Tanulmány a Rouchongrongból (Cistanche Deserticola) származó fenil-etanol-glikozidok kivonatának a lipidanyagcserére gyakorolt ​​javító hatásairól az ApoE májában - / - Magas zsírtartalmú egerek az ACOX1 - CPT2 expressziójának szabályozása alapján

ABSZTRAKT Cél:Feltárni aA fenil-etanol-glikozidok kivonatának hatásaitól tőlCistanche deserticola(PGCD) az ApoE- / - egerek májában a lipidek metabolizmusára, amelyet magas zsírtartalmú étrend indukált. Módszerek: 70 hím ApoE- / - magas zsírtartalmú étrenddel táplált egeret 5 csoportra osztottak, modell (MOD) csoport, pozitív kontroll csoport az egerek Atorvastatin [20 mg / (kg·d)] + Ezetimibe [20 mg / (kg) ·d)](A + E), PGCD alacsony, közepes és magas dózisú csoportokat adtak megPGCD[250, 500, 1000 mg/( kg·d)]; további 14 hím C57BL/6J egeret achow diétával állítottunk be normál kontroll (CON) csoportként. A 12. hétvégén a kezelési utasítás szerint kimutattuk a TG tartalmát, valamint az ALT és AST aktivitását a szérumban és a májszövetben. A friss májszövetet homogenizáltuk, és a zsírsav-szintáz (FAS), a hosszú láncú acil-CoA-dehidrogenáz (LCAD) és a glutation-peroxidáz (GSH-Px) tartalma,szuperoxid-diszmutáz (SOD)Az aktivitásokat ELISA módszerrel teszteltük, míg a malondialdehid (MDA) és lipid peroxid (LPO) tartalmát kidmetódusokkal detektáltuk. Az acil-koenzim A oxidáz 1 (ACOX1) és a karnitin-palmitoiltranszferáz 2 (CPT2) mRNS expresszióját RT-PCR kísérletekkel detektáltuk.

KATTINTSON IDE, HOGY 80%-ot megtudhatFENILETANOID GLIKOZIDOKTERMÉSZETES SZERVES CISTANCHE KIVONAT

A Wecistanche támogató szolgáltatása – a legnagyobb kínai exportőr:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

Vásároljon további specifikációkért:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Eredmények:A modellcsoporttal ellentétbena három dózisú PGCD mind csökkentette a TG szintjéta májban és a szérumban dózisfüggő módon, és csökkentette az ALT és AST aktivitását a szérumban. A három dózisú PGCD dózisfüggő módon csökkentette a FAS-tartalmat, és jelentősen megemelte a máj LCAD-tartalmát.PGCD előléptetetta GSH - Px és a SOD és a SOD aktivitása jelentősen csökkentette az MDA és LPO tartalmát a májban. Az RT-PCR kísérletek kimutatták, hogy a PGCD megemelte az ACOX1 és CPT2 mRNS szintjét a májszövetben.

Következtetés:A PGCD javíthatja a lipid metabolizmust és az oxidatív stresszre adott választ, és csökkentheti a lipid lerakódását a májszövetben az ACOX1 és CPT2 mRNS expressziójának szabályozásával.

Kulcsszavak:Cistanche deserticola fenil-etanoid-glikozidok kivonata; ACOX1; CPT2;lipid anyagcsere;oxidatív stressz; ApoE- / - egerek

Nem alkoholos zsírmáj betegség(NAFLD) az egyik legelterjedtebb májbetegség a világon, prevalenciája a teljes népességben közel 30%. A zsírmájbetegség Kínában éves szinten 0,594%-kal nő [1]. A NAFLD előfordulása és kialakulása szorosan összefügg a szervezet túlzott kalóriabevitelével. A magas zsírtartalmú étrend túlzott zsírfelhalmozódáshoz vezet a májban, és NAFLD-t indukál[2], és patogenezisének kezdeti lépése a triacilglicerin (TG) lerakódása a májsejtekben[2] 3]. A mai napig nincs olyan specifikus terápiás gyógyszer, amely a NAFLD patogenezisét célozná. A biztonságos, hatékony gyógyszerek megtalálása egyértelmű mechanizmusokkal a NAFLD megelőzésére és kezelésére a kutatók fontos feladatává vált. A Cistanche deserticola YC Ma az Orobanchaceae családba tartozó Cistanche nemzetségbe tartozó parazita növény. Fő összetevője, a fenil-etanoid-glikozidok a szervezet immunműködését fokozó, öregedésgátló, sugárzásgátló, antioxidáns és májvédő, valamint egyéb hatásokat fejtenek ki[4-5]. Ez a tanulmány egy előzetes tanulmányt kíván végezni a mechanizmusrólA Cistanche deserticolából származó fenil-etanol glikozidok(PGCD) a lipidanyagcsere javításában.

1 Kísérleti anyagok

1.1 Kísérleti gyógyszerek

A Cistanche deserticola húsos szárát (nedvességtartalom 8,5%) a Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.-től vásároltuk; a fenil-etanol-glikozidokat (fő komponensek verbaszkozid és echinaceasid) (mindkettő tisztasága > 98%) a Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.-től vásároltuk; Atorvasztatin: Pfizer Shanghai; Ezetimib: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Kísérleti állatok

6-8 hetes hím C57BL/6J egerek és ApoE-/- egerek, testtömeg (20 ± 2) g, a Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd.-től vásárolva, engedélyszám: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 óra / 12 óra fényciklus, hőmérséklet (22 ± 1) fok, páratartalom 50% ~ 60%, szabad élelmiszer- és vízfogyasztás. A kísérlet előtt az egereket 1 hétig standard étrenddel etették, hogy alkalmazkodjanak. Minden állatgondozás és kísérlet a Shandong First Medical University Kísérleti Állat-etikai Bizottságának előírásait követi (etikai szám: W202107080303).

1.3 Kísérleti reügynökök

Magas zsírtartalmú takarmány: Harlan Teklad; TG, ALT, AST készletek: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; FAS, LCAD készletek: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; GSH-Px készlet: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; SOD, MDA, LPO, BCA készletek: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Trizol készlet: Invitrogen, Carlsbad, CA; ACOX1 és CPT2 alapozók: a Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. tervezte.

1. 4 kísérleti műszer Hei - VAP Expert Rotary Evaporator: Németország

Heidolph; Varioskan LUX multifunkcionális mikrolemez olvasó: ThermoFisher; FD8508 vákuum fagyasztva szárító: Ilshin, Dél-Korea; F6/10 homogenizátor: Shanghai Fluoroco; Agilent1260 nagy teljesítményű folyadékkromatográf, Cary 3500 UV spektrofotométer: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT – PCR műszer: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Testtömeg és májindex

A 12. hét végén az egereket éheztettük és lemértük. Az egereket nátrium-pentobarbitállal elaltattuk és leöltük. A májat betakarítottuk a májindex kiszámításához.

2.3.2 Szérum indikátor észlelése

Vegye ki a szérumot, és határozza meg a szérum aszpartát-aminotranszferáz (AST) és alanin-aminotranszferáz (ALT) aktivitását sorrendben a kit műveletének megfelelően; A BCA meghatározza a szérum fehérjetartalmát és kimutatja a TG-tartalmat.

2.3.3 A májszövet lipidanyagcseréjével kapcsolatos tényezők kimutatása

4 fokos körülmények között mérjünk le megfelelő mennyiségű friss májat és homogenizáljuk PBS-ben, centrifugáljuk (centrifuga sugara 7,5 cm, 3 000 fordulat/perc) a homogenizátumot 1 percig, vegyük ki a felülúszót, és mérjük meg a fehérjetartalmat. májszövet BCA segítségével. TG-tartalom a szövetben, ELISA módszer zsírsav-szintáz (FAS) és hosszú láncú acil-CoA-dehidrogenáz (LCAD) tartalom kimutatására a májszövetben.

2.3.4 A májszövettel kapcsolatos oxidatív faktorok kimutatása

4 fokos körülmények között mérjünk le megfelelő mennyiségű friss májat és homogenizáljuk PBS-ben, centrifugáljuk a homogenizátumot (7,5 cm centrifugális sugár, 3 000 fordulat/perc) 15 percig, vegyük ki a felülúszót, és mérjük meg a fehérjetartalmat. májszövet BCA-val. Kövesse a reagenseket A dobozban található utasítások a szuperoxid-diszmutáz (SOD) és a glutation-peroxidáz (GSH-Px) aktivitását észlelik, és egyidejűleg a malondialdehid (MDA) és a lipid-peroxid (LPO) szintjét is kimutatják.

2. 3. 5 RT-PCR kimutatás

ACOX1/CPT2 mRNS expressziója májszövetben: Vegyünk megfelelő mennyiségű friss májszövetet, használjunk Trizol készletet a teljes májszövet mRNS-ének kivonásához, használjunk MuLV reverz transzkriptázt a cDNS szintéziséhez, és használjunk cDNS-t templátként a valós idejű fluoreszcencia kvantitatív meghatározásához. PCR (Qpcr) kimutatás. A reakciókörülmények a következők voltak: elődenaturálás 95 °C-on 2 percig; denaturálás 95 fokon 10 másodpercig, lágyítás: 60 fok 30 másodpercig, kiterjesztése 72 fokon 35 másodpercig, 34 ciklus, végül kiterjesztés 72 fokon 5 percig, és valós idejű kvantifikáció automatikus analizátorral. ACOX1 és CPT2 mRNS expressziója. Rotor-gene Q szoftver. 1.7-et (Qiagen) használtunk az adatok elemzéséhez, a 2-△△Ct módszert pedig az mRNS és a GAPDH relatív szintjének megszámlálására. Minden kísérletcsoportot párhuzamosan végeztünk > 3 alkalommal. A primer szekvenciák a következők: GAPDH, upstream: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', downstream: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, upstream: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' downstream: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, felfelé: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' lefelé: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Statisztikai módszerek

Az adatok elemzéséhez az SPSS 20.0 statisztikai szoftvert használtuk. A mérési adatokat (x ± s) adtuk meg. A csoportok közötti összehasonlításhoz egyirányú varianciaanalízist alkalmaztunk. P < 0,05 statisztikailag szignifikáns különbségnek számított.