Cistanche-fenil-etanol-glikozidok farmakodinamikai vizsgálata gentamicin által kiváltott akut vesekárosodáson patkányokban

Kapcsolat: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Absztrakt

Cél A védő hatás vizsgálatafeniletanoid glikozidok(phGs) a gentamicin-indukáltakut vese sérüléspatkányokban. Módszerek Összesen 54 hím SD patkányt osztottunk véletlenszerűen a kontrollcsoportba (10 nap, 15 nap, normál sóoldat 10 ml/kg), modellcsoport (10 nap, 15 nap, normál sóoldat 10 ml/kg), phGs500 mg/ kg-os csoport (10 nap, 15 nap), phGs 250 mg/kg csoport (10 nap, 15 nap) és szimulált klinikai csoport (21 nap, normál sóoldat 10 ml/kg), mindegyik csoportban hat patkány volt. Az akut vesekárosodás patkánymodelljét 75 mg/kg gentamicin intraperitoneális injekciójával hozták létre 10 napon keresztül. A kísérlet végén a patkányok 24 órás vizeletét összegyűjtöttük, a patkányok vérét a hasi aortából vettük, a patkányok kétoldali veséjét vettük, és kiszámítottuk a veseindexet. A szérum kreatinint (Scr), a vér karbamid-nitrogénjét (BUN) autoanalizátorral mértük. Szuperoxid-diszmutáz (SOD), glutation-peroxidáz (GSH-Px), kataláz (CAT) és malonaldehid (MDA) szintet mutattak ki a veseszövetben. Eredmények A vak kontrollcsoporttal összehasonlítva a Scr, BUN, 24 órás vizelettérfogat és MDA expresszió a veseszövet szintje megemelkedett a 10 napos és 15 napos modellcsoportban, és a SOD, a CAT és a GSH-PX aktivitása a veseszövetben szignifikánsan csökkent (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">akut vese sérüléspatkányokban.

Kulcsszavak:Cistanche Herba; feniletanoid glikozids; gentamicin;akut vese sérülés

Cistanche Herba

Akut vesekárosodás (AKI)a vese szűrőfunkciójának különböző okok miatti hirtelen és gyors hanyatlásával vagy elvesztésével járó klinikai szindróma [1]. Jelenleg az AKI előfordulása évről évre növekszik. Okai sokfélék, és sokféle szövődményhez vezethetnek, a klinikai kezelés beavatkozási módjai pedig nagyon korlátozottak [2·3]. Tanulmányok kimutatták, hogy az aminoglikozid antibiotikumokkal végzett folyamatos kezelés az AKI független kockázati tényezője [4], és indukáló mechanizmusa összefügg a gyógyszer által közvetített szabadgyök-termeléssel, foszfolipid lerakódással, csökkent vese véráramlással és helyi gyulladással [5]. Klinikailag a terápiás gyógyszermonitoring technikákat gyakran alkalmazzák az aminoglikozid antibiotikumok által kiváltott akut vesefunkciós károsodások kezelésére, de ezek nem tudják javítani vagy visszafordítani az ilyen antibiotikumok által okozott vesekárosodás kiváltó okából eredő kockázatát [6]. Az aminoglikozid antibiotikumok nefrotoxicitásának korai beavatkozása az aminoglikozid antibiotikumok ésszerű alkalmazásának kutatásában kiemelt szerepet játszik. A hagyományos kínai orvoslásCistanchesA Herba egy száraz, húsos szár pikkelyes levelekkelCistanchesaz Orobanchaceae családjába tartozó növényCistanches. A vese yang tápláló funkciója, valamint az esszencia és a vér táplálása [7]. Meleg természetű, édes ízű, visszatér a vese meridiánjához.feniletanoid glikozidokezek a fő kémiai összetevőkCistanche, amely növelheti a szérum szuperoxid-diszmutáz aktivitását, gátolja a malondialdehid expresszióját, fokozza a szervezet oxigén szabad gyökök megkötő képességét, csökkenti a szabad gyökök felhalmozódását a szervezetben, és megvédi a szervezetet a túlzott stressztől. Oxidatív károsító hatás [8]. Ebben a vizsgálatban a gentamicint az akut vesekárosodás patkánymodelljének megalkotására használták a citronella megelőző és terápiás hatásainak feltárására.feniletanoid glikozidokgentamicin által kiváltott akut vesekárosodásra. A jelentés a következő.

1 Anyag és módszer

1.1 Kísérleti állatok

54 SD patkány, hím, testtömeg (200 ± 20) g, a Hszincsiangi Orvostudományi Egyetem Állatkísérleti Központjától vásárolva, állattenyésztési engedély száma: SCXK (új) 2016-0003, minden állat a Xinjiangi Orvostudományi Egyetem SPF-ben nevelkedett Állatkísérleti Központ gát környezete, engedély száma: SYXK (új) 2016-0002, környezeti hőmérséklet 24-26 fok, állandó hőmérséklet és páratartalom, relatív páratartalom 40 százalék -70 százalék, a patkányok szabadon esznek és isznak .

1.2 Teszt gyógyszer

Cistanche fenetil-összes glikozidok (ez a kutatócsoport Cistanche tubulosa-ból dúsított és tisztított, a teljes fenetil-alkohol-glikozid-tartalom 89,5 százalék, az echinakozid-tartalom nagyobb, mint 40 százalék, a verbaszkozid-tartalom pedig meghaladja a 16,0 százalékot) ; Gentamicin injekció (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., gyártási szám: 16122411), malondialdehid (MDA) detektáló készlet (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., tételszám VAAAK6S286), szuperoxid diszproporcionáló enzim készlet (SOD) Biotechnology Co., Ltd., tételszám WSH27SS9GB, kataláz (CAT) érzékelő készlet (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., tételszám FGS3J66D2K), Valley Glutation-peroxidase (GSH-PX) detektáló készlet (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., tételszám DK8A622XZP), BCA fehérje mennyiségi meghatározási készlet (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., tételszám: 20190622).

1.3 Kísérleti műszer

TD50002A elektronikus mérleg (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co., Ltd.), Multiskan teljes hullámhosszú mikrolemez-olvasó (US Thermo Fisher Company), BS-320 automatikus biokémiai analizátor (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.), Biofugeprimo asztali hűtött centrifuga (Thermo Fisher Company, USA).

1.4 Modellezési, csoportosítási és adminisztrációs módszerek

1 hét adaptív etetés után 54 hím SD patkányt véletlenszerűen osztottak fel 10d, 15d vak kontroll csoportra, 10d, 15d modellcsoportra, 10d, 15d Cistanche cistanche fenetil-alkohol nagy dózisú csoportra, 10d, 15d Cistanche alacsony fenil-etanol tartalmú csoportra. A dóziscsoport és a 21 napos szimulált klinikai kezelési csoport, mindegyik csoportban 6 állat van. A 10. és 15. napos vak kontrollcsoport kivételével az egyes csoportok patkányait intraperitoneálisan gentamicinnel (75 mg/ttkg) injekcióztuk 10 egymást követő napon keresztül, hogy létrehozzuk az akut vesekárosodás modelljét. Beadási módszer: (1) A 10. és 15. napos vak kontroll patkányoknak normál sóoldatot (10 ml/testtömeg-kg) intraperitoneális injekcióban és szondán keresztül 10, illetve 15 napon keresztül adtunk; (2) 10d és 15d modellpatkányok egyidejűleg modelleztek. A 10d és 15d nagy dózisú csoportok patkányai normál sóoldatot (10 ml/testtömeg-kg) kaptak szondán keresztül 10d, illetve 15d-ig; Gyomor 10d és 15d; (4) A 10. és 15. napos, alacsony dózisú csoport patkányait naponta modelleztük, és szondán keresztül Cistanche fenil-etanolt (250 mg/testtömeg-kg) kaptunk szondán keresztül 10 és 15 napon keresztül; (5) 21 napos szimulált klinikai csoport Ezzel egyidőben a patkányok normál sóoldatot (10 ml/testtömeg-kg) kaptak szondán keresztül 21 napon keresztül. A patkányokat hetente lemérjük, és a gyógyszer adagját a testtömegükhöz igazítjuk.

1.5 Mintagyűjtés

Az egyes csoportokban lévő patkányok 24 órás vizeletet gyűjtöttek az 1., 15. és 21. napon (az állatot előző napon a metabolikus ketrecbe helyezték, és mindegyik metabolikus ketrecben egy állatot 24 óra múlva vettek ki), centrifugálva 3000 fordulat/perc sebességgel 20 percig 4 fokon, gyűjtsük össze a felülúszót és fagyasszuk le -20 fokon későbbi felhasználáshoz. A kísérlet után az egyes csoportok patkányait táplálék nélkül éheztették, és 10 százalékos klorálhidráttal elaltatták a hasüregben. Vért vettünk a hasi aortából, és szobahőmérsékleten 1 órán át 4 fokon állni hagytuk, 3500 fordulat/perc sebességgel 15 percig centrifugáltuk, és a felső világossárga tiszta folyadékréteget alikvot részekre osztották. Fagyasztva tárolandó 20 fokon későbbi felhasználásra. Az egyes csoportok patkányait elaltattuk, a hasüreget teljesen szabaddá tettük, a veseszövetek disztális és proximális végeinek artériáit és vénáit vérzéscsillapító csipesszel rögzítettük, a vesevénákat átvágtuk, és 4 fokos izotóniás normál sóoldatot fecskendeztünk be. a hasi aortát és a vesék színét perfundáltuk. Miután elsápadt, gyorsan távolítsa el mindkét vesét, és helyezze szűrőpapírra, hogy felszívja a vizet, majd mérje meg a szervindex kiszámításához. Vegyünk 0,4 g friss patkány jobb vese kéregét, adjunk hozzá előhűtött normál sóoldatot 1:9 arányban, homogenizáljuk a 10 százalékos veseszövetet alacsony hőmérsékletű környezetben, fagyasszuk le, és tartsuk fenn későbbi felhasználásra. A szervindex számítási képlete a következő: Veseindex=kétoldali vesetömeg × 103/patkány testtömeg.

1.6 A szérum kreatinin és karbamid nitrogén szintjének kimutatása patkányokban

Vegye ki a vizsgálandó szérummintákat, és helyezze be egy automatikus biokémiai analizátorba a meghatározáshoz. A készlet utasításai szerint határozza meg a kreatinin és a karbamid nitrogén tartalmát a patkányszérumban.

1.7 SOD, CAT, GSH-PX és MDA kimutatása patkány veseszövetekben

Vigye fel a patkányvese homogenizátumot szobahőmérsékleten olvasztani, centrifugálja 3000 fordulat/perc sebességgel 20 percig 4 fokon, gyűjtse össze a felülúszót, és használja a BCA kit-et a patkány vesék minden csoportjában. A szöveti fehérje koncentrációja. Kövesse a készlet utasításait a szuperoxid-diszmutáz (SOD), kataláz (CAT), glutation-peroxidáz (GSH-Px) és malondialdehid (MDA) aktivitásának meghatározásához a veseszövetben. 1.8 Statisztikai elemzés A statisztikai elemzéshez az SPSS21.0 statisztikai szoftvert használtuk. A mérési adatokat átlag ± szórásban (-x ± s) fejeztük ki. A két csoport összehasonlítása t-próbával történt, =0.05 tesztszinttel.

cistanche kivonat

2 Eredmények

2.1 A cisztanche-fenetil-alkohol összes glikozidjának hatása az egyes csoportokban lévő patkányok testtömegére, veseindexére és 24 órás vizeletkibocsátására

There was no significant difference in the body mass of rats in each group before modeling (P>0.05). A modellezés után a vak kontrollcsoporthoz képest az egyes modellcsoportok testtömege csökkent, a veseindex és a 24 órás vizeletürítés nőtt, a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)

2.2 A Cistanche fenil-etanol-glikozidok hatása a patkányok szérum kreatinintartalmára az egyes csoportokban

A vak kontrollcsoporttal összehasonlítva a patkányok szérum kreatinin tartalma minden modellcsoportban nőtt, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.3 A Cistanche feniletanoid glikozidok hatása a patkányok szérum karbamid-nitrogéntartalmára az egyes csoportokban

A vak kontrollcsoporttal összehasonlítva a patkányok szérum karbamid-nitrogén tartalma minden modellcsoportban nőtt, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically="">közel a {{0}} ágyhoz. 0 csoport 5)

2.4 A Cistanche-fenil-etanol-glikozidok hatása a SOD-aktivitásra az egyes patkánycsoportok veseszövetében

A vak kontrollcsoporttal összehasonlítva a SOD aktivitás a veseszövetben minden modellcsoportban csökkent, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><>

2.5 A cisztanche fenil-etanoid glikozidok hatása a CAT aktivitására az egyes patkánycsoportok veseszövetében

A vak kontrollcsoporthoz képest a CAT aktivitása a veseszövetben minden modellcsoportban csökkent, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05)

2.6. A Cistanche-fenil-etanol-glikozidok hatása a GSH-PX aktivitásra patkányok veseszöveteiben az egyes csoportokban

A vak kontrollcsoporttal összehasonlítva a GSH-PX aktivitás a veseszövetben minden modellcsoportban csökkent, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05).

2.7 A Cistanche-fenil-etanol-glikozidok hatása a patkányok veseszöveteinek MDA-tartalmára az egyes csoportokban

A vak kontrollcsoporttal összehasonlítva mindegyik modellcsoport veseszövetének MDA-tartalma nőtt, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05)

cisztanche védi a veseműködést

3 Vita

Az aminoglikozid antibiotikumok gyakori súlyos mellékhatása a nefrotoxicitás [9]. Ez a fajta gyógyszer prototípusként könnyen átszűrhető a glomeruluson, és egyes gyógyszerek kiválasztódnak a vizeletbe, és a legtöbb gyógyszer szelektíven felhalmozódik a vesekéregben, így a koncentráció ezen a helyen többszöröse a vesekéreg koncentrációjának. a gyógyszer a szérumban (10) ], ennek a fajta gyógyszernek a felhalmozódása elkerülhetetlenül sejtkárosodást és csökkent vesefunkciót okoz. Az aminoglikozid gyógyszerek okozta AKI klinikai kezelése hosszú ideje mindig a gyógyszerelvonás tüneti és szupportív kezelésének elvét és a rutin rehidrációt követte. kár. Ezért ez a tanulmány egy 21-napos szimulált klinikai kezelési csoportot hozott létre, hogy a lehető legnagyobb mértékben szimulálja a rutin klinikai kezelést és a testrehabilitációt, hogy tovább objektíven vizsgálhassa a Cistanche-fenil-etanol-glikozidok terápiás hatását. A klinikai kezelés során az Scr-t és a BUN-t gyakran használják indikátorként a vesefunkció értékelésére. Minél magasabb az Scr és a BUN szintje, annál súlyosabb a vesefunkció károsodása [11]. Ebben a vizsgálatban egy AKI modellt állítottak fel 75 mg/kg gentamicin intraperitoneális injekciójával patkányokba 10 egymást követő napon keresztül. Az üres kontrollcsoporthoz képest a Scr és BUN szintje a modellcsoportban nőtt, ami azt jelzi, hogy a modell sikeres volt. A Cistanche feniletanoid glikozidok 10 és 15 napos beavatkozása után a patkányok Scr és BUN értékei mindegyik kezelési csoportban csökkentek, ami azt jelzi, hogy a cisztanche fenil-etanol glikozidok jó hatással voltak a gentamicin által okozott AKI javítására.

Tanulmányok kimutatták, hogy a reaktív oxigénfajták (ROS) növekedése fontos szerepet játszik a gentamicin által okozott vesetubuláris károsodás kóros folyamatában [12]. Az MDA az egyik fő anyag, amely tükrözi a szervezet ROS szintjét [13-14]. A szervezetben a ROS elleni antioxidáns (antioxidáns) védelmi rendszer közé tartozik a SOD, a CAT, a GSH-PX és így tovább. A Cistanche deserticola fő hatékony összetevőjeként az összes fenil-etanol-glikozid jelentős antioxidáns hatást fejthet ki állatokban [15]. A Cistanche fenetil-alkohol összglikozidok beavatkozása után az adagolt csoportban a patkányok veseszövetének MDA-tartalma szignifikánsan csökkent, a SOD, CAT és GSH-PX aktivitások pedig jelentősen megnőttek, ami arra utal, hogy a Cistanche fenetil-alkohol összglikozidjai. javíthatja a vese oxidatív stressz károsodását és enyhítheti a vesekárosodást.

Összefoglalva, a cisztanche-fenetil-alkohol összes glikozidja védő hatást fejt ki a gentamicin által kiváltott akut vesekárosodásra. Antioxidáns hatást fejt ki a szabad gyökök képződésének gátlásával és a szabad gyökfogó enzimek aktiválásával, javítja a szervezet oxidatív stressz állapotát, fokozza a szervezet antioxidáns hatását. Oxidáló képesség, csökkenti a vesekárosodást.

cisztanche védi a veseműködést