2. RÉSZ A seprűből (Orobanche Caryophyllacea, Phelipanche Arenaria és P. Ramosa) izolált fenilpropanoid-glikozidok antioxidáns és véralvadásgátló hatásai

További információért forduljon:Joanna.jia@wecistanche.com

AZ 1. RÉSZHEZ KATTINTSON IDE

A Cistanche deserticolának számos hatása van, kattintson ide, ha többet szeretne megtudni

3. Eredmények és megbeszélés

Tíz korábban általunk izoláltfenilpropanoidglikozidok[8], beleértve a 2′-O-acetil-lakteozidot, a 2′-O-acetil-poliumosidot, az 3-O-metil-pódiumoldalt,akteozid, az aréna belsejét, a krenatozidot, a pheliposidot, a poliumosidot, a tubulozid A-t és a wiedemanniozid D-t, valamint három seprűkivonatot (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) és P. ramosa (PR)) vizsgálták az oxidatív hatás enyhítésére stressz és antikoaguláns tulajdonságok az emberi plazmarendszerben. Kémiai szerkezetei afenilpropanoidokábrán láthatók, és amint látható, mindegyik hasonló minta szerint épül fel, azonos/hasonló alegységekkel: hidroxi-tirozol, monoszacharidok (glükóz, ramnóz és/vagy xilóz) és hidroxi-fahéj sav. A vizsgált PPG vegyületek többsége kávésavval van helyettesítve, de ez helyettesíthető kumársavval vagy ferulinsavval. A biológiai vizsgálatba az egyes PPG-vegyületeken kívül három seprűszőnyeg-kivonatot is bevontak – OC, PA és PR, amelyek több PPG keverékei, és korábban kiindulási anyagként szolgáltak a vegyület izolálásához. A másik ok, amiért három különböző fajt választottunk, a fitokémiai profilok közötti nagy különbség volt, amint az a 2. ábrán is látható. Az OC, PA és PR kivonatok részletesebb összehasonlítása, beleértve a kvantitatív adatokat, a táblázatban látható. 1.Acteozidaz O. Caryophyllaceae kivonat (690 mg/g) fő összetevője volt, a P. Arenaria-ban a tenipozid és az aréna dominált (együtt 550 mg/g), míg a poliumosid és acetilezett származéka volt a P. ramosa legfontosabb metabolitja. kivonat (együtt 640 mg/g). A vizsgált kivonatok összesített fenilpropanoid-tartalmában is különböztek, a legnagyobb mennyiséget az OC-ban (810 mg/g), a PR-ban valamivel kevesebbet (795 mg/g), a PA-ban (685 mg/g) találtuk. Érdemes megjegyezni továbbá, hogy a koffeoilcsoporton kívül más PPG-k, például kumaroil vagy feruloil jelenléte csak a P. ramosa kivonatban volt kimutatható, ahol ezek a vegyületek az összes PPG-nek körülbelül egyhatodát tették ki (körülbelül 120 mg/kg). g) (1. táblázat). A fenilpropanoid glikozidok radikális hatását vizsgáló korábbi tanulmányok Heilmann és mtsai. [19] és Jedrejek et al. [8], beleértve körülbelül 30 különböző PPG-t, mint plakteozid, izoakteozid és krenatozid, feltárták szoros kapcsolatukat az acilcsoportok (fenolsav és tirozol) szerkezetével. Általánosságban elmondható, hogy az acilegység katecholrészének módosítása vagy helyettesítése a reaktív oxigéngyökök (ROS) és a DPPH gyökök elleni befogó aktivitás jelentős csökkenését eredményezte. A jelen tanulmányban három seprűszőnyeg-kivonat (OC, PA és PR) antiradikális in vitro potenciálját vizsgáltuk ABTS és DPPH vizsgálatokkal, és az eredményeket összehasonlítottuk egymással, valamint az egyedek aktivitásával.fenilpropanoidkorábbi tanulmányunkban mért összetevők [8]. Az eredményeket Trolox-egyenértékben (TE) és IC50 értékben fejeztük ki (2. táblázat). Általánosságban elmondható, hogy mindhárom kivonat jó megkötője volt mind az ABTS, mind a DPPH gyököknek, de a vizsgált minták között különbségek is megfigyelhetők (a becsült TE a 0,5–0,7 tartományba esett; 1,0 volt a Trolox megfelelője). A minták radikális befogó aktivitása a következő sorrendben volt: Trolox > OC > PA > PR. Az Orobanche Caryophyllaceae kivonata (IC50=155–275 µg/mL) több mint 20 százalékkal nagyobb aktivitást mutatott, mint a Phelipanche ramosa kivonat (IC50=200–320 µg/ml). Az OC kivonat jelentett legmagasabb gyökfogó aktivitása a mintában található legmagasabb PPG-tartalommal, valamint aakteoziddomináns összetevője, amely a korábbi kutatások szerint [8,19] az egyik legerősebb szabadgyökfogó az ebbe a csoportba tartozó metabolitok között (TEDPPH=0.87; [4]). Figyelembe véve azonban az antiradikális aktivitás és a tartalom kölcsönös kapcsolatátfenilpropanoidokaz OC, PA és PR kivonatokban nem találtunk egyszerű korrelációt e két tényező között (r < 0,5),="" ami="" a="" kvalitatív="" profil="" jelentős="" bemenetére="" utal.="" ez="" elsősorban="">

P. ramosa kivonat, amely a magas PPG-szint ({{0}},8 g/g) ellenére a legalacsonyabb biológiai aktivitással jellemezhető a vizsgált minták közül (TE ~ 0,5) . A PR-kivonat volt az egyetlen minta, amely kumársavval vagy ferulsavval tartalmazott fenilpropanoidokat, olyan anyagokat, amelyekből hiányzik a B-gyűrű katechol-része, és amelyekről beszámoltak arról, hogy csökkent antioxidatív potenciállal rendelkeznek. Négy módosított kávésavat tartalmazó PPG-vegyület, köztük az 3-O-metil-poliumosid, a ramozid A és a wiedemanniozid D, amelyeket korábban teszteltünk, TEDPPH-értéke 0,3 körül volt [8]. Így a jelenlegi eredmények összhangban vannak a fenilpropanoidokon végzett korábbi radikális in vitro kísérletek eredményeivel, és megerősítik azokat. Ahogy Chen és mtsai. [20] leírták, hogy nagyobb H-donor képességgel vagy a gyök stabilizálásával jár együtt vegyületkeverék különféle funkciós csoportjaival. Számos szerkezeti elemet azonosítottak, amelyek fokozzák a polifenolok közvetlen antioxidáns aktivitását, különösen azokat, amelyek a hidroxilcsoportok számával és helyzetével kapcsolatosak. Úgy gondolják, hogy a szabad gyökfogó aktivitás növekszik az –OH csoportok számának növekedésével. Azonban ezeknek a csoportoknak a molekulában elfoglalt helyzete még nagyobb hatással van a kifejtett aktivitásra. Viszonylag stabil hatásos vegyületek azok, amelyek szerkezetükben 3,4-dihidroxi-csoportot tartalmaznak, valamint azok, amelyek kettőnél több hidroxilcsoportot tartalmaznak [21]. Az antioxidáns anyag kémiai szerkezete lehetővé teszi az antioxidáns reakciómechanizmus megértését. Lopez-Munguía et al. [22] a denzitásfunkcionális elmélet (DFT) számításai alapján megállapította, hogy a PPG antioxidáns mechanizmusa szekvenciális protonveszteség egyelektrontranszferen (SPLET) keresztül megy végbe. Azonban Li és mtsai. [23] a fenolos fenilpropanoid antioxidánsok mechanizmusának feltárására tett kísérlet arra a következtetésre jutott, hogy a PPG-k (akteozid, forzitozid B és poliumosid) több úton is részt vehetnek az antioxidáns hatás kifejtésében, növelve a cukormaradékok szerepét. Tanulmányok kimutatták, hogy a növényi eredetű antioxidánsok hatékonyan modulálják a vérzéscsillapítást szív- és érrendszeri betegségekben [24–26]. A hagyományos orvoslásban használt különféle növények jelentős mennyiségű PPG-t tartalmaznak [27,28]. Ezenkívül a PPG-k számos biológiai tulajdonsággal rendelkeznek

gyulladáscsökkentő, nefritisz- és májelégtelenítő tulajdonságokat is beleértve [29–33]. Jedrejek et al. [8] leírták a PPG-k izolálását három lengyel seprűből, és DPPH-teszttel értékelték antioxidáns aktivitásukat. Ennek alapján a jelen tanulmány azt értékeli, hogy az ezekből a növényekből izolált tíz kiválasztott PPG képes-e csökkenteni az oxidatív stresszt erős biológiai oxidálószerrel, azaz a hidroxilgyök donor H2O2/Fe-vel kezelt humán plazmában, és módosítani tudja-e a plazma koagulációs tulajdonságait in vitro. A tíz antioxidáns tulajdonságai

Az izolált PPG-ket az oxidatív stressz kiválasztott paraméterei szerint határoztuk meg: a TBARS szint mint a lipidperoxidáció markere, valamint a karbonilcsoport és a tiolcsoport szintjei, mint az oxidatív fehérjekárosodás markerei. A H2O2/Fe által kiváltott plazma lipidperoxidációs és fehérjekarbonilációs szintje egyaránt szignifikánsan csökkent nyolc vizsgált vegyület, ti. akteozid, krenatozid, 2′-O-acetil-lakteozid, pheliposid, belső aréna, tubulozid A, poliumosid és 3- O-metil-polimuozid, minden vizsgált koncentrációban (1, 5 és 50 µg/ml); azonban egyik hatást sem figyelték meg a vizsgált vegyületek közül kettőnél, ti. 2′-O-acetil-poliumosid és wiedemanniozid D, vagy a vizsgált kivonatok bármelyike ​​bármilyen koncentrációban (1, 5 és 50 µg/ml). Ezenkívül a vizsgált vegyületek vagy kivonatok egyike sem védi meg a plazmát a H2O2/Fe-indukált tiolcsoport-oxidációval szemben a fehérjékben (3–5. ábra). A vizsgált kivonatok azonban különféle biológiai tulajdonságokkal rendelkező vegyületek forrásai lehetnek. A jelen vizsgálat eredményei most először mutatják, hogy a vizsgált PPG-k közül nyolc antioxidáns potenciált mutat a humán plazmában exogén reaktív oxigénfajták jelenlétében azáltal, hogy gátolja a lipidperoxidációt és a fehérje karbonilációt a H2O2/Fe-vel kezelt plazmában. Ezenkívül a 2′-O-acetil-poliumosid és a wiedemanniozid D nem mutatott ilyen hatást. Általánosságban elmondható, hogy eredményeink összhangban vannak a PPG-ken végzett korábbi in vitro kísérletekkel. Heilmann et al. [19] és Jedrejek et al. [8] összefüggést mutat be a PPG-k kémiai szerkezete és tevékenységeik között. Úgy tűnik, hogy a PPG-k antioxidáns tulajdonságai elsősorban acilcsoportjaik szerkezetével, azaz a fenolsav- ésfenilpropanoidegységet, beleértve a katekolrész jelenlétét és/vagy módosítását. Például a wiedemanniozid D-ről azt találták, hogy elveszti antioxidatív potenciálját a H2O2/Fe-vel kezelt plazmával szemben, miután koffeoil-részét feruloil-csoportra cserélték. A véralvadási folyamat változásai gyakran az oxidatív stressz következményei; ezek a változások módosíthatják a szív- és érrendszer működését, és szív- és érrendszeri betegségek kialakulásához vezethetnek [1]. A jelen vizsgálatban vizsgált tíz növényi vegyület és három növényi kivonat közül a tubulozid, poliumosid és 3-O-metil-poliumosid, valamint az összes vizsgált kivonat szignifikánsan meghosszabbítja a trombin időt minden vizsgált koncentrációnál, ti. 1, 5 és 50 µg/ml (6B. ábra). Azonban ezen kivonatok egyike sem, sem a vizsgált vegyületek egyike sem változtatta meg a PT-t vagy az APTT-t (6A. és C. ábra). A 3. táblázat összehasonlítja a PPG-k (5 µg/mL) hatását az oxidatív stressz biomarkereire H2O2/Fe-vel kezelt plazmában, valamint a koagulációra gyakorolt ​​hatását. A vizsgált PPG-k közül nyolc csak a kezelt humán plazmában mutatott antioxidáns potenciált; három tesztelt PPG azonban antioxidáns tulajdonságokkal és véralvadásgátló potenciállal is rendelkezik. Érdekes módon a DPPH teszt eredményei nem egyeztek meg a H2O2/Fe-vel kezelt humán plazmát alkalmazó biológiai modellben kapott eredményekkel: a vizsgált kivonatok antioxidáns potenciálját gátolhatják bizonyos, a plazmában jelenlévő vegyületek. Összefoglalva, jelenlegi eredményeink új megvilágításba helyezik a PPG-k antioxidáns potenciálját és antikoaguláns tulajdonságait. Úgy tűnik, hogy a PPG-k szerkezete, különösen az acil- és katekolrészek jelenléte, főként antioxidáns és véralvadásgátló tulajdonságaikkal függ össze. A kiválasztott PPG-k potenciálisan alkalmasak lehetnek az oxidatív stresszel összefüggő szív- és érrendszeri betegségek kezelésére. Azonban további kísérletekre van szükség ezen vegyületek in vivo modellekhez szükséges koncentrációinak meghatározásához.

Összeférhetetlenségi nyilatkozat

A szerzők kijelentik, hogy nincs ismert versengő pénzügyi forrásuk

olyan érdekek vagy személyes kapcsolatok, amelyek befolyásolónak tűnhettek

az ebben a lapban közölt munka.

Hivatkozások

[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Revisiting pharmacology of oxidative stress and endothelialis dysfunction in kardiovaszkuláris betegségek: bizonyítékok a redox-alapú terápiákra, Free Radic. Biol. Med. 157. (2020) 15–37. [2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker: Az oxidatív stressz biomarkerei és összefüggése a vizelet redukáló képességével buszkarbantartók, J. Occupat. Med. Toxicol. 6 (2011) 18–23. [3] P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz, Oxidatív stressz és hemosztázis, Post. Biochem. 56 (2010) 239–247. [4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, Modulation of Nrf2 by olive oil and wine polyphenols and neuroprotection, Antioxidants 6 (2017) 73. [5] S. Amor , P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Polifenol-kivonatok vörösborból és szőlőből: potenciális hatások a rákra, Betegségek 6 (2018) 1–12. [6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): a hagyományos kínai orvoslás egyik legjobb gyógyszerészeti ajándéka, a Front. Pharmacol. 7 (2016) 41–49. [7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Review: analysis of chemical constituents in Cistanche species, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979. [8] D. Jedrejek, S. Pawelec, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, A feniletanoid és iridoid glikozidok azonosítása és előfordulása hat lengyel seprűben (Orobanche spp. és Phelipanche spp., Orobanchaceae), Phytocheae (mistry), 170 2020), 112189. [9] B. Kontek, D. Jedrejek, W. Oleszek, B. Olas, Antiradical and antioxidant activity of hops-derived extracts, gazdag keserű savakban és xanthohumolban, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1–9. [10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Szabadgyökös módszer alkalmazása az antioxidáns aktivitás értékelésére, Lebensm. Wiss. Technol. 28 (1995) 25–30. [11] JR Whitaker, PE Granum, Abszolút módszer a fehérje meghatározására a 235 és 280 nm-es abszorbancia különbségén alapuló, Anal. Biochem. 109 (1980) 156–159. [12] B. Wachowicz, Adenin nukleotidok madarak trombocitáiban, Cell Biochem. Funkció. 2 (1984) 167–170. [13] Bartosz G., Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7. [14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins, Módszerek Enzym. 186 (1990) 464–478. [15] DM Joel, J. Gressel, LJ (szerk.), Musselman, Parasitic Orobanchaceae: Parasitic Mechanisms and Control Strategies, Springer, Heidelberg, Németország, 2013, 1–10. [16] Y. Ando, ​​M. Steiner, Thrombocyta membránok szulfhidril és diszulfid csoportjai: diszulfidcsoportok meghatározása, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 26–37. [17] Y. Ando, ​​M. Steiner, Thrombocyta membránok szulfhidril és diszulfid csoportjai: szulfhidrilcsoportok meghatározása, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 38–44. [18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, Phenolic fractions from Trifolium pallidum and Trifolium scabrum aerial parts in human plasma védelmet hyperhomocysteinemia által kiváltott változások, Food Chem. Toxicol. 50 (2012) 4023–4027. [19] J. Heilmann, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Radical scavenger activity of phenylpropanoid glycosides in FMLP stimulated polymorphonuclear leukocytes: structure-activity relations, Planta Med. 66 (2000) 746–748. [20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Free fenolsavak Shanxi öregedő ecetben: változások az öregedés során és szinergikus antioxidáns tevékenységek, Int. J. Food Prop. 19 (2015) 1183–1193. [21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Flavonoidok és fenolsavak szerkezete-antioxidáns aktivitása, Free Radic. Biol. Med. 20 (1996) 933–956. [22] A. Lopez-Munguía, Y. Hernandez-Romero, J. Pedraza-Chaverri, A. Miranda Molina, I. Regla, A. Martínez, E. Castillo, Fenilpropanoid glikozid analógok: enzimatikus szintézis, antioxidáns aktivitás és szabad gyökfogó mechanizmusuk elméleti tanulmányozása, PloS One 6 (2011) 20115. [23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, Antioxidation and cytoprotection of acteoside and its derivatives: Compare and mechanistic chemistry, Molecules 23 (2018) 498. [24] SE Kulling, HM Rawel, Chokeberry (Aronia melanocarpa) – a jellemző összetevőkről és a lehetséges egészségügyi hatásokról szóló áttekintés, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634. [25] BJ Mc Even, Az étrend és a tápanyagok hatása a vérlemezke-funkcióra, Semin. Thromb. Hemost. 40 (2008) 214–226. [26] B. Olas, A bogyók multifunkcionalitása a vérlemezkék felé és a bogyó fenoljainak szerepe a szív- és érrendszeri betegségekben, Thrombocyta 5 (2016) 1–10. [27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, US Harput, I. Sahin-Eredemli, Effects of phenylpropanoid and iridoid glycosides on free radical induced impairment of endothelium-dependent relaxation in patkány aortagyűrűk, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193–197. [28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Etnikai gyógynövények vizsgálata Orobanche, Cistanche és Boschniakia, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552. [29] K. Hayashi, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Yagita, Y. Suzuki, az Acteoside, a Stachys sieboldii MIQ egyik komponense, ígéretes antinefritisz szer lehet (3): az aceteozid hatása az intercelluláris expresszióra adhéziós molekula{158}} patkányok kísérleti nephritis glomerulusaiban és tenyésztett endothelsejtekben, Jpn. J. Pharmacol. 70 (1996) 157–168. [30] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Hepatoprotective activity of phenylpropanoids from fromCistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120–125. [31] WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside védi az endothel sejteket a szabad gyökök által kiváltott oxidatív stressz ellen, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748. [32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Isolation and farmacological activity of Phenylpropanoid esters from Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392. [33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, A gátló hatás fenil-propanoid-glikozidok és iridoid-glükozidok szabadgyök-termelésére és 2-integrin expressziójára humán leukocitákban, J. Pharm. Pharmacol. 58 (2006) 129–135.