjegyzések (az ábrán látható módon):Modell=modellcsoport; MTX=metotrexát csoport; CPhGs–L/M/H=alacsony/közepes/nagy dózisú Cistanche feniletanoid glikozidok csoportja; MTX–CPhGs=kombinációs csoport. Jelentőség vs. modell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

2.6 A CPhG-k hatása a Bcl-2 és a Bax expressziójára gyógyszerrezisztens daganatot hordozó meztelen egerek tumorszöveteiben

A modellcsoporttal összehasonlítva a Bax expresszió a gyógyszerrezisztens csupasz egerek tumorszöveteiben minden kezelési csoportban szignifikánsan megnövekedett (P < 0,001), a Bcl-2 expresszió az MTX csoportban nőtt (P < 0,05), és a Bcl-2 expresszió az MTX-CPhGs, CPhGs-H és CPhGs-M csoportokban szignifikánsan csökkent (0.0.P1). Az MTX csoporttal összehasonlítva a CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L és MTX-CPhGs csoportok tumorszöveteiben a Bcl-2 expresszió szignifikánsan csökkent (P < 0,001), és a Bax expresszió a CPhGs-H és CPhGs-M csoportokban szignifikánsan megnőtt (P < 0,0,0,4 E) (Figure41). 4-F). Azt is jelzi, hogy a CPhG-k a Bcl-2 és a Bax expressziójának szabályozásával elősegíthetik a tumorsejtek apoptózisát gyógyszerrezisztens daganatot hordozó csupasz egerekben.

 

 

3 Vita

Az OS betegek kemoterápiás rezisztenciája és immunszuppressziója szűk keresztmetszetek az OS klinikai kezelésében. Jelenleg a daganatellenes gyógyszerek fő mechanizmusa a tumorsejtek apoptózisának elősegítése, ami közvetlenül tükrözi a kemoterápia hatékonyságát; másrészt a test immunitása erős garancia a betegek számára a kemoterápiás gyógyszerek tolerálására. Ezért kulcsfontosságú annak tanulmányozása, hogyan lehet hatékonyan elősegíteni a gyógyszerrezisztens OS-sejtek apoptózisát és csökkenteni a kemoterápia által kiváltott immunkárosodást.

3. ábra: A tumorszövet sejtek apoptózisának aránya az egyes egércsoportokban (n=3, %)

Megjegyzés: A. Modellcsoport; B. Metotrexát (MTX) csoport; C. Metotrexát és Cistanche deserticola fenil-etanol összglikozidok (MTX-CPhGs) csoportja; D. Nagy dózisú Cistanche deserticola fenil-etanol összglikozidok (CPhGs-H) csoportja; E. Közepes dózisú Cistanche deserticola feniletanol összglikozidok (CPhGs-M) csoportja; F. Alacsony dózisú Cistanche deserticola fenil-etanol összglikozidok (CPhGs-L) csoportja.

3. táblázat: A tumorszövet sejtek apoptózisa az egyes csoportokban (n=3)

Csoport	Apoptózis aránya (%)
Modell	14.47 ± 1.10
MTX	19.77 ± 1.32*
MTX-CPhGs	29.21 ± 0.77***###
CPhGs–H	31.66 ± 1.93***###
CPhGs–M	30.13 ± 2.16***###
CPhGs–L	22.49 ± 3.02**

Megjegyzések (az ábrán látható módon):Modell=modellcsoport; MTX=metotrexát csoport; CPhGs–L/M/H=alacsony/közepes/nagy dózisú Cistanche feniletanoid glikozidok csoportja; MTX–CPhGs=kombinációs csoport. Jelentőség vs. modell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

 

 

Cistanche deserticolafarmakológiai hatása van: melegíti a vesét és feltölti az esszenciát, hidratálja a beleket, antioxidáns és javítja az immunitást. Zhang és mtsai. [11] 1988-ban arról számolt be, hogy a vizes kivonatCistanche deserticolajavíthatja az immunműködést és serkentheti az immunszervek, például a csecsemőmirigy fejlődését egerekben. Későbbiin vivotanulmányok azt is megállapították, hogyCistancheA poliszacharidok tüdőrák- és szarkóma-ellenes hatással bírtak [12]. Tanulmányok kimutatták, hogy a CPhG-k, a fő összetevő aCistanche deserticola, olyan farmakológiai hatásai vannak, mint az antioxidáns, öregedésgátló, neuroprotektív, immunerősítő, májvédelem és spermatogén rendellenességek kezelése [13], valamint daganatellenes és immunerősítő hatást fejt ki különböző rosszindulatú daganatokra, beleértve a májrákot, a tüdőrákot, a mellrákot és a petefészekrákot [14]. Korábbi tanulmányunk azt találtaCistanche deserticolaelősegítheti a gyógyszerrezisztens OS-sejtek apoptózisátin vitroaz MRP1 és a mutáns P53 fehérjék expressziójának csökkentésével [15]. Ez a tanulmány azt találta, hogy a tumor térfogata és tömege a kezelési csoportokban kisebb volt, mint a modellcsoportban, és a tumor térfogata a különböző CPhGs koncentrációs csoportokban és az MTX-CPhGs csoportban is kisebb volt, mint az MTX csoportban, megnövekedett tumorgátlási arány mellett. Ez azt jelzi, hogy a CPhG-k szignifikánsan gátolhatják a daganat növekedését gyógyszerrezisztens OS-tumort hordozó egerekben, és a gátló hatás pozitívan korrelál a CPhG-koncentrációval, ami alapvetően összhangban van Hou és munkatársai tanulmányával. [16] a CPhG-k gátló hatásáról szubkután transzplantált daganatokra H22 hepatómát hordozó egerekben.

Az immunrendszer szorosan összefügg a daganatok kialakulásával és kialakulásával. A IL-2 egyfajta sejtnövekedési faktor az immunrendszerben, amely a T-sejtek proliferációjának és differenciálódásának elősegítésével javíthatja a test immunrendszerét, és tumorellenes aktivitású immunsejteket termel [17]. A TNF-receptorokhoz kötődve fejti ki tumorellenes hatását, hogy tumorsejt-apoptózist indukáljon, fokozza a gazdaszervezet immunfunkcióját, hat a tumor vaszkuláris endothel sejtjeire, fokozza az érpermeabilitást, programozott halált indukál, és ezt követően tumorvérzést és -nekrózist okoz [18]. A szérum IL-2 és TNF-expressziójának analízise az egyes csoportok egereiben azt mutatta, hogy a szérum TNF- és IL-2 expressziós szintje a különböző CPhG-koncentrációjú és MTX-CPhG-csoportok tumoros modellegereiben szignifikánsan megemelkedett. Ez arra utal, hogy a CPhG-k javíthatják az immunműködést gyógyszerrezisztens OS-tumort hordozó egerekben a TNF- és IL-2 expressziójának szabályozásával, gátolhatják a gyógyszerrezisztens osteosarcoma sejtek proliferációját, és így daganatellenes hatást fejthetnek ki.

 

4. ábra: p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2 és Bax fehérjék elektroforézis eredménydiagramja nude egerek daganatszövetében (x ± s, n=3, mm3)

Megjegyzés: Modell, modellcsoport; MTX, metotrexát csoport; MTX-CPhG-k, metotrexát és Cistanche deserticola feniletanol összglikozid csoport; CPhGs-L, alacsony dózisú Cistanche deserticola feniletanol összglikozidok csoportja; CPhGs-M, közepes dózisú Cistanche deserticola feniletanol összglikozidok csoportja; CPhGs-H, nagy dózisú Cistanche deserticola feniletanol összglikozidok csoportja; A. p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2 és Bax fehérjék Western-blot eredményei; B. p-mTOR; C. p-PI3K; D. p-AKT; E. Bcl-2; F. Bax; A modellcsoporthoz képest * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001; Az MTX csoporthoz képest # P < 0,05, ## P < 0,01, ### P < 0,001.

 

Az AKT foszforilációja a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonalon közvetlenül vagy közvetve szabályozhat egy sor apoptózissal kapcsolatos faktort, mint például a Bcl-2 család, az apoptózis fehérje X-hez kötött inhibitora (XIAP), az egér double minute 2 (MDM-2) és a Bcl-2-asszociált X9 fehérje] (Bax). A rendellenesen aktivált PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonal fokozhatja az ABCB1 és ABCC1 membrántranszporterek expresszióját, ezáltal csökkentve a kemoterápia hatékonyságát és közvetítve az operációs rendszer kemoterápiás gyógyszerekkel szembeni rezisztenciáját [20]. A hagyományos kínai orvoslásban számos monomer elősegítheti az OS sejt apoptózisát a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonal gátlásával, mint például a procianidin B2, a kvercetin, a luteolin ésLactarius deliciosuspoliszacharidok [21]. Ez a tanulmány azt találta, hogy az MTX egyetlen hatása alatt a p-AKT fehérje expressziója szignifikánsan csökkent, míg a p-mTOR és a p-PI3K fehérje expressziója nem mutatott szignifikáns különbséget, ami azt jelzi, hogy az MTX csekély hatással van a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonalra gyógyszerrezisztens tumort hordozó meztelen egerek tumorszöveteiben. Azonban a p-AKT, p-mTOR és p-PI3K fehérjék expressziója gyógyszerrezisztens OS daganatot hordozó nude egerek tumorszöveteiben a különböző CPhGs koncentrációs csoportokban és az MTX-CPhGs csoportban alacsonyabb volt, mint a modellcsoportban, és szintén szignifikánsan alacsonyabb volt, mint az MTX csoportban, ami arra utal, hogy a CPhG-k jelentős gátló hatást fejtenek ki a PIM3 gyógyszerrezisztens szignál/AKT TOR-A KT OS-útvonalon. sejteket. A tumorsejtek apoptózisának áramlási citometriás kimutatása azt mutatta, hogy a tumor apoptózis aránya minden csoportban szignifikánsan megnőtt gyógyszeres beavatkozás után. A Bax és Bcl-2 fehérje expresszió kimutatása azt mutatta, hogy a Bax expressziója a gyógyszerrezisztens OS tumort hordozó nude egerek tumorszöveteiben a különböző CPhGs koncentrációs csoportokban és az MTX-CPhGs csoportban szignifikánsan megnőtt, míg a Bcl-2 expresszió a modellegerek tumorszöveteiben az MTX-CPhGs, CPhGs-H és a CPhGs csoportokban szignifikánsan csökkent. Ez arra utal, hogy a CPhG-k bizonyos koncentrációja elősegítheti a gyógyszerrezisztens OS-sejtek apoptózisátin vivoa PI3K/AKT/mTOR jelátviteli útvonal gátlásával, csökkentve a Bcl-2 expressziót és felfelé szabályozva a Bax expressziót.

Összefoglalva, a CPhG-k elősegíthetik a gyógyszerrezisztens OS-sejtek apoptózisát és gátolhatják a tumor növekedésétin vivo, és mechanizmusa a PI3K/AKT/mTOR jelátviteli út gátlásával és a Bcl-2 és Bax expressziójának szabályozásával érhető el. Eközben a CPhG-k a TNF- és a IL-2 expressziós szintjének fokozásával javíthatják az immunfunkciót gyógyszerrezisztens OS-tumort hordozó egerekben, ezáltal szinergikus daganatellenes hatásokat fejtenek ki. Klinikai alkalmazási lehetőségei azonban még további feltárásra és kutatásra szorulnak.

 

Hivatkozások

1 Zhang C, Hu J, Zhu K et al. Cementált megaprotézisek túlélése, szövődményei és funkcionális eredményei a térd körüli magas fokú osteosarcoma esetén [J]. Int Orthop, 2018, 42(4):927-938. DOI:10.1007/s00264-018-3770-9.2 Liu Q, Xu R, Xu X és társai. A T limfocita alcsoportok jellemzői és jelentősége osteosarcoma egerek perifériás vérében [J]. Transl Cancer Res, 2022, 11(6):1503-1509. DOI:10.21037/tcr22-264.3 Wu W, Jing DD, Cao L et al. Az osteosarcoma immunterápiájának jelenlegi állapota és kilátásai [J]. Cancer Research on Prevention and Treatment, 2022, 49(7):721-726. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2022.21.1281.4 Wang CZ, Liu YF, Zhang XQ és társai. Az immunsejtek daganatellenes hatását szabályozó astragalozid Ⅳ mechanizmusával kapcsolatos kutatási eredmények [J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2024, 42(11):145-149. DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.11.029.5 Zhang J, Yu XH, Yan YG et al. PI3K/Akt jelátvitel osteosarcomában [J]. Clin Chim Acta, 2015, 444:182-192. DOI:10.1016/j.cca.2014.12.041.6 Hu Q, You SP, Liu T et al. Vizsgálat a cistanche[J] májrákellenes hatásáról. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenesis, 2018, 30(3):194-199. DOI:10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.006.7 Qi XX, You SP, He ZX és mások. A Cistache deserticola fenil-etanol-glikozid hatása a HepG2 sejtek proliferációjára és apoptózisára in vitro [J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2021, 44(9):1041-1047. DOI:10.3639/j.issn.1009-5551.2021.09.012.8 Panaampon J, Sasamoto K, Kariya R et al. NK-sejteket nem tartalmazó csupasz egerek létrehozása és alkalmazása humán tumor xenograftokra [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2021, 22(4):1069-1074. DOI:10.31557/APJCP.2021.22.4.1069.9 Yu CB, Sun P, Zhang XW et al. A hasnyálmirigyrák xenograft állatmodell-vizsgálata meztelen egereken[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2012, 12(9):1648-1650. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.10 Xu XR, Wang N, Sun MM et al. Különböző hatások osteosarcoma modell egerekben egyetlen ponton akupunktúrával és az akupontok kompatibilitásával [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 2020, 35(5):2271-2276. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.11 Zhang HQ, Zhang AX, Du NS et al. A Cistanche deserticola hatása az egerek immunfunkciójára [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1988, (12):736-737, 710. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZZXJ198812019.htm.12 Zhang HQ, Xu AH, Li DD. A Cistanche poliszacharidok farmakológiai hatásai daganatokra és daganatos egerekre [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1997, (S1):155-156, 294. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=mg_qcPBBapnmsDqon66yc8-zI2VqwJgixywPNSnAl0qboPnZqB4FNuT0bsHSSvs0Dn72KJLZcy_9v6v2Jt_9 -S-Wcbp5ClislhRETaTYT6KGBMKP3_EreGXg3-BH52Itk0rqWiNksajNxzld06uvdfRzCDj-utLfgfANyySxJMHM-g==&uniplatform=&uniplatform=NZ11DOI:10=KPT1&lang} Xue HY, Jiao CY, Yao J. A Cistanches Herba[J] glikozidjainak farmakológiai hatásainak jelenlegi állapota. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4):486-488. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.04.026.14 Tang Y, Wu JQ. A Cistanche deserticolából [J] megfosztott fenil-etanol-glikozidok daganatellenes hatásai. Current Biotechnology, 2023, 13(3):399-405. DOI:10.19586/j.2095-2341.2023.0040.15 Xu W, Ding JX, Xie XW és társai. A Cistanche deserticola hatása a kemoterápia-rezisztens osteosarcoma sejtekre és az MRP1 és P53 [J] expressziójára. Journal of Li-shizhen Traditional Chinese Medicine, 2021, 32(3):551-554. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2021.03.11.16 Hou XT, Liu T, Su DQ. A Cistanche deserticola fenil-etanol-glikozidjainak daganatellenes hatása H22 daganatos egereken [J]. Journal of Toxicology, 2021, 35(3):231-235, 240. DOI:10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010.17 Zhang XY, Wang D, Fu CX et al. Kutatási eredmények a daganatok interleukin-2-vel [J] történő kezelésében. Oncology Progress, 2024, 22(6):581-585, 618. DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2024.22.06.01.18 Gao SY, Li D. Kutatási eredmények a tumornekrózis faktor és a rák terén[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2020, 36(9):1209-1213. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2020.09.006.19 Zhou H, Hai GF, Zhang T et al. A PI3K/AKT/mTOR útvonal és célzott inhibitorai kutatási előrehaladása a rák kezelésében[J]. China Pharmaceuticals, 2023, 32(5):127-135. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.05.030.20 Liu YJ, Cao YH, Kuang R. A tumor multidrug rezisztencia mechanizmusának és a hagyományos kínai orvoslás megfordításának kutatási előrehaladása[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024, 59(7):561-570. DOI:10.11669/cpj.2024.07.001.21 Yang HD, Li N, Xie XW és társai. Kínai orvoslás monomerek az osteosarcoma kezelésében a PI3K/Akt/mTOR jelátviteli útvonal szabályozásával: áttekintés [J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3):254-262. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221527.