A panduratin A védő hatása az emberi vese proximális tubuláris sejtjeinek ciszplatin által kiváltott apoptózisára és egerek akut vesekárosodására
Mar 18, 2022
Háttér:A ciszplatin hatékony kemoterápia, de fő mellékhatása akutvese sérülés, korlátozza a használatát. A Pandurate A, a Boesenbergia rotundából kivont bioaktív vegyület számos biológiai aktivitást mutat, például antioxidáns hatást. Jelen tanulmány a pandurát A nefroprotektív hatását vizsgálta a ciszplatin által kiváltottvesekárosodás.Módszerek: RPTEC/TERT1 sejtek felhasználásával vizsgáltuk a pandurát A hatását a ciszplatin toxicitására mind egerekben, mind humán vesesejttenyészetekben. Eredmények: Az eredmények azt mutatták, hogy a pandurát A enyhíti a ciszplatin által kiváltott vesetoxicitást egerekben és RPTEC/TERT1 sejtekben az apoptózis csökkentésével. Az egyetlen intraperitoneális (ip) ciszplatin injekcióval kezelt egerek (20 mg/ttkg testtömeg)vese-tubulussérülés és károsodottveseműködésamit a szövettani vizsgálat és a megnövekedett szérum kreatinin mutat. A pandurát A (50 mg/ttkg) orális adagolása javultveseműködésés javultvese-a ciszplatin tubulussérülése az extracelluláris szignál-szabályozott kináz (ERK)1/2 és kaszpáz 3 aktiválásának gátlásával. Humán vese proximális tubuláris sejtjeiben a ciszplatin indukálta sejtapoptózist pro-apoptotikus fehérjék (ERK1/2 és kaszpáz 3) aktiválásával, és csökkenti az anti-apoptotikus fehérjét (Bcl{10}}). Ezeket a hatásokat szignifikánsan javult a pandurát A-val történő együttes kezelés. Érdekes módon az A pandurát nem változtatta meg a ciszplatin intracelluláris felhalmozódását. Nem változtatta meg a ciszplatin rákellenes hatékonyságát sem a humán vastagbélben, sem a nem-kissejtes tüdőrák sejtvonalakban. Következtetések: A jelen tanulmány rávilágít, hogy a pandurát A potenciálisan védő hatással bír a ciszplatin nefrotoxicitására.
Kulcsszavak:kemoterápia; akut vese sérülés; panduratin A; humán vese proximális tubulusa; anti-apoptózis; vese; vese
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESEDIALÍZIS
BEVEZETÉS
A gyógyszerek által kiváltott nefrotoxicitás komoly probléma a klinikai környezetben, mivel a nefrotoxikus gyógyszerek alkalmazása gyakran elkerülhetetlen. A nefrotoxicitás vesekárosodással definiálható, beleértve a glomeruláris károsodást és a vesefunkció károsodásához vezető tubulussérülést.1)vese sérülésgyulladáscsökkentők, antibiotikumok és kemoterápiás szerek, például a ciszplatin.2–4) A ciszplatin széles spektrumú, nagy hatású kemoterápiás gyógyszer.5) Azonban körülbelül minden harmadik ciszplatin-kezelésben részesülő beteg nephrotoxicitásban szenved6,7) és elektrolit-egyensúlyzavar.8,9) A ciszplatin által kiváltott nephrotoxicitást proximális tubulussérülés, vaszkuláris sérülés és gyulladás jellemzi.4) A ciszplatin felhalmozódása a vesesejtekben többféle sejthalált elősegítő utat indukál. A reaktív oxigénfajtákat (ROS) a ciszplatin nefrotoxicitásának kulcsfontosságú közvetítőjeként azonosították.10,11) Ezenkívül a ROS nefrotoxicitást indukál a mitogén által aktivált protein-kinázok (MAPK-k) aktiválásával.10,12,13) Számos tanulmány beszámolt arról, hogy a ciszplatin maga is közvetlenül stimulálhatja az extracelluláris szignál-szabályozott kinázt (ERK)1/2 (MAPK-k tagja) mind in vitro, mind in vivo. 14,15)
Egyes fitokemikáliák enyhítik a ciszplatin által kiváltott nefrotoxicitást azáltal, hogy gátolják a ROS felhalmozódását és az apoptózist.16–18) Bár a preklinikai vizsgálatokban e fitokemikáliák nefroprotektív hatásáról számoltak be, a fitokemikáliákból még mindig nincsenek jóváhagyott gyógyszerek a ciszplatinra vonatkozóan (lásd a nephrotoxicitást19). ) A jelenlegi klinikai gyakorlat csak támogató kezeléseket biztosít a vesefunkció helyreállításához.20) Ezért továbbra is fontos hatékony szerek keresése a ciszplatin által kiváltott nefrotoxicitás megelőzésére vagy kezelésére. A Pandurate A egy érdekes fitokemikália. Ez egy ciklohexanol-kalkon, amelyet a hagyományos orvoslásban és élelmiszerekben használt növényből, a Boesenbergia rotundából izoláltak.21) A panduratin A-ról kimutatták, hogy megelőzi vagy kezeli az oxidatív stresszt, a gyulladást és az anyagcsere-betegségeket.22,23) A vese proximális tubulusainak sérülése A ciszplatint, legalábbis részben, a fokozott oxidatív stressz és gyulladás közvetíti.11) Ezért RPTEC/TERT1 sejtekkel vizsgáltuk a pandurát A hatását a ciszplatin toxicitására mind állatokban, mind sejttenyészetekben. Azt is teszteltük, hogy a pandurát A-val történő együttes kezelés befolyásolja-e a ciszplatin rákellenes aktivitását humán rákos sejtvonalakban.
ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
Vegyszerek Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), cisplatin, and compound C (AMP-activated protein kinase (AMPK) inhibitor) were purchased from Sigma-Aldrich (MO, U.S.A.). 3 H-1-Methyl-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) was purchased from PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Thailand). Annexin V- fluorescein isothiocyanate (FITC) apoptosis detection kit was purchased from BD Biosciences (CA, U.S.A.). Primary antibodies for p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No. 9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Cat. No. 2118S), p-AMPKα (Cat. No.2531S), AMPKα (Cat. No. 5832S), Bax (Cat. No. 5023) and β-actin (Cat. No. 4970T) antibodies were obtained from Cell Signaling (MA, U.S.A.) and anti-neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) antibody (Cat. No. STCSC-515876) was purchased from Santa Cruz Biotechnology (CA, U.S.A.). Pandurate A >A HPLC-vel meghatározott 98 százalékos tisztaságot a Boesenbergia rotunda-ból izoláltuk, ahogy azt csoportunk korábban leírta.24) A Boesenbergia rotunda rizómáit a thaiföldi Kanchanaburiból gyűjtöttük. A növényt Tuanta Sematong azonosította. Az utalványmintát (BKF 68909 szám) letétbe helyezték a bangkoki Királyi Erdészeti Osztály Forest Herbáriumában.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE/VESE MŰKÖDÉSÉT
ÁllatokHím C57BL/6 egereket (8-hetesek) a Nomura Siam International Co., Ltd.-től (Bangkok, Thaiföld) vásároltunk. A MUSC61-063-464 számú állatgondozási és -használati protokollt az Institutional Animal Care and Use Committee, a MUSC–IACUC hagyta jóvá. Az egerek szabadon hozzáférhetnek élelemhez és vízhez. Egy hét akklimatizáció után az egereket véletlenszerűen felosztottuk, és a következőképpen kezeltük őket: normál sóoldat egyetlen intraperitoneális (ip) injekcióval a 4. napon (kontrollcsoport); pandurát A (50 mg/testtömeg-kg (BW)) szájszondával 7 napig (pandurát A csoport); ciszplatin (20 mg/ttkg) egyetlen ip injekcióval a 4. napon (ciszplatin csoport); pandurate A (50 mg/ttkg/nap) orális szondán keresztül 7 napon keresztül és ciszplatin (20 mg/ttkg) egyetlen ip injekcióval a 4. napon (együtt kezelt csoport). A 7. napon az egereket tiopentál-nátriummal mélyen elaltattuk. Vért vettünk és 10 percig centrifugáltuk 3000 pm-en. Az összegyűjtött felülúszókat -80 fokon tartottuk aveseműködésmegmérték.Vesefehérje expresszió mérésére és kórszövettani vizsgálatokra gyűjtöttük.
A vesefunkció meghatározása és szövettani vizsgálataA vesefunkciót a szérum kreatinin mérésével határoztuk meg Stanbio Creatinine Liquicolor (NY, USA) és vérkémiai analizátor (Licenza, Róma, Olaszország) segítségével. A ciszplatin által kiváltott vesetubuláris károsodás vizsgálatához egérvese4 százalékos paraformaldehidben rögzítették. AzveseA szeleteket hematoxilinnel és eozinnal (H&E) festették, fénymikroszkóppal fényképezve. A tubuláris sérülés százalékos arányát használtuk a vese tubuláris sérülésének értékeléséhez: 0=nincs tubulus sérülés 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;" 5="">75 százalék. A diákat vakon pontozta egy patológus. Minden állatcsoport átlagos pontszámát egy tárgylemez 10 különböző mezőjének megszámlálásával számítottuk ki.
SejtvonalakAz RPTEC/TERT1 sejteket, a vastagbélráksejteket (HCT116) és a nem kissejtes tüdőráksejteket (A549) az American Type Culture Collection-től (VA, USA) vásároltuk. Röviden, az RPTEC/TERT1 sejteket komplett Dulbecco módosított Eagle tápközegben/F-12 tápközegben (DMEM/F12) tenyésztettük a korábban leírtak szerint.25) A HCT116 és A549 sejteket DMEM/F12, illetve RPMI1640 tápközegben tenyésztettük, kiegészítve. penicillin-sztreptomicin antibiotikumokkal és 10 százalékos magzati borjúszérummal (FBS). A sejteket 37 °C-on tenyésztettük 5% CO2-t és 95% O2-t tartalmazó párásított atmoszférában.
Sejtéletképességi vizsgálat és sejtapoptózis-elemzésA sejtek életképességét úgy határoztuk meg, hogy az RPTEC/TERT1 sejteket 0,5 mg/ml MTT-reagens hatásának tettük ki 1 órán keresztül 37 °C-on. A reagenseket eltávolítottuk, a képződött formazánsót feloldottuk dimetil-szulfoxidban (DMSO) és kimutattuk EnVision mikrolemez-olvasó 570nm abszorbanciával. A sejtek életképességét a kontroll százalékában adtuk meg. Annexin V és propidium-jodid (PI festési analízist használtunk a sejt apoptózis meghatározására. Röviden, az RPTEC/TERT1 sejteket 0,25 százalékos tripszin-etilén-diamin-tetraecetsavval (EDTA) választottuk le. A sejtszuszpenziókat Annexin V-FITC-vel és PI-vel inkubáltuk sötétben 4°C-on 15 percig, majd kétszeri mosás kötőpufferrel Az apoptotikus sejteket áramlási citométerrel megszámláltuk, és az összes sejt százalékában fejeztük ki.
Az intracelluláris ROS felhalmozódás értékeléseA ROS szinteket DCFH-DA assay-vel határoztuk meg. Az RPTEC/TERT1 sejteket 10 uM DCFH-DA-val inkubáltuk, és 30 percig 37 °C-on inkubáltuk. Ezután a DCFH-DA festéket eltávolítottuk, és a sejteket foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) mostuk. Az intracelluláris ROS szintet 485 és 530 nm hullámhosszon mértük a gerjesztés és az emisszió tekintetében. Az intracelluláris ROS-felhalmozódást a fluoreszcens intenzitás százalékában adják meg a kontrollsejtekhez viszonyítva.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEBETEGSÉGET
Platina felhalmozási elemzésA felhalmozódott platinát mind az emésztett RPTEC/TERT1 sejtekben, mind az egérben mértükveseUNICAM 989 QZ AA spektrométerrel (Geleen, Hollandia). Tíz mikroliter 1 százalékos Triton X-100-ot és 400 ul 1 százalékos salétromsavat adtunk minden 100 µl-es mintához. A mintákat ezután legalább 1 órán át inkubáltuk. A platina kimutatása előtt minden mintát 10:1 arányban hígítottunk 1 százalékos salétromsavval. A platinakoncentrációt 2,5 mg/ml 1%-os salétromsavval hígított ciszplatin felhasználásával készített platina standard görbe lineáris regressziójával számítottuk ki. A platinát ng/sejtszám vagy ng/vesesúly.
3H-MMP* felvételi vizsgálatA 3H-MPP plus RPTEC/TERT1 sejtekbe történő felvételét korábbi módszerünkkel határoztuk meg.25) Röviden, a sejteket meleg transzportpufferrel mostuk, és tovább inkubáltuk 20 percig. A sejt monorétegeket H-MPP plusz (10 nM) oldattal inkubáltuk, majd jéghideg transzportpufferrel mostuk. A mintákat összegyűjtöttük, és a H-MPP plus radioaktív aktivitását folyadékszcintillációs számlálóval mértük.
Western-blot-elemzésA fehérjeexpressziót korábbi vizsgálatunk szerint dolgoztuk fel.26) Egérből extrahált fehérjékveseés az RPTEC/TERT1 sejteket 12000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 20 percig 4 fokon. A sejtekből és szövetekből izolált fehérjék azonos mennyiségét denaturáltuk és 10-12 százalékos nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel (SDS-PAGE) választottuk el. A mintákat nitrocellulóz membránokra vittük át, majd 1 órás nem specifikus fehérje blokkolást végeztünk zsírmentes száraz tejjel (5 százalék). A membránokat primer antitesttel 24 órán át inkubáltuk, majd másodlagos antitesttel 1 órán át inkubáltuk. A fehérje expresszió intenzitását kemilumineszcens HRP szubsztrát segítségével detektáltuk, és ImageJ szoftverrel határoztuk meg.
Statisztikai analízisAz adatokat átlag ± standard deviáció (SD) formában fejezzük ki. Az adatokat egyutas ANOVA-val elemeztük Tukey posthoc tesztjei segítségével (GraphPad Prism 8.0). Szignifikancia akkor tekinthető, ha a p-érték kisebb, mint 0.05.
EREDMÉNYEK A Panduratin A javítja a ciszplatin által kiváltott akut vesétSérülés Megvizsgáltuk az A pandurátus hatását avese sérülésciszplatin okozta egerekben. Először úgy figyeltük meg az általános toxicitást, hogy mértük a testtömeg-változást egereken normál sóoldattal, pandurát A-val (50 mg/ttkg), ciszplatinnal (20 mg/ttkg), valamint ciszplatinnal (20 mg/ttkg) és panduráttal végzett kezelést követően. A (50 mg/ttkg). A ciszplatinnal kezelt egerekben a testtömeg jelentős csökkenését találták. A testtömeg-csökkenést az A panduráttal végzett együttes kezelés mérsékelte (1A. ábra). A vezérléshez képestveseműködésa szérum kreatininszinttel mérve azt mutatta, hogy az egerekkel kezelt pandurát A önmagában nem változtatta meg a szérum kreatininszintjét; míg a ciszplatinnal kezelt egerek szérum kreatininszintje jelentősen megemelkedett, ami károsodott vesefunkcióra utal. A szérum kreatinin szintje a pandurát A egyidejű alkalmazásakor szignifikánsan csökkent a ciszplatinnal kezelt egerekhez képest (1B. ábra). Ezenkívül a platina felhalmozódásavesea szövet nem különbözött szignifikánsan a csak ciszplatinnal kezelt egerekben, mint a ciszplatinnal és a pandurát A-val együtt kezelt egereknél (1C. ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy a pandurát A nem befolyásolta a veseszövet ciszplatintartalmát. Azveseönmagában vivőanyaggal vagy pandurát A-val kezelt egerekből származó eredmények nem mutattak jelentős patológiás elváltozásokat. A ciszplatinnal kezelt egerek azonban több tubuláris károsodást mutattak, mint a vivőanyaggal kezelt egereknél, amint azt a degeneráció és hámlás növekedése, a luminális hámsejtek kialakulása, a mononukleáris sejtbeszűrődés, a kariomegália, az intertubuláris vérzés és a tágulás mutatta. Ezeket a kóros elváltozásokat szignifikánsan csökkentette az A pandurát együttes alkalmazása (2A. ábra, 1. táblázat). Meghatároztuk az NGAL (egy nefrotoxicitási biomarker), valamint az ERK1/2 és a hasított kaszpáz 3 (pro-apoptotikus fehérjék) expressziós szintjét. Vizsgálatunk kimutatta, hogy a ciszplatinnal kezelt egerek szignifikánsan növelték a NGAL, a p-ERK1/2 és a hasított kaszpáz 3 expresszióját a hordozóval kezelt egerekhez képest. A pandurát A-val történő együttes kezelés jelentősen csökkentette ezeket a ciszplatin-kezelés által indukált fehérjéket (2B. ábra).
A Pandurate A megakadályozza a ciszplatin által kiváltott citotoxicitást az emberi vese proximális tubuláris sejtjeiben az apoptotikus jelátviteli útvonalak gátlásávalA ciszplatin (50 µM) az RPTEC/TERT1 sejtek életképességének jelentős csökkenését jelzi 72 órás inkubációt követően. Érdekes módon a pandurát A-val (1 és 5 µM) történő együttes kezelés jelentősen növelte a sejtek életképességét (2.
3A). A Panduratin A cisplatin citotoxicitással szembeni védő hatását a sejt apoptózis mérése igazolta. Ahogy az várható volt, a sejtek 48 órás 50 µM ciszplatin expozíciója jelentősen megnövelte az RPTEC/TERT1 sejtek apoptózisát. Ezt a hatást az A pandurát gyengítette (3B. ábra). Megvizsgáltuk, hogy a pandurát A ciszplatin toxicitására gyakorolt hatása szükséges-e az AMPK aktiválásához. Amint a 3C. ábrán látható, a p-AMPK fehérje expressziója, az AMPK egyik aktív formája az A pandurát hatására növekedett, míg a ciszplatin csökkentette. Ezenkívül meghatároztuk a pandurát A védő hatását AMPK gátlása alatt. Érdekes módon a sejtek inkubálása 10 µM C vegyülettel, amely az AMPK inhibitora, nem gyengítette az A pandurát védőhatását a sejt életképességére (3D. ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az A pandurát védő hatását AMPK-független mechanizmusok közvetíthetik. Ezt követően megvizsgáltuk a pandurát A hatását bizonyos fehérjékre, amelyek részt vesznek a ciszplatin által kiváltott sejtapoptózisban. Amint a 4. ábrán látható, a ciszplatin szignifikánsan megnövelte a p-ERK1/2 pro-apoptotikus fehérjéket és a hasított kaszpáz 3-at. A ciszplatin csökkentette az anti-apoptotikus fehérje Bcl-2 expresszióját. A pandurát A-val történő együttes kezelés megfordította e fehérjék expresszióját. Mivel a ROS a ciszplatin által kiváltott vesesejtek apoptózisának fő tényezője,11,27) meghatároztuk a panduratin A hatását a ciszplatin által kiváltott ROS-felhalmozódásra. A ciszplatin jelentősen növelte a ROS intracelluláris szintjét. Érdekes módon a panduratin A jelentősen csökkentette a ciszplatin által kiváltott ROS-felhalmozódást.
A Panduratin A nem befolyásolja a Cisplatin OCT2 sejtes felhalmozódásátközvetíti a ciszplatin transzportját a humán vese proximális tubuláris sejtjeibe.289 Annak vizsgálatára, hogy a panduratin A csökkenti-e a ciszplatin felhalmozódást, megmértük az OCT2 transzport funkcióját. Az eredmények azt mutatták, hogy a sejtek 5 uM panduratin A-val 10 percig és 24 óráig tartó inkubációja nem befolyásolta a H-1-metil-4- fenil-piridinium (H-MPP plus), az OCT2 szubsztrátjának sejtfelhalmozódását. Ezt követően megerősítették a panduratin A hatását a ciszplatin sejtfelhalmozódására. A panduratin A-nak nem volt jelentős hatása a platina felhalmozódására az emberi vesesejtekben (5. ábra).
A Panduratin A védő hatása nem befolyásolja a ciszplatin rákellenes hatásátMeghatározták a Panduratin A hatását a ciszplatin toxicitására rákos sejtvonalakban. A HCT116 és A549 sejtek, amelyek vastagbél-, illetve tüdőrák sejtvonalak, életképessége szignifikánsan csökkent 72 órával a ciszplatin (50 μuM) kezelés után. A panduratin A-val (5 μM) történő együttes kezelés nem csökkentette a ciszplatin citotoxicitását. Érdekes módon a panduratin A önmagában is csökkentette a
VITA
A jelen tanulmány feltárja, hogy a panduratin A csökkenti a cisz-platin nefrotoxicitását anélkül, hogy rontaná a ciszplatin rákellenes hatását vastagbél- és nem-kissejtes tüdőrák sejtvonalakban. Kimutattuk, hogy a panduratin A-val történő együttes kezelés gyengíti az akutvese sérülésciszplatin által okozott egerekben. Bár a jelen tanulmány a ciszplatin által kiváltott védőhatást mutatjavese sérülés,a panduratin A elsődleges célpontját nem azonosították. A Panduratin A aktiválhatja az AMPK-t a vese proximális tubuláris sejtjeiben (3. ábra) és más sejttípusokban.30-2) Valószínűtlennek tűnik, hogy a panduratin A védőhatása megköveteli az AMPK aktiválását, mivel a bizonyítékok azt mutatták, hogy az AMPK gátlása kémiai inhibitorokkal nem változtatta meg a Pandu-minősítő A védő hatását. A panduratin A javult a vesefunkció, amit a csökkent szérum kreatinin is mutat. A ciszplatin károsodott veseműködése összefüggésben áll a vesetubulusok sérüléseivel, mint például a degeneráció, a luminalis gipszképződés, a haemorrhagia és a tágulás. A vesetubulussérülés eredménye jól korrelált az NGAL expresszió indukcióját mutató adatainkkalveseciszplatinnal kezelt egerek szövetében. Ezen túlmenően ezt a bizonyítékot alátámasztja az a korábbi tanulmány is, amely azt mutatta, hogy az NGAL markánsan expresszálódik a vesetubulusokban az akut betegséget követően.vese sérülésciszplatin indukálta.3) Érdekes módon az egerek panduratin A-val történő együttes kezelése gyengítette a ciszplatin által kiváltott vesetubulus sérülést. A szövettani elemzés kimutatta, hogy a ciszplatin fokozta a mononukleáris sejtek beszűrődését, és ezt a hatást a panduratin A megszüntette. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a korábban gyulladáscsökkentőnek bizonyult panduratin A24.3435) gyengítheti a ciszplatin gyulladáscsökkentő hatását a veseszövetben. A MAPK aktiváció sejthalált indukálhat.2415) Eredményeink azt mutatták, hogy a ciszplatin stimulálta az ERK1/2 és a kaszpáz 3 aktiválását. Ezen fehérjék expresszióját a panduratin A gyengítette.
A ciszplatin által kiváltott nefrotoxicitáshoz több út is hozzájárult (beleértve az apoptózist, az oxidatív stresszt és a gyulladást).4 Az RPTEC/TERT1 sejtvonalat használtuk a panduratin A mechanizmusainak azonosítására, amelyek enyhítik a ciszplatin által okozott toxicitást humán vese proximális tubuláris sejtjeiben. Az RPTEC/TERT1 sejteket a xenobiotikumok által kiváltott toxicitás vesesejt-modelljeként javasolták.36 A panduratin A védő hatást fejt ki a ciszplatin citotoxicitásával szemben, amint azt az RPTEC/TERT1 sejtapoptózis csökkenése mutatja. A ciszplatin toxicitásának mechanizmusa a vese proximális tubuláris sejtjeiben összetett. Az ERK1/2 és a kaszpáz 3 aktivációja és a Bcl{10}} kimerülése szerepet játszik a ciszplatin miatti vesesejtek apoptózisában.373) A korábbi tanulmányokkal összhangban a jelen tanulmány kimutatta, hogy a ciszplatin fokozza a p-ERK1/2 és a hasított kaszpáz expresszióját. 3, és csökkenti a Bcl-2 kifejezést. Eredményeink azt mutatják, hogy a panduratin A elnyomja a ciszplatin által kiváltott apoptotikus jelátviteli fehérjéket, a p-ERK1/2-t és a hasított kaszpáz 3-at, és fenntartja az anti-apoptotikus fehérjét. Bcl-2. Az ERK1/2 és a kaszpáz 3 aktiválása mellett a fokozott intracelluláris ROS-felhalmozódás kulcsfontosságú tényező a vesesejtek apoptózisában a ciszplatin miatt.139Egy korábbi tanulmány arról számolt be, hogy a panduratin A megvéd a hepatociták oxidatív károsodásától azáltal, hogy csökkenti a reaktív okozta intracelluláris ROS képződést. intermedierek.4 A panduratin A kezelést követő ROS-felhalmozódás csökkenését a ROS-termelés gátlása vagy a ROS-megkötő reakció fokozódása közvetítheti. Beszámoltunk arról, hogy a panduratin A megnövelte a glutation szintjét, amely egy ROS megkötő molekula, ami csökkentheti a ROS felhalmozódását a veseszövetben (lásd a kiegészítő anyagokat). Nem zárjuk ki azonban, hogy más mechanizmusok is szerepet kapjanak a ROS csökkentésében. Eredményeink kimutatták, hogy a panduratin A csökkenti az intracelluláris ROS felhalmozódást, ami hozzájárul a panduratin A védő hatásához. A ciszplatin intracelluláris szintje az elsődleges tényező, amely befolyásolja a ciszplatin által kiváltott toxicitás súlyosságát. A vesetranszporterekről, például az OCT2-ről, a réztranszporterekről, valamint a multidrog- és toxinextrúziós transzporterekről-1 (MATE1) számoltak be, hogy hozzájárulnak a ciszplatin transzportjához.4) A ciszplatinnak a vese proximális tubuláris sejtjébe történő szállítását azonban elsősorban az OCT2 közvetíti. Az OCT-k gátlásáról kimutatták, hogy mind a tenyésztett vesesejtekben, mind az állatokban gyengíti a ciszplatin által kiváltott vesetoxicitást.发9,42）Valószínűnek tűnik azonban, hogy a panduratin A nem befolyásolja az OCT2 transzport funkcióját vagy a ciszplatin felhalmozódását, ami arra utal, hogy a panduratin A védőhatással rendelkezik a panduratin A ellen. a ciszplatin toxicitását nem a ciszplatin transzportjának vagy felhalmozódásának csökkentése közvetíti.
A CISTANCHE JAVÍTJA A VESE-/VESEFÁJDALÁST
A Panduratin A renoprotektív hatást fejt ki a vesesejtek apoptózisának gátlásán keresztül. Ha a panduratin A a rákos sejtek apoptózisát is gátolja, az csökkentené a kemoterápia hatékonyságát. Ezért megvizsgáltuk, hogy a panduratin A csökkenti-e a ciszplatin rákellenes hatását. Lényeges, hogy a Pandu-rating A-val történő együttes kezelés nem változtatja meg a ciszplatin rákellenes hatását sem a vastagbélben, sem a nem kis tüdősejtes rákos sejtekben. Ezenkívül a panduratin A mindkét rákos sejtvonalra mérgező. Az eredmények azt mutatják, hogy a panduratin A hatása szelektív, eltérően hat a normál vesesejtekre és a rákos sejtekre. Bár a pan-duration A jó szer lehet a ciszplatin által kiváltott nefrotoxicitás megelőzésére, a panduratin A farmakológiai hatásaira vonatkozó információkat a xenograft modellben klinikailag releváns körülmények között a jövőben meg kell vizsgálni.
KÖVETKEZTETÉS
Jelen vizsgálatunk kimutatta, hogy a panduratin A jelentős védőhatást fejt ki a ciszplatin nefrotoxicitására az oxidatív stressz csökkentésével, valamint az ERK1/2 és kaszpáz 3 aktivációjának gátlásával. A panduratin A védő hatása nem változtatta meg a ciszplatin rákellenes hatását a rákos sejtekben. Annak ellenére, hogy egyes káros események blokkolása csak részleges renoprotektív hatással járhat, a panduratin A jó szerjelölt lehet a ciszplatin nefrotoxicitásának enyhítésére, mivel többféle mechanizmuson keresztül csökkenti a ciszplatin toxicitását.
