A vizelet metabolizmusa rendellenes felépülést tesz lehetővé maximális megerőltetés után női ME/CFS-betegeknél 3. rész

Miért leszünk fáradtak? Hogyan oldjuk meg a fáradtság problémáit?

【Kapcsolatfelvétel】 E-mail: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Megbeszélés

Ez az első alkalom, hogy az ME/CFS-betegek vizelet-metabolomáját jellemezték egy edzés előtt és után, amikor az ME/CFS-ben szenvedő betegek PEM-et tapasztalnak. Ezen metabolitok közül sokat még soha nem mértek ME/CFS-ben szenvedő betegeknél, mivel a korábbi vizelet metabolomikai vizsgálatokat ME/CFS-ben 50-nél kevesebbre korlátozták, a jelenlegi vizsgálatban pedig 1403-at mértek. A fizikai aktivitás szintje, amely befolyásolhatja a kiindulási és az edzés utáni metabolitszinteket, a jelenlegi vizsgálati terv egyik kulcsfontosságú előnye, amelyet a korábbi vizsgálatokban nem használtak. Eredményeink azt mutatták, hogy 24 órával edzés után a kontrollok vizeletében a metabolitok szintje széles körben megemelkedett, ami nem volt megfigyelhető ME/CFS-ben szenvedő betegeknél, és ezek közül 110 vegyület szignifikáns kölcsönhatást mutatott a betegség állapota között (ME/CFS vagy kontroll). ) és az idő (alapállapot vs. edzés utáni) (kiegészítő S2 ábra). A vizelet metabolitszintjeinek számos elemzése mellett a vizeletben és a plazmában lévő metabolitszintek korrelációja további bizonyítékot szolgáltatott az edzés utáni ME/CFS betegek metabolikus szabályozási zavarára. Ez az elemzés további bizonyítékot szolgáltatott a patofiziológiai változásokra több alútban, valamint bizonyítékot szolgáltatott a további alútvonalak különbségeire, amelyek nem mutattak sok szignifikáns különbséget az ME/CFS-betegek és a kontrollok között, ha a vizelet metabolitszintjét izoláltan vizsgáljuk.

A Cistanche kimerültség- és állóképességnövelőként hathat, és kísérleti vizsgálatok kimutatták, hogy a Cistanche tubulosa főzete hatékonyan védheti a máj hepatocitáit és az endothel sejteket, amelyek károsodtak a súlyzó úszó egerekben, szabályozza a NOS3 expresszióját, és elősegíti a máj glikogén termelését. szintézis, így kifejtve a fáradtság elleni hatást. A feniletanoid-glikozidokban gazdag Cistanche tubulosa kivonat jelentősen csökkentheti a szérum kreatin-kináz-, laktát-dehidrogenáz- és laktátszintet, valamint növelheti a hemoglobin (HB) és a glükózszintet ICR egerekben, és ez kimerültség-csökkentő szerepet játszhat az izomkárosodás csökkentésével. és késlelteti a tejsavas dúsítást az energia tárolására egerekben. A Compound Cistanche Tubulosa Tablets jelentősen meghosszabbította az úszás idejét, növelte a máj glikogéntartalékát, és csökkentette a szérum karbamidszintet edzés után egereknél, megmutatva fáradtság elleni hatását. A Cistanchis főzete javíthatja az állóképességet és felgyorsíthatja a fáradtság megszüntetését az edzõ egereknél, valamint csökkentheti a szérum kreatin-kináz szintjének emelkedését terhelés után, és az egerek vázizomzatának ultrastruktúráját edzés után normálisan tartja, ami azt jelzi, hogy megvannak a hatásai. a fizikai erő növelésére és a fáradtság csökkentésére. A Cistanchis emellett jelentősen meghosszabbította a nitrittel mérgezett egerek túlélési idejét, és fokozta a hipoxia és a fáradtság elleni toleranciát.

Kattintson a fáradtság érzésére

3.1. Összehasonlítás a korábbi vizeletanyagcsere-vizsgálatokkal ME/CFS betegeken

Eredményeink összességében nincsenek összhangban azzal a néhány korábbi vizsgálattal, amelyek a vizelet metabolitjait mérték ME/CFS-ben szenvedő betegeknél, összehasonlítva a nem ME/CFS-ben szenvedő kontroll alanyokkal. Annak érdekében, hogy jobban össze tudjuk hasonlítani eredményeinket korábbi tanulmányokkal, amelyek kevesebb metabolitot mértek, összehasonlítottuk a kiindulási eredményeket a p < 0.05 LMM-ben a korábbi tanulmányokkal. Az egyetlen vegyület, amelyet egy másik és a mi vizsgálatunk is szignifikánsnak talált, az alanin volt, bár az előző vizsgálat azt találta, hogy az alanin alacsonyabb volt a női betegekben, mint a kontrollokban (BH-beállítás p-érték < 0,05) és vizsgálatunkban az átlagos normalizált koncentráció magasabb volt az ME/CFS betegekben, mint a kontrollokban [20]. Számos tanulmány azonban kiindulási különbségeket talált az olyan vegyületekben, amelyekről azt tapasztaltuk, hogy az ME/CFS-ben szenvedő betegeknél és a kontrollcsoportnál eltérően változtak a testmozgás helyreállítása során, beleértve a fenilalanint (alacsonyabb az ME/CFS-betegeknél [23,24]) és a valint (alacsonyabb a ME/CFS betegek [20]). A jelenlegi vizsgálatban a fenilalanin és a valin is szignifikánsan megemelkedett az ülő testmozgást követő kontrollokban, így lehetséges, hogy más vizsgálatokban a kontrollok aktívabbak voltak, és már magasabb volt a vizelet fenilalanin szintje. Egyetlen másik tanulmány sem vont be kifejezetten ülő, nem ME/CFS alanyokat, bár egy tanulmány az "általános életmód"-nak megfelelt [23]. Armstrong et al. megvizsgálta Pearson korrelációit a vizelet és a plazma metabolitok között ME/CFS-betegeknél és kontrolloknál a kiinduláskor, és különbségeket talált az acetátban, laktátban és fenilalaninban |R| küszöbértékkel. > 0,4 ​​bármelyik csoportban [20]. Az acetát túl kicsi ahhoz, hogy kimutatható legyen a tesztünkben, és nem észleltünk különbséget a plazma és a vizelet korrelációiban a laktát vagy a fenilalanin tekintetében.

McGregor és munkatársai a PEM-ben szenvedő ME/CFS betegek vizeletében és plazma metabolómáiban bekövetkezett változásokat is vizsgálták [19]. Felmérést alkalmaztak a jelenleg PEM-ben szenvedő ME/CFS-betegek elkülönítésére az elmúlt hét napban, és felfedezték, hogy harminc mért vizelet-metabolitból nyolc szignifikánsan alacsonyabb koncentrációt mutatott az ME/CFS csoportban a kontrollokhoz képest. Ezek közül csak a szerinnél volt szignifikáns eltérés az elemzéseinkben; a kontrollcsoportban edzés után nőtt (S2 kiegészítő adatfájl – LMM eredmények). A vizelet két metabolitja, az acetát és a metilhisztidin szintje szintén szignifikánsan különbözött a PEM és a nem PEM csoportban [19]. Az ebben a vizsgálatban vizsgált metilhisztidinek szintjei nem különböztek szignifikánsan az LMM elemzésben, de különbségeket találtunk a 1-metilhisztidin és az N-acetil-3-metilhisztidin plazma és vizelet közötti korrelációiban (9. ábra). McGregor és mtsai. A hétnapos PEM-pontszámok összefüggéseit is találták a plazmában és a vizeletben lévő számos metabolittal [19].

3.2. A vizelet anyagcsere-szintjének edzés utáni emelkedése az ülő testtartás kontrolljainál összhangban van a korábbi tanulmányokkal

A nők vizelet metabolizmusát 24 órával az edzés után nem jellemezték jól. Legjobb tudomásunk szerint egyetlen tanulmány sem mérte a vizelet metabolomát a kiinduláskor, összehasonlítva a nőknél az edzés utáni 24 órával. Egy tanulmány 32 metabolitot mért a vizeletben edzés előtt és 24 órával edzés után férfiaknál, kilenc versenyző kerékpárost nyolc egészséges, de edzetlen, azonos korú (50–60 éves) férfival összehasonlítva [48]. Míg tanulmányuk a sportolók és a nem edzett alanyok összehasonlítására összpontosított, azt tapasztalták, hogy a kontroll alanyok laktát-, acetát- és hipoxantinszintje az edzés utáni (kétszeresnél szignifikánsabb) növekedést tapasztalt. Az acetátot vizsgálatunkban nem mértük, és sem a laktát, sem a hipoxantin nem különbözött a kiindulási értéktől az edzés utáni értéktől a női kontrollcsoportunkban. Mukherjee et al. szignifikáns különbségeket találtak a sportolók és a kontrollcsoportok között nyolc mért metabolit esetében, amelyek különféle biokémiai útvonalakhoz kapcsolódnak [48]. Ezért a jelenlegi tanulmány erőssége az ülő, egészséges kontrollok kiválasztása, szemben az aktívabb egyénekkel, akiknél a rendszeres testmozgás következtében megváltozott a vizelet anyagcsere.

Bár kevés publikált irodalom áll rendelkezésre a vizelet metabolizmusáról 24 órával az edzés után, számos tanulmány létezik a vizelet metabolitjainak mérésére férfiaknál és nőknél a korábbi edzés utáni időpontokban (lásd [49]). Az egyik olyan megállapítás, amely egybehangzó volt a vizsgálatok között, hogy a legtöbb lipid koncentrációja megnő a biofluidokban edzés után, beleértve a vizeletet is. Különösen kimutatták, hogy az acilkarnitin koncentrációja nő a vérben és a vizeletben az edzés hatására. Ez összhangban van vizsgálatunk eredményeivel, amelyben számos acilkarnitin vegyület szignifikánsan megemelkedett edzés után a kontrollok vizeletében (7A. ábra).

A legnagyobb vizsgálat, amelyben nők vettek részt (összesen 255 alany, 107 nő), kiterjedt metabolikus változásokat is talált a vizeletben edzés után, a 47 mért metabolit közül 37-nél szignifikánsan megváltozott az FDR korrekciója, és ezek közül 33-nál nőtt az edzés után [50] . Ez összhangban van azzal a megállapításunkkal, hogy a kontroll alanyok vizeletében az edzés utáni nagyszabású anyagcsere-változások mutatkoztak, és a legtöbb módosított vegyület koncentrációja megnövekedett. Ez a tanulmány egy nemenkénti rétegzett összehasonlító elemzést is befejezett, de csak két metabolitot talált, amelyeknél szignifikánsan különbözik az edzés utáni/kiindulási arány a nők és a férfiak esetében.

A Schranner et al. Áttekintés szerint az aminosavakra vonatkozó eredmények nem olyan következetesek, mint a lipidekre vonatkozó eredmények, amelyek általában növelik az edzést [49]. A vizeletben kimutatott bizonyos eredmények azonban legalább két vizsgálatban konzisztensek voltak (bár az edzés utáni összes időpontot kombinálják), beleértve azt is, hogy a következő vegyületek mennyisége nőtt a vizeletben edzés után: alanin, O-acetil-homoszerin, 5- hidroxi-indolpiruvát, xanthurenát, L-metanefrin, N-acetil-vanilalanin és N-(karboxi-etil)-arginin. Legalább két vizsgálatban a következő vegyületek csökkentek a vizeletben edzés után: glicin, hisztidin, trimetilamin n-oxid. Összehasonlítva ezeket az eredményeket vizsgálatunkkal, a legtöbb metabolit vagy nem különbözött szignifikánsan edzés előtt és után, vagy nem mértük őket vizsgálatunkban. Ugyanakkor a kontrollokban is jelentős alaninszint-emelkedést tapasztaltunk, ami összhangban van az áttekintett tanulmányokkal. Vizsgálatunkban a glicinszint az edzés után is megemelkedett a kontrolloknál, szemben a csökkentéssel. Azonban a Kistner et al. egy tanulmány, amelyben sok nő vett részt, azt is megállapította, hogy a glicinszint jelentősen megemelkedett edzés után [50].

3.3. Különbségek az ülő kontrollok és az ME/CFS betegek között a lipid szuperútban

Ebben a vizsgálatban számos lipid alútvonal szignifikánsan különbözött a betegek és a kontrollcsoportok vizeletében, beleértve az acilkarnitin zsírsav-anyagcserét. Az acil-karnitin metabolitok mennyisége edzés után megnövekedett a vizeletben az egészséges kontrollokban, és az edzés által kiváltott változások szignifikánsan különböztek a kontrollcsoportban és az ME/CFS-ben szenvedő betegek között (3., 7. és S4. ábra). Ezen túlmenően, bár nem acil-karnitin, a karnitin metabolizmus lipid alútjában a dezoxikarnitin eltérően korrelált a plazma és a vizelet között ME/CFS-ben szenvedő betegeknél a kontrollokhoz képest (9. ábra). Az acil-karnitinek nagyon fontosak az energia-anyagcserében, mivel a zsírsavak a mitokondriumokba történő szállításához szükségesek az oxidációhoz. A hosszú szénláncú zsírsav-oxidáció az energia-anyagcsere elsődleges módja az aerob edzés során. Az acilkarnitin anyagcsere zavara edzés közben hozzájárulhat az edzés intoleranciához és a PEM kialakulásához ME/CFS betegekben. Egy másik vizsgálatban, amely csak a kiinduláskor vizsgált alanyokat vizsgálta, és amely nem kifejezetten ülő kontrollokat toborzott, az acilkarnitin alútvonal szignifikánsan eltér a ME/CFS-betegek és a kontrollok között, nyolc vegyületből ötnél alacsonyabb koncentrációt találtak a betegekben. [11]. Amikor csak a kiindulási alanyokat elemezték, a szérumban az acilkarnitin specifikus mérései azt mutatták, hogy az egyik jelentésben [51] a vegyület alacsonyabb volt az ME/CFS-betegeknél, mint a kontrolloknál, de egy másik vizsgálatban nem észleltek különbséget a vizelet- vagy plazmaszintekben [52]. Annak a nagyobb csoportnak a plazmájában, amelynek a jelen vizsgálat alanyai egy részhalmazt alkotnak, a karnitin kémiai klaszter szintén jelentősen megváltozott az ülő nőknél a felépülés során (az edzés utáni 24 óra és az edzés utáni 15 perc különbségeként definiálva). ), a vegyületek többsége edzés után növekszik [25]. A karnitin kémiai klasztere nem változott szignifikánsan az edzés utáni helyreállítás során ME/CFS betegeknél. Noha ez a klaszter nem csak acilkarnitineket tartalmaz, az acilkarnitinek is tagjai, és hozzájárulnak a kémiai hasonlóság-dúsítási elemzésben betöltött jelentőségéhez a jelenlegi tanulmányban is (S4 kiegészítő ábra). Ex vivo azt is kimutatták, hogy a palmitoil-karnitin mennyisége, amely az izmokban az edzés után átmenetileg megnövekszik, erőkifejtési jelként működhet az izomtól a neuronok egy részéhez [53].

Az acil-glicin-zsírsav-metabolitok az egyetlen olyan vegyületek, amelyeket szignifikánsan eltérő koncentrációban találtak a vizeletben ME/CFS-ben a kontrollhoz képest egyetlen időpontban (24 órával edzés után), és egy másik acil-glicin-vegyület, a 3-hidroxi-butiroil-glicin. , szignifikáns negatív korrelációt mutatott az ME/CFS betegekben, amikor az U3/U1-et P3/P1-gyel korrelálták (5. és 9. ábra). Ezenkívül a cisz-3,4-metilén-heptanoil-glicin eltérően változott az edzés felépülése során az ME/CFS-betegeknél, mint a kontrolloknál (LMM, S2 kiegészítő ábra). Míg az acil-glicin metabolizmus nem tartozik azon alpályák közé, amelyek edzés után szignifikánsan megnövekedtek a kontrolloknál, az ME/CFS betegek és a kontrollok között szignifikánsan különbözött mind az edzés utáni 24 órában, mind a különbség elemzésekor. az edzés utáni/alapvonal arányokban (3. ábra). Egyes acil-glicinek vizelettel történő kiválasztását szintén megváltoztatják a mitokondriumokban a zsírsav-oxidációhoz kapcsolódó rendellenességek, beleértve a közepes láncú acil-koenzim A (CoA) dehidrogenáz (MCAD) hiányát [54]. Munkacsoportunk megfigyelte, hogy a zsírsav-oxidáció eltér az immunsejtekben a ME/CFS-ben szenvedő betegektől a kontrollokhoz képest [55].

3.4. Különbségek az ülő kontrollok és az ME/CFS betegek között az aminosav szuperútvonalban

Sok különbséget találtunk a vizelet aminosavaiban is az ME/CFS-ben szenvedő betegeknél és a kontrolloknál az edzés után. Ezen útvonalak közül kettő azért emelkedett ki, mert szignifikáns eltéréseket mutattak az ME/CFS-betegek és a kontrollok között az összes elemzésünkben, beleértve a KEGG-útvonal elemzést is, és az alábbiakban részletesebben tárgyaljuk.

A májban zajló karbamidciklus fontos része az edzés anyagcseréjének, mivel szükséges az edzés során keletkező magas ammóniaszint eltávolításához [56,57]. Germain és munkatársai azt is megállapították, hogy a karbamidciklus és az ammónia-újrahasznosító SMPDB útvonalak szignifikánsan megváltoztak a plazmában az ME/CFS-ben szenvedő nőbetegek és a kontrollok között egy útvonalelemzés során, amikor összehasonlították a metabolitszintek közötti különbséget 24 órával a CPET után (P3) és 15 perccel a CPET után (P2) [25]. Az ammónia felhalmozódását korábban összefüggésbe hozták a neurotoxicitással és az edzés által kiváltott fáradtsággal [56,57]. A vizeletben és a plazma metabolómáinak edzés utáni szabályozási zavara ME/CFS-ben szenvedő betegeknél ammónia felhalmozódást okozhat, de a Metabolon® által a vizeletben mért 1403 vegyület nem tartalmazta az ammóniát, mivel az illékony vegyület és kisebb, mint a Metabolon® platform észlelési határa.

A cisztein, a metionin, a SAM és a taurin fontos aminosavak, mivel ezek az egyetlenek, amelyek ként tartalmaznak, a cisztein pedig egyedülálló abban, hogy diszulfidkötéseket hoz létre. A cisztein glutationná és taurinná is átalakulhat. A cisztein és a metionin számos szerepet játszanak a sejtek anyagcseréjében, de a fehérjék kulcsfontosságú építőkövei is [37]. Tiolcsoportja miatt a cisztein részt vesz számos enzimreakció katalizálásában és a redox homeosztázis fenntartásában. A cisztein-anyagcsere változásai számos neurodegeneratív rendellenességben fordulnak elő, beleértve az Alzheimer-kórt, a Huntington-kórt és a Parkinson-kórt [58]. Míg a cisztein, a metionin, a SAM és a taurin metabolizmusa sok különbséget mutatott a betegek és a kontrollok között a vizelet metabolom elemzése során, a vizelet és a plazma korrelációi további vegyületeket tártak fel, amelyek szignifikáns különbségeket mutattak az ME/CFS betegek és a kontrollok között, beleértve a ciszteint is. akkor keletkezik, amikor két cisztein oxidálódik, és diszulfidkötés jön létre, és a cisztationin, amely a metioninciklusban a ciszteintermelés közbenső terméke [37].

3.5. Korlátozások

Tanulmányunknak számos fontos korlátja van. Először is, az alanyok étrendjét nem ellenőrizték, és a metabolitok étrendi bevitele befolyásolhatja a vizelettel történő kiválasztódásukat. Másodszor, elismerjük, hogy a BMI-egyeztetés hiánya nem ideális, és ez a tanulmány korlátja. A ME/CFS-betegek és az egészséges, ülő kontrollcsoportok nagyobb csoportja megfelel a BMI-nek, ezért ha ezt a kísérleti vizsgálatot kibővítjük, ez nem lesz probléma a jövőben. Harmadszor, eredményeink csak női ME/CFS-betegekre korlátozódnak. Noha nagyon fontos mindkét nem vizsgálata ME/CFS-ben, és egyre több nemi különbséget fedeznek fel a patofiziológiában [25,59,60], kísérleti vizsgálatunkat a nőkre összpontosítjuk, mivel az ME/CFS nagyobb betegségteher. /CFS nőknél (60-65% nő) [2]. Ezen túlmenően, mivel a vizelet metabolomját csak két időpontban, az alapvonalon és az edzés utáni 24 órában rögzítettük, nem tudjuk megmondani, hogy az ME/CFS-betegeknél megváltozott-e ezen metabolitok némelyikének kiürülési szintje korábbi vagy későbbi időpontban. pont, mint a vezérlők. A kiürülési termékek mennyiségének növekedése előfordulhat a betegeknél, de nagyobb késéssel, hasonlóan ahhoz, ahogyan az ME/CFS betegeknél a testmozgás utáni általános felépülés késleltetett. Azonban az is lehetséges, hogy a megváltozott metabolikus kiválasztódás hiánya a testmozgásra adott egészséges metabolikus válasz általános hiányának része.

4. Anyagok és módszerek

4.1. Tantárgyak tanulmányozása

Nyolc egészséges ülő kontrollt és tíz ME/CFS-beteget vontak be ebbe a vizsgálatba. Az ME/CFS betegeket a kanadai konszenzuskritériumok alapján diagnosztizálták [3]. A vizsgálatba bevont 18 alany egy nagyobb, összesen 173 résztvevőből álló csoport része volt (ClinicalTrials.gov azonosító: NCT04026425) [61]. Ebben a kísérleti vizsgálatban minden résztvevő nő volt. Az alanyokat a következő kritériumok szerint vették fel. Minden résztvevőnek 18-70 év közöttinek kell lennie. Az alanyokat egyik csoportból kizártuk, ha dohányosok, terhesek vagy szoptattak, cukorbetegek, túlzott mennyiségű alkoholt fogyasztottak, vagy ortopédiai korlátok miatt nem tudtak elvégezni a CPET-et. A skizofrénia, major depresszió, bipoláris zavar vagy szorongásos zavar diagnózisa szintén kizárási kritérium volt mindkét csoportban. Ezen túlmenően, az egészséges ülő kontrollokat kizárták, ha bármilyen autoimmun betegséget diagnosztizáltak náluk. A vesefunkció a vizsgálatban részt vevő összes alanynál normális volt, amint azt a Quest Diagnostics következő standard laboratóriumi vérvizsgálatai határozták meg: szérum kreatinin, vér karbamid-nitrogén és becsült glomeruláris filtrációs ráta (eGFR).

Tizenhét alany végezte a gyakorlati tesztet a New York-i Ithaca College-ban, egy alany pedig a kaliforniai Torrance-ban lévő ID Med-ben. Minden résztvevőt arra kértek, hogy hagyja abba a táplálék-kiegészítőket, beleértve a probiotikumokat is, két hétig az edzés előtt. A résztvevőket arra kérték, hogy a terheléses vizsgálat előtt két nappal hagyják abba a fájdalom és a stimuláns gyógyszerek szedését. Minden beteg írásos beleegyezését adta, és minden protokollt jóváhagyott az Ithaca College IRB #1017-12Dx2. Minden résztvevő kitöltötte a Bell rokkantsági skálát [26], a Short Form{3}} egészségügyi felmérést [62] és az egyéni kérdőíveket. Az ME/CFS betegek ezenkívül kitöltötték a többdimenziós fáradtságleltárt [63].

4.2. Kardiopulmonális gyakorlatok vizsgálata és vizeletminta gyűjtése

A CPET stacionárius ciklusergométeren történt, a következő protokoll szerint: 3 perc pihenő, majd folyamatos kerékpározás, amelyben a növekvő terhelés percenként 15 watt növekszik az akarati kimerülésig (kb. 8-10 perc). A légzési cserearányt (RER), amely a szén-dioxid-termelés aránya osztva az oxigénfogyasztás mértékével, megmértük annak biztosítására, hogy a résztvevők megfelelő erőfeszítéssel hajtsák végre a tesztet (RER > 1,1 a maximális erőfeszítést jelzi).

Minden vizeletmintát reggel vettünk: (1) 15-20 perccel a CPET előtt és (2) 24 órával később. A vizeletet középen gyűjtöttük steril vizeletgyűjtőkben, aliquot részekre osztották, 10, 000 × g-vel centrifugáltuk 10 percig a sejttörmelék eltávolítása érdekében, és -80 ◦ C-on tároltuk. A vizeletminták egy fagyasztási/olvadási cikluson mentek keresztül a további alikvotokhoz, és az alikvot részeket egy éjszakán át szárazjégen szállítottuk a Metabolon®-ba.

4.3. Metabolomikai vizsgálat

A metabolitokat a Precision Metabolomics™ folyadékkromatográfiás-tandem tömegspektrometriás (LC-MS/MS) globális metabolomikai platform segítségével mérték a Metabolon®-nál. A részletes módszereket korábban már leírtuk [64]. Röviden, a mintákat metanollal (5:1 metanol:minta) extraháltuk, majd bepároltuk. A metabolitokat minden mintában négy különböző LC-MS/MS platform segítségével detektáltuk, amelyeket hidrofil és hidrofób vegyületekre optimalizáltak, és pozitív és negatív ionizációt is alkalmaztak. Minden kromatográfiánál Waters Acquity ultra-nagy teljesítményű (UP)LC-t és 5 µl injekciós térfogatot használtak (a mintákat minden platformon megfelelő oldószerben rekonstituálták). Az összes tömegspektrometriát egy ThermoScientific Q-Exactive nagyfelbontású/pontos tömegspektrométerrel végeztük fűtött elektrospray ionizációs (HESI-II) forrásokkal és Orbitrap tömeganalizátorokkal, amelyek 35,{10}} tömegfelbontással működtek, 70-1000 m/ pásztázási tartományban. z. A Metabolon® szabadalmaztatott szoftvert használták a kísérleti minták és a Metabolomics Standards Initiative által meghatározott, Tier 1 azonosítási szabványok referenciakönyvtárával történő egyeztetésére, és a görbe alatti területet használták a csúcsok mennyiségi meghatározásához. Az értékeket a nyers területszámok alapján normalizáljuk, és az összes mintát egy tételben futtattuk, így nem volt szükség tételkorrekcióra. Az ismeretlen vegyületek nem rendelkeznek standarddal, részben pedig jellemzett molekulák azok, amelyeket nem erősítettek meg hivatalosan szabvány alapján, vagy amelyekre nem áll rendelkezésre szabvány, de a Metabolon® kellően biztos az azonosságában.

4.4. Adatfeldolgozás

A nyers adatokat az egyes minták ozmolalitása alapján normalizáltuk, és az egyes metabolitokra vonatkozó adatokat mediánközpontúan 1-re helyeztük (az ozmolalitást is tartalmazó nyers adatok az S1 kiegészítő fájlban érhetők el). A hiányzó értékeket a minimális értékkel imputáltuk, kivéve azokat a gyógyszereket, amelyeket 0-ként imputáltak. Az adatokat varianciastabilizáló transzformációval (MetaboanalystR) log10 transzformáltuk [65,66]. Eredetileg összesen 1403 metabolitot mértek. A metabolitokat a módosított 80%-os szabály szerint szűrtük: egy vegyületet akkor vettünk bele, ha a minták legalább 80%-ában kimutatható volt akár az ME/CFS, akár a kontrollcsoportban [27]. Összességében 1154 metabolit felelt meg a kritériumoknak, és bekerültek a következő elemzésekbe. Az egyetlen elemzés, amelyet szűrés nélkül végeztek, a plazma metabolitokkal való összefüggésekre vonatkozott. Az egyes metabolitok edzés utáni/kiindulási arányát log-alap 10-ben számítottuk ki az edzés utáni értékből mínusz az egyes alanyok kiindulási értékével. A vulkán diagram ábrázolásához az átlagos log hajtásváltozásokat (ME/CFS betegek vs. kontroll) átszámítottuk log base 2-re az alapképlet változtatásával.

4.5. Adatelemzés és statisztika

Az egyes metabolitok egyváltozós statisztikai analízisét lineáris vegyes modell segítségével végeztük, a betegség állapotának, időpontjának, életkorának és BMI-jének rögzített hatásaival, valamint az alany véletlenszerű hatásával (legokosabb [67] és átlag [68] R csomagok). A Benjamini–Hochberg (BH) módszert alkalmaztuk a hamis felfedezési arány korrigálására, ahol q < 0.1 a szignifikancia küszöbe. Az EnhancedVolcano R csomagot vulkánparcellákhoz használták [69].

A ChemRICH-t R-ben használták a Metabolon® által meghatározott alútvonalakkal és az útvonalak sorrendjével végzett nem átfedő útvonal-analízis elvégzésére [29]. A ChemRICH webeszközt használtuk a kémiai hasonlósági klaszterezési elemzés elvégzésére [30]. Ehhez az elemzéshez csak az ismert SMILES kóddal rendelkező vegyületeket lehetett bevonni, összesen 516 vegyületet. Mindkét ChemRICH analízishez a dúsítási statisztikákat Kolmogorov–Smirnov teszttel végeztük, amely nem alkalmaz p-érték szignifikancia határértéket, hanem összehasonlítja a valószínűségi eloszlást egy nullhipotézis valószínűségi eloszlással [70]. A Metabolon® alútvonalak esetében a q < 0.05 a szignifikancia küszöbértéke, és a q < 0,15 a kémiai klaszterek esetében (BH FDR korrekció). Mindkét kiválasztott q küszöb alatti klaszter p < 0,05 volt.

Az útvonal-dúsítást és a topológiaelemzést a Metaboanalyst 5.{1}} webes eszközzel [65] végeztük, mind a KEGG, mind az SMPDB humán referencia metabolómokra a következő kiválasztott paraméterekkel: globális teszt a statisztikai teszthez és a relatív közti központiság, mint a csomópont fontossági mértéke. A vegyületeket akkor vettük bele ebbe az elemzésbe, ha a Metabolon® által biztosított HMDB azonosító megegyezett a Metaboanalyst HMDB azonosítójával. Az egy HMDB azonosítóhoz tartozó ismétlődő vegyületek esetében csak az első szerepelt. Ez 453 vegyületet eredményezett.

Az alanyok csoportosítását a négy vegyület felhasználásával, amelyek szignifikánsan különböztek a páciensek és a kontrollok között, edzés után hierarchikus klaszterezéssel, távolságmérőként az euklideszi távolsággal, és a "Ward.D2" módszerrel (heatmap R csomag [71) ]).

A vizelet és a plazma közötti Pearson-korrelációt 727 metabolit esetében mindkét biofluidban mértük R-ben (hmisc csomag). A p-értékeket minden egyes korrelációra t-próbával számítottuk ki azzal a nullhipotézissel, hogy a korrelációs együttható egyenlő 0-val, majd BH FDR korrekcióval q < 0,15 a szignifikancia küszöbe. A 8. ábra esetében a szélsőséges kiugró értékeket tartalmazó vegyületeket szűrtük a módosított z-score módszerrel, amely a z-pontszámot a medián és a medián abszolút eltérés alapján számítja ki (outliers R csomag, z küszöb=6).

Ha nincs másképp megadva, az összes adatvizualizáció a ggplot2 R csomaggal történt. Minden elemzésnél a BH FDR korrekciót választottuk a szigorúbb Benjamini és Yekutieli FDR korrekció helyett, mert rendkívül kis számú vegyületet találtunk kolineárisnak (0., a célpontok 75%-ának abszolút értéke Pearson korrelációs együtthatója > { {3}}.7).

5. Következtetések

Összességében szignifikáns különbségek voltak a vizelet metabolomában az egészséges ülő kontrollok és az ME/CFS-betegek esetében a CPET-próbára adott válaszként a metabolikus szuper- és szubútvonalak széles skálájában, beleértve az aminosavakat, lipideket, szénhidrátokat, nukleotidokat, xenobiotikumokat és ismeretlenek. Ezek az útvonalak számos fiziológiai funkcióban vesznek részt, beleértve, de nem kizárólagosan az energia-anyagcserét. Ez azt jelzi, hogy az ME/CFS-betegeknél általános metabolikus diszreguláció áll fenn, ami a testmozgás intoleranciájának és a PEM-nek a része, amelyben a megváltozott metabolikus kiválasztódás hozzájáruló tényező. Adataink azt sugallják, hogy az ülő mozgású, ME/CFS-vel nem rendelkező egyének anyagcseréje olyan jelentős változásokon megy keresztül, amelyek lehetővé teszik számukra, hogy felépüljenek az erőkifejtésből, míg az ME/CFS-ben szenvedő betegeknél nem sikerül hasonló adaptív reakciókat. A jövőbeni munka magában foglalja a tanulmány kiterjesztését egy sokkal nagyobb, mindkét nemet magában foglaló kohorszra, hogy validálják ezeket az eredményeket, megvizsgálják a nemek közötti különbségeket a vizelet metabolómában, és feltárják, hogy vannak-e finomabb különbségek a vizelet metabolitjaiban ME/CFS-betegeknél a kiinduláskor, ami potenciálisan lehetséges. hozzájárul a betegség diagnosztikai vizsgálatához a jövőben.

A szerző hozzájárulásai:Koncepció, AG, KAG és MRH; módszertan, AG, KAG, YVH és MRH; formális elemzés, KAG, AG és YVH; nyomozás, KAG, AG és YVH; írás – eredeti tervezet előkészítése, KAG, AG és MRH; írás – áttekintés és szerkesztés, minden szerző; vizualizáció, KAG és AG; projekt adminisztráció, MRH; finanszírozás megszerzése, MRH Minden szerző elolvasta és elfogadta a kézirat közzétett változatát.

Finanszírozás:Ezt a kutatást a National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS), az NIH (U54NS105541) és az Amar Foundation támogatta. Az NIH Nemzeti Fordítástudományi Központja finanszírozta a Weill Cornell Medicine Clinical and Translational Science Center (CTSC) számára a REDCap adatbázis karbantartását az UL1 TR 002384 számon keresztül.

Az intézményi felülvizsgálati bizottság nyilatkozata:A vizsgálatot a Helsinki Nyilatkozat irányelvei szerint végezték, és jóváhagyta az Ithaca College Institutional Review Board, Ithaca, New York, USA (protokoll 1017-12Dx2), valamint a Weill Cornell Medical College Institutional Review Board ( protokoll 1708018518).

Tájékozott beleegyező nyilatkozat:A vizsgálatban részt vevő összes alanytól tájékozott beleegyezést kaptunk.

Adatelérhetőségi nyilatkozat:Az egyes alanyok összes metabolitadata elérhető a mellékelt kiegészítő adatfájlokban.

Köszönetnyilvánítás:Carl Franconi kezelte az adatbázist és a biobankot a Cornell Egyetemen. A vérmintákat David Wang az EVMED Researchnél frakcionálta a Workwell Alapítvány támogatásával, valamint Ivan Falsztyn, Carl Franconi, Ludovic Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adam O'Neal, Alexandra Mandarano, Jessica Maya, Shannon Appelquist a Cornell Egyetemen. Köszönetet mondunk a következő személyeknek, akik részt vettek a résztvevők szűrésében, gyakorlati tesztek elvégzésében és/vagy vér- és vizeletgyűjtésben: Betsy Keller, John Chia, Jared Stevens, Tiffany Ong és Maria Russell.

Összeférhetetlenség:A szerzők nem nyilatkoznak összeférhetetlenségről. A finanszírozóknak nem volt szerepük a tanulmány megtervezésében; az adatok gyűjtésében, elemzésében vagy értelmezésében; a kézirat megírásában; vagy az eredmények közzétételéről szóló döntésben.

Hivatkozások

1. Jason, LA; Mirin, AA Az Országos Orvostudományi Akadémia ME/CFS prevalenciájára és gazdasági hatásaira vonatkozó adatok frissítése a népességnövekedés és az infláció figyelembevétele érdekében. Fáradtság Biomed. Health Behav. 2021, 9, 9–13. [CrossRef]

2. Valdez, AR; Hancock, EE; Adebayo, S.; Kiernicki, DJ; Proskauer, D.; Attewell, JR; Bateman, L.; DeMaria, A., Jr.; Lapp, CW; Rowe, PC; et al. Az ME/CFS prevalenciájának, demográfiai adatainak és költségeinek becslése nagyszabású orvosi állítások és gépi tanulás segítségével. Elülső. Pediatr. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers, BM; Jain, AK; De Meirleir, KL; Peterson, DL; Klimas, NG; Lerner, AM; Bested, AC; Flor-Henry, P.; Joshi, P.; Powles, AP; et al. Myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma: Klinikai munkaeset meghatározása, diagnosztikai és kezelési protokollok. J. Chronic Fatigue Syndr. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. Chu, L.; Valencia, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG Az erőkifejtés utáni rossz közérzet dekonstruálása myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma esetén: Betegközpontú, keresztmetszeti felmérés. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Stussman, B.; Williams, A.; Snow, J.; Gavin, A.; Scott, R.; Nath, A.; Walitt, B. Az erőkifejtés utáni rossz közérzet jellemzése myalgiás encephalomyelitisben/krónikus fáradtság szindrómában szenvedő betegeknél. Elülső. Neurol. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Stevens, S.; Snell, C.; Stevens, J.; Keller, B.; VanNess, JM Cardiopulmonary Exercise Test Methodology for Assessing Exertion Intolerance in Myalgic Encephalomyelitis/chronic Fatigue Syndrome. Elülső. Pediatr. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; Snell, CR; Stevens, SR Csökkent kardiopulmonális kapacitás erőkifejtés utáni rossz közérzet során. J. Chronic Fatigue Syndr. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. Keller, BA; Pryor, JL; Giloteaux, L. A myalgiás encephalomyelitisben/krónikus fáradtság szindrómában szenvedő betegek képtelenek a VO(2)-csúcs reprodukálására, funkcionális károsodásra utal. J. Transl. Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; Annesley, SJ; Fisher, PR A myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma hátterében álló kóros mechanizmusok. Diagnosztika 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth, TK; Eaton-Fitch, N.; Staines, D.; Marshall-Gradisnik, S. A krónikus fáradtság szindróma/myalgiás encephalomyelitis/rendszeres megerőltetési intolerancia betegség (CFS/ME/SEID) metabolomikus diszregulációjának szisztematikus áttekintése. J. Transl. Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Germain, A.; Barupal, DK; Levine, SM; Hanson, MR Az átfogó keringési metabolizmus az ME/CFS-ben feltárja az acillipidek és szteroidok megzavart metabolizmusát. Metabolitok 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Egy myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma felfedezési csoportjának metabolikus profilozása a zsírsav- és lipidanyagcsere zavarait tárja fel. Mol. Biosyst. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR A myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma plazma-metabolomikájából származó leendő biomarkerek Redox egyensúlyhiányt okoznak a betegség szimptomatológiájában. Metabolites 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Yamano, E.; Sugimoto, M.; Hirayama, A.; Kume, S.; Yamato, M.; Jin, G.; Tajima, S.; Goda, N.; Iwai, K.; Fukuda, S.; et al. A krónikus fáradtság szindróma indexmarkerei a TCA és a karbamid ciklusok diszfunkciójával. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Armstrong, CW; McGregor, NR; Sheedy, JR; Buttfield, I.; Fenék, HL; Gooley, a szérum PR NMR metabolikus profilja azonosítja a krónikus fáradtság szindróma aminosav-zavarait. Clin. Chim. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Fenék, HL; Gooley, PR A széklet mikrobiota és a széklet, a vérszérum és a vizelet metabolitjainak kapcsolata myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma esetén. Metabolomics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Hoel, F.; Hoel, A.; Pettersen, IK; Rekeland, IG; Risa, K.; Alme, K.; Sorland, K.; Fossa, A.; Lien, K.; Herder, I.; et al. A metabolikus fenotípusok térképe myalgiás encephalomyelitisben / krónikus fáradtság szindrómában szenvedő betegeknél. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; Lee, B.; Che, X.; Williams, BL; Kahn, EJR; Ukaigwe, JE; Bateman, L.; Klimas, NG; Komaroff, AL; et al. Betekintés a myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma fenotípusába átfogó metabolomikán keresztül. Sci. Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. McGregor, NR; Armstrong, CW; Lewis, DP; Gooley, PR A megerőltetés utáni rossz közérzet a hipermetabolizmussal, a hipoacetilációval és a purin metabolizmus deregulációjával társul ME/CFS esetekben. Diagnosztika 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Fenék, HL; Gooley, PR A metabolikus profilalkotás rendellenes energia-anyagcserét és oxidatív stressz-útvonalakat tár fel krónikus fáradtság szindrómában szenvedő betegeknél. Metabolomics 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. Fluge, O.; Mella, O.; Bruland, O.; Risa, K.; Dyrstad, SE; Alme, K.; Rekeland, IG; Sapkota, D.; Rosland, GV; Fossa, A.; et al. A metabolikus profilalkotás a piruvát-dehidrogenáz működésének károsodását jelzi myalgiás encephalopathia/krónikus fáradtság szindróma esetén. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; Li, K.; Fényes, AT; Alaynick, WA; Wang, L.; Baxter, A.; Nathan, N.; Anderson, W.; Gordon, E. A krónikus fáradtság szindróma metabolikus jellemzői. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Jones, MG; Cooper, E.; Amjad, S.; Goodwin, CS; Barron, JL; Chalmers, RA Vizelet- és plazma szerves savak és aminosavak krónikus fáradtság szindrómában. Clin. Chim. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblett, SH; Király, KE; Dunstan, RH; Clifton-Bligh, P.; Hoskin, LA; Roberts, TK; Fulcher, GR; McGregor, NR; Dunsmore, JC; Fenék, HL; et al. Hematológiai és vizeletkiválasztási rendellenességek krónikus fáradtság szindrómában szenvedő betegeknél. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Germain, A.; Giloteaux, L.; Moore, GE; Levine, SM; Chia, JK; Keller, BA; Stevens, J.; Franconi, CJ; Mao, X.; Shungu, DC; et al. A plazma-metabolomika a maximális testmozgást követően megzavart reakciót és felépülést mutat ki myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma esetén. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Bell, DS Az orvos útmutatója a krónikus fáradtság szindrómához. A CFIDS megértése, kezelése és együttélése; Addison-Wesley Publishing Company: Reading, MA, USA, 1994.

27. Yang, J.; Zhao, X.; Lu, X.; Lin, X.; Xu, G. A metabolomikai adat-előfeldolgozási stratégia az adatelemzés maszkolási hatásának csökkentésére. Elülső. Mol. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Benjamini, Y.; Hochberg, Y. A hamis felfedezési arány szabályozása: Gyakorlati és hatékony megközelítés a többszörös teszteléshez. JR Stat. Soc. Ser. B 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

29. Barupal, DK; Rajongók.; Fiehn, O. Bioinformatikai megközelítések integrálása a metabolomikai adatkészletek átfogó értelmezéséhez. Curr. Opin. Biotechnol. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Barupal, DK; Fiehn, O. Kémiai hasonlóság-dúsítási elemzés (ChemRICH) a biokémiai útvonal-térképezés alternatívájaként metabolomikus adatkészletekhez. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goeman, JJ; van de Geer, SA; de Kort, F.; van Houwelingen, HC Globális teszt géncsoportokra: A klinikai eredménnyel való összefüggés vizsgálata. Bioinformatika 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. Rosato, A.; Tenori, L.; Cascante, M.; De Atauri Carulla, PR; Martins Dos Santos, VAP; Saccenti, E. A korrelációtól az ok-okozatig: A metabolomikai adatok elemzése rendszerbiológiai megközelítések segítségével. Metabolomics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Cui, H.; Samouilov, A.; Johnson, W.; Kearns, P.; Tsai, AL; Berka, V.; Zweier, JL Bizonyíték az endogén metilargininek patofiziológiai szerepére az endothel NO-termelés és az érrendszeri működés szabályozásában. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879–887. [CrossRef]

34. Chandrasekharan, UM; Wang, Z.; Wu, Y.; Wilson Tang, WH; Hazen, SL; Wang, S.; Elaine Husni, M. A plazma szimmetrikus dimetil-arginin emelkedett szintje és a fokozott argináz aktivitás, mint a kardiovaszkuláris komorbiditás lehetséges indikátorai rheumatoid arthritisben. Arthritis Res. Ott. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen képviselő; Teerlink, T.; Nijveldt, RJ; Prins, HA; Richir, MC; van Leeuwen, PA Az aszimmetrikus dimetilarginin klinikai jelentősége. Annu. Rev. Nutr. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

36. Bertinat, R.; Villalobos-Labra, R.; Hofmann, L.; Blauensteiner, J.; Sepulveda, N.; Westermeier, F. Csökkent NO termelés ME/CFS betegek plazmájának kitett endotél sejtekben. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Brosnan, JT; Brosnan, ME A kéntartalmú aminosavak: Áttekintés. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; Bernal-López, MR; Muñoz-Garach, A.; Martínez-González, MA; Fitó, M.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. Életmód-beavatkozási program hatása energia-korlátozott mediterrán diétával és testmozgással a szérum poliamin metabolomjára magas szív- és érrendszeri kockázatú egyéneknél: Randomizált klinikai vizsgálat. Am. J. Clin. Nutr. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. Wang, W.; Zhang, H.; Xue, G.; Zhang, L.; Zhang, W.; Wang, L.; Lu, F.; Li, H.; Bai, S.; Lin, Y.; et al. A gyakorlati edzés megőrzi az ischaemiás előkondicionálást idős patkányszívekben azáltal, hogy helyreállítja a szívizom poliaminkészletét. oxid. Med. Sejt. Longev. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, E.; Eliasson, J.; Karlsson, HK; Kohnke, R. Az elágazó láncú aminosavak aktiválják a kulcsenzimeket a fehérjeszintézisben a fizikai edzés után. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, P.; Stenson, L.; Sulvucci, M.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.02-Aminosav-anyagcsere. In Comprehensive Biotechnology, 2. kiadás; Moo-Young, M., szerk.; Academic Press: Burlington, ON, Kanada, 2011; 3–14. [CrossRef]

42. Li, S.; Gao, D.; Jiang, Y. Function, Detection and Alteration of Acylcarnitine Metabolism in Hepatocellularis Carcinoma. Metabolites 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Braun, TP; Marks, DL Az izomtömeg szabályozása endogén glükokortikoidokkal. Elülső. Physiol. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman, BL Mineralokortikoidok. In xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, szerk.; Elsevier: New York, NY, USA, 2007; p. 1. [CrossRef]

45. Kavyani, B.; Lidbury, BA; Schloeffel, R.; Fisher, PR; Missailidis, D.; Annesley, SJ; Dehhaghi, M.; Heng, B.; Guillemin, GJ Lehet, hogy a kinurenin útvonal a myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma (ME/CFS) összetett rejtvény kulcsfontosságú hiányzó darabja? Sejt. Mol. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman, DA; Williams, NI; Domchek, SM; Kurzer, MS; Stopfer, JE; Schmitz, KH A testmozgás csökkenti az ösztrogén és a progeszteron szintjét a menopauza előtt álló nőknél, akiknél magas a mellrák kockázata. J. Appl. Physiol. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. De Souza, MJ; Van Heest, J.; Demers, LM; Lasley, BL Luteális fázis hiánya szabadidős futókban: Bizonyíték a hipometabolikus állapotra. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 337–346. [CrossRef]

48. Mukherjee, K.; Edgett, BA; Burrows, HW; Castro, C.; Griffin, JL; Schwertani, AG; Gurd, BJ; Funk, CD Teljes vér transzkriptomika és vizelet metabolomika a nagy intenzitású edzés adaptív biokémiai útvonalainak meghatározására 50–60- éves mestersportolókban. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Schranner, D.; Kastenmuller, G.; Schonfelder, M.; Romisch-Margl, W.; Wackerhage, H. A metabolitkoncentráció változásai az emberekben edzés után: A gyakorlatok metabolizmusával kapcsolatos tanulmányok szisztematikus áttekintése. Sport Med. Nyitva 2020, 6., 11. [CrossRef]

50. Kistner, S.; Rist, MJ; Doring, M.; Dorr, C.; Neumann, R.; Hartel, S.; Bub, A. NMR-alapú megközelítés az akut fizikai gyakorlatokkal és a szív- és légzőszervi fittséggel kapcsolatos vizeletanyagcsere-termékek azonosítására egészséges emberekben – A KarMeN-tanulmány eredményei. Metabolitok 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, H.; Yamaguti, K.; Takahashi, M.; Misaki, H.; Tagawa, S.; Kitani, T. Acilkarnitin-hiány krónikus fáradtság szindrómában. Clin. Megfertőzni. Dis. 1994, 18 (1. melléklet), S62–S67. [CrossRef]

52. Jones, MG; Goodwin, CS; Amjad, S.; Chalmers, RA Plazma és vizelet karnitin és acilkarnitinek krónikus fáradtság szindrómában. Clin. Chim. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. Zhang, J.; Fény, AR; Hoppel, CL; Campbell, C.; Chandler, CJ; Burnett, DJ; Souza, EK; Casazza, GA; Hughen, RW; Keim, NL; et al. Az acilkarnitinek, mint a testmozgással összefüggő üzemanyag-megoszlás, a xenometabolizmus és az izom-afferens neuronok potenciális jelei. Exp. Physiol. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. Costa, CG; Guerand, WS; Struys, EA; Holwerda, U.; ten Brink, HJ; Tavares de Almeida, I.; Duran, M.; Jakobs, C. Vizelet acilglicinek kvantitatív elemzése béta-oxidációs hibák diagnosztizálására GC-NCI-MS segítségével. J. Pharm. Biomed. Anális. 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. Maya, J.; Leddy, SM; Gottschalk, CG; Peterson, DL; Hanson, MR Megváltozott zsírsav-oxidáció myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma limfocitapopulációiban. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Wilkinson, DJ; Smeeton, NJ; Watt, PW Ammónia anyagcsere, az agy és a fáradtság; a link újralátogatása. Prog. Neurobiol. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. Chen, S.; Minegishi, Y.; Hasumura, T.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. Az ammónia metabolizmusának bevonása a tea-katekinek állóképességi teljesítményének javításába egerekben. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Pál, BD; Sbodio, JI; Snyder, SH Cisztein metabolizmus a neuronális redox homeosztázisban. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. Nkiliza, A.; Parks, M.; Cseresznye, A.; Oberlin, S.; Evans, JE; Darcey, T.; Aenlle, K.; Niedospial, D.; Mullan, M.; Crawford, F.; et al. ME/CFS-betegek szex-specifikus plazma lipidprofilja és ezek összefüggése a fájdalommal, fáradtsággal és kognitív tünetekkel. J. Transl. Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. O'Neal, AJ; Üveg, KA; Emig, CJ; Vitug, AA; Henry, SJ; Shungu, DC; Mao, X.; Levine, SM; Hanson, MR-felmérés a patogén elleni antitestek szintjéről myalgiás encephalomyelitis/krónikus fáradtság szindróma esetén. Proteomes 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Erőfeszítés utáni rossz közérzet elemzése kétnapos CPET segítségével ME/CFS-ben szenvedő betegeknél.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD A MOS 36-elem rövidített állapotfelmérés (SF-36). I. Fogalmi keret és tételválasztás. Med. Gondozás 1992, 30, 473–483. [CrossRef]

63. Smets, EM; Garssen, B.; Bonke, B.; De Haes, JC A fáradtság mérésére szolgáló eszköz többdimenziós fáradtsági jegyzéke (MFI) pszichometriai tulajdonságai. J. Psychosom. Res. 1995, 39, 315–325. [CrossRef]

64. Ford, L.; Kennedy, Kr. u. Goodman, KD; Pappan, KL; Evans, AM; Miller, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; Lennon, JJ; Elsea, S.; et al. Klinikai metabolizmus profilozó platform pontossága az anyagcsere veleszületett hibáinak azonosítására. J. Appl. Labor. Med. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. Pang, Z.; Chong, J.; Zhou, G.; de Lima Morais, DA; Chang, L.; Barrette, M.; Gauthier, C.; Jacques, PE; Li, S.; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: A nyers spektrumok és a funkcionális betekintések közötti szakadék szűkítése. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. Durbin, BP; Hardin, JS; Hawkins, DM; Rocke, DM Varianciastabilizáló transzformáció génexpressziós microarray adatokhoz. Bioinformatika 2002, 18 (1. melléklet), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Kuznyecova, A.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTeszt csomag: Tesztek lineáris vegyes hatású modellekben. J. Stat. Softw. 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated Marginal Means, más néven Least-Squares Means, 1.8.2; R csomag. 2022.

69. Blighe, K.; Rana, S.; Lewis, M. EnhancedVolcano: Publikációra kész vulkánrajzok továbbfejlesztett színezéssel és címkézéssel, 1.16-os verzió.0; R csomag. 2022.

70. Smirnov, NV Két független minta empirikus eloszlási görbéi közötti eltérés becsléséről. Bika. Math. Univ. Moscou 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; R csomag. 2019.

Felelősség kizárása/kiadói megjegyzés:Az összes publikációban szereplő állítások, vélemények és adatok kizárólag az egyes szerző(k) és közreműködő(k) sajátjai, nem pedig az MDPI-é és/vagy a szerkesztő(k)é. Az MDPI és/vagy a szerkesztő(k) elhárítanak felelősséget a tartalomban hivatkozott ötletek, módszerek, utasítások vagy termékek által okozott személyi vagy vagyoni sérülésekért.

【Kapcsolatfelvétel】 E-mail: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501