Tanulmány a Cistanche Deserticola fenil-etanol-glikozidjainak antioxidáns hatásáról

Kapcsolatfelvétel: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li és munkatársai (Changchun Normal University Központi Laboratóriuma, Changchun, Jilin 130032)

Absztrakt[ Cél ] A kutatás célja a feniletanoid glikozidok antioxidáns aktivitásának szisztematikus vizsgálata volt .Cistanchedeserticola. [Módszer ] A C. deserticola kivonat antioxidáns aktivitásának mérésére két modellrendszert, a szabadgyök-2,2-difenil-l-pikrilhidrazil (DPPH') vizsgálatot és a fotokemilumineszcencia (PCL) tesztet alkalmaztunk. akteozid, izoakteozid és echinakozid. [ Eredmény ] Az eredmények azt mutatták, hogy a C. deserticola echinakozidjában, akteozidjában, izoakteozidjában és 80 százalékos etanolos kivonatában a teljes fenoltartalom (TPC) 753,95, 659,94, 356,14 és 14,73 mg galluszsav/g minta volt. A C. deserticola kivonat erős antioxidáns hatást mutatott a PCL kísérletben, ezt követte az echinakozid, az akteozid és az izoakteozid. Azonban az echinakozid erős antioxidáns aktivitást mutatott a DPPH-kísérletben, majd az akteozid, az izoakteozid és a C. deserticola kivonat következett.

[ Következtetés ]Ez a kutatás referenciaként szolgálhat a C. deserticolából származó fenil-etanol-glikozidok farmakológiai és biológiai aktivitásának vizsgálatához.

Kulcsszavak Cistanche deserticola ; akteozid ; izoakteozid ; echinakozid; Antioxidáns aktivitás ; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) növénye aCistanchenemzetség (Oro-banehaeeeae) aCistanchenemzetség (Cistanche). A Cistanche szárított húsos szára pikkelyes levelekkel. Számos tanulmány kimutatta, hogy a Cistanche növények fő hatóanyagai a fenetil-alkohol-glikozid vegyületek. . A fenil-etanol-glikozid vegyület egyfajta polifenolvegyület, amely széles körben elterjedt sokféle növényben. A farmakológiai tesztvizsgálatok kimutatták, hogy ezek a vegyületek széles körű farmakológiai és biológiai aktivitással rendelkeznek, például anti-hepatotoxin, gyulladásgátló, fájdalomcsillapító és antioxidáns hatással. Ezek közül a legszembetűnőbb, hogy a fenoxi-etanol-glikozid vegyület nagyon jó antioxidáns hatással rendelkezik. A szerző elsősorban a fenetil-alkohol-glikozid vegyületek antioxidáns hatásának szisztematikus elemzését végezte el.Cistanche, két antioxidáns in vitro kiértékelési módszerrel, nevezetesen a fotoehemilumineszenciával (PCL) és a 2,2-difenil-1-pieril-hidroxil (DPPH') két különböző rendszert használtak a 80 antioxidáns aktivitásának mérésére. százalékos etanolos kivonatCistanche, ergoszterozid, izoergozid, ésechinakozid.

1 Anyag és módszer

1.1 Minták és reagensek

Cistanche (Cistanche deserticola)gyógyászati ​​anyagokat a Peking Tongrentang Gyógyszertártól vásárolták.Ergoszterozid, izoergozid,echinakozid, Folin. A Ciocalteu-reagenst, a gallussavat, a 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilt (DPPH.) stb. a SigmaChemicalCo-tól vásároltuk. Társaság (St. Louis, Mo). A PCL analízishez használt oldószert az Analytik Jena AG (Berlin, Németország) biztosította. Az egyéb reagensek mind analitikai reagensek (a pekingi vegyi üzem gyártja). A víz ultratiszta víz (18,2 nPa).

1.2 Minta kivonás

Mérj le pontosan 2,0005 g-otCistanchemintapor, használjon 50rnl 80 százalékos etanolt ultrahangos extrakcióhoz szobahőmérsékleten 0,5 órán keresztül, kétszer extrahálja, szűrje le a mintaoldatot, rotációs bepárlással szárazra párolja (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 A minta összes polifenol tartalmának meghatározása

A minta teljes fenoltartalmát F{{0}}lin-Ciocaheu módszerrel határozzuk meg, és az eredményt galluszsav milligramm/g kivonatban fejezzük ki. Vegyünk egy bizonyos 0,2rnI koncentrációjú mintaoldatot (hogy az abszorbancia a standard görbére essen), adjunk hozzá 1 ml Folin-Ciocaheu reagenst, amelynek koncentrációja 0,5 mol/L, és majd adjunk hozzá 0,8 ml 7,5 százalékos koncentrációjú nátrium-karbonát oldatot, hogy jól elkeveredjen, szobahőmérsékleten helyezzük el 0,5 órára, majd megmérjük az abszorbanciát 765 nm-en (ultraibolya-látható spektrofotométer: DU800, Beckman Couher, Inc. USA). Használjon galluszsav oldatot (a tömegkoncentráció tartománya 0.{18}}.20 me,/m1) a standard görbe elkészítéséhez, és az összes vizsgálatot kétszer megismételjük.

1.4 Antioxidáns aktivitás in vitro analízis

1.4.1 PCL-módszeres meghatározás.

A teszthez Photochem@ (Berlin, Németország) ultragyors antioxidáns és szabadgyök-analizátort használtak. Az alapelv a szabad gyökök fotokémiai módszerrel történő előállítása és a kemilumineszcencia módszer alkalmazása a szabad gyökök kimutatására. A kísérletben fotokémiai gerjesztő hatású fotoszenzibilizátort alkalmaztak a reakciómolekulák gerjesztésére, így az ultraibolya lámpa hatására az oxidációs reakció 1000 alkalommal ment végbe. gyorsabb, mint a normál körülmények között, és a szabad gyökök gyorsan keletkeztek." Válassza a PCL-ACW-Kit módszert Mérje meg a psyllium részminták vízoldható komponenseinek antioxidáns aktivitását. Pipettázzon 1.0ml reakciópuffert (beleértve a 0,1 mol/l nátrium-karbonát koncentrációját, 10,5 pH-értékét és a 0,1 mmol/LNA koncentrációját, egy EDTA-t, 1,5 ml ACW-hígítót (víz) ), koncentrációja 1mmol/LLumino1) fényérzékenyítőként gerjeszti a reakciómolekulákat, így gyorsan szabad gyökök keletkeznek, ugyanakkor fotokemilumineszcens anyagként. Mind a minta, mind a standard 10 "l. Az L különböző koncentrációinak (0,5, 1,0, 2,0 és 3,0 nmol/L) mérésével. Az aszkorbinsav standard görbe egyenlete Y=24,640Ox plusz 2,9311, R²=0,9969. A vizsgálatban a mintát vagy a standard oldatot úgy kell hígítani, hogy a késleltetési idő a standard görbe lineáris tartományába essen. A Photochem létrehozza a standard görbét, és automatikusan teszteli a minta antioxidáns aktivitását, és a minta antioxidáns aktivitása egyenértékű L. Az aszkorbinsav nanomóljainak számával számolva.

1.4.2 DPPH módszer meghatározása.

A difenil-pikrilhidrazino gyök [DPPH ·] egy stabil nitrogénközpontú gyök, 515 nm hullámhosszon maximális abszorpcióval. A [DPPH ·] metanolos oldat lila színű, és koncentrációja lineáris kapcsolatban áll az abszorbanciával." Miután antioxidánsokat adtunk a [DPPH ·] metanolos oldathoz, az antioxidánsok kombinálódhatnak [DPPH ·] szabad gyökökkel, vagy helyettesíthetik azokat, így [DPPH ·] keletkezik. ] Csökken a szabad gyökök száma, az oldat színe világosabbá válik, ami az abszorbancia folyamatos csökkenésében nyilvánul meg 515 nm hullámhosszon, amíg el nem éri a stabilitást." A tesztben metanol helyett etanolt használtunk. Mérje le pontosan a [DPPH ·]-t, és állítsa be a koncentrációt 0 értékre. [DPPH ·] 0.040 76mg/ml etanolos oldata, a [DPPH ·] standard görbéjét kapjuk: Y: 18.032x-0,0016 , R=0.9993. A szabad gyökök reziduális arányának mérési módszere a szakirodalomra hivatkozik [16]. Oldószerként etanolt használva készítsen különböző koncentrációjú mintát és standard oldatot, vegyen 0,1 ml mintát vagy standard oldatot, és adjon hozzá 3,9 ml [DPPH·] standard oldatot, amelynek tömegkoncentrációja 2,5 mg/l (jelenleg használatos) cserélje ki a mintaoldatot etanolra vakmintaként. Rázza fel a kevert oldatot, egy küvettával mérje meg az abszorbanciáját különböző időpontokban 515 nm hullámhosszon, és a [DPPH·] maradéksebességének kiszámításához a standard görbe szerint alakítsa át a [DPPH·] tömegkoncentrációjára. A [DPPH ·] maradék arányának és a hozzáadott minta megfelelő mennyiségének megfelelően megrajzolható egy görbe a [DPPH -] szabad gyökök mintából való eltávolítására. A [DPPH ·] tömegkoncentrációja és az abszorbancia közötti összefüggési görbe szerint a szabad gyökfogó hozzáadása után mért abszorbancia átszámítható [DPPH ·] tömegkoncentrációjává, és kiszámítható a [DPPH ·]. szabad gyökfogó hozzáadása. A maradék sebesség számítási képlete a következő: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 százalék ahol [DPPH·] a DPPH tömegkoncentrációja · a szabad gyökfogó folyamat egy bizonyos pillanatában, [DPPH·]:. A DPPH· eredeti tömegkoncentrációja. A hozzáadott antioxidánsok száma és a [DPPH ·] maradék aránya alapján elkészítjük a kettő közötti kapcsolati görbét, és a regressziós egyenletet lineáris regressziós analízissel kaphatjuk meg. A regressziós egyenlet alapján kiszámítható az antioxidáns dózis, ha a [DPPH ·] maradék aránya 50 százalék. Fél gátlás. A minták vagy standardok különböző koncentrációira vonatkozó [DPPH·] szabad gyökfogó görbe alapján számítsa ki a minta EC mennyiségét, amikor a [DPPH·] eredeti tömegkoncentrációja 50 százalékra csökken (steady-state). Minél kisebb az EC, annál erősebb a szabadgyök-fogó képesség. Tesztelje párhuzamosan 3 alkalommal.

cistanche

2 Eredmények és elemzések

2.1 A minta összes polifenol tartalmának meghatározása Az összes polifenoltartalom meghatározásánál a teljes polifenoltartalom meghatározásaechinakozida legmagasabb, ami 753,95 mg galluszsav/g. Ezt követik az ergoszteroid glikozidok, az izoergoszteroid glikozidok és a nyers kivonatokCistanche, amelyek 468,3, 356,14 és 14,73 mg galluszsav/g voltak.

2.2 A minta antioxidáns aktivitásának meghatározása

2.2.1 A PCL-ACW módszer meghatározásának eredményei. A PCL-ACW antioxidáns tesztben az antioxidáns kapacitás 1txgCistanchea gyógyászati ​​anyag egyenértékű 15,68 nmol L-aszkorbinsav antioxidáns kapacitásával; 1 gechinakozid14,03 nmol aszkorbinsav antioxidáns kapacitásának felel meg. Aktivitás: 1txgergoszterozidaz aszkorbinsav 11,44 nmol antioxidáns kapacitásának felel meg; Az 1xg izomergoszterozid egyenértékű 8,24 nmol aszkorbinsav antioxidáns aktivitásával.

2.2.2 A DPPH módszer mérési eredményei. Az 1. táblázatból látható, hogy törölve van. A szabad gyökök képességének sorrendje azergoszterozid, echinakozid, izoergozid és a nyers kivonatCistanche, amelyek között ergo oldalon ésechinakozidalapvetően azonos antioxidáns kapacitással rendelkeznek a DPPH tesztben. Ebből is látszik. Mivel különböző in vitro antioxidáns tesztrendszereket használnak a minták mérésére, az antioxidáns hatások mechanizmusa eltérő, és az eredmények ellentmondásosak lehetnek. Ezt a teszt is igazolta. Ezért a további ellenőrzéshez más antioxidáns-elemző rendszereket kell kiválasztani.

echinacosis

hivatkozások

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. A húsleves kutatásának előrehaladása[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei A Cistanche növények kémiai összetevőivel kapcsolatos kutatási előrehaladás[J].Chinese Herbal Medicine, 2003, 34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI, HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Tanulmányok az alkotóelemekről Cistanchis Herba. SZIA. Új fenilpropanoid-glikozidok, Cisztanozidok A és B[J] izolálása és szerkezete. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG és mások. Fenil-etanoid-glikozidok izolálása és tisztítása aCistanche deserticolanagy sebességű ellenáramú kromatográfiával[ J ]. Food Chemistry, 2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ és mások. Actec^ide és izoakteozid izolálása és tisztítása Plantago psyllium L.-ből nagy sebességű ellenáramú kromatográfiával [J ]. Journal of Chromatography A, 2005, 1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M és társai. A Plantago Asiatica-ból származó fenolos vegyületek [J]. Phytochemistry, 1990, 29: 3627-3631.

[7]TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Fenolos glikozidok a Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya és mások. A Cistanche cistanche összglikozidok in vitro megkötik a szabad gyököket és védőhatások az OH által kiváltott DNS-károsodásra [J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEzuka Y és mások. A feniletanoidok májvédő aktivitása aCistanche deserticola[J]. Planta Med, 1998, 64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG és társai. A Stachytarpheta cayeunensisből [J] származó kivonatok és izolált vegyületek gyulladásgátló és antinociceptív hatásai. J. Ethnopharmacol, 1998, 60:53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL és mások. A fenilpropanoid glikozidok védelme a Pedicularies-ből az oxidatív hemolízis ellen in vitro [J]. Planta Med, 1993, 59:315-317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX és társai. Brandisia rákból származó fenil-etanoid-glikozidok antioxidáns hatása [J]. Ethnopharmacology, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T és társai. A feniletanoid antioxidáns hatásai aCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996, 19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S et al. Mely polifenol vegyületek járulnak hozzá az alma teljes antioxidáns aktivitásához? [J]. J Agric Food Chem, 2005, 53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Antiradikális aktivitás hiotokemilumineszcens kimutatása: U. nem enzimes vízoldható antioxidánsok tesztelése [J ]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Szabadgyökös módszer alkalmazása az antioxidáns aktivitás értékelésére [J ]. Lebensm Wiss Technol, 1995, 28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. DPPH módszer a szőlőmag proantocianidinek szabad gyökfogó képességének meghatározására [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V és munkatársai. Az antioxidáns aktivitás értékelése különböző in vitro módszerekkel [J ]. Free Radical Research, 2002, 36(2):177-187.