Hálózati farmakológia és a Cistanche-alapú vegyület kísérleti validálása a jóindulatú prosztata hiperplázia kezelésében a PI3K/AKT útvonal moduláción keresztül
Jun 17, 2025
Absztrakt
Célkitűzés:
Feltárni aa Cistanche alapú vegyületgranulátumok megelőző és terápiás hatásai-onjóindulatú prosztata hiperplázia (BPH)és ezen keresztül tisztázza a mögöttes mechanizmusokathálózati farmakológiai előrejelzések-vel kombinálvain vivo állatkísérletek.
Cisztán alapú gyógynövényes tabletták magas hatóanyag-tartalommal
Tovább a terméklistához További részletekért
Mód:
(1) Aktív összetevők-bólCistanche deserticolaés más támogató gyógynövényeket szűrtek aTCMSP adatbázis, kiegészítve az irodalombányászattal. Ezeknek a fitokemikáliáknak a célpontjait a segítségével jósolták megPubChem, Swiss Target Prediction, ésÖsszehasonlító toxikogenomikai adatbázis (CTD). A BPH-val kapcsolatos célpontokat innen gyűjtöttük összeGeneCards, CTD, DrugBank, ésDisGeNET. A kereszteződés elemzése azonosítva125 lehetséges terápiás célpontCistanche a BPH kezelésében. Aprotein-protein interakciós (PPI) hálózatfelhasználásával készültHÚR, ésGO és KEGG útvonal dúsítási elemzésekkeresztül hajtották végreMetascape. Egy átfogó"gyógynövény-vegyület-célút-útvonal" hálózatsegítségével vizualizáltukCytoscape, és a kulcsfontosságú célokat ezen keresztül érvényesítettékmolekuláris dokkolássegítségévelAutoDock Vina.
(2) Hatvan hím patkányt véletlenszerűen hat csoportra osztottak: kontroll, modell, pozitív kontroll (Qianlie ShutongKapszulák, 0,324 g/kg), és három dóziscsoportCistanche vegyület granulátum(magas: 3,24 g/kg, közepes: 1,62 g/kg, alacsony: 0,81 g/kg). A BPH-t akasztrálás és tesztoszteron-propionát injekció. A patkányok naponta kaptak orális kezelést 30 napon keresztül. Kiszámoltuk a prosztata nedves tömegét és indexét. A szérum szintjeiCOX-2, VEGF, ésPGE2ELISA-val mértük.Hisztopatológiai változásokHE festéssel figyelték meg, ésfehérje expresszió-bólAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, ésVEGFWestern blot segítségével értékeltük ki.
Eredmények:
(1) Összesen260 összetett célpont, 1584 BPH-val kapcsolatos cél, és125 egymást átfedő terápiás célpontazonosították. A legfontosabb célokat tartalmazzaAKT1, TNF, TP53, IL1, EGFR, CASP3, ésPTGS2. A dúsítási elemzések azt mutattákIL-17, HIF-1, TNF, ésPI3K-AKT jelátviteli útvonalakkritikus szerepeket játszanak. Az alapvető hatóanyagok, mint plluteolin, apigenin, útifű glikozidok, mangiferin, ésizovitexinerős kötési affinitást mutatott olyan célpontokkal, mintAKT1, PTGS2, CASP3, ésIL6, kötési energiákkal Kevesebb vagy egyenlő, mint –6 kcal/mol.
(2) Az in vivo eredmények azt mutattákA Cistanche granulátum jelentősen csökkentette a prosztata tömegét és indexét(P < 0,05 vagy P < 0,01), javítvamirigyes szerkezetés enyhültepiteliális hiperplázia. A szérum szintjeiCOX-2, PGE2, ésVEGFjelentősen csökkentek. Kifejezésep-AKT1, p-PI3K, COX-2, ésVEGFa prosztataszövetben szignifikánsan lecsökkent (P < 0,05 vagy P < 0,01).
Következtetés:
Ez a tanulmány előzetes bizonyítékot szolgáltat arra, hogyCistanche alapú gyógynövényterápiagyakorolBPH elleni megelőző és terápiás hatások, elsősorban a moduláció révénPI3K/AKT jelátviteli útvonal, gátlása aCOX-2 és PGE2, és elnyomásaVEGF által közvetített prosztata sejtproliferáció. A legfontosabb bioaktív összetevők, mint plútifű glikozidok, mangiferin, ésluteolinfő farmakológiai hatóanyagként szolgálhatnak. Ezek az eredmények alátámasztják annak lehetőségétCistanche kivonatmint atermészetes gyógymód a prosztata egészségére.
Kulcsszavak:
Cistanche deserticola; Cistanche kivonat; jóindulatú prosztata hiperplázia (BPH); hálózati farmakológia; PI3K/AKT útvonal; VEGF; COX-2; PGE2; prosztata gyulladás; természetes prosztata gyógymód; gyógynövényes kezelés a BPH kezelésére; hagyományos kínai orvoslás; fitoterápia; molekuláris dokkolás; patkány modell
Háttér
Jóindulatú prosztata hiperplázia (BPH)a középkorú és idős férfiak gyakori urológiai rendellenessége. Korai szakaszában a BPH-t gyakori vizelés, sürgősség, tétovázás és hiányos ürítés jellemzi. A betegség előrehaladtával súlyosabb tünetek jelentkezhetnek, mint például haematuria, fájdalmas vizelés, hólyagkövek, sőt veseműködési zavar is [1–2]. Tanulmányok [3] kimutatták, hogy a BPH előfordulása az életkorral növekszik, és az 50 év feletti férfiak több mint 50%-át érinti, így jelentősen rontja az életminőséget.
A jelenlegi BPH-kezelések főként agyógyszerek és sebészeti beavatkozások, ami ahhoz vezethetmellékhatások, szövődmények és hosszú távú következmények[4–7]. Ezért,Hagyományos Kínai Orvoslás (TCM)megfogalmazások, amelyekklinikailag hatékony, kevesebb mellékhatássalegyre nagyobb figyelmet kaptak a BPH alternatív terápiáiként.
Cistanche alapú gyógynövény granulátumgyulladáscsökkentő, vizelethajtó és szövetvédő hatást mutattak vizelési állapotokban. Korábbi tanulmányok [9–10] kimutatták, hogy a gyógynövényes receptek elsősorban aCistanche deserticolagyakorolnivédő hatásoka BPH ellen állatmodellekben. Csoportunk előzetes kutatása [11] azt sugallja, hogy ez a formula csökkentheti a prosztatagyulladást azáltal, hogygyulladásos mediátorok gátlásamint plCOX-2, PGE2, IL-6, ésTNF-. MivelA prosztatagyulladás gyakran egy társbetegség, amely súlyosbítja a BPH-t, ennek a tanulmánynak az a célja, hogy értékelje ahatásmechanizmus és terápiás potenciálaCistanche alapú vegyületsegítségévelhálózati farmakológia és in vivo validálása BPH patkánymodelljében.
A Wecistanche támogató szolgáltatása – Lépjen kapcsolatba velünk nagykereskedelmi árért
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950
1. Anyagok és módszerek
1.1 Kísérleti állatok
Összesen 70 SPF-minőségű hím SD patkányt (180–220 g) biztosított a Guangxi Orvosi Egyetem Laboratóriumi Állatközpontja (engedély: SCXK [Gui] 2020-0003). Az állati protokollokat az intézményi állatetikai bizottság hagyta jóvá (jóváhagyási szám: GXBGMP20220602). A patkányokat standard körülmények között tartottuk, szabályozott hőmérsékleten (23 ± 2 °C), páratartalom mellett (60 ± 5%) és 12 órás fény/sötét ciklus mellett.
1.2 Gyógyszerek és reagensek
Cistanche vegyület granulátum (próbaforma)
Pozitív kontroll: Qianlie Shutong kapszula (0,324 g/kg)
Tesztoszteron-propionát injekció (15 mg/kg)
ELISA készletek COX-2, PGE2, VEGF számára
Antitestek: anti-AKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, VEGF, GAPDH
Western blot reagensek, SDS-PAGE gélek és képalkotó rendszerek
Minden reagenst megbízható hazai és nemzetközi beszállítóktól vásároltunk
1.3 Berendezés
Analitikai mérleg (0,0001 g pontosság)
Fordított biológiai mikroszkóp (Olympus IX73)
Mikrolemez olvasó (Tecan M200)
Western blot rendszer (Bio-Rad)
Képalkotó állomás (GE Imager 680)
1.4 Cisztanche aktív vegyületek célelőrejelzése
Aktív összetevői aCistanche deserticolaés egyéb kiegészítő gyógynövények kerültek elő aTCMSP adatbázis, szűrveorális biohasznosulás (OB nagyobb vagy egyenlő, mint 30%)ésgyógyszerszerűség (DL nagyobb vagy egyenlő, mint 0,18). A szakirodalom által igazolt, ezeket a küszöbértékeket nem elérő bioaktív vegyületeket is bevontuk. A feltételezett célpontokat előre jeleztékPubChem, SwissTargetPrediction, ésCTD, szűrők használatával a magas GI-elnyelés és a kedvező ADME tulajdonságok érdekében.
1.5 A BPH-val kapcsolatos célpontok azonosítása
A "BPH" kifejezést több adatbázisban is keresték, beleértveDisGeNET, CTD, GeneCards, ésDrugBankbetegségekhez kapcsolódó célpontok összegyűjtése. Csak azokat a célokat tartottuk meg, amelyek relevanciapontszáma meghaladja a mediánt, és a duplikátumokat eltávolítottuk a nagy megbízhatóságú BPH célkészlet elérése érdekében.
1.6 Potenciális terápiás célpontok kereszteződésének elemzése
A kereszteződésselCistanche összetett célpontokismertekkelBPH-val kapcsolatos gének, azonosítottuk a potenciáltanti-BPH terápiás célpontok, keresztül láthatóváVenn diagramokR szoftver segítségével.
1.7 Protein-Protein Interaction (PPI) hálózatépítés
A lehetséges célpontokat feltöltöttük aSTRING v11.5adatbázis PPI hálózat felépítéséhez. A vizualizációt és a topológiai elemzést (fok-centralitás) a segítségével végeztük elCytoscape 3.9.1.
1.8 GO és KEGG dúsítási elemzés
Dúsítási elemzések aGénontológia (GO)funkciók ésKEGG utaksegítségével végeztékMetascape, melynek jelentősége itt van beállítvaP < 0,01.
1.9 "Gyógynövény-vegyület-célútvonal" hálózatépítés
A BPH szempontjából releváns kulcsutakat a KEGG dúsítási eredmények közül választottuk ki. Atöbbrétegű hálózatA gyógynövényeket, aktív vegyületeket, célpontokat és útvonalakat összekapcsoló Cytoscape-ben készült, és a kulcscsomópontokat aHálózati elemzőplugin.
1.10 Molekuláris dokkolás ellenőrzése
Hat alapvető célfehérje (PTGS2, AR, CASP3, IL6, PTGS1, AKT1) és a legmagasabb rangú vegyületek (luteolin, apigenin, izovitexin, mangiferin, útifű glikozidok) került kiválasztásramolekuláris dokkolás. A fehérjekristály szerkezeteket aRCSB Protein Data Bank(https://www.rcsb.org), és a dokkolás a használatával történtAutoDock Vina. A kötési energiákat vizualizáltuk és segítségével elemeztükPyMOL.
1.11 Állatmodell és csoportosítás
7 napos akklimatizáció után 60 hím patkányt véletlenszerűen 6 csoportra osztottak (n=10): kontroll, modell, pozitív kontroll és alacsony, közepes, nagy dózisú patkányt.Cistanche vegyületcsoportok(0,81, 1,62, 3,24 g/kg). A BPH-t aorchiectomiakövetitesztoszteron-propionát injekciók(15 mg/kg) 28 napig. A gyógyszer beadása a 29. napon kezdődött és 30 napig folytatódott.
1.12 Mintagyűjtés
Az utolsó kezelés után a patkányokat elaltattuk, és vért vettünk a hasi aortából. A prosztatát feldarabolták, lemértük, és aprosztata index (mg/g)számították. A mintákat –80 fokon tároltuk elemzés céljából.
1.13 ELISA a szérum gyulladásos markerekhez
A szérum szintjeiCOX-2, PGE2, ésVEGFELISA kitekkel határoztuk meg a gyártó utasításai szerint.
1.14 Szövettani elemzés (H&E festés)
A prosztata szöveteit fixáltuk, paraffinba ágyaztuk, metszettek és megfestettekhematoxilin és eozin (H&E). Fénymikroszkóppal kóros elváltozásokat figyeltek meg.
1.15 Western-blot
A fehérje expressziós szintjeiAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, ésVEGFáltal elemeztékWestern blot. A sáv intenzitását számszerűsítettükImageJ, -valGAPDHmint a belső kontroll.
1.16 Statisztikai elemzés
Az adatokat a segítségével elemeztükSPSS 22.0. Az eredményeket a következőképpen mutatjuk beátlag ± SD. Egyirányú ANOVA ésLSD-t tesztcsoportos összehasonlításhoz használták, -valP < 0,05statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.
