A veleszületett immunsejtek helyreállítása és az adaptív immunitás tartós változásai a lábadozó plazmadonorok perifériás vérében a SARS-CoV-2 fertőzés után nyolc hónappal, 1. rész

Absztrakt:

A kezdeti SARS-CoV-2 fertőzést követően körülbelül két hónappal a lábadozó plazma (CP) donorok perifériás vérében korábban tartós elváltozásokat és egyedi immunrendszer aláírásokat észleltek. Ez a cikk 47 CP-donor szekvenciális elemzésének eredményeit mutatja be a fertőzést követő nyolc hónappal (7,5–8,5 hónap) medián időpontban, áramlási citometriával értékelve.

Az új korona-tüdőgyulladás járvány kitörésével egyre többen kezdenek odafigyelni a lábadozó plazma immunitásra gyakorolt ​​hatására. A lábadozó plazma jelenleg hatékony eszköz az új koronária tüdőgyulladás kezelésében. Javíthatja a betegek immunitását, fokozhatja a szervezet ellenálló képességét, és elősegítheti a betegek mielőbbi felépülését.

A lábadozó plazma új coronaria tüdőgyulladásban gyógyult betegek plazmájából kivont anyag, amely nagyszámú antitestet és immunsejtet tartalmaz, ami segítheti az immunrendszert a vírus felismerésében és megtámadásában, így vírusellenes szerepet tölt be. Ezért a lábadozó plazma bizonyos mértékig javíthatja az immunitást és fokozhatja a szervezet ellenálló képességét.

Jelenleg sok kórházban elkezdték használni a lábadozó plazmát új koszorúér-tüdőgyulladásban szenvedő betegek kezelésére, és bizonyos gyógyító hatásokat értek el. Tanulmányok kimutatták, hogy a lábadozó plazmaterápia nagymértékben lerövidítheti a betegek kórházi kezelési idejét, enyhítheti az állapotot és csökkentheti a halálozási arányt. Ezért aktívan támogatnunk és részt kell vennünk a lábadozó plazma kezelésében, hogy minél több beteg mielőbb felépüljön.

Emellett a mindennapi életben az immunitásunk erősítésére is oda kell figyelnünk, hogy megelőzzük az olyan betegségek előfordulását, mint például az új koszorúér-tüdőgyulladás. Például figyeljen a kiegyensúlyozott étrendre, és fogyasszon táplálóbb ételeket, például zöldségeket, gyümölcsöket és halat; erősítse az edzést a fizikai erőnlét és az immunitás javítása érdekében; ügyeljen a higiéniára, mosson gyakran kezet, és csökkentse a fertőzés kockázatát.

Röviden, a lábadozó plazma pozitív hatással van az immunitásra, ami bizonyos mértékig fokozhatja a szervezet ellenálló képességét, és elősegítheti a betegek mielőbbi felépülését. Aktívan támogassuk és vegyen részt a lábadozó plazma kezelésében, a mindennapi életben pedig ügyeljünk az egészségügyre, hogy szervezetünk egészségesebb és életerősebb legyen! Összefoglalva tehát javítanunk kell az immunitásunkat. A Cistanche jelentősen javíthatja az immunitást, mert a húsban lévő poliszacharidok szabályozhatják az emberi immunrendszer immunválaszát, javítják az immunsejtek stressz-képességét, és erősítik az immunsejtek baktericid hatását.

Kattintson a cistanche deserticola kiegészítésre

Érdekes módon eredményeink szignifikáns eltérést mutatnak a releváns immunalcsoport összetételében a CP donorok között. Ami a veleszületett immunitást illeti, mind a nem klasszikus monociták, mind a CD11b-granulociták teljesen felépültek a COVID-19 fertőzés után nyolc hónappal. A köztes monociták és a természetes gyilkos (NK) sejtek már a két hónapos értékelés során helyreálltak, és stabilak maradtak. Ami az adaptív immunitást illeti, a COVID{5}}hoz kapcsolódó torz Th1 és Th2 sejtpolarizáció a két hónapos szinten maradt. Az összes B-sejt alacsony szintjét azonban még nyolc hónapos fertőzés után is kimutatták.

Szintén figyelemre méltó volt a CD8 plusz Treg folyamatos csökkenése és az NKT sejttérben bekövetkezett változások. A CP-donorok egyedülálló immunrendszerrel rendelkeznek a COVID-19 fertőzés után nyolc hónappal, amelyet a veleszületett immunitás összetevőinek jelentős helyreállítása és a SARS-CoV-2 sejtekben való tartós lenyomata jellemez. az adaptív immunitásról.

Kulcsszavak:

SARS-CoV-2; COVID-19; lábadozó plazmadonorok; immunprofilalkotás; az immunrendszer helyreállítása; 8 hónap.

1. Bemutatkozás

A 2019-es koronavírus-betegséget (COVID-19) a súlyos akut légúti szindróma koronavírus 2 (SARSCoV-2) potenciálisan halálos kimenetelű és rendkívül fertőző légúti átvitele okozza. A COVID-19 súlyossága nagymértékben változó a fertőzött emberek között, a teljesen tünetmentes esetektől [1] az enyhébb, lázzal, köhögéssel és fáradtsággal járó állapotokig, valamint a súlyosabb esetekig, amelyek tüdőgyulladásban szenvednek, ami akut légzési distressz szindrómához vezet. féktelen többszervi elégtelenség, amelyek gyakran végzetesek [2].

A COVID{0}} tüneti eseteit szisztémás hipergyulladásos immunválasz jellemzi, és ma már bőven van bizonyíték arra vonatkozóan, hogy a SARS-CoV-2 fertőzést követő tünetek súlyosságának eltérései közvetlenül összefüggenek az előzőekkel. a gazdaszervezet immunstátusza [3–5]. A diszfunkcionális immunkompromittált immunprofilokhoz, és ennek következtében a halálozás magasabb kockázatához kapcsolódó tényezők, beleértve a megnövekedett életkort és bizonyos krónikus alapbetegségeket, mint a 2-es típusú cukorbetegség, kardiomiopátia, elhízás, krónikus obstruktív tüdőbetegség és krónikus vesebetegség [6,7] .
A COVID{0}} kiterjedt kutatása fontos információkat tárt fel a SARS-CoV-2 fertőzést kísérő immunkaszkádokról és a különböző immunalcsoportok sajátos változásairól [3,4,8,9]. Mindazonáltal még mindig korlátozott információ áll rendelkezésre azokról a változásokról, amelyek a fertőzés teljes megszűnése után idővel fennmaradhatnak a gazdaszervezet immunrendszerében.

A közelmúltban kimutatták, hogy a SARS-CoV-2 immunológiai memóriájának különböző összetevői idővel eltérő kinetikával rendelkezhetnek [9,10]. Például úgy tűnik, hogy az anti-SARS-CoV{6}} memória és a citotoxikus T-sejtek gyorsabban csökkennek, mint a B-sejtes immunitás, míg mind a memória B-sejtek, mind az immunglobulin (Ig)G szintje a SARS-CoV tüskefehérjével szemben {8}} legalább hat hónapig fennmarad a COVID-19 megjelenése után [10].

Egy másik kohorszban Breton et al. kimutatták, hogy a központi memória CD4 plusz és CD8 plusz T sejtek csökkentek, de az antigén-specifikus T sejtek megmaradtak hat hónappal a fertőzés után [11]. Ami a veleszületett immunitás sejtjeit illeti, profiljuk korfüggőnek tűnik, és a monocitákban és a neutrofilekben változást figyeltek meg kb. két hónappal a fertőzés után [12].

A közelmúltban arról is beszámoltunk, hogy a kezdeti SARS-CoV-2 fertőzés után körülbelül két hónappal a lábadozó plazma (CP) donorok perifériás vérében (PB) észleltek tartósan fennálló elváltozásokat és egyedi immunrendszert. Ezek az immunaláírások korrelálnak mind a betegek azon képességével, hogy védő humorális választ hozzanak létre, azaz elegendő és kimutatható SARS-CoV-2-ellenes IgG és/vagy IgA antitestet termeljenek, de a tapasztalt tünetek súlyosságával is. , ahol a korábban kórházban kezelt CP-donorok kevésbé immunkompetensek, mint az enyhébb tüneteket tapasztaló CP-donorok [13].
Ugyanezt a megközelítést követve, és a COVID-19-gyógyult CP-donorok immunprofiljának hosszú távú lenyomatainak feltárása érdekében bemutatjuk 47 CP-donor szekvenciális elemzésének eredményeit nyolc hónapos medián időpontban (7,5–7,5 8,5 hónap) a fertőzés után.

2. Anyagok és módszerek

2.1. A résztvevők kiválasztása

A jelen jelentés a CP-donorok szekvenciális tesztelését tartalmazza, akik részt vettek egy fázis 2-es vizsgálatban (NCT04408209), és páros PB-mintákat bocsátottak rendelkezésre immunprofiljuk elemzéséhez két és nyolc hónappal a SARS-CoV-fertőzést követően-2. Valamennyi résztvevő SARS-CoV-2 fertőzött volt, és pozitív nasopharyngealis és/vagy oropharyngealis mintavétel után diagnosztizálták őket RT-qPCR-rel, a korábban leírtak szerint [14].

A CP adományozása előtt két negatív PCR-tesztet végeztek legalább hét napos intervallummal. A második negatív tesztet 1-7 nappal a plazmaferezis előtt végeztük. Ezenkívül kimutatható SARS-CoV-2 elleni IgG antitesteket fejlesztettek ki a SARS-CoV-2 tüskedomén 1 (S1) fehérje ellen, amikor egy kereskedelemben kapható érzékeny, és az Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatóság által jóváhagyott enzimmel vizsgálták. -linked immunosorbent assay (Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG, Lubeck, Németország), amelyet korábban részletesen leírtak [14].

A felvételi kritériumok közé tartozott az is, hogy legalább 14 nappal a SARS-CoV-2 fertőzésből való teljes felépülés után (tünetek nélkül, a SARS-CoV-2 által okozott szervi működési zavarok teljes megszűnése után) legalább 14 nappal, transzfúziós előzmény nélküli férfi donorok és olyan nőstények, akiknél nem szerepelt transzfúzió vagy terhesség, normál teljes vérkép, negatív szerológiai teszt a hepatitis B vírusra (HBV), hepatitis C vírusra (HCV), humán immunhiányos vírusra (HIV), nemi betegségek kutatólaboratóriuma (VDRL), humán T-sejtes limfotróp vírus (HTLV)-1 és HIV-re, HBV-re, HCV-re negatív nukleinsavamplifikációs teszttel, és a donorok megfeleltek a véradás összes általános kritériumának életkor, általános állapot, hemoglobinszint és életképesség tekintetében jelek.

Tíz hasonló korú (47 év közötti, 45-73 év közötti tartomány) és nemű (6 férfi/4 nő) egészséges egyént is értékeltek, és normál kontrollként használtak. Ezeknek az alanyoknak nem voltak ismert egészségügyi problémái, és a vérvételkor negatív PCR-tesztet mutattak a SARS-CoV-2-ra, orrgarat-kenetből.

Valamennyi résztvevőt tájékoztattak erről a vizsgálatról, és aláírt beleegyező nyilatkozatot adtak a Helsinki és a helyi etikai bizottság nyilatkozatának megfelelően.

Valamennyi vizsgálati eljárást Helsinki nyilatkozata (18. Orvosi Világszövetség Közgyűlése), annak későbbi módosításai, a görög szabályozási irányelvek, valamint a Nemzetközi Harmonizációs Konferencia által meghatározott helyes klinikai gyakorlat (GCP) irányelvei alapján hajtották végre. A protokollt az "Alexandra" Általános Kórház etikai bizottsága hagyta jóvá, Athén, Görögország (hivatkozási szám: 245/16. 2020. április).

2.2. Áramlási citometriai elemzés

A PB-mintákat EDTA-val bevont vérvételi csövekbe gyűjtöttük (BD Vacutainer, BD Biosciences, San Jose, CA, USA; #367841), és a gyűjtés után egy órán belül feldolgoztuk a Stain-Lyse-no-Wash protokollt (BD Biosciences) követve. ). Konkrétan minden PB-mintához 100 µl teljes antikoagulált vért vittünk át egy 12 × 75 mm-es kerek fenekű polisztirol FACS csőbe, és megfestettük egy panellel, amely megfelelő fluoroforral konjugált anti-humán antitesteket tartalmazott a CD{{ felületi markerek ellen. 12}}PerCP, CD4-BV510, CD8-PE, CD14-BV605, CD16-APC, CD25-PECF594, CD{{21} }APCH7, CD56- APCR700, CD183-BV421, CD194-BV650, CD196-BB515 és CD11b-BV786 (mind a BD Biosciences cégtől), szobahőmérsékleten (RT) ) 20 percig fénytől védve. Továbbá 450 µl 1×FACS lizáló oldatot adtunk hozzá, és a sejteket további 10 percig szobahőmérsékleten, fénytől védve inkubáltuk. Minden mintát egy 3-lézer BD FACSCelesta (BD Biosciences) elemeztünk, és mintánként 100,000 eseményt vettek fel.

Az itt hivatkozott 12-színpanel a CP-donorok fenotípusos elemzésére szolgáló referenciapanelből állt a fertőzés után két hónappal, és lehetővé tette 24 különböző immunpopuláció azonosítását és elemzését, beleértve a B-sejteket, CD3- és T-sejteket. , természetes gyilkos (NK) sejtek, monociták, granulociták és ezek alcsoportjai a korábban leírt kapuzási stratégiát követve [13].

A korábbi kötegelemzéseinkkel való összhang érdekében rendszeres és kiterjedt beállítási teljesítményt követtünk. A citométer beállítását festetlen kontrollsejtekkel végeztük a megfelelő PMT feszültségek konfigurálásához, és BD CompBeads Set anti-egér Igκ (BD Biosciences) segítségével a csatornák közötti fluoreszcencia átgyűrűzés kompenzációjához. Ezenkívül a CS&T napi teljesítményét minden felvétel előtt alkalmaztuk, hogy ellenőrizzük a citométer stabil állapotát.

Végül egy további szabványosítási lépést alkalmaztunk naponta szivárványgyöngyökkel (Spherotech Inc, Lake Forest, IL, USA), hogy ellenőrizzük a lézer stabilitását a PMT fluktuációk szabályozásán keresztül a gyöngyök célzott fluoreszcens intenzitásának kimutatása érdekében.

2.3. Statisztikai analízis

Az adatokat GraphPad Prism 8.{1}}.2 szoftverrel (San Diego, CA, USA) elemeztük. Az eredményeket átlag ± standard deviáció (SD) formában fejezzük ki. Statisztikai elemzéshez Student-féle t-tesztet használtunk a kontrollok és a CP-donorok összehasonlítására nyolc hónappal a SARSCoV-2 fertőzés után, míg a CP-donorok változásait a fertőzés után két és nyolc hónappal páros Student-féle t-teszttel hasonlították össze. a p-értékek < 0,05 statisztikailag szignifikánsnak minősültek.

3. Eredmények

3.1. A CP donorok jellemzői

A jelen elemzésben 47 CP donor vett részt páros PB-mintákkal a COVID-19 fertőzést követő két és nyolc (7,5–8,5) hónapos mediánban. A résztvevők klinikai jellemzőit az 1. táblázat mutatja be.

3.2. Az immunprofil a SARS-CoV-2 utáni nyolc hónapban nem korrelál a CP-donorok klinikai jellemzőivel

Korábbi elemzésünkkel összhangban a SARS-CoV-2 fertőzés után két hónappal [13], nyolc hónapos korban szignifikáns eltéréseket figyeltünk meg a releváns immunalcsoport összetételében a CP donorok között. Ez az eltérés meghaladta kohorszunk demográfiai és klinikai jellemzőit, mivel nem lehetett szignifikáns különbséget kötni a nemhez, életkorhoz, a tapasztalt tünetek számához vagy az S1 vírus elleni szérum anti-SARS-CoV{5}}-specifikus antitestek értékéhez. antigén.

Megjegyzendő, hogy nem találtunk szignifikáns különbséget a korábban kórházban lévő CP-donorok és az enyhébb tünetekkel rendelkezők immunprofiljaiban, akik nem feleltek meg az intenzív osztályra (ICU) való felvétel feltételeinek (az adatok nem láthatók). Ezért az immunprofil-alkotás időbeli dinamikájának későbbi elemzése során nem osztottuk tovább a CP donorokat több kategóriába (2. táblázat).

3.3. Veleszületett immunitás helyreállítása a COVID után nyolc hónappal-19

Továbbá értékeltük bizonyos immunprofilok dinamikáját a különböző immunalcsoportok releváns összetételének időbeli összehasonlításával. A veleszületett és adaptív immunitási karokhoz tartozó főbb immunpopulációk és azok alpopulációinak elemzését az 1. és 2. ábra mutatja be. Eredményeink általában azt mutatják, hogy a fertőzés után nyolc hónappal a veleszületett immunsejt-alcsoportok többsége felépült. a kontrollcsoportéhoz hasonló szintre, ellentétben az adaptív immunitás sejtjeivel, amelyekben a specifikus limfocita alcsoportok tartós, hosszú távú aktivációt mutattak.

A monocita részhalmazokat illetően korábban beszámoltunk a közbenső monociták számának {{0}}-szereséről és a nem klasszikus kompartment 22--szereséről (a klasszikus monociták rovására) aktív COVID-19 betegség [11]. A fertőzés után két hónappal a közepes és klasszikus monociták szintje a gyógyulás jeleit mutatta, és gyakorlatilag teljesen helyreállt a fertőzés után nyolc hónappal. A nem klasszikus monociták százalékos aránya, amely a fertőzés után két hónappal nőtt (átlagos százalék – 1,16 százalék a kontrollcsoport 0,27 százalékához képest, p=0,01), szintén nyolc hónappal teljesen felépült, és elérte a kontrollcsoport szintjeit.

Hasonló megfigyeléseket jegyeztek fel a granulocitákra. Bár nyolc hónapos összszázalékuk némileg csökkent a kontrollokhoz képest, nyolc hónappal a fertőzés után a CD11b plusz és CD11b-alcsoportok prevalenciája jelentősen csökkent, illetve nőtt, ami hasonló CD11b plusz /CD11b-granulocita arányt eredményezett. a normál egészséges donorokéhoz képest, összehasonlítva a két hónapos értékelésnél a deregulált granulocita expanzióval [13].

Ami az NK sejteket illeti, elemzéseink nem mutattak szignifikáns fluktuációt a fertőzést követő két és nyolc hónap között. Az összes NK-sejt és részhalmazaik százalékos aránya a betegség aktív feloldása után két hónappal majdnem helyreállt, és ugyanez a profil volt megfigyelhető nyolc hónap után is, a százalékok közel normális szinten maradtak.

For more information:1950477648nn@gmail.com