Az N-benzil-eikozapentaénamid neuroprotekciója újszülött egerekben hipoxiás-ischaemiás agysérülést követően

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Absztrakt:

Maca(Lepidium meyenii) gyógyászati ​​tulajdonságai és tápértéke miatt népszerű funkcionális növényi élelmiszerré vált.Macamidok, mivel a kizárólagosan megtalálható hatóanyagokmaca, a nem poláris, hosszú láncú zsírsav-N-benzil-amidok egyedülálló sorozata, amelyek többféle biológiai aktivitással rendelkeznek, például fáradtsággátló tulajdonságokkal és javítják a reproduktív egészséget. Ebben a tanulmányban egy újfajta maximalizálást, az N-benzil-eikozapentaenamidot (NB-EPA) azonosítottak.maca. Tovább vizsgáljuk potenciális neuroprotektív szerepét a hipoxiás-ischaemiás agysérülésben. Eredményeink azt mutatták, hogy a bioszintetizált NB-EPA-val végzett kezelés jelentősen enyhíti az agyi infarktus méretét, és javítja az újszülött egerek hipoxiás-ischaemiás agykárosodását követő neuroviselkedési rendellenességeket. Az NB-EPA gátolta a neuronális sejtek apoptózisát ischaemiás fertőzés után. Az NB-EPA javította a neuronális sejtek túlélését és proliferációját a foszforilált AKT jelátvitel aktiválásával. Megjegyzendő, hogy az NB-EPA védő tulajdonsága az ischaemiás neuronális károsodással szemben a p53-PUMA útvonal elnyomásától függött. Összességében ezek az eredmények arra utalnak, hogy az NB-EPA új neuroprotektáns lehet a hipoxiás-ischaemiás encephalopathiában szenvedő újszülöttek számára.

Kulcsszavak:maca; N-benzil-eikozapentaénamid; újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás encephalopathia; neuroprotekció; PUMA

1. Bemutatkozás

Az újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás encephalopathia (HIE) az oxigénhiány és a véráramlás csökkenése miatti agysérülések gyakori oka [1,2]. A HIE rendkívül idegenkedik az agy fejlődésétől, amely a gyermekeknél a neurológiai diszfunkciót okozó fő tényező [3]. A HIE leggyakoribb következményei közé tartozik az agyi bénulás, a súlyos kognitív károsodás, valamint a motoros és viselkedési zavarok, amelyek évente milliónyi újszülötthalálhoz vagy hosszú távú rokkantsághoz vezetnek [4]. A terápiás hipotermia az újszülött HIE-betegek klinikailag gyakori kezelése, és kimutatták, hogy javítja a túlélők neurológiai kimenetelét [5]. Mindazonáltal, pusztán a hipotermia kezelés alkalmazása nem elegendő a mortalitás csökkentésére vagy a súlyos idegrendszeri fejlődési rendellenességek elkerülésére súlyos HIE esetén [6]. A modern orvosi technológia jelentős fejlődése ellenére nincs hatékony orvosi kezelés a HIE által okozott idegkárosodásra [7]. A neuroprotektív terápia nagy jelentőséggel bír az agyműködés hosszú távú helyreállításában [8]. Ezért biztonságos és hatékony neuroprotektív terápiákat kell kifejleszteni.

hol tudnék cisztán kérget venni

Maca(Lepidium meyenii) a dél-amerikai keresztesvirágúak családjába tartozó egynyári vagy kétéves gyógynövény, amelyet 2011-ben az új táplálékforrások közé soroltak [9,10]. A macában számos farmakológiai és táplálkozási hatású összetevőt azonosítottak, amelyek közé tartoznak a poliszacharidok, fitoszterolok, alkaloidok, glükozinolátok, macaének ésmacamides[11,12]. Ezen bioaktív összetevők közül a makamidokat, a nem poláris, hosszú láncú zsírsav-N-benzil-amid vegyületek csoportját ismerték fel jellemző összetevőként, miközben hozzájárulnak a maca főbb hatékonyságához, például a fáradtság, a csontritkulás elleni küzdelemhez és a termékenység javításához [13] –15]. A maamidokról és szintetikus analógjairól a közelmúltban arról számoltak be, hogy különálló zsírsav-amid-hidroláz (FAAH) gátló aktivitást mutatnak, ami arra utal, hogy ezek a vegyületek potenciális neuroprotektív és gyulladásgátló hatással rendelkeznek [16,17].

cistanche tubulosa

Ebben a tanulmányban az N-benzil-eikozapentaenamid (NB EPA) maximalizálásának új fajtáját azonosították.maca. Tovább vizsgáljuk biológiai aktivitását a hipoxiás-ischaemiás agykárosodásban. Eredményeink azt mutatták, hogy az NB-EPA szignifikánsan javítja a HI által közvetített újszülöttkori agysérülést az agyi infarktus és a viselkedési zavarok javulása révén. Nevezetesen, az NB-EPA neuroprotektív hatása az ischaemiás neuronok túlélésére a p53-PUMA jelátviteli út elnyomásától függött.

2. Eredmények

2.1. Az N-benzil-eikozapentaénamid azonosítása és szintézise

Macamidokaz amid alkaloidok egy osztálya, amelyet benzil-amin és egy zsírsav rész alkot, és amelyeket a faj jellegzetes markervegyületeinek tekintenek.maca. Itt azonosítottunk egy új maximalizálást, az NB-EPA-t (molekulaképlet C27H37NO), a maca-ból. Amint az 1A. ábrán látható, a nagy teljesítményű folyadékkromatográfia elektrospray ionizációs tömegspektrometriával (HPLC-ESI-MS/MS) két csúcsot mutatott ki, amelyeket a teljes ionkromatogramban m/z 392,3 7 retenciós idővel rögzítettek.{1 0}} perc és 9.0 perc. Az MS/MS spektrum azt mutatta, hogy a 7,0 perces retenciós idejű csúcs fragmentuminformációja összhangban van az NB-EPA elméleti fragmenseivel (1B. ábra). Az új makamidból kimutatott fő fragmens ioncsúcs m/z 91,1, ami megfelel a benzil [C7H7] plusznak. Az MS/MS fragmens ioncsúcsok a zsírsav oldalon összhangban voltak a National Institute of Standards and Technology (NIST) Chemistry WebBook (SRD 69) eikozapentaénsavról közölt MS/MS adataival.

Az alacsony NB-EPA tartalma miattmaca, majd az NB-EPA-t szintetizáltuk a karbodiimid kondenzációs módszerrel. A szintetizált keveréket félpreparatív HPLC rendszerrel tisztítottuk. A 23,5 és 25,5 perc közötti retenciós idejű frakciót összegyűjtöttük, és az összegyűjtött frakció tisztasága elérte a 98,2 százalékot (1C, D ábra). A HPLC-MS/MS analízis kimutatta, hogy a bioszintetizált NB-EPA és a természetes NB-EPA kromatográfiás elválasztási jellemzői és a másodlagos tömegspektrometriás fragmentum információi azonosak (1E-G ábra). Ezek az adatok együttesen arra utalnak, hogy egy újmakamidAz NB-EPA-t innen azonosítottákmacaés sikeresen szintetizálták.

2.2. Az NB-EPA csökkenti az infarktusok számát és a neuroviselkedési hiányosságokat az újszülöttkori HI agysérüléseknél

Ezután megvizsgáltuk az NB-EPA bioaktivitását újszülött egerekben hipoxiás-ischaemiás (HI) agysérülést követően. Az agy megjelenéséről készült képek azt mutatták, hogy az ischaemiás agyszövet fehérré vált és megduzzadt a hordozó csoportban a HI utáni 1., 3., 7. és 14. napon (2A. ábra). Ezzel szemben az NB-EPA 250 µg/nap dózisban 3 napon át történő beadása jelentősen csökkentette az agyduzzanatot és az agy víztartalmát (2A, B ábra). A 2,3,5-trifenil-tetrazólium-kloriddal (TTC) végzett festés azt mutatta, hogy az NB-EPA-kezelés (11,13 ± 2,58 százalék) egyértelműen csökkentette az agyi infarktus méretét a HI után 3 nappal a vivőanyaghoz képest (37,01 ± 4,68 százalék). ) (2C. ábra). A neuroviselkedési tesztek kimutatták, hogy az egerek a vivőanyaggal kezelt csoportban jelentős idegrendszeri viselkedési rendellenességeket mutattak a HI utáni 1., 3. és 7. nappal (2D–F. ábra). Éppen ellenkezőleg, az NB-EPA kezelés egyértelműen javította ezeket a neurológiai hibákat (2D–F ábra). Így ezek az adatok azt mutatják, hogy az NB-EPA védelmet nyújt az ischaemiás lézió és a neuro-viselkedési hiányok ellen újszülött egerekben HI agysérülés után.

1. ábra: A természetes NB-EPA és a szintetikus NB-EPA kromatogramjai és MS/MS spektrumai.(A) Reprezentatív összionáram- (TIC) kromatogram, amelyet pozitívan kiválasztott ionfigyelő (SIM) módban kaptunk maca kivonatmintára. (B)M/z3923([NB-EPA plusz H]*) MS/MS spektruma a maca kivonat mintájára.(C) Szintetikus NB-EPA anyagok félpreparációs HPLC-kromatogramja. Az NB-EPA frakciók (23.{9}},5 perc) (D)HPLC kromatogramja, félpreparatív HPLC rendszerből gyűjtve. (E) Reprezentatív TIC-kromatogram, amelyet pozitív SIM-módban nyertünk szintetikus NB-EPA mintára. (F)MS/MS spektruma: m/z 392,3 a bioszintetikus NB-EPA mintára (G) Az NB-EPA kémiai szerkezete.

2.3. Az NB-EPA csökkenti a HI által kiváltott agykárosodást a neuronális apoptózis elnyomásával

Ezt követően megvizsgáltuk, hogy az NB-EPA védelme HI agysérülés esetén szerepet játszik-e az idegsejtek halálának modulálásában. A hematoxilin-eozin (HE) festés azt mutatta, hogy a neuronok elrendeződése a kéregben, a hippocampus dentate gyrusban (DG), a Cornu-féle ammónia (CA) 1 és CA3 régiókban rendezetlen volt. és az idegrostokat meglazították és vakuolizálták ischaemiás agyban HI sérülés után. Az NB-EPA-val végzett kezelés azonban egyértelműen megszüntette a neuronális sejtkárosodást (3A. ábra). A Western blot megerősítette, hogy az NB-EPA jelentősen csökkentette a pro-apoptotikus fehérjék, mint például a p53, PUMA és Bax expresszióját ischaemiás agyszövetben (3B, C ábra). Ezenkívül a neuronális sejtmag-antigén (NeuN) és a TUNEL kettős festése szignifikáns csökkenést mutatott a TUNEL plusz NeuN plusz sejtek számában 7 nappal a HI után az NB-EPA-val kezelt egerekben (5,80 ± 1,35%) a vivőanyagokhoz képest (14,39 ± 1,35%). 2,55 százalék). (3D. ábra). Ezek az adatok együttesen azt sugallják, hogy az NB-EPA jótékony hatása a HI agyi inzultusokban szerepet játszik a neuronális sejt apoptózis gátlásában.

2. ábra: Az NB-EPA beadása csökkenti az agyi infarktust és a viselkedési hibákat újszülött egerekben HI agysérülés után. (A) Reprezentatív képek az agy megjelenéséről 1, 3, 7 és 14 nappal a HI után. (B) Az agy víztartalmának statisztikai elemzése minden egércsoportból 3 nappal a Hl után. (C) Reprezentatív fényképek a TTC-vel festett koronális agymetszetekről minden egércsoportból a HI után 3 nappal és az infarktus térfogatának kvantitatív elemzése. (DF) A geotaxis reflex (D), a sziklakerülési reakció (E) és a tapadásteszt (F) neuroviselkedési eredményei a HI után 1, 3 és 7 nappal. Az adatok az átlag ± standard hibája (SEM) ( n=8 csoportonként).*p<0.05 compared="" to="">

2.4. Az NB-EPA csökkenti a HI által kiváltott agykárosodást a neuronális apoptózis elnyomásával

A Nissl-festés azt mutatta, hogy nagyszámú idegsejt sorvadást, duzzanatot és nukleáris piknózist mutatott, és még az ischaemiás agyban lévő Nissl-testek eltűnésével is elhaltak. Ezzel szemben az NB-EPA láthatóan javította a neuronok túlélését és a neuronok átrendeződését a HI sérülés után (4A, B ábra). A Western-blot kimutatta, hogy az NB-EPA megemelte a túlélést elősegítő jelátvitelként működő foszforilált AKT (p-AKT) szintjét ischaemiás agyszövetben 7 nappal a HI-fertőzés után (4C, D ábra). A Doublecortin (DCX) a neuronális prekurzorok és a fiatal vándorló neuronok markere [18], a Ki-67 pedig a sejtproliferáció markere [19]. Az NB-EPA kezelés (19,83 ± 1,25 sejt/mm3) feltűnően megnövelte a Ki-67 plusz DCX plusz sejtek számát 7 nappal a HI után a vivőanyaghoz képest (11,83 ± 1,08 sejt/mm3) (4E. ábra). Ezért ezek az adatok azt sugallják, hogy az NB-EPA elősegíti a neuronok túlélését és proliferációját újszülött egerekben HI agysérülés után.

3. ábra. Az NB-EPA gátolja az idegsejtek elhalását újszülött egerekben HI agysérülés után. (A) Reprezentatív fényképek a HE-festésről a kéregben, a hippocampus DG, CA1 és CA3 régiókban minden egércsoportból a HI után 7 nappal (skála, 75 μm). (B) Reprezentatív Western blot képek a p53-ról, PUMA-ról, és Bax minden egércsoportból a HI után 7 nappal. (C) Az adatok denzitometriás elemzése a (B) pontban látható. (D) A NeuN(piros) és TUNEL(zöld) reprezentatív képei minden egércsoportból 7 nappal a fertőzés után. HI (bal, skála, 25 um) az agykéregben; A NeuN és TUNEL kettős jelölésű sejtek mennyiségi meghatározása 7 nappal a HI (jobb) után. Az adatok átlag ± SEM (n =8 csoportonként). *p<005 compared="" to="">

cistanche pdf

2.5. Az NB-EPA csökkenti a HI által kiváltott agykárosodást a neuronális apoptózis elnyomásával

Az NB-EPA fenti védőhatása alapján újszülöttkori HI agykárosodásban tovább vizsgáltuk az NB-EPA közvetlen hatását a neuronok túlélésére in vitro. A 7 napig in vitro tenyésztett elsődleges kérgi neuronok kerekek és kicsik voltak, gazdag szinapszisokkal és összekapcsolt hálózatokkal (5A. ábra). A neuronok tisztaságát áramlási citometriával határoztuk meg, és a pozitív arány több mint 95 százalék volt (5B. ábra). A NeuN* neuronokat immunfluoreszcenciával is azonosították (5C. ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az elsődleges kérgi neuronokat sikeresen tenyésztették.

4. ábra: Az NB-EPA javítja a neuronok túlélését és proliferációját újszülött egerekben HI agysérülés után. (A) Reprezentatív fényképek a Nissl-festésről a kéregben, a hippocampus DG, CAl és CA3 régióiban, minden egércsoportból 7 nappal a HI (skála, 75 μm) után. (B) A neuronok számának statisztikai elemzését az (A) mutatja. (C) Reprezentatív Western-blot-képek p-AKT-ról és AKT-ról minden egércsoportból 7 nappal a H után. (D) Az adatok denzitometriás elemzése a (C) részben látható. (E) A DCX (zöld) és Ki-67 (piros) reprezentatív képei minden egércsoportból 7 nappal a HI után (bal, skála, 25 um) a hippocampus DG régiókban; a DCX és Ki{11}} kettős jelölésű sejt mennyiségi meghatározása 7 nappal a HI után (jobbra). Az adatok átlag±SEM (n=8 csoportonként).*p<0.05 compared="" to="">

Ezután a neuronokat 3 órás oxigén-glükóz megvonásnak (OGD) vetettük alá, és különböző koncentrációjú NB-EPA-val kezeltük. A hipoxiás neuronok atrófiával és nukleáris piknózissal jelentek meg a hordozóban, PBS-sel kezelt tenyészetekben. Ezzel szemben az NB-EPA kezelés szignifikánsan javította a neuronok túlélését az OGD után (5D ábra). A neuronok túlélését 24 órával később sejtszámláló kit-8(CCK-8) teszt segítségével mérték. Amint az 5E. ábrán látható, az NB-EPA kezelés láthatóan megmentette a neuronok túlélési arányát az OGD iniury után. Az NB-EPA maximális hatékonyságát 1 μM-nál érték el, amelyet minden következő in vitro kísérletben használtunk. Az áramlási citometriás elemzés megerősítette, hogy az NB-EPA-val kezelt tenyészetekben az annexin-pozitív neuronok száma szignifikánsan csökkent a vivőanyaggal PBS-kezelt tenyészetekhez képest (5F. ábra). Mindeközben az NB-EPA kezelés jelentősen gátolja az apoptózissal kapcsolatos fehérjék, köztük a p53, PUMA és Bax expresszióját az OGD-kondicionált neuronokban (5G. ábra, H). Ezért ezek az adatok azt sugallják, hogy az NB-EPA az idegsejtek túlélésének fokozása révén gyengíti az idegsejtek károsodását, miközben gátolja a neuronális apoptózist.

5. ábra. Az NB-EPA csökkenti az ischaemiás neuronális károsodást OGD-kihívás után. (A) Az 1, 3 és 7 napon tenyésztett elsődleges kérgi neuronok reprezentatív képei (Scale bar, 25 μm). (B) A 7 napig in vitro tenyésztett primer agykérgi neuronokból származó NeuN plusz sejtek százalékos aránya.(C) A NeuN(zöld) és a 4',{8}}diamidino-2-fenil-indol (DAPI) reprezentatív képei ( kék) 7 napig in vitro tenyésztett primer agykérgi neuronokból (skála, 10 um). (D) Reprezentatív képek a primer agykérgi neuronokról minden csoportból 24 hof-tenyészetben 3 óra OGD után (Scale bar, 25 μm). （E）CCK-8 vizsgálat neutronban dúsított tenyészetekben, amelyeket 3 órás OGDor kontroll körülményeknek vetettek alá, majd további 24 órás NB-EPA koncentrációjú kezelésnek vetették alá. (F) A csatolt neuronok százalékos aránya 24 órán keresztül 3 óra OGD után. (G) Reprezentatív Western blot képek a p53-ról, a PUMA-ról és a Bax-ról minden csoportból 24 órás tenyésztéssel 3 óra OGD után.(H) Az adatok denzitometriás elemzése a (G) részben látható. Az adatok átlag ±SEM (n =3 minden csoportban).* p<0.05 compared="" to="">

2.6. Az NB-EPA megvédi a neuronokat az apoptózistól a p53-PUMA elnyomásával

Jelátvitel A p53–PUMA útvonalról ismert, hogy részt vesz az ischaemia/reperfúzió által kiváltott agyi neuronális sejt apoptózisban [20]. Itt azt vizsgáltuk, hogy az NB-EPA neuronhalál elleni védelme összefüggésben van-e a p53-PUMA útvonal gátlásával. Amint az a 6A. ábrán látható, az NB-EPA megszüntette az OGD által kondicionált sejtapoptózist, de nem volt hatással a pififitrin- (PFT) p53 inhibitorral előkezelt mintákra. Eközben az NB-EPA kezelés jelentősen gátolta a pro-apoptotikus Bax fehérje expresszióját OGD-kondicionált neuronokban, de nem volt hatással a PFT-vel előkezeltekre (6B. ábra). A PUMA expressziója észrevehetően fokozódott a neuronokban az OGD-fertőzés után, míg a PUMA mRNS és fehérje expressziója nem változott a PFT-vel előkezelt neuronokban, ami azt jelzi, hogy a PUMA indukció az idegsejtekben p53-függő (6C. ábra). Az NB-EPA kezelés gátolta az OGD által kiváltott PUMA expressziót a neuronokban, de nem volt hatással a PFT-vel előkezelt neuronokra (6C. ábra). A specifikus PUMA-csendesítéssel rendelkező agyi neuronok alacsonyabb százalékos arányban apoptotikus sejteket (6D. ábra) és csökkent Bax-fehérje expressziót (6E. ábra) mutattak az OGD-fertőzés után 24 órával a PUMA-t expresszáló neuronokhoz képest. Ezért ezek az adatok azt mutatják, hogy az OGD által kiváltott neuron-apoptózis NB-EPA által közvetített gátlása nagymértékben függ a p53-PUMA útvonal elnyomásától.

6. ábra. Az NB-EPA csökkenti a neuronok apoptózisát a p53-PUMA útvonal gátlásával. (A) Az annexin plusz neuronok százalékos aránya p53 gátlással vagy anélkül NB-EPA-val vagy anélkül, 24 órás tenyésztéssel és 3 órás OGD után. (B) Reprezentatív Western blot-képek Baxról p53 gátlással vagy anélkül NB-EPA-val vagy anélkül, 24 órás tenyésztéssel és 3 óra OGD után (balra); A Bax fehérje expresszió denzitometriás elemzése (jobbra). (C) PUMA mRNS expressziója neuronokban a tenyésztés 12. órájában NB-EPA-val vagy anélkül, és 3 óra OGD után (balra); a PUMA fehérje expressziójának átlagos százalékos aránya a neuronokban 24 órás tenyésztéssel NB-EPA-val vagy anélkül, és 3 óra OGD után (jobbra). (D) Az annexin neuronok százalékos aránya PUMA knockdown-nal vagy anélkül 24 órás tenyésztéssel NB-EPA-val vagy anélkül, és 3 órás OD után. (E) Reprezentatív Western blot-képek Baxról PUMA knockdown-nal vagy anélkül 24 órás tenyésztéssel vagy NB-EPA nélkül és 3 óra OGD után (balra); A Bax fehérje expresszió denzitometriás elemzése (jobbra). Az adatok átlag ± SEM (n=3 csoportonként).*p< 0.05="" compared="" to="" vehicle.="" n.s.="" not="">

3. Megbeszélés

A perinatális asphyxia okozta újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás károsodás az egyik leggyakoribb újszülöttkori betegség. Hiányoznak olyan hatékony gyógyszerterápiás beavatkozások, amelyek csökkentik az agykárosodást vagy javítják a csecsemők neurológiai funkcióját [21]. Jelen tanulmányban azt találtuk, hogy az új makamid NB-EPA-val végzett kezelés jelentősen enyhítette a hipoxiás-ischaemiás agysérülést újszülött egerekben. Az NB-EPA neuroprotekciója a neuronális túlélés fokozódásával függött össze, miközben gátolta az idegsejtek halálát. Nevezetesen, az NB-EPA által közvetített antiapoptotikus mechanizmus a p53-PUMA jelátvitel elnyomásától függött. A macamidok, amelyeket a maca jellegzetes markervegyületeiként ismernek, benzil-aminból és egy hosszú szénláncú, változó telítetlenségi fokú zsírsavból állnak [22].

A macakivonatban huszonháromféle makamidról számoltak be, amelyek közül az N-benzil-hexadekánamid a legnagyobb mennyiségben előforduló vegyület a perui maca-ban, míg az N-benzil-9Z,12Z-oktadekadienamid a Yunnan maca leggazdagabb vegyülete. [23]. Ebben a tanulmányban egy új makamid NB-EPA-t azonosítottunk Yunnan-ból származó macában. A makamid NB-EPA benzil-aminból és eikozapentaénsavból (EPA; 20:5, n-3) áll, amely az omega-3 többszörösen telítetlen zsírsav (n-3 PUFA) egyik fő összetevője. ). n-3 A PUFA-król és metabolitjaikról beszámoltak arról, hogy a központi idegrendszerben léteznek, és döntő szerepet játszanak az agyműködésben és olyan betegségekben, mint a neurotranszmisszió, a neurogenezis és a neurogyulladás [24]. Megjegyzendő, hogy egyes tanulmányok azt sugallják, hogy az EPA az n-3 PUFA-k és a dokozahexaénsav (DHA; 22:6, n-3) helyett az ischaemiás stroke legtöbb típusának alacsonyabb kockázatával függ össze [25 ]. Ezekkel az eredményekkel egyetértésben kimutattuk, hogy ez az új makamid NB-EPA nemcsak enyhíti az agysérülést, hanem javítja a HI-sérülés utáni neuro-viselkedési hiányosságokat is. A neuronok az idegrendszer legalapvetőbb szerkezeti és funkcionális egységei, amelyek feladata a bemeneti információk összekapcsolása és integrálása, valamint információ kiküldése. Ha az agy hipoxia és ischaemia következtében megsérül, nagyszámú idegsejt károsodik, ami viszont neurológiai diszfunkciót okoz. A p53, a celluláris stresszválasz kulcsfontosságú szabályozója, agysérülés után aktiválódhat az ischaemiás területeken [26]. Elősegítheti a neuronális apoptózist, a p53 hiánya vagy a p53 inhibitorok alkalmazása pedig jelentősen mérsékelheti az agykárosodást különböző stroke modellekben [27]. A p53-közvetített apoptózis számos molekuláris mechanizmuson keresztül megy végbe, amelyek közül a PUMA, az ap53- és az apoptózis felszabályozott modulátora egy erős proapoptotikus gén a p53-tól lefelé [28]. Tanulmányok kimutatták, hogy a p53–PUMA útvonal szerepet játszik a striatum neuronjainak mitokondriális inhibitorok által kiváltott apoptózisában patkányokban [29].

vesekárosodás és -betegségcistanche propedades

A p53-PUMA visszacsatolási hurok aktiválásának gátlása p53 inhibitorokkal és PUMA siRNS-sel csökkentheti az ischaemia-reperfúzió által kiváltott neuronális apoptózist és gyulladást [30]. Eredményeink összhangban vannak ezekkel a tanulmányokkal, amelyek azt mutatják, hogy a PUMA erősen végrehajtja a p53-közvetített apoptózist az idegsejtekben HI agysérülés után. Az NB-EPA kezelés gátolja a HI által kiváltott PUMA-emelkedést a neuronokban. Ezenkívül az NB-EPA neuronális túlélésre gyakorolt ​​védő hatása nagymértékben függ a PUMA jelátvitel elnyomásától. Egyre több bizonyíték mutat rá, hogy az n-3 PUFA-k hozzájárulnak a neuronok túléléséhez és neurogeneziséhez ischaemiás agykárosodás után [31,32]. Javíthatják a stroke prognózisát és korlátozhatják a további neuronkárosodást [33]. Bár az ischaemiás stroke indukálja a neurális progenitor sejtek proliferációját és differenciálódását a szubventrikuláris zónában (SVZ), az újonnan keletkezett neuronok többsége röviddel a stroke után elhal [34]. n-3 A PUFA-król beszámoltak arról, hogy nemcsak az éretlen neuronok túlélését fokozzák, hanem elősegítik érését is a kérgi parenchymában stroke-károsodást követően [35]. A közelmúltban több tanulmány is felvetette a makamidok jótékony hatását a neuronális károsodások enyhítésében, ami a mitokondriális légzésfunkció javulásával függ össze [36,37].

Az AKT jelátviteli útvonal fontos szerepet játszik az apoptózis elleni mechanizmusban. Amikor az agy megsérül, az AKT útvonal aktiválódik, és a szervezet önvédelmet és sérülések helyreállítását kezdeményezi, ami a p-AKT fokozott expressziójához vezet [38–41]. Ezekkel az eredményekkel összhangban megfigyeltük, hogy az NB-EPA-val végzett kezelés megvédi a neuronok túlélését a HI-közvetített agysérüléssel szemben a túlélést elősegítő AKT jelátvitel aktiválásával, miközben gátolja a pro-apoptotikus útvonalat.

A neurobiológusok sokáig úgy gondolták, hogy a neurális őssejtek (NSC-k) röviddel a születés előtt vagy után eltűntek, és a neurogenezis ekkor leállt. Az az elképzelés, hogy az érett agyban nincsenek új neuronok, az 1960s években kezdett megváltozni. A kutatások fejlődésével kiderült, hogy a felnőttkori NSC-k főként az SVZ-ben és a hippocampalis dentate gyrus subgranuláris zónájában (SGZ) találhatók [42–44]. Ezenkívül később megerősítést nyert, hogy az NSC-k a központi idegrendszer (CNS) más kiterjedt területein is léteznek [45]. A legújabb tanulmányok kimutatták, hogy az endogén NSC-k a kéregben agysérülés után aktiválódhatnak, hogy hozzájáruljanak a hipoxiás-ischaemiás agysérülés helyreállításához önmegújuláson, proliferáción, valamint új neuronok, asztrociták és oligodendrociták létrehozásán keresztül [46,47]. . A DCX hozzájárul a neuronok helyreállításához azáltal, hogy stabilizálja a mikrotubulusokat az idegsejtekben, és egy marker az új neuronok vándorlásának nyomon követésére az agy sérült területeire [48]. A hipoxiás-ischaemiás agysérülés és a súlyos traumás agysérülés fokozza a DCX-et expresszáló új striatum neuronok termelődését [49]. A Ki-67 egy proliferáló sejtekhez kapcsolódó nukleáris antigén, amely a G0 fázison kívül minden proliferációs ciklust lefed. Ebben a vizsgálatban az NB-EPA beadása nyilvánvalóan elősegíti a neurogenezist, amely a Ki-67 plusz DCX plusz sejtek növekedéséhez kapcsolódik HI agysérülés után. Tovább kell azonban vizsgálni, hogy a Ki-67 plusz DCX plusz sejtek számának növekedése összefüggésben áll-e az NB-EPA által kiváltott idegi őssejtek proliferációjával és differenciálódásával.

Hivatkozások

1 Thornton, C.; Rousset, C.; Kicsev, A.; Miyakuni, Y.; Vontell, R.; Baburamani, AA; Fleiss, B.; Gressens, P.; Hagberg, H. Az újszülöttkori agysérülés molekuláris mechanizmusai. Neurol. Res. Int. 2012, 2012, 506320. [CrossRef]

2. Ma, Q.; Zhang, L. A hipoxiás-ischaemiás encephalopathia epigenetikai programozása magzati hipoxiára válaszul. Prog. Neurobiol. 2015, 124, 28–48. [CrossRef] [PubMed]

3. Conforti M, HD; Deniz, BF; de Almeida, W.; Miguel, PM; Bronaugh, L.; Vieira, MC; de Oliveira, Kr. e. Pereira, LO Az újszülöttkori hypoxia-ischaemia enyhe motoros diszfunkciót okozott, amelyet akrobatikus edzéssel helyreállítottak anélkül, hogy befolyásolták volna a patkányok motoros szabályozásában részt vevő morfológiai struktúrákat. Brain Res. 2019, 1707, 27–44. [CrossRef]

4. Yıldız, EP; Ekici, B.; Tatlı, B. Újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás encephalopathia: Frissítés a betegség patogeneziséről és kezeléséről. Szakértő. Neurother tiszteletes. 2017, 17, 449–459. [CrossRef]

5. Azzopardi, DV; Strohm, B.; Edwards, Kr. u. Dyet, L.; Halliday, HL; Juszczak, E.; Kapellou, O.; Levene, M.; Marlow, N.; Porter, E.; et al. Mérsékelt hipotermia perinatális asphyxiás encephalopathia kezelésére. N. Engl. J. Med. 2009, 361, 1349–1358. [CrossRef] [PubMed]

6. Tagin, MA; Woolcott, CG; Vincer, MJ; Whyte, RK; Stinson, DA Hipotermia újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás encephalopathiában: frissített szisztematikus áttekintés és metaanalízis. Boltív. Pediatr. Adolesc. Med. 2012, 166, 558–566. [CrossRef] [PubMed]

7. Thoresen, M.; Sabir, H. Epilepszia: Az újszülöttkori rohamok még mindig hiányoznak a biztonságos és hatékony kezelésből. Nat Rev Neurol. 2015, 11, 311–312. [CrossRef] [PubMed]

8. Nair, J.; Kumar, VHS Jelenlegi és kialakulóban lévő terápiák az újszülöttek hipoxiás ischaemiás encephalopathiájának kezelésében. Gyermekek 2018, 5, 99. [CrossRef] [PubMed]

9. Gonzales, GF; Gonzales, C.; Gonzales-Castañeda, C. Lepidium meyenii (Maca): Peru hegyvidékéről származó növény – a hagyománytól a tudományig. Forsch. Komplementmed. 2009, 16, 373–380. [CrossRef]

10. Chen, L.; Li, J.; Fan, L. A maca táplálkozási összetétele Kína különböző régióiban termesztett hipokotilokban (Lepidium meyenii Walp.). J. Food Quality 2017, 2017, 3749627. [CrossRef]

11. Balick, MJ; Lee, R. Maca: A hagyományos élelmiszertermesztéstől az energia- és libidót serkentőig. Altern. Ott. Egészségügyi Med. 2002, 8, 96.

12. Chen, SX; Li, KK; Pub, D.; Jiang, SP; Chen, B.; Chen, LR; Yang, Z.; Ma, C.; Gong, XJ Optimization of Ultrahang-assisted Extraction, HPLC és UHPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS A Maca (Lepidium meyenii Walp fajtái) fő makamidok és makaének elemzése. Molecules 2017, 22, 2196. [CrossRef]

13. Yang, Q.; Jin, W.; Lv, X.; Dai, P.; Ao, Y.; Wu, M.; Deng, W.; Yu, L. A makamidok hatása az állóképességre és a fáradtság elleni tulajdonságokra hosszan tartó úszású egereknél. Pharm. Biol. 2016, 54, 827–834. [CrossRef] [PubMed]

14. Wang, T.; V, CH; Zhong, HB; Gong, Y.; Cui, ZK; Xie, J.; Wang, YP; Liang, C.; Cao, HH; Chen, XR; et al. Az N-(3- metoxibenzil)-(9Z,12Z,15Z)-oktadekatrienamid elősegíti a csontképződést a kanonikus Wnt/-catenin jelátviteli útvonalon keresztül. Fitother. Res. 2019, 33, 1074–1083. [CrossRef]

15. Uchiyama, F.; Jikyo, T.; Takeda, R.; Ogata, M. Lepidium meyenii (Maca) növeli a luteinizáló hormon szérumszintjét nőstény patkányokban. J. Ethnopharmacol. 2014, 151, 897–902. [CrossRef] [PubMed]

16. Alasmari, M.; Böhlke, M.; Kelley, C.; Maher, T.; Pino-Figueroa, A. Zsírsav-amid-hidroláz (FAAH) gátlása Macamidok által. Mol. Neurobiol. 2019, 56, 1770–1781. [CrossRef]

17. Huang, YJ; Peng, XR; Qiu, MH Progress on the Chemical Constituents Derived glucosinolates in Maca (Lepidium meyenii). Nat. Prod. Bioprospect. 2018, 8, 405–412. [CrossRef] [PubMed]

18. Piens, M.; Muller, M.; Bodson, M.; Baudouin, G.; Plumier, JC. Egy rövid upstream promoter régió közvetíti az egér doublecortin gén transzkripciós szabályozását differenciálódó neuronokban. BMC. Neurosci. 2010, 11, 64. [CrossRef]

19. Rahmanzadeh, R.; Hüttmann, G.; Gerdes, J.; Scholzen, T. A PKI-67 kromofor által segített fényinaktiválása a riboszomális RNS szintézis gátlásához vezet. Cell Prolif. 2007, 40, 422–430. [CrossRef]

20. Hong, LZ; Zhao, XY; Zhang, HL p53-mediált neuronális sejthalál ischaemiás agysérülésben. Neurosci Bull. 2010, 26, 232–240. [CrossRef]

21. Wachtel, EV; Verma, S.; Mally, PV Frissítés az újszülöttek újszülöttek encephalopathiájával kapcsolatos jelenlegi kezeléséről. Curr Probl Pediatr. Adolesc. Health Care 2019, 49, 100636. [CrossRef] [PubMed]

22. Wang, S.; Zhu, F. A maca (Lepidium meyenii) kémiai összetétele és egészségügyi hatásai. Food Chem. 2019, 288, 422–443. [CrossRef]

23. Carvalho, FV; Ribeiro, PR Strukturális sokféleség, bioszintetikus szempontok és LC-HRMS adatgyűjtés a Lepidium meyenii bioaktív vegyületeinek azonosítására. Food Res. Int. 2019, 125, 108615. [CrossRef]

24. Bazinet, RP; Layé, S. Többszörösen telítetlen zsírsavak és metabolitjaik az agyműködésben és a betegségekben. Nat. Neurosci tiszteletes. 2014, 15, 771–785. [CrossRef] [PubMed]

25. Venø, SK; Bork, CS; Jakobsen, MU; Lundbye-Christensen, S.; McLennan, PL; Bach, FW; Overvad, K.; Schmidt, EB Marine n-3 Többszörösen telítetlen zsírsavak és az ischaemiás stroke kockázata. Stroke 2019, 50, 274–282. [CrossRef]

26. Yonekura, I.; Takai, K.; Asai, A.; Kawahara, N.; Kirino, T. p53 potencírozza a hippocampalis idegsejtek globális ischaemia által okozott halálozását. J. Cereb. Véráram. Metab. 2006, 26, 1332–1340. [CrossRef] [PubMed]

27. Xie, YL; Zhang, B.; Jing, L. MiR-125b blokkolja a Bax/Cytochrome C/Caspase-3 apoptotikus jelátviteli útvonalat agyi ischaemia-reperfúziós sérülés patkánymodelljében célzás útján. Neurol. Res. 2018, 40, 828–837. [CrossRef] [PubMed] 28. Chen, H.; Tian, ​​M.; Jin, L.; Jia, H.; Jin, Y. A PUMA részt vesz az egér agyi asztrocitáinak ischaemia/reperfúzió által kiváltott apoptózisában. Neuroscience 2015, 284, 824–832. [CrossRef] [PubMed]

29. Zhang, XD; Wang, Y.; Wang, Y.; Zhang, X.; Han, R.; Wu, JC; Liang, ZQ; Gu, ZL; Han, F.; Fukunaga, K.; et al. A p53 közvetíti a mitokondriumok diszfunkciója által kiváltott autofágia aktivációt és sejthalált patkány striatumban. Autofágia 2009, 5, 339–350. [CrossRef] [PubMed]

30. Li, XQ; Yu, Q.; Chen, FS; Tan, WF; Zhang, ZL; Ma, H. Az aberráns p53-PUMA visszacsatolási hurok aktiválásának gátlása csökkenti az ischaemia reperfúzió által kiváltott neuroapoptosist és neuroinflammációt patkányokban a kaszpáz 3 és az NF-κB citokin útvonal leszabályozásával. J. Neuroinflflamm. 2018, 15, 250. [CrossRef] [PubMed]

31. Shi, Z.; Ren, H.; Luo, C.; Yao, X.; Ajak.; Ő c.; Kang, JX; Wan, JB; Yuan, TF; Su, H. A dúsított endogén omega-3 többszörösen telítetlen zsírsavak megvédik a kérgi neuronokat a kísérleti ischaemiás sérüléstől. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 6482–6488. [CrossRef] [PubMed]

32. Belajev, L.; Hong, SH; Menghani, H.; Marcell, SJ; Obenaus, A.; Freitas, RS; Khoutorova, L.; Balaszczuk, V.; Jun, B.; Oriá, RB; et al. A dokozanoidok elősegítik a neurogenezist és az angiogenezist, a vér-agy gát integritását, a Penumbra védelmet és a neuroviselkedési helyreállítást kísérleti ischaemiás stroke után. Mol. Neurobiol. 2018, 55, 7090–7106. [CrossRef]

33. Zendedel, A.; Habib, P.; Dang, J.; Lammerding, L.; Hoffmann, S.; Beyer, C.; Slowik, A. Az Omega-3 többszörösen telítetlen zsírsavak az asztrocitákkal és mikrogliákkal való kölcsönhatás révén enyhítik az ideggyulladást és enyhítik az ischaemiás stroke-károsodást. J. Neuroimmunol. 2015, 278, 200–211. [CrossRef]

34. Ohab, JJ; Fleming, S.; Blesch, A.; Carmichael, ST A neurovaszkuláris rés a stroke utáni neurogenezis számára. J. Neurosci. 2006, 26, 13007–13016. [CrossRef] [PubMed]

35. Zhang, W.; Wang, H.; Zhang, H.; Szivárgás, RK; Shi, Y.; Hu, X.; Gao, Y.; Chen, J. Az omega-3 többszörösen telítetlen zsírsavakkal történő étrend-kiegészítés erőteljesen elősegíti a neurovaszkuláris helyreállító dinamikát és javítja a stroke utáni neurológiai funkciókat. Exp. Neurol. 2015, 272, 170–180. [CrossRef]

36. Gugnani, KS; Vu, N.; Rondón-Ortiz, AN; Böhlke, M.; Maher, TJ; Pino-Figueroa, AJ A makamidok neuroprotektív hatása mangán által kiváltott mitokondriális zavarokra U-87 MG glioblasztóma sejtekben. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2018, 340, 67–76. [CrossRef]

37. Zhou, Y.; Wang, H.; Guo, F.; Si, N.; Brantner, A.; Yang, J.; Han, L.; Wei, X.; Zhao, H.; Bian, B. Integrált proteomika és lipidomika Az N-benzil-hexadekánamid neuroprotektív hatásának hátterében álló mechanizmus vizsgálata. Molecules 2018, 23, 2929. [CrossRef] [PubMed]

38. Liu, Y.; Liu, Y.; Jin, H.; Cong, P.; Zhang, Y.; Tong, C.; Shi, X.; Liu, X.; Tong, Z.; Shi, L.; et al. A hidegstressz által kiváltott agysérülés szabályozza a TRPV1 csatornákat és a PI3K/AKT jelátviteli útvonalat. Brain Res. 2017, 1670, 201–207. [CrossRef]

39. Xu, W.; Li, T.; Gao, L.; Lenahan, C.; Zheng, J.; Yan, J.; Shao, A.; Zhang, J. A nátrium-benzoát enyhíti a másodlagos agysérülést azáltal, hogy gátolja a neuronális apoptózist és csökkenti a mitokondriumok által közvetített oxidatív stresszt az intracerebrális vérzés patkánymodelljében: DJ lehetséges bevonása-1/Akt/IKK/NFκB Pathway. Elülső. Mol. Neurosci. 2019, 12, 105. [CrossRef]

40. Li, J.; Bármi.; Wang, JN; Yin, XP; Zhou, H.; Wang, YS A kurkumin a vaszkuláris endoteliális növekedési faktorokat célozza meg a PI3K/Akt jelátviteli útvonal aktiválásával, és javítja az agy hipoxiás-ischaemiás károsodását újszülött patkányokban. Koreai. J. Physiol. Pharmacol. 2020, 24, 423–431. [CrossRef]

41. Li, T.; Xu, W.; Gao, L.; Guan, G.; Zhang, Z.; Ő P.; Xu, H.; Fan, L.; Yan, F.; Chen, G. A mesencephalic asztrocita eredetű neurotróf faktor idegvédelmet nyújt a subarachnoidális vérzés által kiváltott korai agysérülés ellen, aktiválva az Akt-függő túlélési útvonalat és megvédve a vér-agy gát integritását. FASEB J. 2019, 33, 1727–1741. [CrossRef]

42. Morshead, CM; Reynolds, BA; Craig, CG; McBurney, MW; Staines, WA; Morassutti, D.; Weiss, S.; van der Kooy, D. Neurális őssejtek a felnőtt emlős előagyban: A szubependimális sejtek viszonylag nyugvó alpopulációja. Neuron 1994, 13, 1071–1082. [CrossRef]

43. Chiasson, BJ; Tropepe, V.; Morshead, CM; van der Kooy, D. Felnőtt emlős előagyi ependimális és szubependimális sejtjei proliferatív potenciált mutatnak, de csak a szubependimális sejtek rendelkeznek idegi őssejtjellemzőkkel. J. Neurosci. 1999, 19, 4462–4471. [CrossRef] 44. Alvarez-Buylla, A.; Lim, DA Hosszú távon: Csírarések fenntartása a felnőtt agyban. Neuron 2004, 41, 683–686. [CrossRef]

45. Vescovi, AL; Snyder, EY Neurális őssejt klónok létrehozása és tulajdonságai: plaszticitás in vitro és in vivo. Brain Pathol. 1999, 9, 569–598. [CrossRef] [PubMed] 46. Buffo, A.; Rite, I.; Tripathi, P.; Leiper, A.; Colak, D.; Horn, AP; Mori, T.; Götz, M. A reaktív gliózis eredete és utódai: Multipotens sejtek forrása a sérült agyban. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2008, 105, 3581–3586. [CrossRef]

47. Ahmed, AI; Shtaya, AB; Zaben, MJ; Owens, EV; Kiecker, C.; Gray, WP Az endogén GFAP-pozitív idegi ős-/progenitor sejtek a születés utáni egérkéregben traumás agysérülést követően aktiválódnak. J. Neurotrauma 2012, 29, 828–842. [CrossRef] [PubMed] 48. Horesh, D.; Sapir, T.; Ferenc, F.; Wolf, SG; Caspi, M.; Elbaum, M.; Chelly, J.; Reiner, O. Doublecortin, a mikrotubulusok stabilizátora. Zümmögés. Mol. Közönséges petymeg. 1999, 8, 1599–1610. [CrossRef] [PubMed]

49. Ong, J.; repülőgép, JM; Szülő, JM; Silverstein, FS A hipoxiás-ischaemiás sérülés serkenti a szubventrikuláris zóna proliferációját és a neurogenezist újszülött patkányban. Pediatr. Res. 2005, 58, 600–606. [CrossRef] [PubMed]

50. Shao, Y.; Li, Y.; Liu, T. Tanulmány a fő macamidok (Lepidium meyenii Walp.) extrakciós folyamatának optimalizálására vonatkozóan. Étel. Res. Dev. 2017, 38, 35–39.

51. Skorupskaite, V.; Makareviciene, V.; Gumbyte, M. Lehetőségek egyidejű olajkinyerésre és átészterezésre biodízel üzemanyag-előállítás során mikroalgából: Áttekintés. Üzemanyag. Folyamat. Technol. 2016, 150, 78–87. [CrossRef]

52. Rice, JE, 3.; Vannucci, RC; Brierley, JB. Az éretlenség hatása patkányok hipoxiás-ischaemiás agykárosodására. Ann. Neurol. 1981, 9, 131–141. [CrossRef] [PubMed]

53. Xiao, AJ; Chen, W.; Xu, B.; Liu, R.; Turlova, E.; Barszczyk, A.; V, CL; Liu, L.; Deurloo, M.; Wang, GL; et al. A tengeri xiloketál B vegyület csökkenti az újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás agysérülést. Március Drugs 2014, 13, 29–47. [CrossRef] [PubMed]

54. Jiao, M.; Li, X.; Chen, L.; Wang, X.; Yuan, B.; Liu, T.; Dong, Q.; Mei, H.; Yin, H. Az asztrocita eredetű IL-33 neuroprotektív hatása újszülöttkori hipoxiás-ischaemiás agysérülésben. J. Neuroinflflamm. 2020, 17, 251. [CrossRef] [PubMed]