Hosszan tartó ex-vivo normoterm veseperfúzió: A perfuzátum összetételének hatása

edmund.chen@wecistanche.com

Absztrakt

A donor normoterm gépi perfúziója (NMP).vese lehetőséget biztosít a graft jobb megőrzésére és a transzplantáció előtti objektív ex vivo szervértékelésre. Jelenleg számos perfúziós oldat létezik a vese-NMP-hez. A vizsgálat célja négy különböző perfúziós oldat egymás melletti értékelése volt, és a különböző perfúziós összetételek hatásának meghatározása a mért értékekre.vese-perfúziós paraméterek. Sertésveseés a vért egy vágóhídról szerezték be.VeseNMP-n 37 ˚C-on 7 órán át, 4 különböző perfúziós oldattal (csoportonként n=5) esett át. Az 1. csoport vörösvértestekből (RBC) és Williams-féle Medium E alapú perfúziós oldatból állt. A 2. csoport vörösvértestekből, albuminból és kiegyensúlyozott elektrolit-összetételből állt. A 3. csoport vörösvértesteket és brit klinikai NMP oldaton alapuló táptalajt tartalmazott. A 4. csoport vörösvértesteket és egy 24-órás perfúziós kísérletekben használt táptalajt tartalmazott. Az 1. és 2. oldat NMP áramlási mintázata hasonló volt, a 3. és 4. oldat alacsonyabb, de stabilabb áramlási sebességet mutatott. A tiobarbitursav reaktív anyagok szignifikánsan magasabbak voltak az 1. és 4. oldatban a többi csoporthoz képest. Az N-acetil- -D glükózaminidáz sérülésmarker szintjei szignifikánsan alacsonyabbak voltak a 2. oldatban, mint a 3. és 4. oldatban. Ez a tanulmány azt szemlélteti, hogy az NMP során a perfuzátum összetétele jelentősen befolyásolja a mért perfúziós és sérülési paramétereket, és így befolyásolja az értelmezést. potenciális életképességi markerek. További kutatások szükségesek a fő perfuzátum komponensek egyéni hatásainak vizsgálatához, hogy meghatározzák a legoptimálisabb feltételeket az NMP során, és végül egyetemes szervértékelési kritériumokat dolgozzanak ki.

Kulcsszavak:vesefunkció; vese; vesekárosodás; perfundált vesék; vese tubuláris

A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESE MŰKÖDÉSÉT

Bevezetés

Világszerte a szokásos donorvesetartósítási módszer a statikus hideg tárolás (SCS). Hollandiában azonban a hipotermikus gépi perfúziót (HMP) klinikailag minden elhunyt donor megőrzésére használjákvese.A HMP a késleltetett graftfunkció csökkenését és 1- és 3-év javulást mutatottvese-graft túlélése az SCS megőrzéséhez képest [1,2]. A donorok kínálata és kereslete közötti jelentős szakadék minimalizálása érdekébenvese,szuboptimális elhunyt-donorveseegyre gyakrabban használják. Ezek fokozott felhasználása miatt az optimálisnál alacsonyabb minőségű donorvese,rendkívül fontos, hogy még további optimalizált stratégiákat alakítsunk ki az átültetés előtti robusztus és objektív értékeléshez, valamint a megőrzéshez. Normoterm gépi perfúzió (NMP) alkalmazása ezeknél az elhunyt donoroknálveseegyre inkább szóba kerül. A preklinikai vizsgálatok kimutatták, hogy az NMP jobb transzplantációs kimenetelhez vezethet, mint az SCS önmagában [3]. Szívhalál utáni adományként és kiterjesztett kritériumú donorkéntvesekevésbé tolerálják a hipotermiás tárolást, mint a standard kritériumok szerinti donor eljárásokból származó szervek, a marginális minőségű donor szervek számára előnyös lehet az NMP megőrzése [4,5]. Jelenleg csak egy klinikaivese-Az Egyesült Királyságban folynak az NMP-kísérletek, viszonylag rövid, 1 órás átültetés előtti perfúziós periódussal [6]. A megfelelő szervfelméréshez és újraélesztéshez azonban elképzelhető, hogy hosszabb NMP-időre van szükség [7]. Ez a módszer lehetőséget ad a transzplantáció előtti szervdiagnosztikára, a jobb tartósításra és a transzplantáció előtti ex vivo beavatkozásokra a transzplantáció utáni állapot javítása érdekében.veseműködés. Napjainkban sok transzplantációs központ kezdett beruházni ebbe az ígéretes normoterm ex vivo perfúziós stratégiába. Ezen központok között az NMP perfúziós oldatok széles választéka létezik. Az összetétel nagy heterogenitása akadályozhatja az egységes és robusztus NMP értékelési kritériumok meghatározásának végső célját. Ezt a heterogenitást részben az okozza, hogy jelenleg csak korlátozottan ismerjük, hogy mi legyen az NMP-oldat pontos összetétele. Valószínűleg egy normoterm perfúziós oldatnak oxigénhordozót, kolloidot és kiegyensúlyozott elektrolit-összetételt kell tartalmaznia [8]. Az összetétel az NMP időtartamától is függ, mivel a hosszabb perfúziós periódusokhoz optimalizált perfuzátumkészítményekre van szükség ahhoz, hogy a teljes perfúzió alatt stabil, közel fiziológiás környezetet tartsanak fenn. Ez a tanulmány négy különböző normoterm perfúziós oldatot, három általánosan használt meglévő megoldást, amelyeken nem történt változtatás, és egy újonnan tervezett megoldást értékelt. Hosszan tartó (7 órás) NMP-t végeztünk sertésbenveseadományozási modell. Célunk volt annak elemzése, hogy a különböző perfuzátum-összetételek összességében milyen mértékben befolyásolják az elektrolit egyensúlyt,veseműködés, valamint az NMP során mért sérülésmarkerek.

Anyagok és metódusok

Vese- és vérvételÉletképes sertésveseháziasított táj sertésekből (koca; Topigs 20 típus), a vért pedig egy helyi vágóhídról (Kroon Vlees, Groningen, Hollandia) szereztük be. A sertéseket bi-temporális áramütéssel kábították el, majd a szokásos vágóhídi eljárások szerint kivéreztették. Autológ vért vettünk, és heparint (5000 nemzetközi egység/ml (NE), LEO1 pharma, Ballerup, Dánia) adtunk hozzá, hogy megakadályozzuk a véralvadást.VeseA sertés keringési elpusztulása után gyorsan kinyertük, ami körülbelül 20 perces meleg ischaemiát (WI) eredményezett a hidegen tartósítás előtt. A WI időszak utánveseátöblítettük és 18{1}} ml nátrium-kloriddal (NaCl) (0,9 százalék) (Baxter BV, Utrecht, Hollandia) 4°C-ra lehűtöttük, ami a hideg ischaemia (CI) kezdetét jelentette.Vesefelesleges zsírszövettől mentesen kimetszették, és az ereket szabaddá tettek. Következő,vesekapcsolódtak aVeseAssist Transport HMP készülék (Organ Assist, Groningen, Hollandia). Ez a HMP gép megőrizvevesehideg (0–4˚C) UW gépi perfúziós oldattal (Belzer UW-MP oldat, Bridge to Life Ltd, Columbia, SC) 2–4 órán keresztül oxigénnel dúsított pulzáló HMP-vel 25 Hgmm átlagos artériás nyomáson. . A heparinizált autológ vért leukocitaszűrővel (BioR 02 plusz BS PF, Fresenius Kabi, Zeist, Hollandia) eltávolítottuk, centrifugáltuk, majd a felülúszó plazmát eltávolítottuk.

Perfúziós oldatokNégy kísérleti csoportot határoztunk meg (csoportonként n=5), mindegyik csoportban más-más NMP-oldattal. MegelőzőenveseA kísérlet során használt perfúziós oldat meghatározása történt. Mind a négy perfúziós oldat tartalmazott autológ sertés vörösvértesteket (RBC), de az egyes NMP táptalajok összetétele eltérő volt (1. táblázat). Laboratóriumunkban bőséges tapasztalatot szereztünk a sertés perfúzióval kapcsolatbanveseés rágcsálómáj Williams' Medium E (WME) segítségével (Life Technologies Ltd, Bleiswijk, Hollandia) [9–11]. Ez a perfuzátum nem tartalmaz értágítót, ezért úgy döntöttünk, hogy nem készítjük el

az eredeti megoldás módosítása. A 2. csoportba tartozó perfúziós oldatot csoportunk úgy fejlesztette ki, hogy az elektrolitokat fiziológiás koncentrációban tartalmazza és fiziológiás kolloid ozmotikus nyomást fejtsen ki a glomeruláris membránon. A 3. csoportba tartozó perfuzátum kolloidmentes, klinikailag használt brit NMP-oldat volt, amelyet jelenleg egy randomizált, kontrollált vizsgálatban használnak, amelyben az 1 órás NMP-t emberi elhunyt donor SCS-jével hasonlítják össze.veseaz Egyesült Királyságban [12]. Ami a 4. csoportot illeti, ezt a megoldást sikeresen alkalmazták egy sertés autotranszplantációs vizsgálatban Aarhusban, Dániában [13]. A Weissenbacher és munkatársai által tervezett perfuzátumon alapul, akik eldobott embert fuzionáltak.vese24 óra alatt [7]. Az 1. csoport perfuzátumát a fent említett összetevőkön kívül glükózzal egészítettük ki, ha koncentrációja 4 mmol/l alá esett. Termelt vizelet volt

óránként WME-vel helyettesítve. A 2. csoportban egy fecskendős infúziós pumpa teljes parenterális táplálást adott (SmofKabiven) (Fresenius Kabi Nederland BV, Zeist, Hollandia) 0,5 ml/kéz inzulin (10{{1{) {12}}}}0 NE, szintén Novo Nordisk A/S) 0,005 ml/óra sebességgel. Minden óra elteltével a vizelettermelést recirkuláltattuk a 2. csoportban, hogy fenntartsuk a stabil elektrolit-egyensúlyt. A harmadik csoportban 170 ml tiszta vörösvértestet kevertek össze 120 ml sóoldattal, adeninnel, glükózzal és mannittal (SAG-M), ami 0,5–0,65 l/l hematokrit értékhez vezetett, ami egy tipikus klinikailag használt egység összetételét imitálta. VVT-k (amelyet a brit klinikai NMP perfuzátumban használnak). A kísérletek során három fecskendős infúziós pumpát használtak a Flolan (GlaxoSmithKline BV, Zeist, Hollandia) 5 ml/h sebességű, 5 százalékos glükóz (Baxter BV, Utrecht, Hollandia) 4 ml/h sebességű infúziójához. h és 150 ml Synthamin-17 10 százalék (Baxter Healthcare Ltd., Norfolk, Egyesült Királyság), 6 ml nátrium-hidrogén-karbonát (NaHCO 3 ) 8,4 százalék (B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Németország) keveréke , 30 NE inzulin (1000 NE, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Dánia) és Cernevit (Baxter BV, Utrecht, Hollandia) 20 ml/óra sebességgel, a jelenlegi brit klinikai vizsgálat protokollja szerint. A vizelettermelést óránként Ringers-laktát (szintén Baxter BV) helyettesítette. A negyedik csoport NMP során egy fecskendős infúziós pumpa 0,3 ml/óra sebességgel sóoldatban oldott verapamilt (2,5 mg/ml, Sandoz BV is) fújt be. A vizelettermelést ebben a csoportban is minden óra után újrakeringettük, hogy fenntartsuk a stabil elektrolit-egyensúlyt. A mintatérfogatokat minden csoportban különböző komponensekkel korrigáltuk. Az 1. csoport térfogatát WME-vel, a 2. csoportban perfúziós közeggel, a 3. csoportban Ringers-laktáttal, a 4. csoportban pedig Sterofundin1-gyel (szintén B. Braun) helyettesítettük.

NMP beállításA perfúziós elrendezés megegyezett a csoportunk által korábban leírttal [14]. Azveseasinusoid pulzáló módon perfundáltuk, percenként 60 impulzus gyakorisággal, ata beállított, nem visszacsatolás szabályozott, 110/70 Hgmm nyomású és 95 százalék oxigén/5 százalék szén-dioxid (karbon) oxigénnel telítettek az összes kísérlet során. Ez a szuprafiziológiás oxigénszint standard eljárás mind a négy létező protokollban. A perfúziót egyedileg készített elektronikus interfész és vezérlőszoftver (LabView Software, National Instruments Netherlands BV, Woerden, Hollandia) szabályozta. A normoterm perfúziós áramkör sematikus ábrája az 1. ábrán látható.

Vizelet és perfuzátum elemzéseÓránként artériás perfuzátum és vizeletmintát vettek. A 2. és 4. csoportban, ahol a vizeletet recirkuláltatták, a vizelet recirkulációja előtt perfuzátummintákat vettek. A perfuzátum artériás vérgázmintáit 0, 240 és 420 perces NMP után elemeztük. A perfúziós paramétereket félóránként dokumentáltuk. A laktát-dehidrogenáz (LDH) és az aszpartát-aminotranszferáz (ASAT), nátrium-, kálium-, glükóz- és kreatininkoncentrációit standard klinikai tesztekkel mérték a perfuzátumban. A kreatinin-clearance-t, a kreatinin 100 g-onkénti frakcionált kiválasztását (FE kreatinin/100 g) és a frakcionált nátrium-kiválasztást (FENa plusz) számítottuk.veseműködés. Az egyenletek az S1 Függelékben találhatók. Mindkét N-acetil- -D-glükózaminidáz (NAG) (szintén Sigma-Aldrich), mint avese-tubuláris diszfunkció/sérülés és tiobarbitursav-reaktív anyagok (TBARS) (Lipid Peroxidation-malondialdehyde (MDA)) Assay Kit, Sigma-Aldrich BV, Zwijndrecht, Hollandia), az oxidatív stressz mennyiségi meghatározására a perfuzátumban.

SzövettanA felső tű biopsziájavesekéregaz NMP kezdete előtt készült. Minden kísérlet végén sebészeti szövetmintákat vettünk a felső kéregből. Ezek a biopsziák voltak

Statisztikai analízisAz adatok elemzését a GraphPad Prism 8.3.1 verziójával végeztük (GraphPad software Inc., La Jolla, CA, USA). Minden folytonos longitudinálisan mért változóra, mint például az ASAT és az LDH, a görbe alatti területet (AUC) számítottuk. Egyutas ANOVA-t alkalmaztunk többszörös összehasonlítással az AUC-értékek összehasonlítására a csoportok között, ha az adatok normális eloszlásúak voltak (Shapiro Wilk-teszt) és homogenitásúak voltak a variancia (Bartlett-teszttel tesztelve). Ha az adatok kudarcot vallottak ezeken a feltevéseken, a Kruskal-Wallis tesztet Dunn többszörös összehasonlítás tesztjével alkalmaztuk. A 0,05 vagy annál kisebb kétoldali p-értékek statisztikai szignifikanciát jeleznek.

Eredmények

Perfúziós paraméterekA 2. táblázatban a meleg és hideg ischaemiára vonatkozó adatok (átlag, minimum és maximum), a HMP időtartama és súlya az NMP megkezdése előtt és után, valamint a delta súly (a súlykülönbség a t=420 és a t {{2 között). }}) kerülnek bemutatásra. A delta tömeg szignifikánsan magasabb volt az 1. csoportban a 2. csoporthoz képest (p=0,041). Egyéb szignifikáns különbség nem volt az összes kísérleti csoport értékei között. Az NMP alattvese-Az artériás áramlás a reperfúzió első 60 percében nőtt az 1. és 2. csoportban. 60 perc elteltével az áramlási sebességek jellemzően csökkenni kezdtek. A 3. és 4. csoportban a perfúzió alacsonyabb áramlási értékekkel indult, de állandóbb áramlást mutatott az egész NMP-ben. A végértékek 7 óra NMP után körülbelül 75 ml/perc/100 g volt minden csoportban (2. ábra).

Vizelet és perfuzátum elemzéseA perfúzió során a funkcionális és sérülési paraméterekre vonatkozó egyedi adatok a 3. táblázatban találhatók.Veseműködés.A 3. csoportban volt a legmagasabb a vizeletkibocsátás (3. ábra). A kumulatív diurézis a 3. csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint az 1. csoportban (p=0.003), a 2. csoportban (p < 0,001)="" és="" a="" 4.="" csoportban="" (p="0,008).">vesea 2. csoportban nem termelt vizeletet t=180 és t=300 időpontban, ami a kumulatív vizelettermelés alacsonyabb átlagos szintjéhez vezetett t=360 és t=420 időpontokban. A nátrium- és káliumszint jelentősen különbözött a csoportok között (4. ábra). A t=0 érték a perfúzió kezdeti kiindulási értékeit jelzi. Különösen a 3. csoport mutatott be magasan

A perfúzió során a 3. csoport pH-ja stabilizálódás nélkül csökkent, míg a többi csoport 7 órás NMP-kezelés után kiegyensúlyozottabb, körülbelül 7,4-et ért el (5. ábra). A kreatinin-clearance minden csoportban alacsony volt (6A és 6B ábra). Ennek ellenére szignifikánsan magasabb volt, mint a 3. csoportban a 2. csoporthoz képest (p=0,039). A kreatinin 100 g-onkénti frakcionált kiválasztódása (6C. és 6D. ábra) szignifikánsan magasabb volt a 3. csoportban, mint az 1. csoportban (p=0,026), a 2. csoportban (p=0.017) és a 4. csoportban ( p=0.045). A FENa plus minden csoportban magas volt, ami azt jelzi, hogy ezekben az ischaemiás sérültekben a tubuláris funkció súlyosan károsodott (6E és 6F ábra).vese. A FENa plus a 3. csoportban szignifikánsan magasabb volt a 2. csoporthoz (p=0,037) és a 4. csoporthoz (p=0,019) képest. Az összes többi csoport nem különbözött szignifikánsan.Vese sérülés.Az NMP alatti ASAT szinteket elemeztük (7A és 7B ábra) az általános sejtkárosodás markereként. Az átlagos AUC értéket minden csoportra meghatároztuk. A 4. csoport szintjei szignifikánsan magasabbak voltak, mint az 1. csoportban (p=0.022) és a 2. csoportban (p=0,011). Az LDH-szinteket a perfuzátumban is mértük általános sérülésmarkerként (7C. és 7D. ábra). Kiszámították azt az AUC-t, amely az 1. és 2. csoportban mutatta a legalacsonyabb LDH szintet. A 2. csoport szignifikánsan alacsonyabb volt a 4. csoporthoz képest (p=0,020). Az 1. csoport szignifikánsan alacsonyabb szintet mutatott a 4. csoporthoz képest (p=0,022). A NAG-szintek szignifikánsan magasabbak voltak a 3. csoportban, mint az 1. csoportban (p=0,043) és a 2. csoportban (p=0,006) (8A és 8B ábra). A TBARS-t, a malondialdehid (MDA) koncentrációját mind a négy csoportban mértük a lipidperoxidáció markereként (8C. és 8D. ábra). Az MDA szintek szignifikánsan magasabbak voltak az 1. csoportban, mint a 2. csoportban (p=0,003) és a 3. csoportban (p < 0,001).="" a="" 2.="" csoport="" szignifikánsan="" alacsonyabb="" mda="" szintet="" mutatott="" a="" 4.="" csoporthoz="" képest="" (p="0,006)." a="" 3.="" csoport="" szignifikánsan="" alacsonyabb="" szintet="" mutatott,="" mint="" a="" 4.=""><>

Szövettan

A 9. ábra pontdiagramjai azt mutatjákvese-tubuláris károsodás/ATN, tubuláris dilatáció és glomerulus tágulási pontszámok az NMP kezdete előtt (t {0}}) és 7 órás NMP után (t=420). A szövettani nekrózis és a tubuláris dilatáció kezdeti értékei összehasonlíthatóak voltak a csoportok között, csak marginális különbségek voltak a végpontpontok között. A glomeruláris dilatáció a t=420 időpontban jelentősen alacsonyabb volt a 2. csoportban a másik 3 csoporthoz képest. A csoportonkénti szövettani adatok az S1 ábrán találhatók. Bax és Bcl-2 szeres indukció, a pro- és anti-apoptotikus génexpresszió indikátorai, mindkettő eltolódást mutatott a végponti NMP-szintekben a t=0 (10. ábra). A Delta Bax génexpressziót (különbség t=0 és t=420 között) minden csoportban kiszámítottuk, és az 1. csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a 2. csoportban (p=0.046), a 3. csoportban. (p < 0,001)="" és="" a="" 4.="" csoport="" (p="0,003)." a="" bcl-2="" expressziója="" minden="" csoportban="" csökkent="" 7="" órás="" perfúzió="" után,="" a="" csoportok="" között="" nem="" volt="" szignifikáns="">

Vita

Általános érdeklődés avese-A normoterm ex-vivo gépi perfúziós technikák egyre terjednek, de a klinikai bizonyítékok továbbra is korlátozottak, mindössze egyetlen folyamatban lévő klinikai NMP-vizsgálat miatt. Kiterjedt preklinikai vizsgálatokat végeztek az NMP potenciáljának vizsgálatára. Rengeteg különfélevese-Normoterm perfuzátumok léteznek a különböző kutatócsoportok között. Kérdés azonban, hogy a perfuzátum összetétele milyen mértékben befolyásoljaveseműködésés az, hogy ez hogyan befolyásolja a potenciális életképességi markerek értelmezését. Ezért ez a tanulmány négy különböző normoterm ex vivo perfúziós oldat egymás melletti hatását értékelte.veseműködésésvese sérüléssertésekkel végzett hosszan tartó NMP soránvesevérkeringési halálozás utáni adományozás modell.

elszigetelten értékelniveseműködéstranszplantáció előtt. Hosgood és munkatársai bemutatták az első klinikai bizonyítékot a transzplantáció előtti életképesség-értékelés megvalósíthatóságára vonatkozóan.vese-NMP. Perfúziós oldatukat jelenleg a legszélesebb körben használják az NMP során, és eredetileg értékelésre fejlesztették kiveseműködéstranszplantáció előtt 1-2 órán belül [16].VeseEzzel az oldattal perfundálva általában magas vizelettermelést mutatnak [17]. Valójában a legmagasabb vizelettermelést a 3. csoportban figyelték meg, amely ezen a klinikai Egyesült Királyság-perfuzátumon alapul, ami a perfuzátum keringő térfogatának több mint teljes vizelettel történő kiválasztásához vezetett ebben a csoportban 7 órás NMP-kezelés alatt. A keringő perfúziós folyadék térfogatának folyamatos veszteségét hasonló térfogatú Ringer-laktát időszakos hozzáadásával kellett kompenzálni, a perfúziós oldat klinikai protokolljának megfelelően. Vizsgálatunkban ez jelentős változást eredményezett az elektrolit összetételében és pH-jában, mivel a vizelet nem keringtetett vissza. Ez a magas vizelettermelés nagy valószínűséggel annak tudható be, hogy csak ebben a perfúziós oldatban nincs kolloid. Mindhárom másik csoport perfúziós oldata jelentős mennyiségű albumint tartalmazott. Az intravaszkuláris térben az albumin a fő komponens, amely fenntartja a normál kolloid ozmotikus nyomást [18]. A hidrosztatikus nyomás és a kolloid ozmotikus nyomás közötti egyensúly fiziológiás ultrafiltrációs sebességet eredményez a glomeruláris membránon [19]. Kaths et al. kimutatta, hogy az NMP alatti vizelettermelés nem korrelált a transzplantáció utáni funkcióval. Feltételezték, hogy a vizelettermelést nagymértékben befolyásolja a perfuzátum összetétele, különösen az onkotikus nyomás és az ozmolaritás, ami összhangban van eredményeinkkel [20].

A CISTANCHE JAVÍTJA A vese-/veseelégtelenséget

Az elektrolitok szabályozásáért felelős fő szerv avesede bizonyíték van arra, hogy avesemaga is előnyös az elektrolit egyensúlyból. Megállapítást nyert, hogy a kálium egyensúlyhiánya és különösen a hypokalaemia számos változáshoz vezethetveseműködésideértve a tubuláris transzport károsodását, a vizelet-koncentrációs képesség károsodását, a megváltozott nátrium-reabszorpciót és az intracelluláris acidózist [21–23]. Weissenbacher et al. vizelet-recirkuláció alkalmazását javasolta az NMP során. Kimutatták, hogy elősegíti a perfuzátum térfogatának és a homeosztázis megfelelő fenntartását az eldobott emberbenvese, még 24 órás NMP után is [7]. A mért albumin koncentráció a perfuzátumban idővel csökkent a perfúzió során. Ezt a csökkenést nagy valószínűséggel az albuminnak a műanyag perfúziós kör csövéhez való tapadása okozza, és csak kis mennyiségben tudható be a termelődő vizelet vesztesége, ami más NMP-vizsgálatokban is megfigyelhető [24]. Az albumin vizeletből történő elvesztése az endothelsejtek meleg ischaemia által kiváltott károsodásával magyarázható, amely a szűrőmembránok megszakadásával és proteinuriával jár együtt, ami összhangban van az NMP során megfigyelt albuminuria szintjével [25].

Nem tudjuk teljes mértékben megmagyarázni a csoportok közötti különbségek mechanizmusát, amelyeket megfigyeltünkvesesúlygyarapodás az NMP során. A szövettani vizsgálat nem volt döntő az ödémaképződés lehetséges területein. További vizsgálatok szükségesek a súlygyarapodás potenciálisan többtényezős mechanizmusainak tisztázásához az alkalmazott perfúziós oldattal kapcsolatban. Különféle perfúziós paramétereket mértünk, aholvese-flow mutatta a legszembetűnőbb különbségeket.Vesea 3. és 4. csoportban az áramlás a legstabilabb szintet tartotta az 7-órás NMP periódus alatt. Ezekben a csoportokban az oldatokat értágítóval egészítettük ki, míg az első két csoportban nem. Az endogén értágítók elősegítik a vaszkuláris simaizom relaxációját, és ezáltal szabályozzák a regionális véráramlást [26]. Mivel az 1. és 2. csoportot nem egészítették ki értágítóval, az érgörcsök csökkentettvese-artériás áramlás. Sőt, bizonyítékok vannak arra, hogy a medulláris és a kérgi áramlás egyénileg szabályozható [27,28]. Csoportunk előzetes, nem publikált adatai, amelyek az NMP során végzett precíz és kvantitatív funkcionális MRI (ASL) áramlásméréseken alapulnak, erősen alátámasztják ezt a mechanizmust. Azokban a kísérletekben,vese-Az NMP első órájában az áramlás főként velős, amely több mint egy órás perfúzió után corticalis áramlásba megy át. Az áramlásnak ez a regionális újraeloszlása ​​magyarázhatja az 1. és 2. csoport perfúziójában tapasztalt csúcsot, valószínűleg az első óra medulláris söntelése miatt. Egy értágító hozzáadása az NMP kezdetén javíthatja a túlnyomórészt kortikális mikroperfúziót közvetlenül az NMP kezdetén, ami stabilabb áramlást eredményez, amint azt a 3. és 4. csoportban megfigyeltük. Ezért, ha stabil áramlási mintázatot és esetleg fiziológiásabb, túlnyomórészt kortikális áramlást eredményez. perfúzió kívánatos az NMP során, tanácsos lehet értágítót adni a perfúziós oldathoz. Alternatív megoldásként a vörösvértestek perfúzió előtti ismételt mosása csökkenthetivese-érszűkület a vörösvértestek vazokonstrikciós aktivitásának csökkentésével [29].

A vese működésesorán az NMP minden sertésnél jelentősen károsodottvese, valószínűleg a kezdeti meleg ischaemiás károsodás és a fiziológiás humorális szabályozó mechanizmusok hiánya miatt, mint például az antidiuretikus hormon és az aldoszteron által vezérelt. A kreatinin-clearance alacsony volt, és a FENa plus magas értékeit figyelték meg minden csoportban. A FENa plus hirtelen emelkedése 3 órás NMP-kezelés után a 2. csoportban a vizelettermelés hiányának a következménye lehetett.veset=240 és t=300, míg a perfúzió végénveseismét elkezdett vizeletet termelni. A FENa plus megemelkedett értékei feltehetően tubularis nekrózis eredménye, amint azt korábbi tanulmányok is beszámolták [30,31]. Emellett az in vivo kreatinin clearance-t és a FENa plusz szintet nagymértékben befolyásolja a humorális szabályozás. Humorális szabályozásként

Az NMP-kísérletek során hiányzott, fiziológiás kreatinin-clearance és FENa plus szint nem várható az NMP-beállításunkban.

A sérülés számszerűsítéséhezvese-sejtek ASAT és LDH szintjét mértük. A legmagasabb szintet a 3. és 4. csoportban figyelték meg, ami arra utal, hogy a legtöbb sérülés ebben a két csoportban történt. Kaths et al. kimutatták, hogy az NMP során megnövekedett ASAT-szintek korrelálnak a transzplantáció utáni értékekkelveseműködésés ezért az ASAT fontos szervi életképesség-értékelési biomarker lehet [20]. A különböző perfuzátum-összetételek hatása a mért ASAT-szintekre hangsúlyozza az NMP-protokollok harmonizálásának fontosságát a transzplantációs központok között, hogy lehetővé váljon az NMP-adatok globális értelmezése. A NAG, a megváltozott tubuláris integritás és tubuláris károsodás markere [32,33] szintje a 3. csoportban volt a legmagasabb, ami azt jelzi, hogy a legtöbb tubuláris sérülés ebben a csoportban fordult elő. A TBARS-szinteket mértük az oxidatív stressz mennyiségi meghatározására a perfúzió során. A legmagasabb szintet az 1. és 4. csoportban figyelték meg, ami arra utalveseezekben a csoportokban tapasztalták a legnagyobb oxidatív stresszt, ami a sejtműködés károsodásához vezethetett [34]. A Bax/Bcl-2 arány eltolódása 7 órás NMP után az NMP előtti biopsziához képest valószínűleg a kezdeti meleg ischaemiás periódus eredménye, nem pedig az NMP során fellépő potenciálisan káros hatások. A következményes reperfúziót követő ischaemiás sérülés szabályozó apoptózis kaszkádot indukál, amely kulcsszerepet játszik a sérült proximális tubulus helyreállítási folyamatában [35]. Bár sok normoterm sérülésmarkert javasoltak, a mai napig egyiket sem validálták egy jól megerõsített klinikai vizsgálatban. Egy tanulmány, amely az NMP során mért ígéretes sérülésmarkerek sorát korrelálja a transzplantáció utánveseműködésszükséges annak tisztázásához, hogy mely lehetséges biomarkereket kell beépíteni a normoterm ex vivo életképesség értékelési kritériumaiba.

A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESE FERTŐZÉSÉT

NMP-beállításunkat a DCD sertésmodelljével együtt használtákveseadomány melyik vágóhídonvesehasznosítottak. Ennek a tanulmánynak az a korlátja, hogy a vágóhídi eljárás kivérzésen, majd szívleálláson alapul, ami némileg eltér a tényleges DCD-modelltől, amelyben a keringésleállás szívischaemia és/vagy szívelégtelenség következménye. Ezt azonban megfigyeltükvesevizsgálatunkban a DCD utánihoz hasonló ischaemiás sérülést mutattak ki [36,37]. Ezért úgy gondoljuk, hogy a jelenlegi vágóhídi DCD modell segít csökkenteni a laboratóriumi állatok felhasználását, miközben megőrzi az alapvető megbízhatóságot és reprodukálhatóságot. Noha kísérleti csoportjaink viszonylag kicsik voltak, a csoportok mérete hasonló más sertéseknélvesegépi perfúziós vizsgálatok [17,38–40]. A 3. csoportban rögzített NMP perfúziós paraméterek, amelyek a Hosgood és munkatársai által használt brit klinikai perfúziós oldaton alapultak, nem hasonlíthatók össze a Leicester/Cambridge csoport által korábban közölt eredményekkel [6,12]. Tanulmányunkbanvesesokkal hosszabb ideig tartó NMP kezelésen estek át, és magasabb átlagos artériás nyomással perfundáltuk őket. Továbbra is,veseperfundálta Hosgood et al. gépi perfúziót követően ültettek át. A négy perfúziós oldat teljesen megbízható összehasonlítása érdekében egy jövőbeli vizsgálatnak tartalmaznia kell a transzplantációtveseaz NMP után, mivel ez lehetővé teszi a tényleges nyomon követést és a funkcionális értékelést in vivo.

Összefoglalva, a sertés perfúziójavesemind a négy tesztelt megoldással megvalósíthatónak bizonyult. Az elektrolitszintek között azonban jelentős különbségek voltak,veseműködésparamétereket és sérülésmarkereket a négy csoportban. Ezek a különbségek, valamint az alkalmazott perfúziós oldatok jelenlegi heterogenitása a csoportok között, akadályozzák a szabványosított NMP értékelési kritériumok kidolgozását. Úgy érezzük, hogy mind a kísérleti, mind a klinikai NMP esetében elengedhetetlen az NMP pontos céljának és kívánt időtartamának gondos előre meghatározása, mivel mindegyik szükségessé teheti a perfuzátum és a perfúziós protokoll szükséges módosításait. Fontos hangsúlyozni, hogy ez a tanulmány a meglévő perfuzátumok egészének a mért eredményekre gyakorolt ​​hatásaira összpontosított, nem pedig az egyes perfuzátum-komponensek szerepének vizsgálatára. További vizsgálatok szükségesek az egyes perfuzátum-összetevők egyedi hatásainak és előnyeinek tisztázásához az NMP során