A Cistanche poliszacharidok szabad gyököket megkötő kutatása

További információ:ali.ma@wecistanche.com

Wang Guowei Zhao Fang

(Kémiai és Vegyészmérnöki Iskola, Shihezi Egyetem, Beisi Road, Shihezi City, Xinjiang 832000)

Kulcsszavak: Cistanche; Cisztanche poliszacharid,poliszacharida cistanche-ból; szabad gyök

A szervezet az élettevékenységek oxidatív anyagcseréje során folyamatosan különféle reaktív oxigéngyököket (ROS) termel, amelyek az emberi szervezet aerob anyagcseréjének redox reakciója során keletkező köztes termékek. Tanulmányok kimutatták, hogy a túlzottszabad radikálisokmegtámadja az életben lévő makromolekuláris anyagokat és különféle organellumokat, különböző károsodásokat okozva a szervezetben molekuláris, sejtes és szöveti szervek szintjén, felgyorsítva a szervezet öregedési folyamatát, vérrögképződést, cukorbetegséget és érelmeszesedést okozva. , Daganatok és egyéb betegségek [1]. Mivel a kémiailag szintetizált antioxidánsok mérgezőek az emberi szervezetre, az utóbbi években a nagy hatékonyságú és alacsony toxicitású természetes antioxidánsok keresése, amelyek képesek megkötni az oxigén szabad gyököket, az orvostudomány, az élelmiszeripar és a vegyészmérnöki területeken is felkapott helyet kapott.

Cistanche [Cistanche deserticola (YC Ma.)]többnyire a Tamarisk, Nitraria és Haloxylon ammodendron gyökerein parazitál. Hazámban ritka kínai orvosság, és ún"sivatagi ginzeng"[2]. A Cistanche cistanche poliszacharid az egyik fő biológiailag funkcionális aktív komponensecistanche, de arról nem számoltak be, hogy acistanche poliszacharid szabad gyököket megkötő hatása van. Ebben a cikkben a spektrális analízis módszerét alkalmaztuk a meghatározásáraa Cistanche poliszacharid megkötő hatása szuperoxid anion szabad gyökökre, hidroxil szabad gyökökre, D PPH gyökökre és szingulett oxigén szabad gyökökre, így például aantioxidáns aktivitásának értékelésére. Használja ki teljes mértékben ezt a természeti erőforrást, hogy tudományos alapot nyújtson.

Kattintson a Cistanche szárra a szabad gyökökért

Ez a kutatás tanulmányozzaCisztanche poliszacharidin vitroantioxidánstevékenység. Az aszkorbinsavat kontrollként véve a Fenton-szerű reakció hidroxil-szabad gyököket, a dopamin autooxidációja szuperoxid-aniont termelszabad radikálisok, a nátrium-hipoklorit és a hidrogén-peroxid reakciója szingulett oxigén, difenil-keserű-hidrazin gyökök előállítására kísérleti modellként, ultraibolya fényes spektrofotometriás és kemilumineszcencia analízis módszerrel, első alkalommal aCistanche poliszacharide szuperoxid anion szabad gyökökön, hidroxil szabad gyökök, D PPH ·szabad radikálisok(difenil-hidrazino gyökök) és szingulett oxigén.Az eredmények azt mutatták, hogy a Cistanche poliszacharidjai nyilvánvalóan megfogó hatást fejtenek ki a fent említett szabadgyökökre, és a megkötő hatások pozitívan korreláltak a poliszacharidok koncentrációjával.

Készülékek és reagensek: UV 22401 ultraibolya-látható spektrofotométer (Shimadzu Corporation, Japán); Lum at LB9507 ultraérzékeny csöves luminométer (Berthold Technologies, Németország); R E252CS rotációs elpárologtató (Shanghai Yarong Biochemical Co., Ltd.) Műszergyár); HW 2SY elektronikus állandó hőmérsékletű vízfürdő edény (Jintan Xinhang Instrument Factory); pH S23C savasságmérő (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); D ZF26020 vákuumszárító sütő (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.).

Cistanche kivonata Kuitun Medicinal Materials Corporationtől vásárolták. Luminol (Luminol, Sigma, USA), Dopamin (Kínai Nemzeti Gyógyszerészeti és Biológiai Termékek Ellenőrzési Intézet), FeSO 4, ED TA, C-vitamin, H 2O 2, NaClO, Na2CO 3, NaHCO 3 stb. hazai analitikai reagens. A kísérleti víz ioncserélt desztillált víz.

Azextrakciós módszereCisztanche poliszacharidok: Vegyünk 30 g-otcisztanche porés helyezzük egy 500ml-es Erlenmeyer-lombikba, és áztassuk petroléterben (60-90 fok), éterben és 80 százalékos etanolos forró oldatban (30 fok) 6 órán át, majd a maradékot. szárazra párolog. . A szűrőmaradékot 1:10 szilárd-folyadék arányú vízbe áztatjuk 24 órán át, majd 30 °C-on melegítjük 100 percig. Az extrakció befejezése után a felülúszót centrifugálással nyertük ki. A felülúszót csökkentett nyomáson betöményítettük, majd háromszoros térfogatú 95%-os etanol hozzáadásával kicsaptuk, 24 órán át 4 °C-on állni hagytuk, a csapadékot centrifugálás után összegyűjtöttük, és vákuumban szárítottuk, hogy megkapjuk a nyers Cistanche cistanche poliszacharidot. Mérjünk le 1,00 g nyers poliszacharidot, oldjuk fel vízben, hígítsuk fel egy 50 ml-es mérőlombikba, majd tegyük félre a vizsgálathoz.

A teszt a cistanche poliszacharid szuperoxid szabad gyökön (O) tisztító képesség: a dopamin autooxidációjának alkalmazása szuperoxid szabad gyökök előállításáraCisztanche poliszacharid szuperoxid szabadgyök-megkötőképesség [3]. Adjon hozzá sorrendben 0,1 mm olöL pH=10,12-t a száraz és beosztásos kémcsőbe, 3.0 ml karbonát puffert, 3.0 ml vizet, és 0,5mL különböző koncentrációjú poliszacharid mintaoldatot, és 30 fokos vízfürdőbe helyezzük előmelegítésre 5 percre. Adjunk hozzá 1.0mL 2.0mm olöL 30 fokos vízfürdőben előmelegített dopamint, azonnal keverjük össze, tartsuk a reakcióelegyet 30 fokon 5 percig, majd azonnal állítsa le a reakciót 2 csepp 10 mól sósavval. Használjon puffert referenciaként, mérje meg az abszorbanciát 221 nm-en (A minta), a vakcsoport a mintát 0,5 ml vízzel (A vakpróba), a kontrollcsoport pedig 0,5 ml aszkorbinsavval helyettesíti. Minden mintát 3-szor párhuzamosan tesztelnek, és az átlagértéket veszik. O szuperoxid gyökfogó ráta ( százalék )=(Egy vak-A minta) öA vak × 100 százalék .

Kísérlet a Cistanche poliszacharid ·OH szabad gyökön való megkötő képességére vonatkozóan

Az EDTA 2Fe (Ê) 2 metilénkék 2H 2O 2 rendszert használtuk aCisztanche poliszacharida hidroxil-szabad gyökök megkötésére. Az elv az, hogy az ED TA 2Fe(Ê) és a hidrogén-peroxid közötti Feton-szerű reakció ·OH gyököket hoz létre, ami csökkenti a metilénkék oldat jellemző abszorpciós csúcsát 660 nm-en. 10ml-es dugós kémcsövek sorozatába adjunk hozzá 5 mm-es oLöL FeSO 4-oldatot 1.{{20}}mL, 5 mm-es oLöL EDTA oldat 1,2mL, 0.{101} {29}}3 mol N aH 2 PO 4 2N a2H PO 4 (pH=7.4) pufferoldat 2,0 ml, 20 mm olöL hidrogén-peroxid oldat 1,3 ml, rázás után adjunk hozzá 0,2 mm olöL metilént 0,7 ml kék oldatot, majd adjunk hozzá különböző koncentrációjú tesztoldatot, 1,0 ml C-vitamint, és hígítsuk fel vízzel 10-re. 00mL keverés után inkubáljuk 37 fokon 30 percig, majd mérjük meg az egyes oldatok abszorbanciáját. 660 nm-en, és cserélje ki a mintaoldatot vízzel a vakcsoportban. Minden mintát 3-szor párhuzamosan teszteltünk, és az átlagértéket vettük. A minta OH gyökfogó sebessége ( százalék )=[(A 2-A 1) ö(A 0-A 1) × 100 százalék . A képletben: A sértetlen cső 0 - abszorbancia értéke; A sérült cső 1 - abszorbancia értéke; 2 - abszorbancia érték a minta hozzáadása után.

Kísérlet a Cistanche poliszacharid D PPH szabad gyökön megkötő képességéről

Vegyünk {{0}},1 ml Cistanche deserticola poliszacharid oldatot, és adjuk hozzá 50 ml D PPH · oldathoz, gyorsan keverjük össze, és 10 perc szobahőmérsékleten való állás után a abszorbancia változást mérünk 517 nm hullámhosszon [4]. Minden mintát 3-szor párhuzamosan teszteltünk, és az átlagértéket vettük. A minta kiürülési aránya D PPH · ( ​​százalék )=1- [(AB) öA 0] × 100 százalék.

A képletben: A 0 - D PPH abszorbancia értéke minta hozzáadása nélkül (1,9 ml D PPH plusz 0,1 ml 50 százalékos etanol); A - abszorbancia érték a minta és a D PPH közötti reakció után; B - vak A minta abszorbancia értéke (minta 0,1 ml plusz 1,9 ml 50 százalékos etanol).

Cistanche poliszacharid befogó szingulett oxigén 1O 2 teszt

A szingulett oxigén (1O 2) NaClO és H 2O 2 kémiai reakciója során keletkezik 37 fokon [5]. Az 1O 2 meghatározásához használt oldat: 100L 2.8mm olöL NaClO oldat, 400L 5mm olöL NaOH oldat, 300L 10mm olöL H 2O 2 oldat, 50L 1mm olöL Luminol oldat. A reakció során a reakcióoldatot hozzáadják a mintaoldathoz, és a kemilumineszcencia analizátor egyidejűleg automatikusan rögzíti a reakció folyamatát. Vegyünk NaClO 2H 2O 2 2N NaOH 2 Luminolt vakkontrollnak. Indítsa el a reakciót, és a program által beállított mennyiségben töltse a reakcióoldatot a kemilumineszcens műszer tartályából a mintacsőbe. Ezt követően a reakcióelegy kemilumineszcencia intenzitását 5 másodpercenként rögzítettük a felvevőpapíron, és minden mintát 3-szor párhuzamosan mértünk, és az átlagértéket vettük. A fényerősség kiszámítása a következő képlet szerint történik: clearance rate ( százalék )=(ellenőrző fényintenzitás-minta fényerősség) ö szabályozási fényerősség × 100 százalék 3.

A cisztanche poliszacharidok megkötő hatása a szuperoxid szabad gyökökre

A szuperoxid szabad gyökök kémiai természete aktív, ami miatt a biofilm zsírsavai peroxidokat termelhetnek, ami viszont elpusztítja a sejteket [6]. Ebben a cikkben a dopamin módszert alkalmaztuk a szuperoxid szabad gyökök megkötő képességének meghatározására. Lásd az 1. ábráta Cistanche megkötő képessége a szuperoxid szabad gyökök ellen.Az eredmények azt mutatták, hogy:A Cistanche poliszacharidok gátolhatják a szuperoxid szabad gyököketa dopamin autooxidációjával, és a mért koncentráció tartományon belül (0-8m gömL) a koncentráció növekedésével növekszik, de a megkötő képessége kisebb, mint az aszkorbinsavé.

Cisztanche poliszacharid OH szuperoxid szabad gyök fogó hatása

Az OH szuperoxid gyök az egyik legaktívabb oxigén szabad gyök az aktív oxigénben. Élő sejtekben szinte bármilyen biológiai makromolekulával reagálhat, ami a testszövetek lipidperoxidációjához, fehérje polimerizációjához és depolimerizációjához, nukleinsav fragmentálódáshoz stb. felgyorsítja a szervezet öregedését [7]. A 2. ábra a cisztanche poliszacharidok OH-szuperoxid szabad gyökök megkötő képességét mutatja. A kísérleti eredmények azt mutatjáka Cistanche poliszacharidja jó tisztító hatással van az ·OH-raszabad radikálisok,és a koncentráció növekedésével növekszik.

A Cistanche cistanche poliszacharid megkötő képessége a D PPH szabad gyökökkel szemben

D A PPH gyök (difenil-keserű hidrazino gyök) egy stabil szabad gyök, amely szerves oldószerekben lila színű, és 517 nm közelében erős abszorpcióval rendelkezik. Az antioxidánsok hozzáadása után a szabad gyökök egy része kiürül és a felszívódás gyengül, amivel értékelhető az anyag antioxidáns aktivitása [8]. A Cistanche poliszacharidok megkötő képessége D PPH szabadgyökökön a 3. ábrán látható. A kísérleti eredmények azt mutatják, hogy a Cistanche deserticola poliszacharid D PPH szabad gyökök megkötő képessége pozitívan korrelál koncentrációjával, és a megkötő képessége nagyobb, mint a D PPH szabad gyökök megkötő képessége. C-vitamin.

A cistanche poliszacharidok megkötő képessége 1O 2 szabad gyökökön

A szingulett oxigén aktív kémiai tulajdonságokkal rendelkező gerjesztett molekuláris oxigén. Mivel a párosítatlan elektronok hajlamosak a párosításra, a szabad gyökök aktívabb kémiai tulajdonságokat mutatnak [9]. A 4. ábra a Cistanche deserticola poliszacharid 1O 2 szabad gyökök megkötő képességét mutatja. A kísérleti eredmények azt mutatják, hogy a képesség aCisztanche poliszacharidokszingulett oxigén eltávolítása alacsonyabb, mint az aszkorbinsavé a {{0}}.0m gömL tartományban. Ha a koncentráció nagyobb, mint 4,0 m gömL, a Cistanche cistanche poliszacharidok eltávolítási képessége nagyobb, mint az aszkorbinsavé.

Összegzésként: Különböző reaktív oxigén-szabadgyök rendszereken keresztül részletesen tanulmányozták a Cistanche poliszacharid in vitro antioxidáns hatását. A kísérleti eredményekből látható, hogy a vizsgálati koncentráció tartományon belül a Cistanche poliszacharid kivonat a szuperoxid szabad gyökök O, OH szuperoxid szabad gyökök, D PPH szabad gyökök és 1 O 2 szabad gyökök megkötő hatása. A hatások nem egyformák. Az eredmények azt mutatták, hogy a Cistanche poliszacharid hatékony exogén természetes antioxidáns, amely további kutatásra, fejlesztésre és átfogó hasznosításra érdemes.

hivatkozások

[1] Ling Guanting. Antioxidáns élelmiszer és egészség [M]. Peking: Chemical Industry Press, 2004. 1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei stb. Cistanche deserticola poliszacharidok lúgos extrakciója és kémiai elemzése[J]. Agriculture Food Science and Technology, 2008, 2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. A dopamin autooxidációja[J]. Journal of Hebei Normal University, 1997, 21(4): 387-389.

[4] Zhang Zhiqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Tanulmány a radix poliszacharidok antioxidáns aktivitásáról[J]. Kínai Materia Medica, 2008, 31(2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Chunsheng. Tanulmány a Pleurotus ostreatusból származó poliszacharidok antioxidáns aktivitásáról [J]. Élelmiszerkutatás és -fejlesztés, 2008, 29(4): 56-60.

[6] Mo Jian. Bevezetés az orvosi szabadgyökök biológiájába [M]. Peking: People's Medical Publishing House, 1989. 21-25.

[7] F Frederick V L. Szabad gyökök [J ]. Clinical Chemistry, 65 (12): 374-377 (1993).

[8] M at suda M, N agaham a Y, Sato T et a l. A DM Y egy specifikus DM domén gén, amely szükséges a hímek fejlődéséhez a medaka halban [J ]. Természet, 2002, 30: 559—563.

[9] Kanofsky J R. Singlet Oxygen Production by L aktoperoxidáz[J]. Journal of Biological Chemistry, 1983, 258 (10): 5991-5993.