Kutatás a Cistanches Herba többindexes átfogó minőségértékeléséről a CRITIC súlymódszer alapján

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Jiuquan Minőségvizsgáló és Tesztközpont Gansu tartományban, Jiuquan, Gansu 735000, Kína)

Absztrakt:A cél egy többindexes átfogó értékelési módszer kidolgozása volt a Cistanche deserticola minőségének felmérésére, valamint a különböző forrásokból (Cistanche deserticola és Cistanche tubulosa) és a különböző termőterületekről származó Cistanches Herba minőségi különbségeinek tudományos értékelése. Öt feniletanoid-glikozid (echinakozid, verbaszkozid, tubulozid A, izoakteozid és 2'-acetil-lakteozid) tartalmát nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC) határoztuk meg. A CRITIC súlyozási módszert alkalmaztuk az egyes komponensek tömegének kiszámításához, és kiszámítottuk a minták átfogó pontszámait. A minták közötti minőségi különbségek mintázatának elemzésére klaszteranalízist alkalmaztunk. Az eredmények azt mutatták, hogy minőségi különbségek figyelhetők meg a Cistanche deserticola és a Cistanche tubulosa között. A Cistanche tubulosa értékelési pontszáma általában magasabb volt, mint a Cistanche deserticolaé. A klaszteranalízis a Cistanche deserticolát és a Cistanche tubulosát külön kategóriákba sorolta. A Cistanche deserticola minősége minimális eltérést mutatott, míg a Cistanche tubulosa minősége a különböző termőterületeken változott. A jelen tanulmányban felállított modell objektíven számszerűsítheti a különböző eredetű és termőterületről származó Cistanches Herba minőségi különbségeit, tudományos alapot biztosítva a Cistanche minőségi értékeléséhez.

Kulcsszavak: Cistanches Herba;CRITIC súlymódszer; klaszterelemzés;minőségi értékelés

Cistanche gyógynövény kivonat eladó

 

 

 

 

 

A Cistanches Herba a Cistanche deserticola YC Ma vagy a Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, korábbi nevén sivatagi cistanche szárított, pikkelyes zamatos szárából áll. A Cistanches Herba meleg természetű, édes és sós ízű. Tonizálja a vese yangot, jótékony hatással van az esszenciára és a vérre, valamint nedvesíti a beleket, hogy enyhítse a székrekedést. Vese-yang-hiány, esszencia- és vérhiány, impotencia és meddőség, derék- és térdfájdalom és -gyengeség, izom- és csontgyengeség, valamint székrekedéssel járó bélszárazság esetén alkalmazzák. Farmakológiailag aktív komponensei – mint például a fenil-etanoid glikozidok, poliszacharidok és iridoidok – kimutatták, hogy antioxidáns, öregedésgátló, immunmoduláló és neuroprotektív hatásúak. Híres hagyományos kínai gyógyászati ​​anyagként a Shennong's Classic of Materia Medica legjobb minőségű gyógynövényeként szerepel, és a "sivatag ginzengejeként" ismert. Főleg Belső-Mongólia, Gansu, Hszincsiang és Ninghszia északnyugati régióiban elterjedt.

A növekvő piaci kereslet következtében a vadon élő erőforrások a kimerüléshez közelednek, és a mesterséges termesztés általánossá vált. A Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyvének 2005-ös kiadása kiterjesztette a Cistanche tubulosa-t a Cistanches Herba legális botanikai forrásává. A két forrásnak külön vizsgálati határértékei vannak, de csak az extraktumokra, valamint az echinacoside és verbaszkozid tartalmára vonatkozóan, amelyek nem tükrözik átfogóan a hagyományos kínai orvoslás többkomponensű, többcélú jellemzőit. A Cistanches Herba kémiai összetétele a termőterülettől, a betakarítási időtől és a feldolgozási módszerektől függően változik. Ezért a tudományos és szisztematikus minőségértékelési rendszer kialakítása nagy jelentőséggel bír a gyógyászati ​​anyagok biztonságának és hatékonyságának biztosítása, valamint a fenntartható ipari fejlődés elősegítése szempontjából. Ebben a tanulmányban 20 tétel Cistanches Herba-t elemeztek Jiuquan különböző termelési területeiről. HPLC-vel öt fenil-etanoid-glikozidot – echinakozidot, tubulozid A-t, verbaszkozidot, izoakteozidot és 2′-acetil-lakteozidot – egyidejűleg határoztunk meg. A CRITIC súlyozási módszert használták az egyes mutatókhoz súlyozáshoz a két botanikai forrás átfogó minőségi értékeléséhez, a klaszteranalízist (CA) pedig a botanikai eredet és termőterület szerinti különbségek értelmezéséhez, azzal a céllal, hogy tudományos alapot nyújtsanak a Cistanches Herba minőségi értékeléséhez.

1 Cisztanch műszerek és anyagok

1.1 Műszerek és felszerelések

Agilent 1260 Infinity HPLC rendszer [kvaterner szivattyúval, automatikus mintavevővel, oszlopkemencével és DAD detektorral; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; XP205DR elektronikus analitikai mérleg (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE ultrahangos tisztító (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Reagensek

Referencia szabványok: a verbakozidot (tételszám. 111530-201914, tisztaság 95,2%) és az echinakozidot (tételszám. 111670-201706, tisztaság 89,7%) a National Institutes for Food and Drug Controltól vásárolták; A tubulozid A (tételszám: B20471, tisztasága nagyobb vagy egyenlő, mint 98%), az izoakteozid (tételszám: B21535, tisztaság nagyobb vagy egyenlő, mint 98%) és a 2′-acetil-lakteozid (tételszám: B21779, tisztaság nagyobb, mint vagy egyenlő, mint a 98%), a Shanghai, Yu-Technology. Ltd. A metanol HPLC minőségű volt (Merck). Az ultratiszta vizet házon belül készítették el. A többi reagens analitikai minőségű volt.

 

1.3 Minták

Tíz tétel Cistanche deserticola és tíz tétel Cistanche tubulosa gyűjtöttünk be Cistanches Herba termesztési bázisokból és gyógyszertárakból Jiuquan térségében, R1–R20 jelzéssel (lásd 1. táblázat). A Cistanche deserticola YC Ma vagy a Cistanche tubulosa (Schenk) Wight kiszáradt, pikkelyes, zamatos száraiként azonosította őket Hou Jianzhong, a TCM gyógyszerésze, a Jiuquan Minőségvizsgáló Központból. Az utalványmintákat a Jiuquan Minőségvizsgáló és Vizsgáló Központ Gyógyszer- és Kozmetikai Vizsgáló Intézetében helyezik el.

1. táblázat A Cistanches Herba minták forrásinformációi

R1|Cistanche deserticola|Dazhuangzi város, Jinta megye, Jiuquan város

R2|Cistanche deserticola|Jiashan New Town, Suzhou kerület, Jiuquan város

R3|Cistanche deserticola|Xiqu város, Jinta megye, Jiuquan város

R4|Cistanche deserticola|Zhonghe város, Jinta megye, Jiuquan város

R5|Cistanche deserticola|Shuanglong város, Suzhou kerület, Jiuquan város

R6|Cistanche deserticola|Hongliu város, Guazhou megye, Jiuquan város

R7|Cistanche deserticola|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Yumen város, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Tashi város, Guazhou megye, Jiuquan város

R10|Cistanche deserticola|Zongtai Township, Yumen City, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Dazhuangzi város, Jinta megye, Jiuquan város

R12|Cistanche tubulosa|Suzhou kerület, Jiuquan város

R13|Cistanche tubulosa|Suzhou kerület, Jiuquan város

R14|Cistanche tubulosa|Suzhou kerület, Jiuquan város

R15|Cistanche tubulosa|Suzhou kerület, Jiuquan város

R16|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Liangzhong Township, Yumen City, Jiuquan

R20|Cistanche tubulosa|Liugou település, Anxi megye, Jiuquan

 

2 Módszerek és eredmények

2.1. Vegyes referenciaoldat készítése

Mérjünk be pontosan 10,45 mg verbaszkozidot, 11,56 mg echinakozidot, 10,59 mg tubulozid A-t, 19,63 mg izoakteozidot és 9,03 mg 2′-acetil-lakteozidot külön 50 ml-es mérőlombikokba, oldjuk fel 50 térfogat%-ra metanollal. Jól keverjük össze, hogy megkapjuk a referencia törzsoldatokat. Ezután mindegyik törzsoldatból pontosan pipettázzon 1,00 ml-t egy 10 ml-es mérőlombikba, hígítsa térfogatra 50%-os metanollal, és keverje össze, hogy megkapja a vegyes referenciaoldatot.

Wecistanche támogató szolgáltatása – További részletek az együttműködésről
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

 

2.2 Vizsgálati oldatok készítése

Tegye át a mintaporokat egy No. 3 szitán; mérjünk be körülbelül 1 g-ot pontosan egy 100 ml-es barna mérőlombikba. Adjunk hozzá 80 ml 50%-os metanolt, zárjuk le, rázzuk össze, mérjük le, áztassuk 30 percig, és ultrahanggal kezeljük 40 percig (250 W, 35 kHz). Hűtsük le szobahőmérsékletre, mérjük meg újra, adjunk hozzá 50%-os metanolt a súlyvesztés kompenzálására, rázzuk fel jól, hagyjuk állni, öntsük le a felülúszót és szűrjük le. Gyűjtsük össze a következő szűrletet vizsgálati oldatként.

 

2.3 Kromatográfiás körülmények

Használjon InertSustain C18 oszlopot (4,6 mm × 250,0 mm, 5 μm). Mozgófázis: metanol (A) és 0,1%-os foszforsav oldat (B). Gradiens az A fázishoz: 0–6 perc, 20%; 6–18 perc, 20%→30%; 18–35 perc, 30%→45%. Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc; oszlophőmérséklet: 35 fok ; detektálási hullámhossz: 330 nm; injekció térfogata: 10 μL. Az egyes komponensek elméleti lemezei nem voltak kevesebbek 5000-nél. A kevert összehasonlító oldat és a vizsgálati oldat kromatogramja az 1. ábrán látható.

 

2.4 A tartalom meghatározásának módszertani validálása

2.4.1 Precíziós vizsgálat

Fecskendezze be a 2.1. pontból származó összekevert referenciaoldatot hatszor egymás után a 2.3. pontban leírt feltételek mellett. Az összes analit csúcsterületének RSD-je 0,86% vagy annál kisebb volt, ami jó műszer pontosságot jelez.

 

2.4.2 Ismételhetőségi vizsgálat

Pontosan mérjünk le hat adag R2 mintát (egyenként körülbelül 1,0 g-ot), és készítsünk hat vizsgálati oldatot a 2.2. pontban. Elemezze a 2.3. szakaszban leírt feltételek szerint. A csúcsterületek RSD-je 1,12% vagy annál kisebb volt, ami a módszer jó megismételhetőségét jelzi.

 

2.4.3 Stabilitási vizsgálat

Készítsünk vizsgálati oldatot az R1 mintából a 2.2. pont szerint. Adja be az injekciót 0, 2, 4, 8, 12 és 24 órában a 2.3 pontban leírt feltételek szerint. A csúcsterületek RSD-je 1,20% vagy annál kisebb volt, ami jó megoldási stabilitást jelez 24 órán belül.

 

2.4.4 Linearitás

Készítsen egy sor vegyes referenciaoldatot úgy, hogy mindegyik törzsoldatból 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 és 2,0 ml-t pontosan pipettázunk 10 ml-es mérőlombikokba, és 50%-os metanollal térfogatra hígítjuk. Az injekciót a 2.3 pontban leírt feltételek szerint kell beadni. Ábrázolja a koncentrációt a csúcsterület függvényében, hogy megkapja a kalibrációs egyenleteket és a lineáris tartományokat (2. táblázat). Az eredmények jó linearitást mutattak az echinakozid, a tubulozid A, a verbaszkozid, az izoakteozid és a 2'-acetil-lakteozid esetében a megfelelő tartományon belül.

2. táblázat A linearitásvizsgálat eredményei

Echinakozid|y=2397.4x − 15,363|r=0.9987|lineáris tartomány: 0,0046–0,0462 mg·L−1

Tubulozid A|y=9428.7x − 7,104|r=0.9984|lineáris tartomány: 0,0024–0,0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8,507|r=0.9986|lineáris tartomány: 0,0024–0,0418 mg·L−1

Izoakteozid|y=11600.3x − 11,359|r=0.9985|lineáris tartomány: 0,0079–0,0786 mg·L−1

2′-acetil-lakteozid|y=10901.8x − 5,216|r=0.9985|lineáris tartomány: 0,0036–0,0362 mg·L−1

2.4.5 Helyreállítás
Készítsen kilenc adagot egy ismert tartalmú mintából (R1), egyenként körülbelül 0,5 g-ot. A névleges tartalom 50%-át, 100%-át és 150%-át növelje megfelelő mennyiségű verbaszkoziddal, echinakoziddal, tubulozid A-val, izoakteoziddal és 2′-acetil-lakteoziddal. Készítsen vizsgálati oldatokat a 2.2. szakasz szerint, és elemezze a 2.3. szakasz szerint. Az átlagos visszanyerés 99,58%, 99,24%, 100,26%, 99,84% és 100,46% volt, az RSD 1,26%, 1,67%, 1,03%, 1,39% és 1,71% volt, ami jó pontosságot jelez.

 

2.4.6 Tartalom meghatározása

Pontosan mérjünk le körülbelül 1 g Cistanche deserticola és Cistanche tubulosa port, készítsünk vizsgálati oldatokat a 2.2. szakasz szerint, analízist a 2.3. szakasz szerint végezzük, és számítsuk ki a verbaszkozid, echinakozid, tubulozid A, izoakteozid és 2′-acetil-lakteozid tartalmát. Az eredményeket a 3. táblázat tartalmazza.

3. táblázat Öt komponens tartalmának meghatározása a Cistanches Herba-ban (mg·g-1)

R1: Echinacoside 4,81|Tubulozid A 0,16|Verbascoside 0,58|Izoakteozid 0,26|2′-acetil-lakteozid 0,49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Minőségértékelés a CRITIC súlyozási módszerrel

2.5.1 Adatok szabványosítása

Mivel az indikátorok mért tartalma jelentősen eltért, az egyes mutatókat haszon típusú mutatóként kezeltük, és az (1) képlet segítségével a [0, 1] tartományba standardizáltuk.

 

2.5.2 A súlyok meghatározása

A 20 köteg standardizált eredményeit az SPSSPRO online adatfeldolgozó platformra importáltam, a súlyszámításhoz pedig a CRITIC módszert alkalmaztuk (4. táblázat). A 4. táblázatból látható, hogy a 2′-acetil-lakteozid információtartalma (1,936) szignifikánsan magasabb volt, mint a többi mutatóé (0,683-0,758), elsősorban a nagyon magas konfliktusmérték (6,786) miatt, ami nagyon alacsony korrelációt jelez más mutatókkal. Így az értékelési rendszerben egyedülálló információt szolgáltatott, és az össztömeg 40,112%-át tette ki, ezzel a domináns mutatóvá vált. A másik négy indikátor (echinakozid, tubulozid A, verbaszkozid és izoakteozid) súlya viszonylag kiegyensúlyozott volt.

4. táblázat A súlyozási tényezők számítási eredményei

Indikátor: Echinacoside|Változékonyság 0,367|Konfliktus 2,064|Információ 0,758|Súly 15,705%

Indikátor: Tubulozid A|0,352|1.940|0,683|14,150%

Indikátor: Verbascoside|0,392|1,881|0,737|15,275%

Indikátor: Izoakteozid|0,330|2,157|0,713|14,759%

Indikátor: 2′-acetil-lakteozid|0,285|6,786|1,936|40,112%

 

2.5.3 Átfogó értékelés

A meghatározott súlyok alapján a (2) képlet segítségével kiszámítottuk a 20 tétel átfogó értékelési pontszámait. Az eredményeket az 5. táblázat tartalmazza. Jelentős pontszámkülönbségeket találtunk a két botanikai forrás között. A Cistanche tubulosa általában magasabb echinakozid- és verbaszkozid-tartalmat tartalmazott, ami magasabb átfogó pontszámot eredményezett, mint a Cistanche deserticola.

5. táblázat: CRITIC átfogó értékelési pontszámok a Cistanches Herba esetében

R1: 0,307 (14. helyezett)

R2: 0,386 (10. helyezett)

R3: 0,292 (15. helyezett)

R4: 0,432 (8. helyezett)

R5: 0,258 (17. hely)

R6: 0,313 (13. helyezett)

R7: 0,351 (12. helyezett)

R8: 0,147 (20. helyezett)

R9: 0,265 (16. helyezett)

R10: 0,179 (19. helyezett)

R11: 0,236 (18. helyezett)

R12: 0,335 (12. helyezett)

R13: 0,533 (4. helyezett)

R14: 0,632 (2. helyezett)

R15: 0,667 (1. helyezett)

R16: 0,497 (6. helyezett)

R17: 0,530 (5. helyezett)

R18: 0,469 (7. helyezett)

R19: 0,565 (3. helyezett)

R20: 0,425 (9. helyezett)
 

 

2.6 Klaszterelemzés

A 20 tétel mért tartalmát az SPSS 20.0-ba importáltuk. Mértékként a legtávolabbi szomszéd módszert és a négyzetes euklideszi távolságot használtuk, a klaszterezéshez pedig a csoportok közötti kapcsolatot (lásd 2. ábra). Az eredmények minőségi különbségeket jeleztek a két botanikai forrás között: a Cistanche deserticola és a Cistanche tubulosa külön csoportokba csoportosultak. A Cistanche deserticola kis csoporton belüli eltéréseket mutatott, míg a Cistanche tubulosa minőségi különbségeket mutatott a termőterületek között, és tovább lehetett osztani három alcsoportra, ami általában összhangban volt a CRITIC-alapú átfogó értékeléssel.