Ⅰ rész A vér karbamid-nitrogén és a szérum kreatinin szintjének javítása a Cordyceps Militaris új termesztésével

Absztrakt

A krónikus vesebetegség (CKD) kritikus közegészségügyi probléma, amely világszerte hatalmas anyagi terhet jelent mind a betegek, mind a társadalom számára. Sajnos jelenleg nincs hatékony terápia a végstádiumú vesebetegség (ESRD) progressziójának megelőzésére vagy késleltetésére. A hagyományos kínai orvoslás gyakorlata kimutatta, hogy a Cordyceps militaries (C. militaries) micéliumok számos farmakológiailag hasznos tulajdonsággal rendelkeznek, beleértve a daganatellenes, immunmoduláló és májvédő tulajdonságokat. Mindazonáltal, a micélium C. hadseregének hatása a CKD-re továbbra is tisztázatlan. Mód. Itt négyféle táptalaj segítségével vizsgáltuk a C. militaris micélium hatásait CKD-s egereken: HKS, HKS A-vitaminnal (HKS plusz A), CM és CM A-vitaminnal (CM plusz A). Eredmények. A 10. napon elért eredmények azt mutatták, hogy a vér karbamid-nitrogén (BUN) szintje szignifikánsan alacsonyabb volt a HKS (41 százalék), a HKS plusz A (41 százalék) és a CM plusz A (34 százalék) csoportban, mint a megfelelő kontrollcsoportok (nefrektómiás egerek). A szérum kreatinin szintje a HKS plusz A csoportban 35 százalékkal csökkent a 10. napon, míg a HKS és CM plus A csoportban csak 14, illetve 13 százalékkal csökkent a 30. napon. az első jelentés, amely négy új táptalajt (HKS, HKS plusz A, CM és CM plusz A táptalaj) használ C. militaris micéliára. A CKD-n élő micéliumos C. militaries minden tápközege specifikus hatást fejt ki a BUN-ra, a szérum kreatininre, a testtömegre, az összfehérjére és a húgysavra. Következtetések. Összességében ez az első jelentés, amely négy új táptalajt (HKS, HKS plusz A, CM és CM plusz A táptalaj) használ a C. militaris micéliára. A CKD-n élő micéliális C. militaries minden tápközege specifikus hatást fejt ki a BUN-ra, a szérum kreatininre, a testtömegre, az összfehérjére és a húgysavra. Arra a következtetésre jutottunk, hogy a HKS-ben vagy CM plusz A tápközegben tenyésztett C. militaris micéliával végzett kezelés potenciálisan megakadályozhatja a vesefunkció romlását CKD-s egerekben.

Kulcsszavak

Krónikus vesebetegség (CKD), Cordyceps Sinensis, micélium, vér karbamid-nitrogén (BUN), szérum kreatinin,A Cistanche előnyei.

Kattintson ide a letöltésheza Cistanche hatásai

Bevezetés

A krónikus vesebetegség (CKD) elterjedt globális egészségügyi probléma [1]. A CKD a vese szerkezetét és működését befolyásoló heterogén rendellenességek általános kifejezése [2]. A CKD-ben szenvedő betegeknél fokozott a végstádiumú vesebetegség (ESRD) kockázata [3, 4]. A meglévő farmakológiai szerek a CKD-kezeléssel kapcsolatos szövődményekre összpontosítanak, mint például a hiperlipidémia, a cukorbetegség és a magas vérnyomás, nem pedig magát a krónikus vesebetegséget [5–8], így a vesevédelem kutatása feltörekvő orvostudomány. A korábbi tanulmányok a homeodoménnel kölcsönhatásba lépő protein kináz 2-re (HIPK2) összpontosítottak, mivel ez a tubuláris sérülésben és fibrózisban szerepet játszó génexpresszió transzkripciós szabályozója [9, 10]; specifikus HIPK2 inhibitorok azonban nem kaphatók a kereskedelemben. Emellett kimutatták, hogy a renin-angiotenzin-aldoszteron rendszer blokkolása csökkenti mind a hyperkalaemia progressziójának kockázatát, mind a kiújulási arányt [11, 12]. Bár a renin-gátló gyógyszert, az aliszkirent korábban rendszeresen adták angiotenzin-konvertáló enzim-gátlókkal vagy angiotenzinreceptor-blokkolóval együtt, súlyos mellékhatásai miatt manapság konzervatívabban alkalmazzák [13].

Beszámoltak arról, hogy a krónikus vesebetegség kockázati tényezői az életkor, a rassz, az elhízás, a cukorbetegség, az alacsony születési súly, a magas vérnyomás és a családi anamnézis voltak [14]. A CKD morbiditás és mortalitás kockázata továbbra is jelentősen magas, mivel a CKD-s betegek általában vesepótló kezelést kapnak, például dialízist és veseátültetést. .usunkban új kezeléseket kell kidolgozni. Az elmúlt években a gyógynövényes terápiák alternatív kezelési lehetőséget biztosítottak a krónikus vesebetegség kezelésére [15, 16]. Ezen túlmenően sokféle kutatás kimutatta, hogy a megfelelő kínai gyógynövény-receptek pozitív hatással vannak a CKD-re, ami jelentősen csökkentheti az ESRD kockázatát a CKD-ben szenvedő betegeknél, és javíthatja a CKD-ben szenvedő betegek hosszú távú túlélési arányát [17]. Például számos gyógynövény, köztük a Radix Astragali, a Rheum officinale, a Panax ginseng és a Lycopus lucidus vesebetegségekre gyakorolt ​​hatását vizsgálták [18–21]. Egyes gyógynövények ígéretes eredményeket mutattak a proteinuria csökkentésében vagy a szérum albuminszint növelésében. Mások azonban mérgező összetevőket, például arisztolosavat vagy nehézfémeket tartalmaznak, amelyek károsan befolyásolhatják a veseműködést és nephropathiát válthatnak ki [22]. Bár egyes fejlődő országokban gyakran alkalmazták őket, a hatékonyságukról szóló jelentések továbbra is ellentmondásosak. Ezért sürgős gondot okoz egy természetes termékből származó, hatékony vegyület kifejlesztése CKD kezelésére.

A Cordyceps a gombák családjába tartozik, és a hagyományos kínai orvoslás egyik fajtája, amelyben a parazita rovarlárvák nőnek, és fokozatosan érett termőtestté alakulnak. A Cordyceps sinensis (C. sinensis) és a Cordyceps militaries (C. militaries) két jól ismert Cordyceps faj. A C. sinensist sok éven át fáradtság, vese- és tüdőműködési zavar, hiperglikémia, hiperlipidémia és aritmia kezelésére használták [23], és hatását CKD-betegekben és vesetranszplantált betegekben tanulmányozták [24–26]. Általában a C. militaris viszonylag alkalmas a tömegtermelésre [27], és változatos és specifikus farmakológiai tulajdonságokkal is rendelkezik [28–30]. Ezenkívül egy korábbi, csoportunk által végzett tanulmány a C. militaris rákellenes funkcióit vizsgálta, és kimutatta, hogy a micélium fermentációja szabályozhatja a mitogén-aktivált protein kinázok (MAPK) szignálútját a sejtciklus leállítása, a kromoszómális DNS lebomlásának serkentése és végső soron. a tenyésztett glioblasztóma sejtek apoptotikus és autofágiás halálát is okozzák [31]. Ezért ebben a vizsgálatban a C. militarist renoprotektív hatásai miatt alkalmaznák.

A Mycelial C. militarist nemrégiben népszerű funkcionális élelmiszerként fejlesztették ki Ázsiában. A C. militaris termőtestéből származó kivonatok jelentősen késleltethetik a subtotális nephrectomia által kiváltott veseműködési zavar progresszióját [32]. A C. militaris micélium CKD-re gyakorolt ​​hatásával kapcsolatos vizsgálatok azonban ritkák. A tanulmány tesztelni fogja azt a hipotézisünket, hogy a micélium C. militaris potenciálisan megakadályozhatja a vesefunkció romlását CKD-ben szenvedő egerekben. Négyféle táptalajt terveznek és alkalmaznak a micélium C. hadseregek inkubálásához: (i) HKS, (ii) HKS plusz A, (iii) CM és (iv) CM plusz A. 30 napig egerek a kezelési csoportokban a négy különböző táptalaj egyikében tenyésztett C. militaris micéliumot naponta szájon át adják be, míg az álkontroll (C) és a nefrektómiás kontroll (Nx) csoportba tartozó egerek desztillált vizet kapnak. .e tesztek várhatóan tisztázni fogják a micélium C. militaris funkcionális élelmiszerként való biztonságosságát.

Cistanche tubulosa

Anyagok és metódusok

1. Anyagok.

A C. militaris micéliumot (BCRC 32219) az Élelmiszeripari Kutató- és Fejlesztési Intézet (Hsinchu, Tajvan) Bioresource Collection and Research Center-től vásároltuk. A glükózt a JT Bakertől (EU) vásároltuk. A malátakivonatot, a peptont és az élesztőkivonatot a Becton Dickinsontól (Franklin Lakes, NJ, USA) vásároltuk. Az A-vitamint a Sigma-Aldrich-től (St. Louis, MO, USA), az agart pedig a High Standard Enterprise Co., Ltd.-től (Tajvan) vásároltuk. A vesefunkció kimutatására szolgáló biokémiai vizsgálati készleteket az Arkray-től (Kyoto, Japán) szereztük be.

2. Gomba táptalaj előkészítése.

A Mycelial C. militarist négyféle tápközegben inkubáltuk, nevezetesen CM, CM plus A, HKS és HKS plus A. .e CM táptalaj 2% malátakivonatot, 2% agart, 0,1% peptont, és 2 százalék glükóz [33]. A .e HKS táptalaj a Huang Keng-Shiang professzor által kidolgozott táptalaj módosítása volt, és 2 százalék malátakivonatot, 2 százalék agart, 0,2 százalék peptont és 0,2 százalék élesztőkivonatot tartalmazott. . A CM és HKS tápközegek a pepton és az élesztőkivonat koncentrációjában különböztek. A HKS plus A és CM plus A táptalajok mindegyike további 1 százalék A-vitamint tartalmazott az alaptápközegben. Egy 0,5 × 0,5 cm-es négyzetméteres C. militaris micéliumot vágtunk ki, ültettünk át mindegyik lemezre, és 25 fokon inkubáltuk. Miután a C. militaris-t 30 napig különböző tápközegekben tenyésztettük, a gomba micéliumát késsel óvatosan lekapartuk a szilárd táptalaj felületéről. Az összegyűjtött gomba micélium porokat fagyasztva szárítottuk (EYELA FDU-1100) vákuumban –54 fokon 48 órán át. A liofilizált C. militaris mycelia porokat felhasználásig -20 fokon tároltuk.

3. CKD egérmodell felépítése.

Az öthatodik nephrectomia volt a legelterjedtebb krónikus eljárás, amely a vesetömeg elvesztése után progresszív veseelégtelenséget utánozza. A CKD egereket kétlépéses, öthatodik nefrektómia után hozták létre a korábban leírtak szerint [34, 35]. Röviden, a bal vesét szabaddá tettük, és a felső és alsó egyharmados pólusnál elvágtuk. A bal vese veseartériája extrarenális ágainak 2/3-át lekötöttük, majd egy hét múlva teljesen jobb oldali nephrectomia követte. Az állatokat a műtét után legalább két hétig visszahelyezték a ketrecükbe, mielőtt az urémiát kiváltották volna. Az eljárásokat az I-Shou Egyetem Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága hagyta jóvá (jóváhagyási szám: IACUC-ISU- 101025).

4. Kísérleti eljárás.

A C. militaris mycelia fagyasztva szárított porait desztillált vízben (10 mg/ml) szobahőmérsékleten áztattuk. Két héttel a második nephrectómia után az egereket véletlenszerűen kezelt csoportokra osztották (csoportonként n=4-6), és a C. militaris micélium-oldat négy típusának egyikével kezelték, amelyeket HKS-ben, HKS-ben és A-ban inkubáltak. , CM vagy CM plus A táptalaj, szájszondával 30 egymást követő napon keresztül. Az ál-csoportnak és az Nx egereknek ekvivalens térfogatú desztillált vizet adtunk be C. militaris micélium nélkül. A testtömeget az 1., 10. és 30. napon mértük és vérmintákat vettünk. A kezelési periódus végén az egereket CO2 segítségével leöltük. A veséket kimetszettük, foszfáttal pufferolt sóoldattal mostuk, majd 10%-os semleges pufferolt formalinba helyeztük a későbbi szövettani feldolgozás céljából. Vérmintákat vettünk a periorbitális vénás sinusból. A vér karbamid-nitrogénjét (BUN), a szérum kreatinint, az összfehérjét és a húgysavat a kereskedelemben kapható készletek segítségével, automatizált biokémiai analizátorral (SPOTCHEM EZ SP-4430) mérték a gyártó utasításai szerint (Arkary, Inc., Kyoto, Japán).

Szabványosított Cistanche

5. Állattakarmányozás.

Az Institute of Cancer Research hím egereket (körülbelül 30 g-os) a BioLASCO Taiwan Co., Ltd. szállította, és standard ketrecekben tartották állandó, 22 ± 1 fokos hőmérsékleten, 12-órás világos-sötét ciklussal. Az állatokat ad libitum etettük rendszeres egértáppal és csapvízzel. A vizsgálatban használt állatokat a NIH Laboratóriumi állatok gondozására és használatára vonatkozó útmutatója tartotta és gondozta.

6. Vérminták biokémiai elemzése.

Vérmintákat vettünk a periorbitális vénás sinusból. A plazmamintákat 12, 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig 4 fokon, és -20 fokon tároltuk az elemzés előtt. A vér karbamid-nitrogénjét (BUN), a szérum kreatinint, az összfehérjét és a húgysavat a kereskedelemben kapható készletek segítségével, automatizált biokémiai analizátorral (SPOTCHEM EZ SP-4430) mérték a gyártó utasításai szerint (Arkary, Inc., Kyoto, Japán).

7. Veseszövettani elemzés.

Az egerek veséit paraffinblokkokba ágyaztuk, 3-μm vastag metszetekre bontottuk, és Harry-féle hematoxilin-eozin (HE) festéssel dolgoztuk fel a standard eljárást követve. A vese glomerulusait és tubulusait megvizsgálták és lefényképezték a későbbi elemzés céljából. A képeket egy mikroszkóphoz (DP72, Olympus, Center Valley, PA, USA) csatlakoztatott színes videokamerával (VKC150, Hitachi, Tokió, Japán) rögzítettük, és egy tapasztalt patológus vakon elemezte. Ez azt jelenti, hogy a glomeruláris keresztmetszeti terület átlagát körülbelül 8-15 egyedi glomerulus átlagos területének kiszámításával kaptuk meg a Image J program segítségével.

8. Statisztikai elemzés.

Az összes adatot az átlag átlag ± standard hibájaként mutatjuk be (n=4–6 csoportonként). Az adatokat kétirányú varianciaanalízissel, majd Bonferroni post hoc tesztekkel elemeztük (SigmaPlot verzió 10.0, San Jose, CA, USA). p < 0,05 volt statisztikailag szignifikáns.

Cistanche kivonat

Hivatkozások

[1] K. Kalantar-Zadeh és D. Fouque, "Nutritional management of chronic vesebetegség", New England Journal of Medicine, vol. 377. sz. 18., 1765–1776., 2017.

[2] TK Chen, DH Knicely és ME Grams, "Krónikus vesebetegség diagnosztizálása és kezelése", JAMA, vol. 322. sz. 13., 1294–1304., 2019.

[3] P. Cockwell és L.-A. Fisher, ".e global burden of chronic vesebetegség",:e Lancet, vol. 395. sz. 10225, 662–664. o., 2020.

[4] P. Rossignol, ZA Massy, ​​M. Azizi és munkatársai, ".e double challenge of rezisztens magas vérnyomás és krónikus vesebetegség", e Lancet, vol. 386. sz. 10003, 1588–1598, 2015.

[5] AS Levey és J. Coresh, "Krónikus vesebetegség", e Lancet, vol. 379. sz. 9811, 165–180., 2012.

[6] RJ Johnson, C. Wesseling és LS Newman, "Ismeretlen okú krónikus vesebetegség a mezőgazdasági közösségekben", New England Journal of Medicine, vol. 380, sz. 19, 1843–1852, 2019.

[7] T. Yang, EM Richards, CJ Pepine és MK Raizada, ".e bél mikrobiota és az agy-bél-vese tengely magas vérnyomásban és krónikus vesebetegségben", Nature Reviews Nephrology, vol. 14. sz. 7., 442–456., 2018.

[8] S. Joshi, M. McMacken és K. Kalantar-Zadeh, "Növényi alapú étrendek vesebetegségekhez: útmutató a klinikusoknak", American Journal of Kidney Diseases, vol. 77. sz. 2., 287–296., 2021.

[9] A. Pisciottani, L. Biancolillo, M. Ferrara és munkatársai, "A HIPK2 foszforilálja a mikrotubulus-leválasztó enzimet, a spasztint az S268-nál abszcisszió céljából", Cells, vol. 8, sz. 7. o. 684, 2019.

[10] MM Nugent, K. Lee és JC He: „A HIPK2 új gyógyszercélpont a vesebetegség fibrózis elleni terápiájában”, Frontiers in Physiology, vol. 6. o. 132, 2015.

[11] PE Drawz és ME Rosenberg, "A krónikus vesebetegség progressziójának lassítása", Kidney International Supplements, vol. 3, sz. 4, 372–376., 2013.

[12] MR Weir, GL Bakris, DA Bushinsky és munkatársai, „Patiromer vesebetegségben és hyperkalaemiában szenvedő betegeknél, akik raas-inhibitorokat kapnak”, New England Journal of Medicine, vol. 372. sz. 3., 211–221., 2015.

[13] M. Azizi és J. M´enard, "Renin inhibitorok, valamint szív- és érrendszeri és vesevédelem: végtelen küldetés?" Cardiovascular Drugs and: therapy, vol. 27. sz. 2., 2013. 145–153.

[14] K. Al-Jewari, R. Baban és J. Manuti, "Szérum és vizeletben oldható -Klotho-szintek krónikus vesebetegségben szenvedő betegeknél", Baghdad Journal of Biochemistry and Applied Biological Sciences, vol. 2, sz. 2021. 01., 29–38.

[15] S. Prakash, GT Hernandez, I. Dujaili és V. Bhalla, "Ólommérgezés egy ájurvédikus gyógynövényből krónikus vesebetegségben szenvedő betegnél", Nature Reviews Nephrology, vol. 5, sz. 5, 297–300., 2009.

[16] AA Razmaria, "Krónikus vesebetegség", JAMA, vol. 315. sz. 20. o. 2248, 2016.

[17] M.-Y. Lin, Y.-W. Chiu, J.-S. Chang és munkatársai: „A felírt kínai gyógynövény-használat társulása a végstádiumú vesebetegség kockázatával krónikus vesebetegségben szenvedő betegeknél”, Kidney International, vol. 88, sz. 6, 1365–1373, 2015.

[18] A. Zuk és JV Bonventre, "Acute vesekárosodás", Annual Review of Medicine, vol. 67. sz. 1, 293–307., 2016.

[19] Y. Zhong, MC Menon, Y. Deng, Y. Chen és JC He, "A vesebetegségek hagyományos kínai gyógyászatának legújabb vívmányai", American Journal of Kidney Diseases, vol. 66. sz. 3., 513–522., 2015.

[20] SW Lim, KC Doh, L. Jin és munkatársai: "A ginseng kezelés gyengíti az autofágiás sejthalált krónikus ciklosporin-nephropathiában", Nephrology, vol. 19, sz. 8., 490–499., 2014.

[21] Y. Yao, J. Yang, D. Wang és munkatársai: "A Lycopus lucidus Turcz vizes kivonata javítja a streptozotocin által kiváltott diabéteszes vesekárosodást a TGF- 1 jelátviteli útvonal gátlásával", Phytomedicine, vol. . 20, sz. 13., 1160–1167. o., 2013.

[22] L. Wu, W. Sun, B. Wang és munkatársai, "Inintegrált rendszer a rejtett orgyilkosok azonosítására arisztolosavat tartalmazó hagyományos gyógyszerekben", Scientific Reports, vol. 5, sz. 1, cikkazonosító 11318, 2015.

[23] GM Shashidhar, P. Giridhar és B. Manohar, "Funkcionális poliszacharidok a Cordyceps sinensis gyógygombából, mint hatásos táplálékkiegészítő: extrakció, jellemzés és terápiás lehetőségek – szisztematikus áttekintés", RSC Advances, vol. 5, sz. 21, 16050–16066, 2015.

[24] T. Hong, M. Zhang és J. Fan, "Cordyceps sinensis (hagyományos kínai orvoslás) vesetranszplantált betegek számára", Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 10, cikkazonosító: CD009698, 2015.

[25] HW Zhang, ZX Lin, YS Tung és munkatársai, "Cordyceps sinensis (hagyományos kínai orvoslás) krónikus vesebetegség kezelésére", Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 18, cikkazonosító: CD008353, 2014.

[26] G. Shao, S. Zhu és B. Yang, "Applications of herbal medicine to treat autoszomális domináns policisztás vesebetegség", Frontiers in Pharmacology, vol. 12, Cikkszám 629848, 2021.

[27] C.-T. Lee, K.-S. Huang, J.-F. Shaw és munkatársai, "Trends in the immunomodulatory effects of Cordyceps militaris: total Extracts, polysaccharides, and cordycepin", Frontiers in Pharmacology, vol. 11. cikkszám: 575704, 2020.

[28] B.-L. Ő, Q.-W. Zheng, L.-Q. Guo és munkatársai: "Cordyceps militaris egy új, nagy molekulatömegű poliszacharid szerkezeti jellemzése és immunerősítő aktivitása", International Journal of Biological Macromolecules, vol. 145., 2020. 11–20.

[29] X.-C. Liu, Z.-Y. Zhu, Y.-L. Tang és munkatársai: "Cordyceps militaris termesztett gyümölcstesteiből és micéliumából származó poliszacharidok szerkezeti tulajdonságai", Carbohydrate Polymers, vol. 142., 2016. 63–72.

[30] H.-J. Park, "Csírázott szójababon termesztett Cordyceps militaries etanolos kivonata gátolja a 2, 4-dinitrophenol-fluorobenzole-induced allergis kontakt dermatitist", Journal of Functional Foods, vol. 17., 938–947., 2015.

[31] C.-H. Yang, Y.-H. Kao, K.-S. Huang, C.-Y. Wang és L.-W. Lin: "Cordyceps militaris és micélium-fermentáció indukálta humán glioblasztómasejtek apoptózisát és autofágiáját", Cell Death & Disease, vol. 3, sz. 11. o. e431, 2012.

[32] SK Das, M. Masuda, A. Sakurai és M. Sakakibara, "A gombás Cordyceps militaries gyógyászati ​​felhasználása: jelenlegi állapot és kilátások", Fitoterapia, vol. 81. sz. 8., 961–968., 2010.

[33] LS Wang, CY Wang, CH Yang és munkatársai, "Synthesis and antifungal effect of silver nanopartticles-chitosan kompozit részecskék", International Journal of Nanomedicine, vol. 10., 2685–2696., 2015.

[34] R. Poesen, K. Windey, E. Neven és munkatársai, ".e influence of CKD on colon microbial metaboly", Journal of the American Society of Nephrology, vol. 27. sz. 5., 1389–1399., 2016.

[35] S.-C. Wang, C.-H. Yang, AM Grumezescu et al., "Renoprotective effects of shout camphor Medicinal Mushroom (Taiwanofungus camphorates, Basidiomycetes) Micélium több táptalajon krónikus vesebetegségben szenvedő egereknél", International Journal of Medicinal Mushrooms, vol. 18, sz. 12., 1105–1114. o., 2016.

Chih-Hui Yang , 1,2,3 Wen-Shuo Kuo, 4 Jun-ShengWang, 2 Yi-Ping Hsiang, 3,5 Yu-Mei Lin, 1,6 Yi-Ting Wang, 1,6 Fan-Hsuan Tsai, 6 Chun- Ting Lee, 6,7 Jiun-Hua Chou, 1 Huei-Ya Chang, 1 Lung-Shuo Wang, 6,8 Shu-Chi Wang, 6,9 és Keng-Shiang Huang 6

1 Biológiai Tudományok és Technológiai Tanszék, I-Shou Egyetem, Kaohsiung, Tajvan

2 Taiwan Instrument Research Institute, National Applied Research Laboratories, Hsinchu, Tajvan

3 Az E-Da Kórház gyógyszerészeti osztálya, Kaohsiung, Tajvan

4 Kémiai és Anyagtudományi Iskola, Nanjing Informatikai és Technológiai Egyetem, Nanjing, Kína

5 Biotechnológiai és Vegyészmérnöki Tanszék, I-Shou Egyetem, Kaohsiung, Tajvan

6 Kínai Orvostudományi Iskola érettségi után, I-Shou Egyetem, Kaohsiung, Tajvan

7 Amulette Chinese Medicine Clinic, Taipei, Tajvan

8 Kínai Orvostudományi Osztály, Sin-Lau Kórház, Tainan, Tajvan

9 Orvostudományi Iskola nemzetközi hallgatóknak, I-Shou Egyetem, Kaohsiung, Tajvan