Az oldható gyöngykivonat hatékonyan világosítja a bőrt az endotelin antagonizálásával

Kapcsolatba lépni:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Jing Wang MD1|Zhixiong Chen MSc2|Yaojia Lu BSc2|Lihua Zhang BSc3|Jiahuan Mo BSc2|Fumin Cao BSc2|Min Xie BSc3|Xinzhong Shen BSc3|Anquan Yang BSc3

Absztrakt

Háttér:A bőr pigmentációs rendellenességeinek előfordulása világszerte növekszik. Ez biztonságosabb és hatékonyabb helyi bőrvilágosító és szeplőt eltávolító termékeket igényel. Ebben a tanulmányban azt feltételeztükOldható gyöngy kivonat(SPE) endotelintantagonizáló vegyületekkel rendelkezhet, jó bőrrelfehérítéshatások.

Célok: (a) Meghatározni a hatását és mechanizmusaitSPEET{0}}kezelt B16 melanomasejteken. (b) Az SPE citotoxikus hatásainak feltárása B16 melanoma sejtekre.

Mód:CCK-8 vizsgálatot végeztünk annak meghatározására, hogy az SPE és az ET-1 hogyan befolyásolja a B16 melanoma sejtek proliferációs sebességét, a NaOH lízis vizsgálatot a melanintartalom mennyiségi meghatározására, míg a tirozináz aktivitást DOPA oxidációval határoztuk meg. teszt. A TYR és a TRP-1 mRNS és fehérje expressziós szintjét qRT-PCR, illetve Western blot assay-vel határoztuk meg.

Eredmények:Azt találtukSPE0,1 és 1 ug/mL koncentrációban nincs hatással a sejtek proliferációjára, és 10 nmol/L ET-1 elősegítette a B16 melanomasejtek proliferációját. Nevezetesen, a 10 nmol/L ET-1-mal kezelt B16 melanomasejtek szignifikánsan magasabb melaninszintézist, tirozinázaktivitást, TYR- és TRP-1-mRNS-expressziót mutattak a kezeletlen sejtekhez képest. Megjegyzendő, hogy a 10 nmol/L ET{11}}-kezelés hatásait az SPE dózisfüggő módon megszüntette.

Következtetések:Az SPE gátolja az endotelint, ezáltal biztonságosan és hatékonyan világosítja a bőrt az endotelint antagonizálva. Ezenkívül az SPE biztonságos és hatékony.

KULCSSZAVAK:B16 melanomasejtek, endotelin-1, oldható gyöngykivonat,fehérítés

Cistanche herbabőrfehérítő összetevő.

1|BEVEZETÉS

Az elmúlt években újabb és hatékonyabb bőrfehérítéskülső használatra szánt kozmetikumok kerültek forgalomba. Ez a gazdasági fejlődésnek és a változó életmódbeli szükségleteknek tudható be minden generációban. A jelenleg használt bőrfehérítésA szerek közé tartozik a hidrokinon, a kojsav, a foszfolipáz D1, a placenta és az A-vitamin. A bőr pigmentációs rendellenességei főként a melanin termelésével járnak. A tirozinnak a tirozináz által katalizált dopává történő átalakulása által elindított folyamat során szintetizálódik. A dopa komplex biokémiai reakciók sorozatát indítja el, amelyek a melanin szintéziséhez vezetnek. A dihidrospárga icsav,1 hidrokinon és kojinsav fehérítő mechanizmusa a tirozináz aktivitás gátlását foglalja magában, amely a melaninszintézis sebességkorlátozó enzimje.2 Ilyenkor ezek a szerek csökkentik a melanin termelődését, ami a bőr fehéredését eredményezi. 3 Ezzel szemben a foszfolipáz D1, a placenta és a retinsav a tirozináz szintézisének csökkentésével hatnak.4 Noha ezek a szerek bizonyos mértékű bőrfehérítést érnek el, fehéredési mechanizmusaik nem egyértelműek. Ezenkívül mérgezőek, és hosszabb ideig tartanak a bőrfehérítéshez.

Ezért elengedhetetlen a biztonságosabb és hatékonyabb bőr megtalálásafehérítésügynökök. A bőrfehérítéssel kapcsolatos kutatások nagy hangsúlyt fektettek a citokinek és a melanociták közötti kölcsönhatásra, mint a hatékony bőrfehérítő szerek kifejlesztésére. A keratinociták citokineket, például endotelint (ET) választanak ki, amikor ultraibolya sugárzásnak vannak kitéve. Ezek a citokinek befolyásolják a melanociták migrációját, a dendritfejlődést és a melanintermelést.5 Mint ilyen, e citokinek hatásterületeinek antagonizálása fehérebb bőrt eredményez.6 Shi és munkatársai (2011) arról számoltak be, hogy a resveratrol, egy új endotelin antagonista fehéríti a bőrt. 7 Yang és munkatársai (2000) azt találták, hogy a resveratrol a melanociták membránját célozza meg. Ez azt jelenti, hogy csak a melanocita membránon és a melanoszóma membránon halad át, hogy elérje azokat a helyeket, ahol gátolja a melanintermelést.8 A tirozináz a melanoszómában található, így inhibitorainak négy rétegen kell áthaladniuk (a stratum corneum, a mély epidermisz, a melanocyta membrán és a melanoszóma membrán) blokkolja a hatását.9 A rezveratrol csak két réteget (a stratum corneumot és a mély epidermiszt) halad át, hogy gátolja a tirozináz aktivitást.10 Ez lerövidíti a fehéredés időtartamát.

Harley (1993) megállapította, hogy a skót édesvízben, az ausztrál és a srí lankai tengervízben található gyöngyök hasonló kémiai összetételűek, azaz kalcium-karbonát 91,72 százalék, szerves anyag 5,94 százalék, víz 2,23 százalék és egyéb anyagok, {{ 7}},11 százalék .11 Zhang és munkatársai (2018) máshol azt találták, hogy a gyöngykivonatok jelentős antioxidáns hatást fejtenek ki in vitro.12,13 Yang és munkatársai (2016) azt találták, hogy a gyöngykivonatok gátolhatják a tirozináz aktivitást a B16F10 sejtekben, ezáltal csökkentve a melanin termelése.14 Ez azt jelezte, hogy a gyöngykivonat bőrrel rendelkezhetfehérítéshatását, de a mechanizmust nem vizsgálták. Itt azt feltételeztükSPEantagonizálja az endotelint, megváltoztatva a melanin szintézisét és a B16 melanoma sejtek tirozináz aktivitását. Eredményeink azt mutatják, hogy az oldható gyöngykivonatok antagonizálják az endotelint, ami bőrfehérítést okoz.

2|ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

2.1|Oldható gyöngykivonat (SPE) előállítása és összetételének elemzése

A gyöngyport tejsavban feloldottuk, és az elegy pH-ját PBS-sel 7.{1}} értékre állítottuk. Az enzimes hidrolízist proteáz hozzáadásával indítottuk el, és az extraktumot 10 μm-es kvalitatív szűrőpapírral szűrtük. A felülúszót megkaptuk és liofilizáltuk, így oldható gyöngykivonatot kaptunk.

2.2|A liofilizált por összetételének elemzése

Röviden a nedvességtartalma aSPEatmoszférikus szárítási módszerrel mértük. Meghatározott mennyiségű mintát szárítószekrényben 95-105 fokon melegítettünk 3 órán át, és lemértük. A mintákat többször megszárítottuk, hogy tömegállandóságot kapjunk. A nedvességtartalmat a melegítés előtti és utáni tömegkülönbségként határoztuk meg. A minta elégetett, aminek következtében egy szervetlen anyag, az úgynevezett hamu képződik. A hamu minőségének mérésére az égető mérési módszert alkalmaztuk, melyben az égetés előtti és utáni minőségkülönbséget vettük hamutartalomnak. Az SPE fehérjetartalmának meghatározására Kjeldahl módszert alkalmaztunk. A peptidtartalmat a korábban leírtak szerint becsültük meg.15 A poliszacharidok tartalmát antranon-kénsav módszerrel határoztuk meg.

cistanchekivonat

2,3|Sejttenyésztés

A rágcsáló B16 melanoma sejteket (a Kínai Tudományos Akadémia Stem Cell Bankja jóvoltából) 1 0% magzati szarvasmarha szérumot és 1% penicillint/sztreptomicint tartalmazó Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) táptalajban tenyésztettük inkubátorban (BB150 Thermo). Fisher Scientific) 37 fokra és 5 százalékos CO2-ra állítva. 3 napos tenyésztés után a sejtek majdnem összeolvadt állapotban voltak, és lényegében az egész edényben elterjedtek. A sejteket foszfátpuffer sóoldattal (PBS) mostuk, és 0,25% tripszinnel történő emésztéssel passzáltuk. A sejteket sejtszámláló lemezzel és megfelelő koncentrációban készített sejtszuszpenziókkal számoltuk meg. A sejtszuszpenziókat sejtinkubátorban tenyésztettük a további kísérletekhez

2,4|Sejtproliferáció kimutatása SPE és ET-1 kezelés után CCK-8 vizsgálattal

A logaritmikus növekedési fázisban lévő sejteket {{0}}lyukú lemezeken tenyésztettük 1 × 104 sejt/ml koncentrációban 37 fokos és 5 százalékos CO2-tartalmú inkubátorban 24 órán keresztül. . Ezután különböző koncentrációjú SPE-t ({{10}}, 0,01, 0,1, 1 és 10 ug/ml) adtunk a lyukakba, és 24 órán át állni hagytuk. 10 százalék Cell Counting Kit-8 (CCK-8) reagenst (Jian Cheng Bioengineering Co.) adtunk minden egyes lyukhoz a sejtek proliferációs sebességének mérésére. Mindegyik lyuk abszorbanciáját 490 nm hullámhosszon olvastuk le mikrolemez-leolvasóval. Mindegyik csoportot három ismétlésben teszteltük. Az ET-1 (0,1, 1, 10 és 100 nmoL) sejtproliferációra gyakorolt ​​hatását ugyanezen protokoll szerint értékeltük. A sejteket ezután három csoportra osztottuk: a kontrollcsoportra (nem kapott kezelést), az ET-1 csoportra (a sejteket 10 nmoL ET-1-el kezeltük 24 órán keresztül), és aSPEcsoport (a sejteket 24 órán keresztül 10 nmoL ET-1-el, majd 24 órán át 0,1, 1 ug/ml SPE-vel kezeltük).

cistanche tubulosatirozináz inhibitor

2,5|Tirozináz aktivitás teszt

10 μl sejtet (különbözően kezelve) oltottunk be egy 96-lyuklemez minden lyukába (5-10) × 104 sejt/ml sejtsűrűséggel, és 100 µl táptalajt adtunk mindegyik kutat. A sejteket ezután előtenyésztettük egy inkubátorban, amelyet 37 °C-ra és 5% CO2-ra állítottak be 24 órán át. A lemezeket percenként 2000 fordulattal centrifugáltuk 2 percig, és a felülúszót elöntöttük. A sejteket háromszor mostuk PBS-sel, és 50 μl 1%-os Triton X{14}} oldatot (Jian Cheng Bioengineering Co.) adtunk minden egyes lyukba. A sejteket azonnal –80 fokon 30 percig tároltuk, majd szobahőmérsékleten felengedtük, hogy a sejtek teljesen felszakadjanak. A sejteket ezután 5 percig 37 fokra előmelegítettük, és 10 μl 1%-os L-DOPA oldatot adtunk hozzá. A sejteket 37 °C-on 2 órán át állni hagytuk, és a lemez abszorbanciáját 490 nm hullámhosszon mértük mikrolemez-leolvasóval.

2,6|Melanin tartalom teszt

A sejteket {{0}}lyukas lemezeken tenyésztettük (5-10) × 104/lyuk sűrűséggel. Mindegyik lyuk 2 ml táptalajt tartalmazott. A sejteket 24 órán át inkubáltuk egy inkubátorban, amelyet 37 fokos hőmérsékletre és 5% CO2-ra állítottak be. A felülúszót eldobtuk, és a melanocitákat 0,25%-os tripszinnel kezeltük 3 percig. Ezt követően 2 ml 10% FBS-t tartalmazó DMEM tápközeget adtunk a reakció leállítására. A melanocitákat 15 ml-es centrifugacsőbe gyűjtöttük, percenként 1000 fordulattal centrifugáltuk 5 percig, és a felülúszót elöntöttük. A melanocitákat PBS-sel mostuk és 500 μl etanol/éter oldatot tartalmazó kémcsövekbe helyeztük, 1:1 arányban elkeverve, majd rázatással jól összekevertük. Az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig állni hagyjuk, majd 3000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk 5 percig. A felülúszót eldobtuk, és 300 μl 1 N NaOH-t (10% DMSO-t tartalmazó) adtunk a sejtekhez. Ezt az elegyet 80 fokos vízfürdőben hagyjuk 40 percig reagálni, hogy a melanin teljesen feloldódjon. Ezután 200 μl oldott melanint vittünk át egy 96-lyukú lemezre, és az abszorbanciát 405 nm-es hullámhosszon mértük mikrolemez-leolvasóval.

2,7|Kvantitatív valós idejű PCR (qRT-PCR) elemzés

A teljes RNS-t a három csoport (kontroll, ET-1 ésSPEcsoportok) az RNAiso Plus készlettel (TaKaRa Bio) és a PrimeScript™ RT reagenskészlettel (TaKaRa Bio) cDNS-re fordítottan átírva. qRT-PCR vizsgálatot végeztünk az -aktin expressziójának kimutatására minden egyes mintában. Ez a SYBR zöld festékkel történt. A felhasznált primer szekvenciák16 (TaKaRa Bio) az 1. táblázatban láthatók. A PCR körülményei a következők voltak: kezdeti denaturációs hőmérséklet 95 °C-ra 30 másodpercre, 40 denaturációs ciklus, 95 °C-ra 5 másodpercre és 60 °C-ra 34 °C-ra beállított hőkezelési hőmérséklet. másodperc, ill. Ezt StepOne plusz valós idejű PCR rendszerben (Applied Biosystems) hajtottuk végre. A qRT-PCR eredményeket elemeztük és relatív mRNS expresszióként fejeztük ki a CT (threshold cycle) értékek alapján, amelyeket később fold-változásokká alakítottunk át.

2,8|Western blot analízis

Az összes fehérjét a sejtekből Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) alkalmazásával extraháltuk. A fehérjekivonatok koncentrációját a Bicinchoninic Acid Assay Kit (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) segítségével határoztuk meg. A fehérjéket ezután nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel (SDS-PAGE) választottuk el, és a kapott sávokat elektroforetikusan vittük át polivinilidén-fluorid (PVDF) membránra. A membránt ezután 5 százalék sovány tejporral blokkoltuk, és TYR, TRP-1 és -aktin (Santa Cruz Biotechnology) elleni antitestekkel inkubáltuk 4 fokon 24 órán keresztül. Ezután a membránt a másodlagos antitesttel (Goat Anti-Mouse IgG Abmart) inkubáltuk 1 órán át szobahőmérsékleten. A fehérjesávokat fokozott kemilumineszcenciával (ECL) detektáltuk (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). A csík letapogató analízist Image J elemző rendszerrel végeztük. - Az aktint használták belső referenciaként a fehérjeexpresszió elemzésében. A mintákat független ismétlésként, háromszor megismételtük minden csoportban.

2,9|Statisztikai analízis

A statisztikai elemzéseket GraphPad prism8 szoftverrel végeztük. A csoportok közötti különbségeket egytényezős varianciaanalízissel (ANOVA) hasonlítottuk össze, és az eredményeket átlag ± SD P formában mutatjuk be.<.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche eladó: a cistanche egy fehérítő szérum

3|EREDMÉNYEK

3.1|Az SPE összetételi elemzése

A kémiai jellemzés azt mutattaSPEnedvességtartalma 6.03 ± 0,16 százalék, hamutartalma 1,55 ± {0}},11 százalék, peptidtartalma 7,52 ± {{16 }}.03 százalék , fehérjetartalom 54,12 ± 0,18 százalék , poliszacharid tartalom 0,09 ± 0,005 százalék . Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a fehérjék az SPE szerves anyagában voltak a legnagyobb mennyiségben.

3.2|Az SPE hatása a B16 melanoma sejtek proliferációjára

Miután a B16 melanoma sejteket különböző koncentrációjú (0, 0.01, 0.1, 1 és 10 ug/ml) SPE-vel kezeltük 24 percig órával a sejtproliferációt a CCK-8 vizsgálattal értékelték (1A. ábra). Azt találtuk, hogy a 0,01 ug/ml SPE-vel kezelt B16 melanoma sejtek proliferációja magasabb volt, mint a vak csoportban (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">SPEhasználták a következő kísérletekben. Biztonsági megfontolások alapján, mint természetes összetevőjefehérítéskozmetikumok, az SPE nem toxikus a sejtekre ebben a két koncentrációban; így bizonyos mértékig biztonságos.

3,3|Az ET-1 hatása a B16 melanoma sejtproliferációra

A B16 melanoma sejteket különböző koncentrációjú ET-1-el kezeltük 24 órán keresztül, és a sejtek proliferációját CCK-8 vizsgálattal értékeltük. A B16 melanomasejtek kezelése 0,1, 1 és 10 nmol/L ET-1-mal koncentrációfüggő módon elősegítette a proliferációt 10 nmol/L ET{{12} mellett. } a legmagasabb proliferációs rátát produkálja (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">

3.4|Az SPE gátolja a tirozináz aktivitást a B16 melanoma sejtekben

A gátló mechanizmus további feltárásáraSPEA melanin szintézisével kapcsolatban elemeztük annak hatását a melanin szintézis folyamatában a sebesség-korlátozó enzimre (tirozináz). A sejtekben a tirozináz aktivitását L-dopa oxidációs módszerrel detektáltuk. Az 10 nmol/L ET-1-mal kezelt B16 melanomasejtek szignifikánsan magasabb intracelluláris tirozináz aktivitást mutattak a kezeletlen sejtekhez képest (P < 0,01).="" azonban="" a="" tirozináz="" aktivitás="" a="" 0,1="" ug/ml="" és="" 1="" ug/ml="" spe="" kezeléssel="" kezelt="" sejtekben="" alacsonyabb="" volt,="" mint="" a="" kezeletlen="" sejtekben="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01).="" ezek="" az="" eredmények="" azt="" mutatják,="" hogy="" az="" spe="" koncentrációfüggő="" módon="" gátolta="" a="" tirozináz="" aktivitást="" (2a.="">

3,5|Az SPE gátolja a melanin szintézist a B16 melanoma sejtekben

Azt is megvizsgáltuk, hogy az SPE B16 melanomasejtek melanintermelésére gyakorolt ​​hatásait az ET-1 közvetíti-e a NaOH lízis módszerével. Az eredmények azt mutatták, hogy a B16 melanoma sejtek melanintartalma szignifikánsan megnőtt 10 nmol/L ET-1 kezelés után a kontrollcsoporthoz képest (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">SPEA melanintermelés dózisfüggő volt. Az SPE melanintartalomra és tirozináz aktivitásra gyakorolt ​​hatása hasonló volt (2B. ábra). Tekintettel arra, hogy 0,1 ug/mL és 1 ug/mL SPE nem változtatta meg a B16 melanomasejtek proliferációját, a melanintartalom csökkenése ennél a két koncentrációnál ismeretlen mechanizmusokon keresztül következhet be.

3,6|Az SPE hatása a TYR és TRP-1 mRNS-szintekre

Azt a mechanizmust, amellyel az SPE megváltoztatta az ET-1 B16 melanomasejtekre gyakorolt ​​hatását, a TYR és a TRP-1 mRNS szintjének mérésével határozták meg különböző kezelést kapott sejtekben. A TYR és a TRP-1 mRNS szintje a B16 melanoma sejtekben szignifikánsan magasabb volt (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">SPEkoncentrációfüggő módon gátolta a TYR és a TRP{0}} mRNS expressziós szintjét.

3,7|Az SPE hatása a TYR és TRP-1 fehérjeszintekre B16 melanoma sejtekben

A TYR és a TRP-1 fehérje expresszióját B16 melanoma sejtekben Western blot segítségével mutattuk ki. Magasabb TYR és TRP-1 fehérjeszinteket találtunk a 10 nmoL ET- 1-el kezelt B16 melanoma sejtekben, mint a kontrollcsoportban (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">SPE24 órán át) szignifikánsan alacsonyabb volt a TYR és a TRP fehérjeszintje-1 (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">

4|VITA

Az endotelin (ET) egy természetes bioaktív peptid, amelyet az emberi szervezetben lévő endotélsejtek szintetizálnak. Három izomerből áll: ET{{0}}, ET-2 és ET-3, amelyek három ET-receptoron keresztül jeleznek: ETA, ETB és ETC.17 Az ETA és ETB a a humán ET-rendszerben expresszálódó fő receptorok.18 Ultraibolya sugárzás B (UVB) besugárzás hatására ET szabadul fel a keratinocitákból. Amikor az ET a melanocita receptorokhoz kötődik, serkenti a DNS szintézist és növeli a tirozináz aktivitást. Ez elősegíti a melanociták gyors proliferációját és a melaninszintézist.19 Az ET-l elősegíti a melanociták proliferációját, a dendritképződést, adhéziót és a migrációt.20 Itt azt találtuk, hogy 0,1, 1, 10 és 100 nmol/L ET-1 jelentősen elősegítette a sejtproliferációt. A proliferáció 10 nmol/L ET{15}} mellett volt a legmagasabb, ami összhangban van Geng és munkatársai (2011) eredményeivel, akik azt találták, hogy az ET-1 fokozta a tenyésztett alpaka bőr melanociták proliferációját és melaninszintézisét. 21 TYR és TRP{19}} gén játszik szerepet a melanintermelésben. Valójában egy korábbi tanulmány kimutatta, hogy az endotelin -1 tirozináz aktivitásra gyakorolt ​​hatását az ETA receptorok közvetítik.22 10 nmol/L ET-1 kezelés B16 melanoma sejtekben növelte a tirozináz aktivitást és a melanin tartalmat. . A qRT-PCR eredmények azt mutatták, hogy a TYR és TRP-1 mRNS szintjei a 10 nmol/L ET-1-el kezelt sejtekben magasabbak voltak, mint a kontrollcsoportban. Ez megerősítette, hogy az ET-1 elősegítette a melanintermelést.

Továbbá,SPEgátolta az endotelin B16 melanomasejtekre gyakorolt ​​hatását. 10 ug/ml koncentrációban toxikus hatást fejtett ki, és így gátolta a B16 melanoma sejtek proliferációját. Az SPE azonban nem változtatta meg a sejtek proliferációját 0,1 és 1 ug/ml koncentrációban. Azonban {{10}.01 ug/ml koncentrációban jelentősen elősegítette a sejtproliferációt a kontrollcsoporthoz képest. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az SPE biztonságos 1 ug/ml alatti koncentrációban. Az SPE dózisfüggő módon gátolta az ET-1- által kiváltott melanintermelést 0,1 és 1 ug/ml koncentrációban. Ezenkívül a 0,1 és 1 ug/ml SPE-vel való kezelés alacsonyabb TYR és TRP{17}} mRNS szintet eredményezett a kontrollcsoporthoz képest. Ezenkívül az SPE gátló hatása koncentrációfüggő volt. A Western blot analízis az SPE hasonló hatását mutatta ki mindkét koncentrációban (0,1 és 1 ug/ml) a TYR és a TRP fehérjeszintjére{22}}.

A melanocitákban az ET{0}} a B típusú endotelinreceptor (EDNRB) receptorhoz kötődik, ami a foszfolipáz C (PLC) aktiválásához vezet.23 Ez tovább hidrolizálja a foszfatidil-inozitol-difoszfátot (PIP2) és aktiválja a protein kináz C-t (PKC), ezáltal megváltozik. az ioncsatornák permeabilitása.24 A permeabilitás változása feszültségfüggő Ca2 plusz csatornák és foszfolipáz A (PLA) aktiválásához vezet.25 Végül ez aktiválja a melaninszintézist.26 Itt az a mechanizmus, amellyel az SPE antagonizálta az ET{{-t. 8}} melanintermelés gátlását csak előzetesen vizsgálták. Mint ilyen, az EDNRB receptor expressziója, valamint a melaninszintézis egyéb vonatkozásai, mint például a PKC, PKA és KIT27 további vizsgálatokat érdemelnek.

A gyöngypor fő kémiai komponensei a kalcium-karbonát és a fehérjék, míg mások, például a porfirin és a taurin kevésbé gazdagok.28 A gyöngypor vizes kivonata főleg fehérjéket tartalmaz. A kemény keratin a vízkivonat fő fehérje. A vizes kivonat azonban kis számú nyomelemet is tartalmazhat.29A modern farmakológiai kutatások azt sugallják, hogy a gyöngy elősegítheti az emberi test anyagcseréjét, növelheti az epidermális sejtek életképességét, késlelteti a sejtek öregedését, és gátolja a melanin termelődését. valamint egyéb farmakológiai hatások, mint például a szeplők fehérítése és méregtelenítése.30 A kémiai jellemzés során kiderült, hogy a fehérjék a legnagyobb mennyiségben előforduló biomolekulák az SPE szervesanyag-tartalmában. Feltételeztük tehát, hogy aSPEis volnafehérítéshatása a B16 melanoma sejtekre. Eredményeink megerősítették ezt a hipotézist.

Ezekcistanchetabletták számárabőrfehérítés. Kérjük, kattintson a képre és tekintse meg a részleteket.

5|KÖVETKEZTETÉS ÉS KITEKINTÉS

Az ET{{0}} elősegíti a B16 melanomasejtek proliferációját és a melaninszintézist a TYR és TRP-1 jelátviteli útvonalak aktiválásával. Az SPE 0,1 és 1 ug/ml koncentrációban gátolja a melaninszintézist, ezáltal antagonizálja az ET-1 hatásait anélkül, hogy citotoxikus hatással lenne a B16 melanomasejtekre. Mint olyan,SPEpotenciális endotelin antagonista, amely biztonságos és hatékony bőrvilágosító szerként használható.

IRODALOM

1. Venditti A, Mandrone M, Serrilli M és mtsai. Dihidroaszparagusav: antioxidáns és tirozináz gátló hatások és javított szintézis. J Agric Food Chem. 2013;61(28):6848-6855.

2. Jean-Paul O. A bőr melanin fényvédő tulajdonságai. Brit J Dermatol. 2002;146(61):7-10.

3. Maeda K, Fukuda M. Számos fehérítő kozmetikai komponens invitro hatékonysága humán melanocitákban. J Soc Cosmet Chem. 1991;42(6):361-368.

4. Sato K, Morita M, Ichikawa C, Takahashi H, Toriyama M. Depigmenting mechanizmusok all-trans retinoic acid and retinol on B16 melanoma cells. J Biosci Biotech Bioch. 2014;72(10):2589-2597.

5. Ching-Shuang W, Chia-Li Y, Chieh-Shan W, Lan Cheng-Che E, Hsin-Su Y. A keskeny sávú ultraibolya-B stimulálja a tenyésztett melanociták proliferációját és migrációját. J Exp Dermatol. 2004;13(12):755-763.

6. von Koschembahr AM, Swope VB, Starner RJ, Abdel-Malek ZA. Az endotelin-1 megvédi a humán melanocitákat az UV-indukálta DNS-károsodástól azáltal, hogy aktiválja a JNK és p38 jelátviteli útvonalakat. J Exp Dermatol. 2015;24(4):269-274.

7. Shi XM, Yan ZM, Xie JH, Zhou HF, He HX, Duan MX. Előzetes kutatás a resveratrol fehérítő hatásáról. J Flavor Fragrance Cosmetics. 2011;10(05):37-39.

8. Yang LC, Wang F, Liu M és társai. A Cissus assamica anti-endotelin-1 hatásai. Chinese New Drugs J. 2000;12(07):455-458.

9. Serre C, Busuttil V, Botto JM. Az emberi bőr melanogenezisének és pigmentációjának belső és külső szabályozása. Int. J. Cosmet Sci. 2018;40(4):328-347.

10. Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. A Kojic sav, egy kozmetikai bőrfehérítő szer, a tirozináz katekoláz aktivitásának lassan kötődő inhibitora. J Pharm Pharmaco. 1994;46(12):982-985.

11. Kun GF, Stevenson CH. A gyöngy könyve. New York: Dover Publications; 1993:13-125.

12. Zhang LH, Shen YQ, Yang AQ, Mo JH, Chen ZX, Wang J. A gyöngykivonat liofilizált porának in vitro antioxidáns aktivitásának vizsgálata. J Flav Frag Cosm. 2018;13(04):26-29.

13. Yang YL, Chang CH, Huang CC, Liu HW. A gyöngykivonat gél gyulladás- és apoptózis-ellenes hatása UVB besugárzású HaCaT sejteken. J Biomed Mater. 2015; 26 (1. melléklet): S139-S145.

14. Yang AQ, Wang J, Zhang LH, Mo JH, Chen ZX, Shen YQ. A gyöngykivonat fényhatása a melanocitákra in vitro. J Pharma Biotechnol. 2016;23(2):146-149.

15. Lu W, Ren GP, ​​Song JM. Peptezin fehérje hidrolizátumok tartalmának meghatározása. J Food Sci. 2005;12(07):169-171.

16. Chia-Hua L. Ov-16 [4-(3,4-dihidroxibenzoiloximetil)fenil-O- -D-glükopiranozid] gátolja a melaninszintézist a melanogenezis expressziójának szabályozásával. szabályozott gén és fehérje. J Exp Dermatol. 2011;20(9):743-748.

17. Yanagisawa M, Kurihara H, Kimura S és mtsai. Új, erős érszűkület vagy peptid, amelyet vaszkuláris endotélsejtek termelnek. J Természet. 1988;332:411-415.

18. Hou L, Pavan WJ, Shin MK et al. Sejt-autonóm és sejt nem autonóm jelátvitel az endotelin receptor B-n keresztül a melanociták fejlődése során. J Fejlesztés. 2004;131(14):3239-3247.

19. Imokawa G, Yada Y, Miyagishi M. A humán keratinocitákból szekretált endotelinek belső mitogének a humán melanociták számára. J Biol Chem. 1992;267(34):24675-24680.

20. Tada A, Suzuki I, Im S et al. Az endotelin-1 egy parakrin növekedési faktor, amely modulálja az emberi melanociták melanogenezisét, és részt vesz az ultraibolya sugárzásra adott válaszaikban. J sejtnövekedési különbség. 1998;9(7):575-584.

21. Geng JJ, Zhang J, Mu XL és mtsai. Az ET-1 hatása az alpaka bőr melanocitáinak proliferációjára és melaninszintézisére in vitro. Kínai J Animal Veter Sci. 2011;42(07):932-938.

22. Monji A, Inoue H, Oshima H, et al. Tirozináz indukció és inaktiválás normál tenyésztett humán melanocitákban endotelin által-1. J Int J Tissue React. 2005;27(2):41-49.

23. Takeshi S, Masashi Y, Tomoh M. Endothelin receptorok molekuláris jellemzése. J Tippek. 1992;13(3):103-108.

24. Georgia K, Ali B, Bou DG, Srivastava AK. A nitrogén-oxid/cGMP rendszer moduláló szerepe az endotelin-1-indukált jelátviteli válaszokban vaszkuláris simaizomsejtekben. J Curr Cardiol Rev. 2010;6(4):247-254.

25. Sp H, Angela C. Endothelin jelátvitel a szívizomsejtekben és patofiziológiai jelentősége. J Curr Vasc Pharmacol. 2005;3(4):343-351.

26. Clouthier DE, Hosoda K, Richardson JA et al. Koponya- és szív idegi gerinchibái endotelin-A receptor hiányos egerekben. J Fejlesztés. 1998;125(5):813-824.

27. Imokawa G, Yada Y, Kimura M és mtsai. Az endotelin által kiváltott mitogenezis és melanogenezis jelzőmechanizmusai humán melanocitákban. Biochem J. 1996, 314 (Pt 1):305-312.

28. Zhang C, Xie LP, Huang J és mtsai. Egy új mátrixfehérje család, amely részt vesz a gyöngy osztriga prizmatikus rétegvázának kialakításában. Pinctada fucata. Biochem Bioph Res Co. 2006;344(3):735-740.

29. Wu WL, Zhang LP, Yang ZJ és mtsai. Összetevők és ultrastruktúra a körte képződésével. J Mater Rep. 2011;025(021):79-85.

30. Shao DZ, Wang CK, Wang HJ és társai. Absztraktok: a hidratáció, a tirozináz rezisztencia és az antioxidáns aktiválás összehasonlítása háromféle gyöngyporban. Int. J. Cosmet Sci. 2010;32(5):396.