A CARISTANCHE DESERTICOLA poliszacharid -kivonat válaszfelületi módszertan segítségével a CISTANCHE DESERTICOLA POLYCHARID KIVAKAZÓ CISTANCHE DESERTICOLA POLYSACHARID Extract -os antioxidáns aktivitásának optimalizálása

ABSZTRAKT:

 

Célkitűzés:A cistanche sivaterticola poliszacharidok elpusztulási folyamatának optimalizálása és antioxidáns aktivitásuk feltárása érdekében.

Megvizsgáltuk az aktivált széntartalmú, mint elpusztító szerként alkalmazott aktivált szénet, beleértve az aktivált szén -adagolást, a képalkotási hőmérsékletet, a lebontási időt és a pH -t, a dazorizációs sebességre és a poliszacharid visszanyerési sebességére. Az egy faktor kísérletek alapján a CISTANCHE DESERTICOLA poliszacharid -kivonat domborzási folyamatát a válaszfelület módszertanával optimalizáltuk. In vitro antioxidáns aktivitási értékelési módszer alkalmazásával az 1, 1- difenil -2- picryl-hidrazin (DPPH), a teljes redukáló képesség, a hidroxil-radikális scavenging képesség és a 2,2'-azino-i-Azino-tó, a teljes redukciós képesség, a 2,2'-azino (DPPH). BIS (3- etil -benzotiazol - 6- szulfonsav) diamonium -só (ABTS) kationos kation szabad gyökös scavenging képességét határoztuk meg a cistanche deserticola poliszacharidokból. Eredmények A poliszacharidok kivonásának optimális elpusztulási folyamat feltételei a cistanche -dezertikola -ból a következők voltak: aktív szén -adagolás 20%, domborzási hőmérséklet 37 fok, 49 perc elpusztulási idő, pH 5,03. Ezen optimális körülmények között a dekoloizációs sebesség és a poliszacharid visszanyerési aránya 62,66%, illetve 96,16% volt. A elpusztulás után a DPPH radikális és hidroxil -szabad gyökök megsemmisítésének képességei szignifikánsan megnövekedtek, míg az ABTS aniongyökök megsemmisítésének képességei szignifikánsan csökkentek. KÖVETKEZTETÉS A boncolási folyamat könnyen működtethető, jó domblorizációs hatásokkal és poliszacharid -visszanyerési sebességgel. Fontos alkalmazási értéke van, és alapot nyújt a CISTANCHE DESERTICOLA poliszacharid későbbi kutatásához és fejlesztéséhez.

Kulcsszavak: cistanche sivaterticolapoliszacharid; színtelenítés; válaszfelületi módszertan; antioxidáns aktivitás

CistancheDeserticola hatások

 

1.2.3 A poliszacharid visszanyerési sebességének mérése

A standard görbe előkészítése:
A fenol-szulfursav módszert alkalmaztuk. Körülbelül 0. Ezután 1,0 ml raktároldatot pontosan megmértünk és 10 ml -re hígítunk egy térfogat lombikban, hogy 0,1 mg/ml standard oldatot kapjunk. A 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 és 100 μl glükóz -glükóz standard oldatait pontosan 1,5 ml centrifugacsövekké mértük. Mindegyik csőhöz desztillált vizet adtunk, hogy teljes mennyiségű 100 μl -t tegyünk. Egy másik 1,5 ml -es centrifuga csövet, amely 100 μl desztillált vizet tartalmazott, üres kontrolloldatként. Mindegyik csőhez 100 μl 5% fenololdatot adunk hozzá, alaposan összekeverve, majd gyorsan hozzáadunk 500 μl koncentrált kénsavat. A csöveket 3 percig vortexeljük, és 35 percig álltak. Ezután 200 μl reakcióoldatot vittünk át egy 96- kútlemezre, és az abszorbanciát 490 nm -en mértük automatikus mikrotábla -olvasó segítségével. A standard görbét az abszorbancia (Y) függőleges tengelyként és glükózkoncentrációjával (X, UG/ml) ábrázoltuk a vízszintes tengelyként. A kapott standard görbe egyenlet:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

A poliszacharid -tartalom mérése:
Egy 100 μl hígított aliquotCistanche sivatagolaA poliszacharid -kivonatot pontosan mérjük egy 1,5 ml -es centrifuga csőbe. Az abszorbancia értéket a fent leírt módszerrel határoztuk meg, és a poliszacharid koncentrációját a standard görbével számítottuk.

A poliszacharid visszanyerési sebességének mérése:
A poliszacharidok tömege aCistanche sivatagolaA kivonatot a elhalványulás előtt és után a fenti módszerrel mértük. A poliszacharid visszanyerési sebességét a (2) egyenlet alkalmazásával számítottuk:

Poliszacharid visszanyerési aránya (%)
= (mafTermBefore) × 100%\ bal (\ frac {m _ \ text {után}} {m _ \ text {előtt}} \ dight) \ idő 100 \%(mbefore mafter) × 100%
Ahol:

mbeforem _ \ text {előtt} mbefore és mafterm _ \ text {után} mafter a tömegekCistanche sivatagolaPolyszacharidok a domborítás előtt és után, (G).

 

 

1.2.4 Egytényezős kísérleti kialakítás

Négy faktor által aktivált szén-adagolás, a domborítási hőmérséklet, a boncolási idő és a pH-on történő hatása a domborítási sebesség és a poliszacharid visszanyerési sebességeCistanche sivatagolaVizsgáltuk a poliszacharid -kivonatot.

Az aktivált szén -adagolás hatása:
Rögzített elpusztulási idő 30 perc alatt, elpusztulási hőmérséklet 50 fokos és pH -nál 5,03 -nál (mért mintaérték). Megvizsgáltuk az aktivált szén -adagolás hatását a elpusztulási sebességre és a poliszacharid visszanyerési sebességére.

A boncolási hőmérséklet hatása:
Rögzített aktivált szén -adagolás 20% -nál (m: m), domborítási idő 30 perc alatt és pH -nál 5,03 -on. Megvizsgáltuk a hanyatlási hőmérséklet hatását a elpusztulási sebességre és a poliszacharid visszanyerési sebességére.

A boncolási idő hatása:
Rögzített aktivált széndózis 20%-on, a domborítási hőmérséklet 50 fokon és pH -nál 5,03 -on. Megvizsgáltuk a hanyatlási idő hatását a elpusztulási sebességre és a poliszacharid visszanyerési sebességére.

PH -hatás:
Rögzített aktivált széndózis 20% (m: m), elhalasztási hőmérséklet 50 fokon és 30 perc alatt elpusztulási idő. Megvizsgáltuk a pH hatását a elpusztulási sebességre és a poliszacharid visszanyerési sebességére.

 

1.2.5 válaszfelület optimalizálása kísérleti terv

Az egytényezős kísérletekben azonosított optimális állapottartományok alapján a doboz-Behnken kísérleti tervezési módszert használták négyfaktor, háromszintű kialakítás elvégzéséhezCistanche sivatagolapoliszacharid -kivonat. Az értékelési mutatókként a domblorizációs sebességet és a poliszacharid visszanyerési sebességét alkalmaztuk. A tervezési paramétereket az 1. táblázat mutatja.

1.2.6 Az antioxidáns aktivitás meghatározásaCistanche sivatagolaPoliszacharidok

(1) meghatározásaCistanche sivatagolaPoliszacharidok DPPH radikális megsemmisítő képessége

Kan Jintao et al. [21] Enyhe módosításokkal, 0. 5 ml 1. (1, {{1 0}} difenil -2- picryl -hidrazin) és 1,1 ml desztillált víz. A keveréket hagytuk, hogy sötétben reagáljunk 37 fokos 30 percig. A reakcióoldat abszorbanciáját 517 nm -en mértük, és a DPPH radikális megsemmisülési sebességét 1,0 mg/ml poliszacharidok előtt és után a (3) egyenlet alkalmazásával kiszámítottuk::

DPPH radikális megsemmisülési arány (%)

{{0}}[1−(A1−A2)A0]×100%= \left[ 1 - \frac{(A_1 - A_2)}{A_0} \right] \times 100 \%= [1 - A0 (A1 −A2)] × 100%

Ahol:

A1a _1 A1 a minta kémcső abszorbanciája,

A2A _2 A2 az abszorbancia, ha a vízmentes etanol helyettesíti a DPPH oldatot,

A {{0}} a _0 A0 az abszorbancia, amikor desztillált víz helyettesíti a mintát.

 

(2) A teljes redukáló erejének meghatározásaCistanche sivatagolaPoliszacharidok

Hivatkozva Lu Xue et al. [22], 1. Egy 5 μl mintát és 180 μl FRAP -t (vas -ioncsökkentő antioxidáns teljesítményű) működő oldatot adtunk egy 96- kútlemezhez, alaposan összekeverve, és hagyjuk reagálni 37 fokon 5 percig. Az abszorbanciát 593 nm -en mértük, és a poliszacharidok teljes redukáló teljesítményét a FeSO4 standard oldat koncentrációjában fejeztük ki.

(3) ACistanche sivatagolaPoliszacharidok

Az irodalomban ismertetett módszert [23] és a hidroxil -gyökök megsemmisítő vizsgálati készletének utasításai, 1. Desztillált vizet használtunk a hidrogén -peroxid helyett a kontrollcsoport abszorbanciájához (acontrola _ \ text {control} acontrol), és desztillált vizet használtunk a minta helyett az üres csoport abszorbanciájához (Ablanka _ \ Text {üres} Ablank). Az abszorbancia értékeket 550 nm -en mértük, és a hidroxilgyökök kioldódási sebességét a (4) egyenlet alkalmazásával számítottuk:

Hidroxil -gyökök megsemmisülési aránya (%)

= [(acontrol - asample) (acontrol - aBlank)] × 100%= \ bal [\ frac {(a _ \ text {control} - a _} \ text {minta}) {(a _}}}}}}}}}) A _ \ text {blank})} \ jobb] \ Times 100 \%= [(acontrol −aBlank) (acontrol −sample)] × 100%

Ahol:

ASAMPLEA _ \ text {minta} ASMALE a mintacsoport abszorbanciája,

Acontrola _ \ text {control} acontrol a kontrollcsoport abszorbanciája,

Ablanka _ \ text {blank} Ablank az üres csoport abszorbanciája.

 

(4) Az ABTS kation radikális megsemmisítő képességének meghatározásaCistanche sivatagolaPoliszacharidok

Az irodalomban leírt módszer [24] és az ABTS kation radikális megsemmisítő vizsgálati készletének utasításai szerint, 1. A 10 μl mintát 20 μl reagens munkaműs oldattal négy és 170 μl ABTS munkaoldattal keverjük össze, alaposan összekeverjük, és hagyjuk, hogy szobahőmérsékleten 6 percig sötétben reagáljunk. Üres kontrollként ionmentes vizet használtunk. Az abszorbanciát 405 nm -en mértük, és az ABTS -kationgyök radikális megsemmisülési sebességét kiszámítottuk az (5) egyenlet alkalmazásával:

ABTS kation radikális megsemmisülési arány (%)

=[(Bblank−Bsample)Bblank]×100%= \left[ \frac{(B_\text{blank} - B_\text{sample})}{B_\text{blank}} \right] \times 100 \%= [bBlank (bblank −bSample)] × 100%

Ahol:

BBlankb _ \ text {blank} A bBlank a desztillált víz és az ABTS oldat közötti reakció abszorbanciája,

BSAMPLEB _ \ text {minta} BSample a minta és az ABTS oldat közötti reakció abszorbanciája.

 

1.3 Adatfeldolgozás

A Sigmaplot 12.5 szoftvert használták a ábrázoláshoz, és a 8. {3}}.