Tanulmány a Cistanche Deserticola és rizsborpároló termékeinek neuroendokrin-immun funkciójáról glükokortikoid-indukált patkánymodellben-Ⅱ

3.2.4. Immunhisztokémia

A neuronális apoptózist számos apoptotikus és antiapoptotikus gén szabályozza, főként az apoptózist elősegítő Bax gén és a Bcl-2 géncsalád antiapoptotikus génjei. A Bcl-2 reaktív oxigéntermelő organellumokban, például a mitokondriumokban, az endoplazmatikus retikulumban és a nukleáris membránokban található. A Bcl-2 kevés hatással van az oxigén szabad gyökökre, de igenmegakadályozza az oxidatív károsodást a sejtekben. A Bax a citoplazmából a mitokondriális membránba transzportál, megváltoztatja a mitokondriális membrán szerkezetét, és elősegíti a citokróm c felszabadulását és az apoptózis indukálását.

TERMÉSZETES CISTANCHE TUBULOSA A SZEXUÁLIS FUNKCIÓ JAVÍTÁSÁRA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

A Bax és a Bcl{0}} fehérje kifejeződött a mellékvese citoplazmájában. A festés minden sárga részecskét mutatott. A BC csoporthoz képest a Bax fehérje átlagos optikai sűrűsége az MC csoportban jelentősen megnőtt (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Az 5(b) ábra azt mutatja, hogy a BC csoporthoz képest a Bcl-2 fehérje átlagos optikai sűrűsége az MC csoportban jelentősen csökkent (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

A kaszpáz-3 fehérje eredeti formájában főként a citoplazmában lokalizálódik, normál szövetekben, és alacsony az expressziója. A pozitív jelek halványsárga vagy barnássárga. A BC csoporthoz képest a kaszpáz-3 expressziója szignifikánsan megnőtt az MC csoportban (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Normál szövetekben a Fas gén expressziója csökkent, és az in situ hibridizáció pozitív jele barnássárga volt. Amint az 5(d) ábrán látható, a BC csoporthoz képest a Fas fehérje átlagos optikai sűrűsége nőtt az MC csoportban (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

A FasL fehérje főként a sejtmembránban vagy citoplazmában található, pozitív jelei barna színűek. A BC csoporthoz képest a FasL gén átlagos optikai sűrűsége az MC csoportban jelentősen megnőtt (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Az eredmények azt mutatták, hogy a CD és a WCD képesapoptózist indukálnak a gyulladásos sejtekbenés csökkenti a mellékvese károsodását azáltal, hogy elősegíti a FasL fehérje expresszióját és a Fas fehérjéhez való kötődést, aktiválja a kaszpáz-3 fehérjét és elindítja a kaszpáz kaszkádot. A WCD-HD csoport hatása volt a legjobb.

3.3. Az immunfunkció meghatározása

3.3.1. Immun szervi index

A BC csoporthoz képest az MC csoport csecsemőmirigy együtthatója és lépindexe szignifikánsan csökkent (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

TERMÉSZETES CISTANCHE TUBULOSA A SZEXUÁLIS FUNKCIÓ JAVÍTÁSÁRA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. A T-limfocita alcsoportok kimutatása perifériás vérben

A CD{0}} sejtek százalékos aránya a bal felső negyedben és a CD8+ sejtek százalékos aránya a jobb alsó negyedben a BC-ben és minden gyógyszercsoportban magasabb volt, mint az MC csoportban. A BC csoporthoz képest a CD4+ThCD8+ aránya szignifikánsan csökkent az MC csoportban (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Az IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α és IFN-C szintjének meghatározása a szérumban

A 8. ábra azt mutatja, hogy a BC csoporthoz képest az IL-6, a TNF- és az IFN-c szintje jelentősen megnőtt (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. A Lymus szövetmikroszkópos megfigyelési kísérlet eredményei

A 9. ábra azt mutatja, hogy a BC csoportban nagyszámú limfocita volt jelen. A limfociták és retikulociták lazán helyezkedtek el a központban, szétszórtan kerek vagy ovális timociták. Nem volt nekrózis, nem volt gyulladásos sejtinfiltráció, és nem volt kóros elváltozás sem.

Az MC csoport nagy mennyiségű limfoid nekrózisos szövetet mutatott, a limfociták és retikulociták rendezetlen elrendezésével a központban. A kerek vagy ovális timociták eltűntek, masszív sejtdegeneráció vagy -nekrózis volt látható, és gyulladásos sejtinfiltráció volt megfigyelhető abnormális kóros elváltozásokkal.

A CD csoportokban a limfociták morfológiai jellemzői normalizálódtak, a központi limfociták és retikulociták elrendeződése szinte normális volt. A kerek vagy ovális timociták helyreálltak, de kis számú degeneratív vagy nekrotikus limfocita és beszűrődő gyulladásos sejt maradt.

A WCD-csoportban és a PC-csoportban a limfociták morfológiai jellemzői jobban javultak. A központban a limfociták és retikulociták jól illeszkedtek egymáshoz, a kerek vagy ovális timociták szinte normálisak voltak, de kis számban megmaradtak infiltráló és degeneratív limfociták.

3.4. CaM fehérje génexpresszió

Az RQ értéket (CaM mRNS -aktin mRNS) tekintettük a CaM mRNS expressziójának vizsgálatára. A BC csoport RQ értéke 1 volt. A CaM mRNS expressziója a hipotalamuszban az MC csoportban szignifikánsan megnőtt (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Megbeszélés

A Kínai Gyógyszerkönyv [2] rögzíti, hogy a CD-t és a WCD-t fel lehet használni a klinikán, mint a darabok főzésének fő típusait. Rizsborral párolás után aöregedésgátló és tonizáló vese-yang hatásokfokozták. Az UPLC-QqQ-MS segítségével detektáltuk a kémiai anyagbázis mennyiségi változásait a rizsbor gőzölésének folyamata során. Az iridoid glikozidok instabilak voltak, és ezeknek a glikozidoknak a tartalma csökkent, sőt kimutathatatlanná vált. A fenil-etanol-glikozidok tartalma is változott, ami a farmakodinámiában és a klinikai hatásban is változást indukálhat.

TERMÉSZETES CISTANCHE TUBULOSA A SZEXUÁLIS FUNKCIÓ JAVÍTÁSÁRA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

A klasszikus vese-yang-hiány modellt kortikoszteron szubkután injekciójával reprodukálták [19]. A kortikoszteron túladagolása gátolhatja a CRH szekrécióját a hipotalamuszban. Eközben az ACTH titkát is gátolta. Csökkent a mellékvesekéreg hormon szintje, így a HPA tengely funkciója is csökkent. A HPA tengely alulműködése a vese-yang hiány gyakori jellemzője [20]. Ezután a patkányok "kimerülési" jelenséget mutatnak, és a tünetek összhangban vannak a klinikán tapasztalt vese-yang-hiány tüneteivel.

Az MC csoportban a CRH, ACTH, T és CORT szintje a patkányszérumban szignifikánsan csökkent (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

A Bcl{0}} családtagok arányának módosítása az egyik alapvető mechanizmus, amellyel a FasThFasL a halálreceptor útvonalat közvetíti, a Bcl-2 család pedig a mitokondriális útvonalat szabályozza [21]. Az apoptózist gátló Bcl-2 faktor és az apoptózist indukáló faktor, mint például a Bax, mind a Bcl-2 családba tartoznak [22]. A sejtapoptózist az apoptózist gátló faktorok és az apoptózist indukáló faktorok relatív aránya határozhatja meg [23]. A mitokondriumok központi ellenőrzőpontként szolgálnak az apoptózis számos formájához [24]. A jelen tanulmány kimutatta, hogy a CD-MD és a WCD-k következtethetnek a Bax expressziójára, és növelhetik a Bcl-t{13}}javítja a vese-yang hiányt. A Fas a fő halálreceptor, amely a Fas-ligandummal (FasL) való ligálással apoptózist indukál [25]. A Fas és FasL expressziója az MC csoportban nőtt, míg ez az expresszió szignifikánsan nőtt a WCD-MD csoportban (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Az immunfunkció hiánya a vese-yang-hiány egyik fontos megnyilvánulása [28]. Ebben a vizsgálatban azt találtuk, hogy a WCD-MD csoport lépének és csecsemőmirigyének indexe szignifikánsan helyreállt (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

A HPA tengely a legfontosabb szabályozó rendszer, mivel szabályozza a glükokortikoid szekréciót és az endokrin rendszert a mellékvesekéreg szekréciós funkciójának fenntartása érdekében [32]. A CaM mRNS túlzott expressziója a hipotalamusz szövetben a vese yang hiányával függött össze. A CD és WCD blokkolhatja a kalciumcsatornákat, gátolhatja a CaM mRNS expresszióját a hipotalamuszban, és csökkentheti a kalcium beáramlást, ezáltal csökkentve a Ca2+·CaM komplex aktivitását.

A vese-yang-hiány kialakulása krónikus betegség kialakulásának folyamata. A vese már nem pusztán anatómiai fogalom, hanem a neuroendokrin immunitás és a húgyúti rendszerek általános kifejezése. A neuroendokrin-immun (NEI) hálózat fontos integrált szabályozó rendszer [33]. A CD és a WCD szabályozhatja a HPAT tengely működését és javíthatja a vese-yang hiány helyreállítását. Ez az eredmény kísérleti alapot ad a vese-yang-hiány klinikai megelőzésére és kezelésére.

TERMÉSZETES CISTANCHE TUBULOSA A SZEXUÁLIS FUNKCIÓ JAVÍTÁSÁRA PHGS75% ECH 30% ACT 12%