A Cistanche Tubulosa monoterpén összetevői – a kankanozidok A–E és ​​a kankanol kémiai szerkezetei

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA és Masayuki YOSHIKAWA

Absztrakt

Négy új iridoid glikozidot, az A (1), B (2), C (3) és D (4) kankanozidot, egy klórozott iridoidot, a kankanolt (5) és egy aciklikus monoterpénglikozidot, a kankanozidot E (6) izoláltak. a Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) szárított szárának metanolos kivonatából 16 ismert vegyülettel együtt. Ezen új vegyületek (1-6) szerkezetét kémiai és fizikai-kémiai bizonyítékok alapján határoztuk meg.

Kulcsszavak:Cistanche tubulosa; kankanosid; kankanol; iridoid; monoterpén; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)egy évelő parazita növény, amely Salvadora vagy Calotropis fajok gyökerein nő, és Észak-Afrikában, Arábiában és ázsiai országokban elterjedt.1) Ennek a növénynek a szárát (japánul Kanka-nikujuyou) hagyományosan az impotencia és a sterilitás kezelésére használják. , lumbágó és testgyengeség.2) Korábban számos iridoidot, monoterpenoidot, feniletanoidot és lignánt izoláltak a kínai és pakisztáni C. tubulosából. 1,3–7) A kínai természetes gyógyszerek bioaktív összetevőiről végzett sorozatvizsgálataink során,8–18) négy új iridoid glikozid, a kankanozidok A (1), B (2), C (3) és D (4) ) egy klórozott iridoidot, a kankanolt (5) és egy aciklikus monoterpén-glikozidot, a kankanosid E-t (6) izolálták ennek a gyógynövénykészítménynek a metanolos kivonatából 16 ismert vegyülettel együtt, köztük 12 monoterpénnel (7–18). Ez a cikk új monoterpén alkotórészek izolálásával és szerkezetének feltárásával foglalkozik (1-6).

Cistanche tubulosa

A metanolos kivonat szárított szárábólCistanche tubulosa(26,8 százalék ebből a gyógynövényből) normál fázisú és fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfiának vetettük alá, és ismételt HPLC-nek vetettük alá a kankanozidok A-t (1, 0).0{{10 }}54 százalék ), B(2, 0.030 százalék ), C (3, 0.00 27 százalék ), és D (4, {{40}.0015 százalék ), kankanol (5, 0.0{ {66}}34 százalék ), és kankanosid E (6, 0.027 százalék ) és muszaénozidsav19) (7, 0.020 százalék ) , genipozidsav19) (8, 0,030 százalék), 8-epilogánsav7) (9, 0,033 százalék), glurozid19) (10, 0,14 százalék), antirrhid20) (11, 0,0079 százalék), ajugol19) (12,01 százalék) százalék), bartsiozid19) (13, 0,21 százalék), 6-dezoxikatalpol19) (14, 0,11 százalék), argiol21) (15, 0,0030 százalék), cisztanin22,23) (16, 0,0040 százalék), cisz-taklórin22 17, 0,0035 százalék ), (2E,6Z)-8-bD-glükopiranoziloxi-2, 6-dimetil-2, 6-oktadiénsav24) (18, 0,0028 százalék ), D-mannit25) (4,19 p ercent ), uridin25) (0,0069 százalék), (3R)-3-hidroxi-2- pirrolidinon26,27) (0,0020 százalék) és (3R)-3-hidroxi-1-metil{ {97}}pirrolidinon27) (0,0059 százalék).

A kankanozid A szerkezete (1) A kankanozid A (1) amorf por formájában készült, és negatív optikai forgatóképességet mutatott ([a]D 25 107,4 fok MeOH-ban). Az 1 IR-spektruma 1647 cm 1 -nél egy abszorpciós sávot mutatott, amely az olefin funkcióhoz rendelhető a 341 0 és 1076 cm 1 -nél lévő erős abszorpciós sávok mellett, amelyek glikozidcsoportra utalnak. Az 1-es pozitív és negatív ionos gyorsatomos bombázás (FAB)-MS során kvázimolekuláris ioncsúcsokat figyeltek meg m/z 369 (M Na) és 345 (MH) mellett, és a nagy felbontású FAB-MS analízis feltárta a molekuláris az 1 képlet C16H26O8. Az 1 savas hidrolízise 1,0 M sósavval (HCl) felszabadította a D-glükózt, amelyet HPLC analízissel azonosítottunk optikai rotációs detektor segítségével.8,10—12,15—18) Az 1 H- (CD3OD, 1. táblázat) ill. Az 1-es 13C-NMR-spektrumai (2. táblázat), amelyeket különböző NMR-kísérletekkel állítottak össze,28) két metilhez rendelhető jeleket mutatott [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47}). }H3)], két metilén [d 1,49, 2,02 (mindkettő m, 6a- és 6b-H), 1,64, 1,67 (mindkettő m, 7b- és 7a-H)], két metin [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)] és egy a,b-telítetlen acetálcsoport [d 5,33 (d, J=2,7 Hz, 1-H) ), 5,95 (br s, 3-H)] egy b-glükopiranozil-résszel együtt [d 4,62 (d, J=7,9 Hz, 1 -H)]. Amint az 1. ábrán látható, az 1 H-1H korrelációs spektroszkópiai (1 H-1 H COSY) kísérlet az 1-en félkövér vonallal írt részstruktúrák jelenlétét jelezte. Az 1-en végzett heteronukleáris többszörös kötéskorrelációs (HMBC) kísérletben a következő protonok és szénatomok (3-H, 1 -H és 1-C; 11-) közötti hosszú távú korrelációkat figyeltek meg. H3 és 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 és 4- C ; 11-H3 és 5-C; 10-H3 és 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 és 8-C; 10-H3 és 9-C; 7-H2 és 10-C) az 1. ábrán látható módon. Az 1-es vegyület b-glükozidázzal végzett enzimatikus hidrolízise aglikont, kankagenin a-t (1a) eredményezett, amint az a 3. ábrán látható. Az 1 13C NMR-spektrumának az 1a spektrumának összehasonlítása feltárta a glikoziláció eltolódását a 1- pozíció körül az 1-ben. [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Így az 1-ben lévő bD-glükopiranozil-rész kapcsolódását is tisztáztuk, hogy az 1-1a pozícióban van. Ezt követően az 1 relatív sztereostruktúráját jellemeztük nukleáris Overhauser fokozó spektroszkópiai (NOESY) kísérlettel, amely NOE korrelációt mutatott ki a következő protonpárok között (1-H és 10-H3; 3-H és 11-H3; 5-H és 6b-H, 9-H; 6b-H és 7b-H; 7a-H és 10-H3; 7b-H és {{ 190}}H), amint az a 2. ábrán látható. Végül az 1-es 1- pozíció abszolút konfigurációját az 1,1-diszacharid 13C-NMR glikozilációs eltolódási szabályának alkalmazásával határoztuk meg,29), amelyet megállapítottunk. hogy a félacetálvegyületekre alkalmazzuk.30,31) Az 1. pozícióban lévő 1-pozíció sztereostruktúrája az 1a-ban megmaradt az 1H-NMR-analízissel, beleértve a NOESY-kísérletet is. A glikozilációs eltolódási értékek [Dd 1,2 ppm (1 -C) és 0,9 ppm (1- C), piridin-d5-ben] jellemzőnek bizonyultak az R, Rhemiacetal kombinációra, amely megfelelt az 1 abszolút sztereostruktúrájának. Következésképpen az 1-es 1-pozícióban lévő abszolút konfigurációt S-konfigurációnak határoztuk meg, és az 1-es abszolút sztereostruktúráját a képen látható módon tisztáztuk.

A Kankanozid B (2) és C (3) szerkezete A Kankanozid B (2) szerkezetét szintén izoláltuk negatív optikai forgatóképességű amorf por formájában ([a]D 26 118,7 fok MeOH-ban). A 2 IR-spektruma 3410, 1647 és 1{{5{{80}}}85 cm 1 -nél mutatott abszorpciós sávokat, amelyek a hidroxil-, olefin- és éterfunkcióknak tulajdoníthatók. A 2-es C15H24O10 molekulaképletet a pozitív ionos FAB-MS és a nagy felbontású FAB-MS kvázimolekuláris ioncsúcsai határozták meg. A 2 savas hidrolízise 1,0 M sósavval felszabadított D-glükózzal, amelyet HPLC analízissel azonosítottunk optikai rotációs detektor segítségével.8,10—12,15—18) Az 1H- (CD3OD, 1. táblázat) és a 13C-NMR ( A 2. táblázat 2) 2 spektruma két metilénhez rendelhető jeleket mutatott [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-H), , 3,99 (mindkettő d, J 11,9 Hz, 10-H2)], négy metin [d 2,21 (dd, J: 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J: 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J: 6,4 Hz, 1-H)] és egy cisolefifin pár [d 4,95 (dd, J 4,0) , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)], egy b-glükopiranozil-résszel együtt [d 4,72 (d, J=7,9 Hz, 1 - H)]. A 2 1H- és 13C-NMR-adataiban a proton és a szén jelei hasonlóak voltak a 6-dezoxikatalpol (14) jeleihez, kivéve a 7- és 8- jeleket. pozíciókat. Amint az 1. ábrán látható, az 1 H–1 H COZY kísérlet a 2-n félkövér vonallal írt részleges struktúrák jelenlétét jelezte, és a HMBC kísérletben hosszú távú korrelációkat figyeltek meg a következő proton- és szénpárok között ({{ 122}}H, 1 -H és 1-C; 1-H és 3-C; 10-H2 és 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 és 8-C; 7-H, 10-H2 és 9-C ; 7-H és 10-C). A 2 relatív sztereostruktúráját a NOESY kísérlettel jellemeztük, amely NOE korrelációt mutatott ki a következő protonpárok között (1-H és 10-H2; 3- H és 4-H; 5-H és 6b-H, 9-H; 6b-H és 7-H; 7-H és 9-H) a 2. ábrán látható módon. Végül a 14 vegyület 5%-os vizes kálium-hidroxiddal (KOH) történő lúgos kezelése a 2-t és a 19, 32) vegyületet eredményezte, így a 2-es sztereoszerkezete tisztázódott.

A kankanozid C-t (3) amorf por formájában izoláltuk negatív optikai forgatóképességgel ([a]D 26 ± 34,{3}} fok MeOH-ban). A 3-as negatív ionos FAB-MS-ben egy pár izotóp kvázimolekuláris ioncsúcsot figyeltek meg m/z 399 és 401 (MH) mellett. A 3 molekulaképletét nagy felbontású FAB-MS méréssel C15H25ClO1{87}}-ként határoztuk meg. A 3 savas hidrolízise 1,0 M sósavval felszabadított D-glükózzal, amelyet HPLC analízissel azonosítottunk optikai rotációs detektor segítségével.8,10—12,15—18) Az 1H- (CD3OD, 1. táblázat) és a 13C-NMR ( 2. táblázat) 3 spektruma28) három metilénhez rendelhető jeleket mutatott [d 1,70 (br dd, J kb. 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J kb. 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (széles d, J kb. 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (mindkettő d, J 11,3 Hz, 10-H2)], öt metin [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (széles s, 7-H), 5,10 (széles d, J kb. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J=2,5 Hz, 1-H)], és egy b-glükopiranozil-rész [d 4,60 (d, J=8,0 Hz, 1-H)]. A 3-as 1H- és 13C-NMR-spektrumában a proton és a szén jelei szuperponálhatók voltak a 2-esével, kivéve a 3- és 4- pozícióból adódó jeleket. A bD-glükopiranozil és a klór funkciójának helyzetét a 3-ban a H-H COZY és a HMBC kísérletekből derítettük ki, az 1. ábrán látható módon. Következésképpen a 3 síkbeli szerkezetét az ábra szerint szerkesztettük meg. A 3 relatív sztereostruktúráját egy NOESY kísérlettel határoztuk meg, amelyben NOE korrelációkat figyeltünk meg a következő protonpárok között (1-H és 3-H, 10-H2; 3- H és 4a-H; 4b-H és 5- H; 5-H és 6b-H, 9-H; 6b-H és 7-H; {{121} }H és 9-H) a 2. ábrán látható módon.

A Kankanozid D (4) és a Kankanol (5) szerkezete A kankanozid D (4) negatív optikai forgatóképességű amorf por formájában izoláltuk ([a]D 25 30,6 fok MeOH-ban). A 4 IR-spektruma 1655 cm 1 -nél az olefin funkciónak tulajdonítható abszorpciós sávot, valamint 341 0 és 1078 cm 1 -nél erős abszorpciós sávokat mutatott, ami glikozidos szerkezetére utal. A 4-es pozitív ionos FAB-MS-ben egy kvázimolekuláris ioncsúcs m/z 341 (M Na) mellett volt megfigyelhető. A 4-es C15H26O7 molekulaképletet nagyfelbontású FAB-MS méréssel határoztuk meg. A 4 savas hidrolízise 1,0 M sósavval felszabadított D-glükózzal (8,10-12,15-18), míg az (R)-rotundity (4a) 33,34) a 4 vegyület b-glükozidázzal történő enzimatikus hidrolízisével érhető el. A 4 1H-NMR (3. táblázat, CD3OD) és 13C-NMR (4. táblázat) spektruma28) metilhez [d 1,69 (s, 10-H3)], három metilénhez [d 1,41, 2,06 (mindkettő m, 4-H2), 1,51, 2,01 (mindkettő m, 6a- és 6b-H), 2,23 (széles dd, J kb. 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (széles dd , J kb. 8, 15 Hz, 7b-H)], egy metin [d 2,90 (m, 5-H)] és két metilén, amelyek oxigénfunkciós {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (mindkettő d, J 12,2 Hz, 1-H2)} egy b-vel együtt glükopiranozil rész [d 4,25 (d, J=7,7 Hz, 1 -H)]. A 4-es bD-glükopiranozil rész helyzetét a HMBC-kísérlet tisztázta 3-pozíciónak (1. ábra). Ezen bizonyítékok alapján a 4 abszolút sztereostruktúráját úgy határoztuk meg, mint a bemutatott.

A kankanolt (5) amorf por formájában kaptuk pozitív optikai forgatással ([a]D 25 11,1 fok). Az 5-ös kémiai ionizációs (CI)-MS egy kvázimolekuláris ion (MH) miatt egy pár izotóp ioncsúcsot mutatott m/z 221 és 223 értéknél. Az 5-ös nagy felbontású CI-MS mérés kimutatta, hogy a molekulaképlet C9H13ClO4. Az 5-ös1H-NMR (1. táblázat, CD3OD) és 13C-NMR (2. táblázat) spektruma28) a következő funkciók jelenlétét mutatta: három metilén [d 1,60 (DDD, J 2,5, 5,5, 13,1) Hz, 4a-H), 1,80 (széles dd, J kb. 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (széles d, J kb. 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (mindkettő d, J 9,2 Hz, 10-H2)], öt metin [d 2,76 (dd, J: 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (széles s, 7-H), 5,17 (széles d, J kb. 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J: 4,3 Hz, 1-H) ]. Az 5 síkbeli szerkezetét 1 H–1 H COZY és HMBC kísérletekkel igazoltuk. Azaz az 5-ös 1 H–1 H COZY kísérlet a félkövér vonallal írt részstruktúrák jelenlétét jelezte, a HMBC-kísérletben pedig az 1. ábrán látható hosszú távú korrelációkat figyelték meg. Az 5 relatív sztereostruktúrája a NOESY kísérlet határozta meg, amelyben NOE korrelációkat figyeltek meg a következő protonpárok között (1-H és 9-H; 3-H és 4a-H; 4b-H és {{ 93}} H; 5-H és 6b-H, 9-H; 6b-H és 7-H; 7-H és 9-H) a képen látható módon Az 5-ös 1H- és 13C-NMR-adatokat összehasonlítva a 14a-val, amelyet a 14-es vegyület 5%-os vizes sósavval való kezelésével kaptunk az 1. ábra szerint, 35) a klór helyzete. az 5. csoportot támogatták a 3-pozícióban. Továbbá, az 5 vegyület ecetsavanhidriddel (Ac2O) és piridinnel végzett acetilezésével (5a) 3,{119}}-oxidot kaptunk, míg a 14a vegyületből (14b) diacetátot kaptunk azonos acetilezési körülmények között. Ez a bizonyíték arra is vezetett, hogy megerősítsük, hogy a klórfunkció a 3b-helyzetben van (3. ábra). Következésképpen az 5 sztereostruktúráját úgy határoztuk meg, mint az ábrán látható.

A kankanozid E (6) szerkezete A kankanozid E (6) amorf porként izolált, negatív optikai forgatóképességgel ([a]D 25 20.0 fok MeOH-ban). A 6-os IR-spektrum 3410, 1647, 1085 cm 1 -nél glikozidos és karbonilfunkciós abszorpciós sávokat mutatott, míg UV-spektruma 211 nm-nél mutatott abszorpciós maximumot (log e 4,63), ami telítetlen karboxil-sav jelenlétére utal. A C16H28O8 6-os molekulaképletet pozitív és negatív ionos FAB-MS-sel és nagy felbontású MS méréssel jellemeztük. 6 felszabadult D-glükóz,8,10-12,15-18), míg (2E,6R)-8-hidroxi-2,6-dimetil- 2-oktánsav savas hidrolízise A (6a) 36) vegyületet a 6 vegyület b-glükozidázzal végzett enzimatikus hidrolízisével kaptuk. A 6 1H-NMR (3. táblázat, CD3OD) és 13C-NMR (4. táblázat) spektruma28) (2E,6R)-8-hidroxi-2,6- jelenlétét jelezte. dimetil-2-oktánsav rész [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (mindkettő m, 5-H2), 1,45, 1,70 (mindkettő m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (mindkettő m, 8-H2), 6,78 (dd, J=1,2, 7,3 Hz, 3-H)] egy bD-glükopiranozil-résszel együtt [d 4,26 (d, J=7,6 Hz, 1 -H)] . A 6-os 13C-NMR-spektrum szénjeleit a 6a-éval összehasonlítva a glikozilációs eltolódást a 6-os 8-pozíció körül figyelték meg. A glükozidkötés helyzetét HMBC-kísérletek is megerősítették, amint az a következő: 1. ábra. Következésképpen a 6 abszolút sztereoszerkezete (2E,6R)-8-b-D-glükopiranoziloxi-2,6-dimetil-2-oktánsav.

cistanche kivonat előnyei

Kísérleti

A fizikai adatok beszerzéséhez a következő műszereket használtuk: fajlagos forgások, Horiba SEPA-300 digitális polariméter (l 5 cm); UV-spektrumok, Shimadzu UV-1600 spektrométer; IR spektrumok, Shimadzu FTIR-8100 spektrométer; EI-MS, CI-MS és nagy felbontású CI-MS, JEOL JMS-GCMATE tömegspektrométer; FAB-MS és nagy felbontású MS, JEOL JMS-SX 102A tömegspektrométer; 1H-NMR spektrum, JEOL EX-270 (270 MHz) és JNM-LA500 (500 MHz) spektrométerek; 13C-NMR spektrumok, JEOL EX-270 (68 MHz) és JNM-LA500 (125 MHz) spektrométerek belső standardként tetrametil-szilánnal; és HPLC detektor, Shimadzu RID{27}}A törésmutató és SPD- 10Avp UV-VIS detektorok. Analitikai és preparatív célokra HPLC oszlopot, YMC-Pack ODS-A (250 x 4,6 mm id), illetve (250 x 20 mm id) oszlopot használtunk.

A kromatográfiához a következő kísérleti körülményeket használtuk: normál fázisú szilikagél oszlopkromatográfia, szilikagél BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japán, 15{{10}}-35). 0 háló); fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfia, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japán, 100-200 mesh); TLC, szilikagél 60F254 (Merck, 0,25 mm) (közönséges fázis) és szilikagél RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (fordított fázis) bevonatú TLC lemezek; fordított fázisú HPTLC, szilikagél RP{17}} WF254S-vel (Merck, 0,25 mm) előre bevont TLC lemezek; a kimutatást pedig 1%-os Ce(SO4)2-10%-os vizes H2SO4-oldattal történő permetezéssel, majd melegítéssel érte el.

Növényi anyag

A Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT szárított szárát 2005 januárjában a kínai Urumqi-ban, Hszincsiang tartományban vásárolták az Eishin Trading Co., Ltd. Osakán keresztül, és a botanikai azonosítást Jia Xiaoguang professzor végezte el a Hszincsiangi Hagyományos Kínai Intézetben. és etnológiai gyógyszerek. Ennek a növénynek az utalványmintája (2005.01. Xinjiang-01) a laboratóriumunkban található.

Kivonás és izolálás

A C. tubulosa szárított szárát (50 kg) porítottuk, és metanollal háromszor extraháltuk visszafolyató hűtő alatt 3 órán át. Az oldószer csökkentett nyomáson történő elpárologtatásával metanolos kivonatot kapunk (1340 g, 26,8 százalék ebből a gyógynövényből). A metanolos kivonatot (16{71}} g) normál fázisú szilikagél oszlopkromatográfiának vetettük alá [3,2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3 : 1 → 7 : 3 : 1, alsó). réteg→6:4:1)MeOH], így hat frakciót kapunk [Fr. 1 (5.{85}}4 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), Fr. 5 (113,6{{104}} g), és Fr. 6 (7,61 g)]. Az 1. frakciót (5.{41}} g) fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfiával választottuk el [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{) 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH], így öt frakciót kapunk [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg) és Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830 mg) HPLC-vel tovább választottuk [MeOH–H2O (10: 90, v/v)], így kankanolt (5, 20) kaptunk. mg, 0,0034 százalék), argiol (15, 18 mg, 0,0030 százalék), cisztanin (16, 24 mg, 0,0040 százalék) és Fr. 1-1-2 (62 mg), amelyet HPLC-vel tovább választottunk [MeOH–H2O (2:98, v/v)], így (3R)-3-hidroxi-2-pirrolidinont (0,0020%) kaptunk. ) és (3R)-3-hidroxi-1-metil-2-pirrolidinon (0,0059%). Fr. 1-2 (590 mg) HPLC-vel tisztítottuk [MeOH-H2O (35:65, v/v) és CH3CN-H2O (20:80, v/v)], így cisztánklórt (17, 21 mg, 0,0035) kaptunk. százalék ). A 2. frakciót (9,72 g) fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfiának vetettük alá [290 g, MeOH–H2O (20:80→30:70→40:60→60:40, v/v)→MeOH]. hét frakció [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg) és Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (5:95, v/v)] elválasztva uridint (0,0069%) kapunk. Fr. 2-2 (535 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (10:90, v/v)] elválasztva antirrhidet (11, 15 mg, 0,0079 százalék) és 6-dezoxikatalpolt (14, 214) kapunk. mg, 0,11 százalék). Fr. 2-3 (535 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (20:80, v/v)] elválasztva glurozidot (10,110 mg, 0,14%) és barciozidot (13,164 mg, 0,21%) kaptunk. . Fr. 2-4 (375 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (30:70, v/v)] elválasztottuk a kankanozidot A (1, 32 mg, 0,0054 százalék) és D (4, 9 mg, 0,0015 százalék). ). Fr. 2-6 (460 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (45:55, v/v)] tovább választottuk a kankanozidot E (6, 161 mg, 0,027 százalék) és a (2E,6Z){192 }}bD-glükopiranoziloxi-2,6-dimetil-2, 6-oktadiénsav (18, 17 mg, 0,0028%). A 3. frakciót (7,60 g) fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfiának vetettük alá [230 g, MeOH–H2O (20:80→40:60→50:50→60:40, v/v)→MeOH]. öt frakció [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg) és Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (10:90, v/v)] tisztítva kankanozidot B (2, 19 mg, 0,018 százalék), genipozidsavat (8, 32 mg, 0,030) kaptunk. százalék ), és ajugol (12, 12 mg, 0,011 százalék). A 4. frakciót (13,10 g) fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfiának vetettük alá [390 g, MeOH–H2O (10:90→20:80→30:70→40:60→50:50, v/v) → MeOH], hogy hét frakciót kapjunk [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg) és Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg) HPLC-vel tovább választottuk [MeOH-H2O (5:95, v/v)], így kaptuk a 2-t (70 mg, 0,012%) és a kankanosid C-t (3, 16 mg, 0,0027%). . Fr. 4-6 (1058 mg) HPLC-vel [MeOH-H2O (15:85, v/v)] is elválasztottuk, így muszaénozidsavat (7, 116 mg, 0,020 százalék) és 8-epilogánsavat kaptunk. (9, 193 mg, 0,033%). Az 5. frakciót (15,15 g) fordított fázisú szilikagél oszlopkromatográfiának vetettük alá [455 g, MeOH–H2O (0:100→10:90→20:80→40:60→50:50, v/v)→MeOH ] hét frakciót adni [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg) és Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg) metanolból kristályosítva D-mannitot kapunk (3337 mg, 4,19%).

Az ismert vegyületeket (7-18) fizikai adataik ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) a közölt értékekkel 1,7,19-24,26,27) vagy a kereskedelmi mintáké.25) Kankanozid A (1): Amorf por, [a]D 25 107,4 fok (c 1,50, MeOH). Nagy felbontású pozitív ionos FAB-MS: C16H26O8Na-ra számított (M Na) 369,1525; talált: 369,1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD és piridin-d5) d: az 1. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD és piridin-d5) d C: a 2. táblázatban megadott. Pozitív ion FAB-MS: m /z 369 (M Na). Negatív ion FAB-MS: m/z 345 (MH).

Kankanozid B (2): Amorf por, [a]D 26 118,7 fok (c 0,10, MeOH). Nagy felbontású pozitív ion FAB-MS: C15H24O10Na-ra számított (M Na) 387,1267; talált: 387,1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: a 2. táblázatban megadott. Pozitív ion FAB-MS: m/z 387 (M Na). Negatív ion FAB-MS: m/z 363 (MH).

Kankanozid C (3): Amorf por, [a]D 26 34.0 fok (c 1.00, MeOH). Nagy felbontású negatív ion FAB-MS: C15H24ClO10 (MH) képletre számított: 399,1058; talált: 399,1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadva. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: a 2. táblázatban megadott. Negatív ion FAB-MS: m/z 399, 401 (MH).

Kankanozid D (4): Amorf por, [a]D 25 30,6 fok (c 0,50, MeOH). Nagy felbontású pozitív ion FAB-MS: C15H26O7Na (M Na) képletre számított: 341,1204; talált: 341,1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a 3. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: a 4. táblázatban megadott. Pozitív ion FAB-MS: m/z 341 (M Na). Negatív ion FAB-MS: m/z 317 (MH).

Kankanol (5): amorf por, [a]D25 11,1 fok (c 1,40, MeOH). Nagy felbontású CI-MS: C9H14ClO4-re számított (MH) 221,0580; talált: 221,0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a 2. táblázatban megadott. CI-MS m/z (százalék): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) és 57 (49).

Kankanozid E (6): Amorf por, [a]D 25 20,0 fok (c 2.00, MeOH). Nagy felbontású pozitív ionos FAB-MS: C16H28O8Na-ra számított (M Na) 371,1682; talált: 371,1690. UV [MeOH, nm (loge)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a 3. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: a 4. táblázatban megadott. Pozitív ion FAB-MS: m/z 371 (M Na). Negatív ion FAB-MS: m/z 347 (MH).

cistanche kivonat előnyei

1-4 és 6 savas hidrolízise 1 M sósavval

1-4 vagy 6 (egyenként 1,5 mg) 1 M sósavval (0,5 ml) készült oldatát 3 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Lehűlés után a reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, Amberlite IRA-400-vel (OH forma) semlegesítjük, majd a gyantát szűréssel eltávolítjuk. Ezután a szűrletet EtOAc-tal extraháljuk. A vizes réteget HPLC analízisnek vetettük alá a következő körülmények között: HPLC oszlop, Ka érzékelő LC NH{{10}}, 4,6 mm belső átmérő 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokió, Japán); észlelés, optikai forgatás [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokió, Japán)]; mozgófázis, CH3CN–H2O (75:25, v/v); társsebesség 0,8 ml/perc; oszlop hőmérséklet, szobahőmérséklet. A vizes rétegben jelenlévő D-glükóz azonosítását retenciós idejének és optikai forgatóképességének összehasonlításával végeztük egy autentikus mintaéval: tR 12,3 perc (pozitív optikai rotáció)

Az 1, 4 és 6 enzimatikus hidrolízise b-glükozidázzal

Az 1. vegyület (7,7 mg) 1,5 ml vízben készült oldatát 50 mg b-glükozidázzal kezeltük, a mandulától, Oriental Yeast Co., Tokió, Japán), és az oldatot 37 fokon kevertük. 3 napig. Miután EtOH-t adtunk a reakcióelegyhez, az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítottuk, és a maradékot HPLC-vel [MeOH-H2O (55:45, v/v)] tisztítottuk, így kankagenin a-t (1a, 2,3 mg, 56%) kaptunk. . Hasonló eljárással (R)-rotundiol33,34) (4a, 1,2 mg, 69 százalék) és (2E,6R)-8-hidroxi-2,6-dimetil{{30} }oktánsavat36) (6a, 6,8 mg, 62 százalék) a 4-ből (3,5 mg) és a 6-ból (20,4 mg) kaptuk.

Kankagenin a (1a): fehér por, [a]D 25 18,4 fok (c 0,20, MeOH). Nagy felbontású EI-MS: C10H16O3 (M) összegképletre számított: 184,1099; talált: 184,1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadva. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: a 2. táblázatban megadott. EI MS: m/z (százalék): 184 (M, 37) , 95 (100).

A 14 lúgos kezelése 5%-os vizes KOH-val

A 14. vegyület (23.{2}} mg) 5%-os vizes KOH-oldattal (1.{5}} ml) készült oldatát 8 °C-on 2 órán át keverjük. A reakcióelegyet Amberlite HCR-W2-vel (H forma) semlegesítjük. Az oldószert a szűrletből csökkentett nyomáson eltávolítva egy maradékot kapunk, amelyet HPLC-vel [MeOH-H2O (5:95, v/v)] tisztítva 2 (4,0 mg, 16 százalék) és 1932) (10,5 mg) vegyületet kapunk. , 43 százalék).

14 savas kezelése 5%-os vizes sósavval

A 14. vegyület (25.{2}} mg) 5%-os vizes sósavoldatban (2.{5}} ml) készült oldatát szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük. A reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, és az egész reakcióelegyet EtOAc-tal extraháljuk. Az EtOAc-extraktumot egymás után telített vizes NaHC03-oldattal és sóoldattal mostuk, majd vízmentes MgS04-poron szárítottuk és szűrtük. Az oldószert a szűrletből csökkentett nyomáson eltávolítva egy maradékot kapunk, amelyet HPLC-vel [MeOH-H2O (20: 80, v/v)] elválasztva 14a vegyületet kapunk (4,0 mg, 25%).

14a

Fehér por, [a]D 20 21,5 fok (c 0,30, MeOH). Nagy felbontású CI-MS: C9H14ClO4-re számított (MH) 221,0580; talált: 221,0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a 2. táblázatban megadott. CI-MS: m/z (százalék): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) és 57 (65).

Az 5 és 14a acetilezése

Az 5. vegyület (2,5 mg) piridinben (0,5 ml) készült oldatát ecetsavanhidriddel (Ac2O, 0,4 ml) kezeljük, és az elegyet szobahőmérsékleten 12 órán át keverjük. A reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, és az egész reakcióelegyet EtOAc-tal extraháljuk. Az EtOAc-extraktumot egymást követően 5%-os vizes HCl-oldattal, telített vizes NaHC03-oldattal és sóoldattal mostuk, majd vízmentes MgS04-poron szárítottuk és szűrtük. Az oldószert a szűrletből csökkentett nyomáson eltávolítva egy maradékot kapunk, amelyet HPLC-vel [MeOH-H2O (35:65, v/v)] tisztítva 5a vegyületet kapunk (2,3 mg, 77%). Hasonló eljárással a 14b (2,7 mg, 87%) vegyületet is előállítottuk, és HPLC-vel [MeOH-H2O (55:45, v/v)] tisztítottuk a 14a vegyületből (2,1 mg).

5a

Fehér por, [a]D 20 1,8 fok (c 0,18, MeOH). Nagy felbontású CI MS: C11H15O5 (MH) összegképletre számított: 227,0919; talált: 227,0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a 2. táblázatban megadott. CI-MS m/z (százalék): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) és 57 (34) ).

14b

Fehér por, [a]D 20 23,7 fok (c 0,06, MeOH). Nagy felbontású CI-MS: C13H18C106 (MH) képletre számított: 305,0792; talált: 305,0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: az 1. táblázatban megadott. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a 2. táblázatban megadott. CI-MS: m/z (százalék): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) és 57 (93).

Köszönetnyilvánítás

Ezt a kutatást a 21. COE Program, az Academic Frontier Project és a Japán Oktatási, Kulturális, Sport-, Tudományos és Technológiai Minisztérium tudományos kutatási támogatása támogatta. A szerzők köszönetet mondanak Xiaoguang Jia professzornak a Xinjiang Hagyományos Kínai és Etnológiai Orvostudományi Intézetben (Urumqi, Kína) a növényi anyagok azonosításáért.

cistanche haszon

Hivatkozások és jegyzetek

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Culture Techniques of Xinjiang Staple Medicinal Plants", Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Edit., 2004, 84-88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46-48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170-171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728-730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808-810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 38, 1927-1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 50, 208-215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468-1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638-645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 51, 654-662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464-1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194-1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416-1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) nyomdában.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 506-513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244-246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343-344 (2001).

25) Ezeket az ismert vegyületeket fizikai adataik és kereskedelemben beszerzett minták összehasonlításával azonosították.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213-9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587-2594 (2003).

28) Az 1-6 és rokon vegyületek (19, 1a, 5a, 14a, 14b) 1 H- és 13C-NMR spektrumát polarizációs transzferrel (DEPT), kettős kvantumszűrős korrelációs spektroszkópia segítségével rendeltük hozzá. DQF COSY), heteronukleáris többszörös kvantumkoherencia (HMQC) és heteronukleáris többszörös kötés kapcsolati (HMBC) kísérletek.

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982-984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691-1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753-1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281-2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotech. Biochem., 63, 731-735 (1999).