A Cistanche Tubulosa-ból származó fenil-etanol-glikozidok megelőző hatásai

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Shu-Ping You et al

Absztrakt

Háttér:Cistanchetubulosaegy hagyományos kínai gyógynövény, amelyet széles körben használnak az immunitás szabályozására.Fenil-etanolglikozidokAz ebből a növényből származó CPhG-k az elsődlegesen hatékony anyagok. Ennek a vizsgálatnak a célja a CPhG-k megelőző és terápiás hatásának értékelése a BSA-indukált májfibrózisban patkányokban, valamint a kapcsolódó molekuláris mechanizmusokban, amelyekben a máj csillagsejteket is érintik. Pozitív kontrollként a Biejiarangant (BJRG), egy másik hagyományos kínai gyógynövényes gyógyszert használták.

Mód:In vivo kísérletekben 75 SD patkányt véletlenszerűen 6 csoportra osztottak: normál (desztillált vízzel kezelt), modell (BSA-val kezelt), pozitív gyógyszer (BSA-kezelt plusz BJRG 600 mg/kg/nap) és BSA-kezelt. plusz CPhG-k (125, 250 és 500 mg/kg/nap) csoportok. A máj és a lép indexei, aszpartát aminotranszferáz (AST), alanin aminotranszferáz (ALT), hexadecénsav (HA), laminin (LN), III-as típusú prokollagén (PCIII), IV típusú kollagén (IV-C), hidroxiprolin (Hyp) szérumszintjei ), és a transzformáló növekedési faktor 1-et (TGF- 1) mértük patkánymájban. A májfibrózis hisztopatológiai fokozatát minden csoportban H&E és Masson-féle trikróm festéssel értékeltük. A TGF- 1, a kollagén I (Col-I) és a kollagén III (Col-III) expresszióját immunhisztokémiai festési módszerrel határoztuk meg. Ezeket a hatásokat tovább értékeltük in vitro az NF-κB p65 és a Col-I expressziós szintjének meghatározásával kvantitatív valós idejű PCR analízissel. A Col-I fehérje expresszióját Western blottal is vizsgáltuk.

Eredmények: Minden dóziscsoport (125, 25{5}} és 500 mg/kg/nap) a CPhG-k szignifikánsan csökkentette a máj- és lépindexet, csökkentette az ALT, AST, HA, LN értékeket , PCIII, IV-C szérumszintek, TGF- 1 tartalom (P < 0.01,="" p="">< 0,01="" és="" p="">< 0,01),="" valamint="" hyp="" tartalom.="" a="" cphg-k="" emellett="" jelentősen="" enyhítették="" a="" májsejtek="" duzzadását,="" és="" hatékonyan="" megakadályozták="" a="" hepatocita="" nekrózist="" és="" a="" gyulladásos="" sejtek="" beszűrődését.="" az="" immunhisztokémiai="" eredmények="" azt="" mutatták,="" hogy="" a="" cphg-k="" szignifikánsan="" csökkentették="" a="" tgf-="" 1="" (p="">< 0,01,="" p="">< 0,01="" és="" p="">< 0,01),="" a="" col-i="" és="" col-iii="" expresszióját.="" a="" cphg-k="" (100,="" 75,="" 50="" és="" 25="" ug/ml)="" in="" vitro="" hatásai="" a="" hsc-t6-ra="" azt="" mutatták,="" hogy="" a="" cphg-k="" jelentősen="" csökkentették="" az="" nf-κb="" p65="" és="" col-i="" mrns-expresszióját,="" és="" a="" cphg-k="" szintén="" csökkentették="" a="" col-i="" fehérje="">

Következtetések:A CPhG-k jelentős májfibrózis-ellenes hatással rendelkeznek, és májfibrózis kezelésére használhatók májvédő szerként.

Kulcsszavak:májfibrózis,Cistanche tubulosa,Fenil-etanolglikozid,Chemokin BSA, megelőzés és terápia

Fenil-etanolglikozidban benCistanchetubulosa

Háttér

A májfibrózis egy súlyos májkárosodásra adott sebgyógyulási reakció, amely a különböző tényezők által kiváltott krónikus hepatitisz patogenezisében fordul elő. Ezek a tényezők a vírusfertőzés, az alkoholfogyasztás, a kolesztázis, valamint az anyagcsere- és autoimmun betegségek [1–3]. Az extracelluláris mátrix (ECM) progresszív felhalmozódása és a csökkent remodelling megzavarja a máj normális szerkezetét, ami májfibrózist eredményez [4]. A májfibrózis kritikus jelentőségű a krónikus májbetegségben, és gyakran visszafordíthatatlan cirrózissá és karcinogenezissé fejlődik. Jelenleg nincsenek módszerek vagy hatékony gyógyszerek a májfibrózis kezelésére. Ezért sürgős olyan májfibrózis elleni gyógyszert találni, amely mérsékli a májkárosodás fibrózis és rák kialakulását.

CistanchetubulosaA W (az Orobanchaceae családból) egy parazita növény, amelyet széles körben termesztenek Kínában, Hszincsiang déli régiójában [5]. Az emberek általában a vesék élénkítésére, a vér táplálására, a bél lazítására és az öregedés késleltetésére használják. Hivatalosan szerepel a kínai gyógyszerkönyvben [6].Cistanchetubulosasokféle aktív komponenst tartalmaz. Ezek tartalmazzákFenil-etanolglikozidok(CPhG-k), iridoidok és poliszacharidok. Mint a sok aktív komponens közülCistanchetubulosa, a CPhGshave meggyőző antioxidáns, fáradtság-ellenes, neuroprotektív és gyulladásgátló hatást mutatott mind in vivo, mind in vitro vizsgálatokban [7]. Az elmúlt években arról számoltak be, hogy a CPhG-k májvédő hatásúak. E hatások mögött meghúzódó lehetséges mechanizmusok a szabad gyökök megkötése, a májmembránok védelme, az immunreguláció, az apoptózis gátlása, a HBsAg és a HBeAg expressziójának gátlása, valamint a HBV DNS replikációjának gátlása és mások [8–11]. Az irodalomban azonban kevés tanulmány foglalkozik a GPhC-k májfibrózis elleni hatásával. Ezért ennek a tanulmánynak a célja a GPhC-k májfibrózis elleni hatásának vizsgálata volt a szarvasmarha szérumalbumin (BSA) által indukált májfibrózis amodell felhasználásával patkányokban. A kapcsolódó molekuláris mechanizmusokat HSC-T6 sejtekben vizsgáltuk.

Mód

Vegyszerek és reagensek

A Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute-tól (Kína) vásároltunk egy hidroxiprolin készletet (alkáli hidrolízis) (Lot:20140616). A patkány TGF- 1 szendvicsELISA készleteket (tétel: 238240615) a Lianke Biotech Co., Ltd.-től (Kína) vásároltuk. A Rabbit Anti-CollagenI antitestet (tétel: 140619), a Rabbit Anti-Collagen III antitestet (tétel: 980788 W) és a Rabbit Anti-TGF- 1 antitestet (tétel: 140619) a Beijing BiosynthesisBiotechnology Co., LTD ( Kína). Normál juhszérummal (munkafolyadék) (tétel: WP141214), PV-6000(tétel: WK141225) és DAB készlettel (tétel: K136621D) a Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd.-től (Kína) vásárolták. Az elsődleges antitestek kimutatását az Invitrogen Company (USA) cégtől vásárolt 2. antitestoldat (Alk-Phos.Conjugated, Anti-nyúl) és 2. Antitest oldat (Alk-Phos. Conjugated, Anti-Mouse) (tétel: 272387) felhasználásával végeztük. .

A szarvasmarha-szérumalbumint (BSA) (tétel: SLBG8239V) a Sigmától (USA) vásárolták. Használat előtt a BSA-t 18 g/l koncentrációban állítottuk elő normál sóoldatban, a baktériumokat szűréssel eltávolítottuk, és a BSA-t 4 fokon tároltuk. Az 1 g bárányszőrből származó lipidet tartalmazó Freund-féle hiányos adjuvánst (tétel: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Kína)) összekevertük 2 g folyékony paraffinnal (tétel: 20130815, Tianjin Fuyu, Chemical Co., Fine. Ltd. (Kína), gőzautoklávban sterilizálva és 4 fokon tárolva. A pozitív BJRG gyógyszert Biejiarangan tabletta formájában szerezték be az Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd.-től (Kína). A BJRG gyógyszertörzseket úgy állítottuk elő, hogy BJRG tablettákat oldottak desztillált víz 600 mg/kg koncentrációban.

Fenil-etanol glikozidban benCistanchemegelőző hatása van

Növényi anyagok

Cistanche tubulosa(Orobanchaceae család) a kínai Xinjiang Minfeng régiójából vásárolták. Az anyagot Jun Zhao kutató, a Xinjiang-i Materia Medica Intézet ujgur orvostudományi kulcslaboratóriumának kutatója hitelesítette. Az utalványmintákat a hszincsiangi Materia Medica Intézetben helyezték letétbe.

CPhG-k készítése

Szárított és szeletelt rizómákCistanchetubulosa(6{1}} kg) háromszor 70%-os etanollal visszafolyató hűtő alatt háromszor extraháltuk, majd az oldószert eltávolítottuk, így etanolos kivonatot kaptunk. Az etanolos kivonatokat AB-8 gyantával tisztítottuk, hogy megkapjuk afeniletanoidglikozidok(CPhG-k). Az állatkísérletekben különböző dóziscsoportokhoz használt CPhG törzsoldatokat (500 mg/kg, 250 mg/kg, illetve 125 mg/kg) 0,5 százalékos (5 g/l) karboxi-metil-cellulózban oldottuk fel. nátriumsó).

A CPhG-k mennyiségi meghatározása

A CPhG-ben lévő két komponens (echinakozid és akteozid) tartalmát HPLC-vel határoztuk meg egy korábban ismertetett módszerrel (Zhang et al. 2004)[12]. A HPLC-t UV-detektorral felszerelt Shimadzu LC-10AHPLC-vel végeztük. A HPLC oszlop egy Phenomenex Gemini ODS oszlop volt (250 × 4,6 mm, 5 μm). Az izokratikus mozgófázis metanol-acetonitril -1 százalékos ecetsavból (15:10:75, v/v/v) állt. Az eluálást 40 percig végeztük, és az áramlási sebességet 0,6 ml/perc értéken tartottuk. Az oszlop hőmérsékletét állandóan 30 fokon tartottuk. Az UV-detektálás 334 nm-en történt.

Állatok és HSC-T6 sejtvonal

[Grade SPF] egészséges felnőtt hím Sprague–Dawley (SD) patkányokat (180–220 g) a Xinjiang MedicalUniversity Animal Centertől vásároltunk, engedélyszám: SCXK (New)2011–0004. A patkányokat specifikus kórokozómentes (SPF) chow-val etették. Az állatkísérletekkel kapcsolatos összes eljárást jóváhagyta a Hszincsiangi Orvostudományi Egyetem első társkórházának állatetikai bizottsága. A patkányokat ketrecekben tartottuk ellenőrzött környezeti feltételek mellett (25 fok és 12 órás világos/sötét ciklus), és szabad hozzáférésük volt a standard patkánypellet táplálékhoz és a csapvízhez. A patkányokat a kezelés előtt akklimatizáltuk.

Egy immortalizált patkány májcsillag sejtvonalat, a HSC-T6-ot, a Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo., LTD-től szereztük be. (Wuhan, Kína). A HSC-T6 sejteket Dulbecco's Modified Eagle's Medium (High Glucose) (DMEM, Peking, Kína) táptalajban tenyésztjük, amelyet 10 százalék borjúmagzati szérummal (Gibco, Dél-Amerika), 100 NE/ml penicillinnel és 100 ug/ml sztreptomicinnel (Pekij) egészítettünk ki. ) párásított inkubátorban 37 fokon, 5 százalékos CO2 mellett.

BSA által kiváltott májkárosodás és kezelések

Hetvenöt SD patkányt véletlenszerűen hat csoportra osztottak: normál (desztillált vízzel kezelt), modell (BSA-val kezelt), pozitív gyógyszer (BSA-kezelt plusz BJRG 600 mg/kg/nap) , valamint a BSA-val kezelt plusz CPhG-k (125, 250, 500 mg/kg/nap) csoportok. A BSA-val kezelt plusz CPhG-kkel (125, 250, 500 mg/kg/nap) kapott csoportban 13, a másik csoportban pedig 12 patkány szerepelt. A BSA-indukált májkárosodás modellje elsődleges szenzitizációra oszlik, amelyet immunológiai támadás követ) [13]. A normál csoport kivételével a többi csoport 0,5 ml (9 mg/ml) BSAFreund inkomplett adjuvánsával többszöri szubkután injekciót kapott az 1., 15., 22., 29. és 36. napon az elsődleges szenzibilizáció céljából. Hét nappal az ötödik injekció után vért vettünk a ratretinális vénafonatból, és megvizsgáltuk a szérum albumin antitesteket. A BSA antitestet patkányszérumban kettős agar diffúziós módszerrel detektáltuk. A támadó injekciót 0,4 ml BSA normál sóoldatban történő beadásával végeztük BSA antitest-pozitív patkányok farokvénán keresztül hetente kétszer, tíz alkalommal. A koncentrációk és az injekciók beadási ideje: 5.00, 5,50, 6.00, 6,50, 7.00, 7,50, 8,50, 9,00, 9,50 és 10,00 g/l a 46. napon , 50. nap, 53. nap, 57. nap, 60. nap, 64. nap, 67. nap, 71. nap, 74. nap és 78. nap. A normál csoportban normál sóoldatot használtak immunológiai primer (szenzibilizáció) és másodlagos (támadás) injekcióhoz BSA helyett, és a többi körülmény megegyezett a modellcsoportéval.

A normál csoport orálisan 10 ml/kg/nap dózisban desztillált vizet kapott. A modellcsoport 10 ml/kg/nap 0,5%-os CMC-Na oldatot kapott orálisan. A pozitív gyógyszercsoport 600 mg/kg/nap BJRG-t kapott orálisan. A BSA-val kezelt és CPhG-kkel (125 250 és 500 mg/kg/nap) kezelt csoportok 125, 250 és 500 mg/kg/nap CPhG-t kaptak orálisan. A patkányok napi adagolását az utolsó injekció beadása után két hétig folytatták.

A kísérleti időszak után a patkányokat 12 órán át éheztették a 10%-os klorálhidrát előtt, majd azonnal elaltatták. A szérummintákat minden patkányból gyűjtöttük, és azonnal felhasználtuk. A májat két célból gyűjtöttük be: (1) folyékony nitrogénben való konzerválás Hyp kitsand (2) 10%-os formaldehidben történő rögzítés szövettani és immunhisztokémiai vizsgálatokhoz. Az állatkísérletek teljes időtartama 93 nap volt.

Fenil-etanol glikozidban benCistanchemegelőző hatása van

Máj és lép indexei

A májat és a lépet laparotomiával kimetszettük, és 4 fokos normál sóoldattal mostuk. Miután a felesleges vizet felszívtuk szűrőpapírral, lemértük a májat és a lépet, hogy kiszámítsuk a megfelelő indexeket: Szerv relatív tömege=szervtömeg (g)/egyéni testtömeg (g) × 100 százalék [14].

A májfibrózis markereinek elemzése

A CPhG-k BSA által kiváltott májkárosodással szembeni védőhatását ALT és AST mérésével (Mind ray automatikus biokémiai analizátor, A086A0182) értékeltük. A májfibrózis kialakulását és a kezelés hatásait a HA, LN, PC III és IV-C (kemilumineszcencia analizátor, TaiGeKeXin, MP2808) vizsgálatával határoztuk meg.

Hyp tartalom és TGF{0}} elemzés

A Hyp szintjét a májszövetben spektrofotometriás módszerrel határoztuk meg a kit utasításai szerint. A Hyp szintjét Hyp (ug)/fehérje (mg) formában fejeztük ki. Hyp (ug/mg)=(Mért OD - vak OD)/(standard OD vak OD) × 5 (ug/ml) × 10/szövet nedves tömege (ml/mg). A TGF- 1 májkoncentrációját ELISA kitekkel határoztuk meg a gyártó utasításai szerint. A CPhG-k fibrózisra kifejtett gátló hatását a TGF- 1 expressziós szintjei igazolták.

Hisztopatológiai vizsgálat

A bal lebeny ugyanazon részében lévő májszövetet kimetszették és 10%-os formaldehid oldatban rögzítették. A szöveteket hagyományos H&E és Masson-sztrikróm festéssel festettük meg, hogy fénymikroszkóp alatt megfigyeljük a kórszövettani változásokat. Az I. típusú kollagén, a III. típusú kollagén és a TGF- 1 expresszióját a májszövetekben immunhisztokémiai festéssel elemeztük [15].

A szemikvantitatív immunhisztokémiát a leírt módszerek szerint végeztük [16, 17]. A következő osztályozásokat alkalmaztuk a TGF- 1 pozitív sejtekhez: "-" azt jelenti, hogy szinte nincs kifejezés, 20=l; A " plusz " a lézióterületen egyenként összegyűlt pozitív sejteket jelöli, 21=2; A " plusz plusz " a léziós terület körül összegyűlt kis csoportokban lévő pozitív sejteket jelzi, 22=4; A " plusz plusz plusz " diszpergált pozitív sejteket jelöl, mint 23=8. Az eredmények hierarchikus integrációt képviselnek. Az I. típusú kollagén és a III. típusú kollagén kromogén fokát és hatókörét CRI-vé konvertáltuk statisztikai elemzés céljából (kromogén fok × kromogén tartomány). A kromogén fokozat gyenge „plusz”, mérsékelt „plusz plusz” és erős „plusz plusz” részekre oszlik. A kromogén tartomány "plusz"-ra oszlik, kromogén tartománya < nézet="" 1/4;="" "="" plusz="" plus="" ",="" kromogén="" látási="" tartománya/4-2/4;="" "="" plus="" plus="" plus="" ",="" kromogén="" látótávolsága="" 2/4-3/4;="" "="" plusz="" plusz="" plusz="" ",="" kromogén="" tartománya=""> 3/4. A vakpontozást két ember végezte, ahol a "plusz" 1; A " plusz plusz " értéke 2, a " plusz plusz plusz " 3, és a " plusz plusz plusz " 4. Három mikroszkóp megfigyelési mezőt (nagyítás × 200) véletlenszerűen választottunk ki minden szakaszhoz, a minták átlagos szintjét használva. félkvantitatív szinten.

Sejtkísérletek

A HSC-T6 sejteket egy 96-lyukú lemezre szélesztettük. Kezdetben a sejteket 10% FBS-t tartalmazó DMEM-mel tenyésztettük 48 órán át. A tápközeget ezután FBS nélküli DMEM-re cseréltük, hogy a sejteket 12 órán át éheztessük. A sejteket ezután 5,0 ng/mLTGF- 1-t (FBS nélkül) tartalmazó DMEM-mel tenyésztettük 24 órán át. Végül különböző koncentrációjú CPhG-k (100 ug/ml, 50 ug/ml és 25 ug/ml), akteozid (6 ug/ml, 3 ug/ml és 1,5 ug/ml), andechinakozid (500 ug/ml, 250 ug/ml, és 125 ug/ml) végeztük a lemezen négy párhuzamos üregben, és 48 órán át inkubáltuk.

Valós idejű PCR elemzés

Az NF-κB, p65 és kollagénI mRNS expressziós szintjét valós idejű PCR-rel határoztuk meg. A HSC-T6 sejtekben az RNS expressziójának meghatározásához a sejteket (4 × 105 sejt) hatlyukú lemezekre oltottuk 3 ml DMEM-mel 10% FBS-sel, és egy éjszakán át inkubáltuk 37 °C-on és 5% CO2-on, majd a sejttenyésztő tápközeget toszérummentes DMEM-re cseréltünk. Ezután a CPhG-k (100 ug/ml, 50 ug/ml és 25 ug/ml), az akteozid (6 ug/ml, 3 ug/ml és 1,5 ug/ml) és az echinakozid (500 ug/ml, 250 ug/ml) /ml és 125 ug/ml) adtunk a lyukakba. 48 órás CPhG-kkel vagy monomer kompozíciókkal végzett inkubálás után a teljes RNS-t TRIzol reagenssel (Invitrogen, USA) extraháltuk, és 15 másodpercig erőteljesen kloroformmal kevertük. Miután 3 percig szobahőmérsékleten tartottuk, a lizátumot 12, 000 × g-vel centrifugáltuk 15 percig 4 fokon. A vizes fázisban lévő RNS-t izopropanollal kicsaptuk, és a felső vizes fázist egy új mikrocentrifugacsőbe vittük át. Az RNS-t 0,75 százalékos etanol hozzáadásával csaptuk ki, majd a mikrocentrifuga csövet 12,000 × g-vel centrifugáltuk 4 fokon legfeljebb 5 percig. A felülúszót eltávolítottuk, és az RNS-t szobahőmérsékleten 5-10 percig szárítottuk. Speciális primerkészletek (Sangon, Shanghai, Kína), amelyeket a patkány-aktin [GenBank: NM_031144.3], a kollagén I [GenBank: NM_ 053304.1] és az NF- amplifikálására használtak. A κB p65[GenBank: NM_199267.2] géneket Batch Primer 3 segítségével terveztük. A forward (FW) és a fordított (RV) primerek a következők voltak: Kollagén I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG, RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA), NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG, RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA), -aktin (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG, RV: AGA GGCATA CAG GGA CAA CAC A). Az eredményeket belső kontrollként a housekeepinggén -aktin mRNS-ére normalizáltuk, és relatív mRNS szintként mutatjuk be.

A reakciókat 8 μL IQ SYBR GreenSupermix, 1 μL 10 pM primer párral, 8,5 μL desztillált vízzel és 2,5 μL cDNS-sel végeztük. Mindegyik polimeráz láncreakciót a következő körülmények között hajtották végre: 95 fokon 3 percig, majd 40 ciklus 10 másodpercig 95 fokon, 30 másodpercig 55 fokon és 10 másodpercig 55 - 95 fokon a kiterjesztéshez, majd egyszeri fluoreszcencia mérés. A végső eredményeket a relatív értékekkel (2-ΔΔCt) írtuk le. A számításokat és elemzéseket az iQ5 Real-Time PCR Detection System rendszerrel végeztük.

Western blot analízis

A kollagén I (Abcam, Cambridge, Egyesült Királyság, cikkszám: ab34710) fehérje expressziós szintjét Westernblot módszerrel határoztuk meg [-aktinnal (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, Kína) háztartási kontrollként. A teljes sejtes kivonatokat Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) (Thermo Scientific, USA) pufferrel állítottuk elő 1% Haltproteáz inhibitor koktéllal (Thermo Scientific, USA) és 1% Halt-foszfatáz inhibitor koktélokkal (Thermo Scientific, USA). A fehérjekoncentrációt Bradford-módszerrel mértük és mennyiségileg határoztuk meg [18]. A fehérjét (10-50 ug) 10 százalékos SDS-PAGE gélen választottuk el, és PVDF membránokra vittük (Millipore, USA). A membránokat 1 órán át szobahőmérsékleten blokkoltuk 5 százalékos BSA-val és az elsődleges antitestekkel (Anti-Colla gen I. antitestet, 1:200 hígítást vagy egér mAb-aktint, 1:5000 hígítást) inkubáltuk 4 fokon egy éjszakán át. A megfelelő Alk-Phos. A konjugált másodlagos antitesteket szobahőmérsékleten inkubáltuk. Végül a membránokat háromszor mostuk 0,1 százalékos Tween 20-at tartalmazó 1 × Tris-HClsaline oldattal, majd a jeleket GEL DOC XR Imaging System (Bio-Rad) segítségével letapogattuk és láthatóvá tettük. Denzitometriás analízist végeztünk a kérdéses fehérjéken, és a GEL DOCImage Studio szoftverrel (Bio-Rad) -aktinra normalizáltuk. Az aktint belső kontrollként használták.

Statisztikai analízis

A Shapiro-Wilk normalitás tesztet és a Levene varianciahomogenitás tesztet alkalmaztuk a normalitás és a variancia homogenitás ellenőrzésére. Az inhomogén, normális eloszlású adatok statisztikai eltéréseinek azonosítására a Tukey-féle post hoc tesztet követő varianciaanalízist (ANOVA) használtuk. A nem normál eloszlású vagy homogén adatok elemzésére Kruskal-Wallis nem-paraméteres tesztet használtunk. Az eredményeket átlag ± SD formában fejeztük ki. A szignifikancia értéke P < 0.05.="" minden="" adatot="" spss="" 16.0="" szoftverrel="" (xinjiang="" medical="" university)="">

Eredmények

A CPhGsCPhG-k mennyiségi meghatározása inCistanchetubulosakettőt tartalmazFenil-etanolglikozidok, echinakozid és akteozid, és ezek CPhG-tartalmát HPLC analízissel (1. ábra) 42,71 ± 0,42 százaléknak, illetve 14,27 ± 0,18 százaléknak határoztuk meg.

Máj és lép indexei

Amint az 1. táblázatban látható, a modellcsoport máj- és lépindexe szignifikánsan megemelkedett [P < 0.01,p="">< 0,05].="" a="" pozitív="" gyógyszer="" bjrg="" és="" cphg="" máj-="" és="" lépindexe="" a="" különböző="" dóziscsoportokban="" szignifikánsan="" csökkent="" a="" modellcsoporthoz="" képest="" [pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0.004," pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024," pspleen="0.070]." a="" máj="" és="" a="" lép="" indexei="" alacsonyabbak="" voltak,="" mint="" a="">

A CPhG-k hatása az ALT, AST aktivitásokra és a májfibrózismarkerekre

Jelen vizsgálatban az AST és ALT májenzimek szérumszintje szignifikánsan megemelkedett a modellcsoportban, ami a BSA által kiváltott májfibrózisos patkányok hepatocelluláris károsodását tükrözi. A kísérletek azonban azt mutatták, hogy a BJRG-vel (600 mg/kg) és a CPhG-kkel (125, 250 és 500 mg/kg) végzett kezelés jelentősen csökkentette. AST[MÚLT < 0,001,="" múlt="">< 0,001,="" múlt="">< 0,001,="" múlt="">< 0,001]="" és="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189" ,="" palt="0.255," illetve]="" szintek="" a="" májfibrózisos="" betegekben.="" (2.="">

A HA, LN, PC és IV-C szintje modellpatkányokban szignifikánsan megemelkedett [PHA < 0.001,="" pln="">< 0.{{39}="" }01,="" ppciii="0.002," piv-c="">< 0,001].="" a="" modellcsoporthoz="" képest="" a="" ha="" szintjei="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023]," ln="" [pln="0.011," pln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069" rendre],="" pc="" iii[p="" pciii="" {{26="" }}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296]," illetve="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001]="" patkányokban="" jelentősen="" csökkentette="" a="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" és="" a="" cphg-k="" a="" különböző="" dóziscsoportokban="" (125,="" 250="" és="" 500="" mg/kg).="" )="" (3.="">

Hyp tartalom és TGF- 1

A kollagéntartalmat a májszövetben lévő Hyplevels mérésével is kimutatták. Amint a 4. táblázat mutatja, az átlagos Hyp szint a modellcsoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a normál csoportban, de jelentősen csökkent a BJRG csoportban és a különböző CPhGs dóziscsoportokban.

A modellcsoport TGF{{0}} májkoncentrációja patkányokban szignifikánsan megnőtt [P < 0.001].="" a="" modellcsoporthoz="" képest="" a="" pozitív="" gyógyszer="" tgf-="" 1="" szintje="" és="" a="" különböző="" cphg-dóziscsoportok="" jelentősen="" csökkentek="" [p="" tgf-="" 1="">< 0,001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0,001,p="" tgf{{10="" }}="">< 0,001,="" ptgf-="" 1="">< 0,001].="" az="" eredményeket="" a="" 4.="" táblázat="" foglalja="">

Hisztopatológiai vizsgálat

A H&E-vel és Masson-féle trikrómmal festett normál májszövet metszetek megfigyelései külön hepaticlobulusokat és máj sinusoidokat mutatnak. A modellpatkányokban a májszövet szerkezete rendezetlen volt, a májszövetet és a máj sinusoidjait nagy mennyiségű kötőszövet váltotta fel. A kezelt csoportban azonban több normális citoarchitektúrát és kevesebb kötőszövetet észleltek, mint a modellcsoportban.

H&E festés

A normál csoportban a májlebeny szerkezeti integritását figyelték meg abnormális portális területek és máj sinusoidok nélkül. A májzsinórok rendezett módon voltak elhelyezve, a mag kerek és átlátszó. A sejtmagok a sejt közepén helyezkednek el, bőséges citoplazmával. Csak a portál területén található kis mennyiségű rostos szövet (2a. ábra).

A modellcsoportban a lebenyes szerkezet súlyosan károsodott. A májsejtek enyhe vizes degenerációt mutattak, többnyire ballonos degenerációt és/vagy zsíros degenerációt. Gyulladásos sejtinfiltráció, kiterjedt rostos szöveti hiperplázia, nagyszámú rostos septum, hasadó lebenyek kialakulása és jelentős májsejtek szaporodása is megfigyelhető volt. Ezek a megfigyelések megerősítették a patkány immunsérüléses állatmodell létrehozásának sikerét. májfibrózis (2b. ábra).

A modellcsoporttal összehasonlítva a gyulladásos sejtek infiltrációja csökkent a különböző CPhG-kben. Ugyancsak megfigyelhető volt a májsejtek nekrózisa és zsíros degenerációja, valamint a fibrózis enyhülése. A CPhG szignifikánsan enyhítette a BSA által kiváltott májfibrózis patológiáját patkányokban, enyhítette a májsejtek duzzadását, és hatékonyan megelőzte a hepatocita nekrózist és a gyulladásos sejtek beszűrődését, ami arra utal, hogy a CPhG védő hatást fejt ki a BSA által kiváltott patkány májfibrózisra. (2c–f ábra).

Masson-féle trikróm festés

A normál csoportban a májszövet normális volt. A májkapu területén kis számú bluekollagén rost volt látható, és a májszövet szerkezete normális volt (3a. ábra). Összehasonlítva a normál csoport májszövetével, a rostos szövet a központi szórólap hatására elszaporodott és a máj parenchymába terjeszkedett. A kollagénrostok kiterjesztették és összekapcsolták és beborították az egész lebenyet, és körülvették a központi vénát. Ezek a hatások, valamint a hepatocita fibrózis, a lebenyes szerkezeti károsodás, a periportális fibrózis és a pszeudolobulus képződés (3b. ábra) bizonyítékot szolgáltattak a modell létrejöttére.

A modellcsoporttal összehasonlítva a pozitív gyógyszer-kontroll csoport kollagénrostjai enyhén megnyúltak a perifériás portális területtől kifelé (3c. ábra). A modellcsoporttal összehasonlítva a különböző CPhGs dóziscsoportokban a kollagén rostok szignifikánsan csökkentek, a rostok proliferációja gátolt, és a máj parenchymán belüli proliferációs rostszövet szignifikánsan csökkent. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a CPhG-k megvédik a patkányokat a BSA által kiváltott májfibrózistól (3d–f ábra).

Immunhisztokémiai festés

Fontos, hogy az I-es és III-as típusú kollagén expressziója alapvető szerepet játszik a májfibrózis kialakulásában, és ezek keletkezése és lerakódása a májszövetben fontos meghatározója lehet a májfibrózis elleni hatékonyságnak. Az eredményeket az 5. táblázat foglalja össze.

I-es típusú kollagén

A normál csoport I. típusú kollagént elsősorban a vérerekben és a portál területén expresszált. A modellcsoport erősen expresszálta az I-es típusú kollagén vaszkuláris fibrózist a portális területeken. A Disse terében az I. típusú kollagén festődés csíkként vagy foltos eloszlásként volt megfigyelhető. A kollagénnel burkolt fibroussepta pszeudolobulumot képez. Ezekben a kísérletekben kevesebb rostos septa alakult ki a BJRJ-re (600 mg/kg) és a CPhG-k különböző dózisú csoportjaira (125, 250 és 500 mg/kg) [PCol I= 0.002, PCol I {{6 }}.001, PCol I=0.023, illetve PCol I=0.044]. A szemikvantitatív eredmények azt mutatták, hogy I. típusú kollagénjük expressziója szignifikánsan alacsonyabb volt a modellcsoporthoz képest (4. ábra).

III típusú kollagén

A III-as típusú kollagén gyengén expresszálódott a normál csoportban, és a portált és a májvénákat körülvevő perifériás területeken a folytonos rostok helyett kis mennyiségű finom sárga volt (5a. ábra). A modellcsoportban a kollagénrostok széles és vastag zsinórokat mutattak, ami erős expressziót jelez, főként a portálban és a rostos szöveti területeken (5b. ábra).

A BJRJ kollagénrostjai (600 mg/kg) és a CPhG különböző dóziscsoportjai (125, 250 és 500 mg/kg) fonalasak voltak, és a központi véna és a portális területek körül oszlanak el. A modellcsoporthoz képest a kollagénrostok szignifikánsan csökkentek, a festődés halvány és vékony volt, az immunhisztokémiai festődés pedig gyengén pozitív volt (5c-f ábra). Ezek a szemikvantitatív eredmények azt mutatják, hogy a pozitívan expresszált sejtek a pozitív és a különböző dóziscsoportokban [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PColIII=0.010 és PCol III=0.037] eltértek a modellcsoportban szereplőktől.

TGF- 1

Normál patkánymájsejtekben kevés volt a TGIF{0}} expressziója. Az expresszió kis számú intersticiális sejtre korlátozódott (6a. ábra). A modellcsoportban a TGF- 1 expressziója széles körben elterjedt a portál területén, a rostos terekben, a máj csillagsejtekben, a gyulladásos sejtekben, a szinuszos falban és a citoplazmában. Egy adott portálterület erősen pozitív expressziót mutatott barnássárga festéssel (6b. ábra)

Kismértékű expresszió volt megfigyelhető a BJRJ portális területén és rostos septumában (600 mg/kg), valamint a CPhG különböző dóziscsoportjaiban (125, 250 és 500 mg/kg). A pozitív festődés mértéke ezekben a csoportokban szignifikánsan csökkent a modellcsoporthoz képest. A rostos septa intersticiális sejtjeinek és a gyulladásos sejtek citoplazmájának festődése csökkent (6c-f ábra). A szemikvantitatív eredmények azt mutatták, hogy a BJRJ és a CPhG különböző dóziscsoportjai [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0." 004,="" illetve]="" szignifikánsnak="" bizonyultak="" a="" modellcsoporthoz="">

Amint a cikkben korábban említettük, a TGF{0}} a májfibrózis patofiziológiájában fontos citokin, amely serkenti az extracelluláris mátrix termelését [19]. Kimutattuk, hogy a TGF- 1 szintje a modellcsoportban a májfibrózis súlyosságával összhangban nőtt. A TGF- 1 expressziós szintje a májban összhangban volt a szérum TGF- 1 szintjével. Ez azt jelzi, hogy a CPhG-k jelentősen csökkenthetik a TGF- 1 expressziója miatti májfibrózist azáltal, hogy részt vesznek az ECM szintézisében és lebontásában.

Az I. típusú kollagén, a III. típusú kollagén és a TGF{0}} expressziója képes kimutatni a májfibrózis kóros folyamatát. Az expressziós szintjük a kezelt csoportokban szignifikánsan csökkent, és azt szemlélteti, hogy a CPhG-k javíthatják a kollagenáz aktivitást, fenntartva a máj ECM szintézisének és lebomlásának dinamikus egyensúlyát, így késleltetve és megelőzve a májfibrózis kialakulását.

NF-κB p65 és kollagén I expresszió gyógyszerintervenció után HSC-T6 sejtekben

A májfibrózis jeleinek jellemzésére két kulcsfontosságú szabályozó gént határoztunk meg a májban RT-PCR vizsgálattal. Az adatok azt mutatták, hogy a kontrollcsoportból származó tHSC-T6 sejtekben alacsonyabb volt az NF κB és az I. típusú kollagén mRNS szintje. Ezzel szemben a TGF- 1 a HSC-T6 sejteket az NF-κB (P < 0.01)="" és="" a="" col-i="" (p="">< 0,01)="" mrns="" jelentős="" felszabályozására="" indukálta,="" magasabb="" szintekkel,="" mint="" a="" kontrollcsoportba="" tartozók.="" különböző="" koncentrációjú="" cphg-k="" jelenlétében="" az="" nf-κb="" p65="" [p="" nf-κb="0,001" 100="" ug/ml,="" p="" nf-κb="0,002" 75="" ug/ml="" esetén="" ,="" p="" nf-κb="0,007" 50="" ug/ml="" esetén,="" és="" p="" nf-κb="0,012" 25="" ug/ml="" esetén]="" és="" col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.006,="" p="" col-i="0.009," p="" col-i="0.014," p="" col-i="0.019," rendre]="" ezen="" mrns-ek="" csökkent="" expresszióját="" mutatták="" (="" 7.="">

A kollagén I szintjének Western blot analízise gyógyszerbeavatkozás után HSC-T6 sejtekben

A 8. ábra a kollagén I fehérje expressziós szintjét mutatja a különböző kísérleti csoportok HSC-T6 sejtjeiben. A kollagén I fehérje expressziós szintje szignifikánsan csökkent a CPhG különböző dóziscsoportjaiban (100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml, és 25 ug/ml) a TGF- 1 csoporthoz képest.

Vita

A CPhGs egy feniletanoid-glikozid, amelyet a Cistanche rizómájából izolálnak és tisztítanak, és amelyet hagyományos kínai gyógynövénykészítményként használnak. Az elmúlt években kimutatták, hogy a CPhGshad erőteljes májsérülések megelőzésére alkalmas képességgel rendelkezik [20]. Ezért arra törekedtünk, hogy megvizsgáljuk, hogy a CPhG-k gátolják-e a BSA-indukált májfibrózis által okozott hepatitis fibrózist patkányokban. A BJRG-t gyakran használják a májfibrózis terápiás gyógyszereként Kínában. Teknőspáncélból készül. A Radix PaeoniaRubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis stb. Qi-t és vért pótolnak, enyhítik a fáradtságot, lágyítják a csomókat. Ezenkívül korábbi tanulmányok kimutatták, hogy nyilvánvaló funkciója a korai májfibrózis blokkolása, a zsírraktározó sejtek proliferációjának gátlása és a kollagénszintézis csökkentése [21]. Ezért a BJRG-t pozitív gyógyszerként használták ebben a vizsgálatban.

A patkányok májfibrózisának BSA-injekciókkal kiváltott kóros elváltozásai hasonlóak a humán portális cirrhosisban tapasztaltakhoz [22]. A CPhG-k dózisfüggően enyhítették a májfibrózis mértékét és gátolták a HSC miofibroblaszt-szerű sejtekké történő átalakulását, csökkentették a szérum ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 emelkedett szintjét és a májindexet, és jelentősen visszaszorították a kollagén expresszióját I, kollagén III és TGF- 1 a májszövetben.

A májfibrózis stádiumai korrelálnak a HA, LN és IV-C e vérszintjeivel, amelyek markerként szerepet játszhatnak a májfibrózis mértékének kimutatásában [23]. Beszámoltak arról, hogy a HA az extracelluláris mátrix fő erőforrása. A IV-C, mint az alapmembrán alapvető eleme, bőségesen szintetizálódik és lerakódik a májcirrhosis korábbi fázisaiban. Az LN és IV-C szérumszintjei a bazális membrán turnover rate indexei, és a portális területen és a szinuszoidális kapillárisok fibrózisának mértékét mutatják [24]. A PC III marker a májfibrózis és a korai cirrhosis diagnosztikájában, de szenzitivitása és specificitása nem magas, és számos hivatkozásban nincs szignifikáns különbség az offibrosis különböző stádiumai között [24, 25]. Ez a tanulmány hasonló eredményt hozott.

Ezenkívül a H&E és a Masson trichrome-festett metszet megfigyelései normális májszöveteket mutatnak, különálló májlebenyekkel és máj sinusoidokkal. A modellcsoportban a májszövet szerkezete rendezetlen volt, a májszövetet és a máj sinusoidát nagy mennyiségű kötőszövet váltotta fel. A kezelt csoportokban azonban szignifikáns javulás volt megfigyelhető a modellcsoporthoz képest.

Fontos, hogy az I. típusú kollagén és a III. típusú kollagén expressziója alapvető szerepet játszik a májfibrózis kialakulásában, amelynek gátlása megelőzheti és kezelheti a májfibrózist. Ezért az I-es és III-as típusú kollagén termelődése és lerakódása a májszövetben fontos meghatározója lehet a májfibrózis elleni hatékonyságnak. A TGF- 1 szintén fontos profibrogén citokin a májkárosodásban, és biológiailag aktív, számos farmakológiai hatással[26]. A szöveti homeosztázis fenntartásához egyensúlyra van szükség ezen tevékenységek között. A TGF 1 rendellenes expressziója részt vesz a májbetegségek patogenezisében [27, 28]. Ismeretes, hogy a TGF- 1 egy kulcsfontosságú citokin, amely részt vesz a májfibrózis korai stádiumában. Oxidatív stresszt kiváltó TGF- 1, ami az utóbbi serkenti az ECM-termelést és a lerakódást [29]. Ezért a májfibrózis elleni gyógyszer előállításának egyik hatékony stratégiája az anti-TGF{11}} szerek azonosítása. Az immunhisztokémiai elemzés kimutatta, hogy az I. típusú kollagén, a III. típusú kollagén és a TGF{12}} expressziója képes kimutatni a májfibrózis kóros folyamatát. Az I. típusú kollagén, a III-as típusú kollagén és a TGF- 1 expressziója a kezelt csoportokban csökkent, amelyek különösen a nagy dózisú CPhG-kezelési csoportban voltak szignifikánsan alacsonyabbak, és arra utalnak, hogy a CPhG hatékony I-es típusú kollagén, III-as típusú kollagén. és TGF- 1-gátló. Feltehetően a CPhGscan javítja a kollagenáz aktivitást, fenntartja az ECM szintézis és lebontás dinamikus egyensúlyát, így késlelteti és megakadályozza a májfibrózis kialakulását.

A CPhG-k nemcsak a BSA által kiváltott májfibrózist javíthatják patkányokban, hanem összefüggésbe hozhatók a HSC aktiválódásának in vitro gátlásával is. Úgy gondolják, hogy a HSC aktiválása a fibrogenezis döntő lépése. Ebben a vizsgálatban az eredmények azt mutatták, hogy a CPhG-k 25-100 ug/ml-es adagolása jelentősen gyengítette a csökkent NF-κB p65, kollagén I mRNS expressziót és kollagén I fehérje expressziót HSC-ben.

Az NF-κB fontos szerepet játszik a fertőzésekre vagy ingerekre adott immunválasz modulálásában [30]. Az NF-κB felhalmozódása a májsejtekben gyulladásos citokinek/mediátorok felszaporodását eredményezheti, ezáltal fibrózis kialakulását idézheti elő [31, 32]. Ezenkívül a kollagén egy érzékeny index is, amely tükrözi a fibrózis szintjét, és a rostos máj teljes fehérjéjének körülbelül 50 százalékát teszi ki [33]. Ennek eredményeként azt feltételeztük, hogy a májfibrózis elleni molekuláris mechanizmus az NF-κB expresszió CPhGs által közvetített inaktiválásához kapcsolódik, amelyben az előny hozzájárul az immunotoxicitás és a gyulladásos stressz szinergikus szerepéhez a BSA-sérült májszövetben, tovább javítva a dysmetabolizmust a versameliorateliizmus felé.

Következtetések

Összefoglalva, vizsgálataink azt mutatják, hogy a CPhG-k szignifikánsan csökkentik a BSA által kiváltott májfibrózis mértékét patkányokban. Mechanizmusa legalább részben a CPhG-knek az ECM összetételére gyakorolt ​​gátló hatásának és az ECM lebomlásának serkentésének és/vagy az I. típusú kollagén, III. típusú kollagén szintézisének és a TGF expressziójának közvetlen gátlásának köszönhető. }}. Ezért azt vártuk, hogy a CPhG-ket fel lehet használni egészségügyi termékekben vagy klinikai gyógyszerekben az emberi májfibrózis megelőzésére. Jövőbeli vizsgálatokra van szükség a CPhG-k, mint erős májfibrózis elleni gyógyszer hatékonyságának megállapításához.

Rövidítések

CPhG-k: a cisztanchából származó anol-glikozidok;

BSA: szarvasmarha-szérum albumin;

HSC-T6: máj csillagsejtek;

Hyp: Hidroxiprolin;

BJRG: CompoundBiejiarangan tabletták;

TGF- 1: Átalakító növekedési faktor 1;

ALT: alanin-amino-transzferáz;

AST: aszpartát-aminotranszferáz;

HA: hialuronsav;

LN: Laminin; PC III: III típusú prokollagén;

IV-C: IV típusú kollagén;

NF-κB: Az aktivált B-sejtek nukleáris faktor kappa-könnyűlánc-erősítője;

RT-PCR: Reverztranszkriptáz-polimeráz láncreakció;

SDS-PAGE: Nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis.

Versengő érdekek

A szerzők kijelentik, hogy nincsenek egymással versengő érdekeik

A szerzők hozzászólásai

TL, JZ, SPY, LM, MT és SLZ tervezte és tervezte a kísérleteket. SPY, TL és JZ elemezte az adatokat. SPY és JZ írta a kéziratot. TL, LM és JZ átnézte a kéziratot. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végső kéziratot.

Elismerés

Ezt a kutatást a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (81260624) támogatta. A szerzők szeretnének kifejezni őszinte köszönetüket Tao Liu professzornak a dolgozat megírásához javasolt fejlesztésekért.

A szerző adatai

1 Toxikológiai Tanszék, Közegészségügyi Iskola, Xinjiang MedicalUniversity, No. 393 Xinyi Road, Urumqi 830011Xinjiang Ujghur Autonomous Region, Kína. 2Key Laboratory for Ujgur Medicine, Institute of MateriaMedica of Xinjiang, Urumqi 830004, China. 3 Nem. 140 Xinhua South Road, Tianshan District, Urumqi 830000Xinjiang Ujgur Autonóm Régió, Kína.

Kattintson ide az ellenőrzéshezCistanchetubulosaTermékek

Hivatkozások
1. Cohen-Naftaly M, Friedman SL. Az új antifibrotikus terápiák jelenlegi állapota krónikus májbetegségben szenvedő betegeknél. Ther Adv Gastroenterol. 2011;4(6):391–417.
2. Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. A máj csillagsejtek és a májfibrózis. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
3. Hernandez-Gea V, Friedman SL. A májfibrózis patogenezise. Annu Rev Pathol. 2011;6:425–56.
4. Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Áttekintő cikk: a cirrhosis visszafordíthatósága. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
5. Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. Kínai Tudományos Akadémia. 23. kiadás Kína: Flora of China szerkesztőbizottsága; 2013. p. 1–16.
6. A Kínai Népköztársaság Egészségügyi Minisztériumának Kínai Gyógyszerkönyvi Bizottsága. Kínai gyógyszerkönyv, 1. rész Kína: Chemical Industry Publishing House; 2010. p. 126.
7. Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. Kutatási előrehaladásfeniletanoidglikozidoktól tőlCistanchetubulosa. Central South Pharm. 2012;10:692–5.
8. Li J, Huang D, He L. Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) hatása a Leigongteng glikozidja (Radix et Rhizoma Tripterygii) által kiváltott reprodukciós toxicitásra egerekben. J Tradit Chin Med. 2014;34(3):324–32.
9. Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H és társai. ACE, és a Tamarix hohenackeri Bunge (gazdanövénye) származó vérlemezke-aggregáció-gátlókHerbaCistanches) nőtt Hszincsiangban. Pharmacogn Mag. 2014;10(38):111–7.
10. Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P és mások. A dextrán-szulfát-nátrium által kiváltott vastagbélgyulladás enyhítése egerekben echinakoziddal dúsított kivonattalCistanchetubulosa. Phytother Res. 2014;28(1):110–9.
11. Wong HS, Ko KM. A Herba Cistanches stimulálja a sejt glutation redox ciklusát a H9c2 kardiomiociták mitokondriális légzéséből származó reaktív oxigénfajták által. Pharm Biol. 2013;51(1):64–73.
12. Zhang SJ, Liu L, Yu JY. ARP: RP-HPLC módszer echinakozid és akteozid egyidejű meghatározására Herbie Cistanches-ban. Chin Pharm J 2004; 39. cikk (10): 740-741.
13. Zhu QG, Fang BW, Zhu QN, Wu HS, Fu QL. A szarvasmarha-szérumalbumin által kiváltott immunitási májfibrózis állatmodell vizsgálata. Chin J Pathol. 1993;22:121–2.
14. Qin DM, Wen ZP, Nie YR, Yao GM. A Cichorium glandulosum kivonatok hatása a CCl4-indukált májfibrózisra. Iran Red Crescent Med J. 2013;15, e10908.
15. Niu HM, Zeng DQ, Long CL, Peng YH, Wang YH, Luo JF és mások. Klerodán diterpenoidok és prenilált flavonoidok a Dodonaea viscosa-ból. J Asian Nat Prod Res. 2010;12(1):7–14.
16. Li WW, Song XW, Wang HW, Shen BS, Wang QC. Az NF-κB és a májfibrózis patológiás stádiumának korrelációja krónikus hepatitis B-ben szenvedő betegeknél. Chin J Immunol. 2013;29(3):251–4.
17. Zhang GL, Shi XF, Ran CQ, Xu M, Zhu ZJ. A Panax notoginseng összes szaponinjának hatása a májfibrózisra patkányokban. Acta Academiae Medicinae Militaris harmadlagos. 2007;29:2212–4.
18. Rossi O, Maggiore L, Necci F, Koberling O, MacLennan CA, et al. Kolorimetriás vizsgálatok összehasonlítása kvantitatív aminosav-analízissel a membránantigének (GMMA) általánosított moduljainak fehérje kvantitatív meghatározásához. Mol Biotechnol. 2015;57(1):84–93.
19. Dang SS, Li YP. Előrelépések a transzformáló növekedési faktor- 1 szerepének megértésében a májfibrózis patogenezisében. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2010;18:1631–6.
20. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z és mtsai. Az akteozid védő hatása a Bacillus Calmette-Guerin plusz lipopoliszacharid által kiváltott immunológiai májkárosodásra. Planta Med. 2009;75(14):1463–9.
21. Yang FR, Fang BW, Lou JS. A Fufang Biejia Ruangan tabletták hatása a májfibrózisra in vivo és in vitro. World J Gastroenterol. 2013;19(32):5326–33.

22. Liu P, Fang BW, Liu C. Az 1-es növekedési faktor és receptor transzformáló szerepe patkányok immunológiai indukált májfibrogenezisében és a cordyceps poliszacharid hatása rájuk. Chin J Hepatol. 1998;6:232–3.

23. Xu GG, Luo CY, Wu SM, Wang CL. A máj stádiumának kapcsolatafibrózis és a szérum biokémia szintjei. HBPD INT. 2002;1:246–8.Te et al. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 12/13 oldal

24. Liu J, Wang JY, Lu Y. Szérumfibrózis markerek a májfibrózis diagnosztizálásában. ÁllJ Intern Med. 2006;145:475–7.

25. Li CZ, Wan MB, Zeng MD, Mao YM, Fan ZP, Cao AP és mások. A nem invazív paraméterek kombinációjának előzetes vizsgálata a májfibrózis diagnózisában. Chin J Hepatol. 2001;9:261–3.

26. Chen YL, Li ZY. A TGF- 1, a PDGF-BB, a CTGF és a krónikus hepatitis B kapcsolata a fibrózissal. Chin J Diffic Compl Cas. 2010;9:19–20.

27. Sferra R, Vetuschi A, Catitti V, Ammanniti S, Pompili S, Melideo D és mások. A Boswellia serrata és a Salvia miltiorrhiza kivonatok csökkentik a DMN által kiváltott májfibrózist egerekben a TGF-béta1 downregulációjával. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012;16(11):1484–98.
28. Liu L, Li XM, Chen L, Feng Q, Xu LL, Hu YY és mások. A Gypenosides hatása a TGF- 1/Smad útvonalra szén-tetraklorid által kiváltott májfibrózisban patkányokban. Gyakornok J Integr Med. 2013;1:1–6.
29. Zhang BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Wang H. Védelem a berberin antioxidáns mechanizmusával a több hepatotoxikus faktor által kiváltott patkánymájfibrózis ellen. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008;35(3):303–9.
30. Tornatore L, Thotakura AK, Bennett J, Moretti M, Franzoso G. A nukleáris faktor kappa B jelátviteli út: az anyagcsere integrációja a gyulladással. Trends Cell Biol. 2012;22(11):557–66.
31. Luedde T, Schwabe RF. NF-κB a májhoz kapcsolódó sérülésben, fibrózisban és hepatocelluláris karcinómában. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2011;8(2):108–18.
32. Petrasek J, Csak T, Szabó G. Toll-like receptors in liver disease. Adv Clin Chem. 2013;59:155–201.
33. Wang Y, Cheng M, Zhang B, Nie F, Jiang H. Az áfonyalé étrend-kiegészítése fokozza a metallotionein hepatikus expresszióját és gyengíti a májfibrózist patkányokban. PLoS One. 2013;8, e58659.