Mi stimulálja az új csontok növekedését? A Cistanche (CPhGs) aktiválja a SIRT2–C/EBP –AREG útvonalat az erősebb csontok felépítéséhez

Eredmények

 

A 2.1 CPhG-k enyhítik a petefészek-eltávolítás által kiváltott csontritkulást egerekben

A mikro-CT-leletek (1A. ábra) azt mutatták, hogy a Sham-csoporthoz képest az OVX-csoport a trabekuláris csont mikroarchitektúrájának súlyos károsodását mutatta a disztális combcsontban, amelyet ritka és törött trabekulák jellemeztek. Az OVX+CPhGs csoportban a trabecularis szám és a kapcsolat jelentősen helyreállt, megközelítve a Sham szintet. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CPhG-k mérsékelhetik az ovariectomia által kiváltott csontvesztést. A HE-festés (1B. ábra) továbbá megerősítette, hogy a trabekuláris szám csökkent az OVX-csoportban a Sham-csoporthoz képest, a maradék trabekulák elvékonyodtak és eltörtek; ezzel szemben az OVX+CPhGs csoport megnövekedett trabekuláris számot mutatott az OVX-hez képest, és jelentősen javult a szerkezeti integritás. A kalcein kettős jelölés (1C. ábra) elmosódott és szűken elhelyezkedő fluoreszcens sávokat mutatott az OVX csoportban, ami gátolt csontképződésre utal; az OVX+CPhGs csoportban a fluoreszcens sávok tiszták voltak, szignifikánsan megnövekedett távolsággal, ami azt jelzi, hogy a CPhG-k elősegítik a csontmátrix mineralizációs sebességét és jelentősen növelik az új csontképző képességet.

 

 

Reprezentatív mikro-számítógépes tomográfiás kép a trabekuláris csontról az egerek combcsont-metaphysisében; B hematoxilin és eozin festődés egerek combcsont metszetén; C-kalcein kettős jelölésű egerek képei az OVX és OVX+CPhGs csoportokban.

1. ábra A CPhG-k enyhítik az ovariectomia által kiváltott csontritkulást egerekben

 

Cistanche Egyéb előnyei

 

 

 

 

Cistanche Listing Eladó

 

 

2.2 A CPhG-k hatása az MC3T3-E1 sejtek oszteogén differenciálódására

In vitro a CPhGs csoport szignifikánsan magasabb OCN, OPN és RUNX2 fehérje és mRNS expressziós szintet mutatott, mint az NC csoport (P < 0,05). Az alkalikus foszfatáz (ALP) aktivitása a 10. napon szintén szignifikánsan magasabb volt a CPhGs csoportban, mint az NC-ben (P < 0,05). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CPhG-k jelentősen elősegítik az oszteoblasztok differenciálódását. Lásd az 1. táblázatot.

 

2.3 A CPhG-k hatása a SIRT2–C/EBP –AREG tengelyre

A sejtkísérletek (2. táblázat) azt mutatták, hogy az NC csoporthoz képest a CPhGs csoportban szignifikánsan megnövekedett a C/EBP fehérje és mRNS expressziója, valamint emelkedett az AREG mRNS (P < 0,05), ami a downstream C/EBP célgének aktiválódását jelzi. Az NC-hez viszonyítva a SIRT2 mRNS szignifikánsan felszabályozott a CPhGs csoportban (P < 0,05), ezzel párhuzamosan a fehérjeszint növekedése (P < 0,05). Ezzel szemben a SIRT1, SIRT3, SIRT4 és SIRT5 mRNS szintjei nem mutattak szignifikáns változást (P > 0,05), ami megerősíti a SIRT2 útvonalspecifitását.

1. táblázat: A CPhG-k fokozzák az osteogén differenciálódási markereket MC3T3-E1 sejtekben

Tétel	NC csoport	CPhGs csoport
OCN fehérje	0.48 ± 0.14	1.24 ± 0.18¹
OCNmRNS	1.00 ± 0.11	1.61 ± 0.23¹
OPN fehérje	0.51 ± 0.15	1.05 ± 0.44¹
OPNmRNS	1.03 ± 0.12	2.11 ± 0.24¹
RUNX2 fehérje	0.77 ± 0.21	1.08 ± 0.25¹
RUNX2mRNS	1.02 ± 0.14	1.58 ± 0.17¹
ALP aktivitás a 10. napon	0.21 ± 0.02	0.44 ± 0.05¹

¹ P< 0,05 vs. NC csoport.

 

2. táblázat: A CPhG-k hatása a SIRT2, C/EBP és AREG expressziójára

Tétel	NC csoport	CPhGs csoport
C/EBP fehérje	0.51 ± 0.06	1.21 ± 0.11¹
C/EBPmRNS	1.00 ± 0.10	1.15 ± 0.14¹
AREGmRNS	1.01 ± 0.15	2.05 ± 0.24¹
SIRT1mRNS	1.03 ± 0.12	1.01 ± 0.11
SIRT2 fehérje	0.26 ± 0.08	0.37 ± 0.07¹
SIRT2mRNS	0.87 ± 0.08	1.88 ± 0.21¹
SIRT3mRNS	1.01 ± 0.14	1.28 ± 0.17
SIRT4mRNS	1.21 ± 0.12	1.04 ± 0.05
SIRT5mRNS	1.06 ± 0.05	1.08 ± 0.03

¹ P< 0,05 vs. NC csoport.

 

2.4 A CPhG-k hatásai és mechanizmusa a SIRT2-re és a C/EBP-re

Az immunfluoreszcencia (2A ábra) a SIRT2 és a C/EBP kifejezett fokozott expresszióját és nukleáris társlokalizációját mutatta ki a CPhGs csoportban az NC-vel szemben. Míg a SIRT2 és C/EBP jelek gyengék voltak NC-ben, fluoreszcencia intenzitásukat jelentősen megnövelték a CPhG-k, egyértelmű nukleáris ko-lokalizációs jelekkel, ami megerősített kölcsönhatásra utal. A koimmunprecipitáció továbbá megerősítette, hogy a C/EBP pull-down komplexekben a SIRT2 fehérje szignifikánsan megnőtt a CPhGs csoportban az NC-vel szemben (2B. ábra). A C/EBP immunprecipitátumokban az acetil-lizin (acetil) jel csökkent a CPhGs csoportban, míg a teljes C/EBP fehérje nem változott (2C. ábra), ami azt jelzi, hogy a CPhG-k jelentősen fokozzák a SIRT2–C/EBP kölcsönhatást, és elnyomják az endogén C/EBP acetilációt az E1MC3T3-E1MC3T3-E1 sejtekben.

2.5 A SIRT2 hatása a C/EBP fehérje és mRNS expressziójára

A Kontroll csoporthoz képest a SIRT2 knockdown (SIRT2 KD) szignifikánsan csökkentette a C/EBP fehérje és mRNS szintjét az MC3T3-E1 sejtekben. A Control+CPhGs csoporthoz képest a SIRT2 KD+CPhGs csoport C/EBP fehérje és mRNS csökkenést mutatott, és a CPhG-k nem tudták visszafordítani a SIRT2 knockdown okozta csökkenést (3A, 3B ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a SIRT2 elvesztése jelentősen csökkenti a C/EBP fehérje felhalmozódását és a C/EBP mRNS expresszióját.

A, SIRT2 (piros) és C/EBP (zöld) immunfluoreszcencia analízise CPhGs-kezelt MC3T3-E1 sejtekben (×200);B, SIRT2-C/EBP interakció koimmunprecipitációs (ko-IP) elemzése; C, acetilációs szint C/EBP IP-elleni acetil-tisztítás után.

2. ábra A CPhG-k hatása a SIRT2-re és a C/EBP-re és annak mechanizmusára

 

2.6 A C/EBP dezacetiláció hatása az oszteogén differenciálódásra

A C/EBP acetilációs hely mutánsait (K102R és K211R) úgy állítottuk elő, hogy utánozzák a tartós dezacetilációt. Az ALP aktivitást a korai differenciálódási szakaszban (7. nap) és a mineralizációt a terminális szakaszban (14. nap) értékeltük. A WT-hez képest mind a K102R, mind a K211R mutánsok fokozott ALP-pozitív területet mutattak, és az Alizarin Red S (ARS) festés fokozott extracelluláris mátrix mineralizációt mutatott. Az EX-csoport azonban nagyobb növekedést mutatott az ALP és az ARS tekintetében, mint bármelyik egyetlen mutáns, ami arra utal, hogy a CPhG-k együttműködve modulálják mind a K102, mind a K211 helyeket, hogy átfogóan elősegítsék a csontképződést (3C. ábra). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CPhG-k pro-osteogén hatása a C/EBP deacetiláció által közvetített korai differenciálódáshoz és terminális mineralizációhoz kapcsolódik, funkcionális bizonyítékot szolgáltatva arra, hogy a CPhG-k a SIRT2/CEBP/AREG tengelyen keresztül befolyásolják az oszteogén differenciálódást.

Vita

 

Az oszteoporózis globális közegészségügyi problémává vált, amely súlyosan befolyásolja a betegek életminőségét. A hagyományos kínai gyógyszerek, mint például a Cistanche (Rou Cong Rong), a Ligustrum lucidum és a Morinda officinalis fontos szerepet játszanak a csontritkulás kezelésében, és egyre nagyobb figyelmet vonzanak a kevesebb káros hatás és a stabil hatékonyság miatt [8–9]. A Cistanche és összetevői modulálhatják a csontképződést és a felszívódást, és jelentős potenciállal rendelkeznek az oszteoporózis megelőzésében és kezelésében. Egy tanulmány [10] azt találta, hogy a Cistanche kivonat elősegíti a mezenchimális őssejtek oszteoblasztok felé történő differenciálódását, hatékonyan növelve a csonttömeget, miközben csökkenti a csontfelszívódást. Egy másik tanulmány [11] kimutatta, hogy a Cistanche poliszacharidok gátolják az oszteoklasztogenezist és a hidroxiapatit reszorpciót, részben az oszteoklaszt marker gének (pl. Ctsk, MMP9 és ACP5) elnyomásával.

Ez a tanulmány szisztematikusan vizsgálta a CPhG-k hatásait és molekuláris mechanizmusait az oszteoporózis terápiájában. In vivo és in vitro kísérletekkel azt találtuk, hogy a CPhG-k jelentősen elősegítik az oszteogén differenciálódást a SIRT2–C/EBP –AREG tengely modulálásával, új elméleti alapot biztosítva a csontanyagcsere természetes termékekkel történő szabályozásához.

Kimutattuk, hogy a CPhG-k a SIRT2–C/EBP –AREG tengely aktiválásával javítják a csontvesztés fenotípusát petefészek-eltávolított egerekben, jelentősen növelve a trabekuláris számot és elősegítve a csontképződést. Eredményeink azt mutatják, hogy a CPhG-k jelentősen felszabályozzák az osteogén markereket (OCN, OPN, RUNX2) és az ALP aktivitást. Az oszteogén differenciálódás fő szabályozójaként [12] a RUNX2 upregulációja közvetlenül elősegítheti a csontmátrix mineralizációját, a fokozott ALP-aktivitás pedig tovább támogatja az osteoblast funkció érését. Először mutatjuk be, hogy a CPhG-k fokozzák a SIRT2 expresszióját, erősítik kölcsönhatását a C/EBP-vel, és indukálják a C/EBP dezacetilációját. A deacetilált C/EBP valószínűleg konformációs változásokon megy keresztül, amelyek fokozzák a transzkripciós aktivitást és jelentősen felszabályozzák az AREG mRNS-t; Az EGFR ligandumként az AREG aktiválhatja a PI3K–AKT útvonalat, hogy elősegítse az oszteogenezist – összhangban a ZHANG et al. [13], akik arról számoltak be, hogy a Cistanche kivonat elnyomja az oszteoklasztok differenciálódását a PI3K/AKT révén. C/EBP acetilációs hely mutánsok (K102R és K211R) felhasználásával közvetlenül megerősítettük, hogy a C/EBP dezacetiláció elősegíti az extracelluláris mátrix meszesedését, míg a SIRT2 knockdown igazolta ennek az útvonalnak a szükségességét a CPhG hatásában, jelezve, hogy a SIRT2 által közvetített C/EBP központi szerepet játszik a pro-oshG dezacetilációban. Ezek az eredmények kiszélesítik a Sirtuin család csontháztartási funkcióinak elismert sokféleségét, és új stratégiákat javasolnak az oszteoporózis kezelésére a poszttranszlációs módosítások megcélzásával.

Az oszteoblasztok kulcsszerepet játszanak a csontremodelling összetett folyamatában. A csontképződés és a reszorpció közötti egyensúlyhiány – amelyet nagyrészt az oszteoblasztok szabályoznak – az oszteoporózis fő hajtóereje. Ezért a csontképződés fokozása alapvető terápiás stratégia. A hatékony remodelling az oszteoblasztok és az oszteoklasztok közötti koordinált kölcsönhatásoktól függ. Az AREG, az EGF család tagja, kritikus szerepet játszik a sejtnövekedés, az apoptózis és a különböző sejttípusok közötti migráció szabályozásában [14]. A SIRT2 egy NAD+--függő deacetiláz, amely főként a citoplazmában expresszálódik, de megtalálható a mitokondriumokban és a sejtmagban is, így a Sirtuin család egyedülálló tagja [15]. Transzkripciós faktorként a C/EBP dezacetiláción megy keresztül a SIRT2 szabályozása alatt, ami növeli a különböző gének transzkripciós aktivitását. Az oszteoblasztok differenciálódása során a C/EBP több gént köt a transzkripció modulálására. Eredményeink azt mutatják, hogy a CPhG-k fokozzák a C/EBP fehérje expresszióját és kölcsönhatását a SIRT2-vel, jelentősen elnyomják a C/EBP acetilációt, és viszont fokozzák az AREG mRNS-t, ezáltal elősegítve az oszteogén differenciálódást. Bár a C/EBP expresszió pozitívan korrelál az AREG transzkripcióval, az, hogy a C/EBP közvetlenül AREG transzkripciós faktorként szolgál-e, további validálást igényel.

Összefoglalva, a CPhG-k elősegítik a C/EBP dezacetilációt a SIRT2-n keresztül, ezáltal növelik az AREG expressziót, fokozzák az oszteoblasztok differenciálódását és javítják a csontritkulást. A CPhG-k potenciálisan terápiás szerekként szolgálhatnak az osteoporosisban.

 

Megbízható Cistanche beszerzés az oszteoporózisos csontok egészségéért

Ha Ön egy táplálkozási márka, funkcionális élelmiszer-gyártó vagy K+F vásárló, aki megbízható, kiváló minőségű Cistanche fenil-etanol-glikozidokat (CPhG-ket) vagy szabványosított Cistanche kivonatokat keres a csontok egészsége érdekében, elengedhetetlen, hogy olyan beszállítóval lépjen kapcsolatba, amely a teljes gyógynövényipari láncot irányítja és megfelel a nemzetközi minőségbiztosítási rendszereknek. A Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. (WECISTANCHE) a Hotan Dicheng (Hetian Dicheng) értékesítési vállalata, és székhelyünk Hotanban, Hszincsiang-Kína első számú Cistanche származási régiójában található. A WECISTANCHE a kínai Cistanche vezető gyártója:

Hotan Dicheng (Hetian Dicheng)

A világ legnagyobb Cistanche-feldolgozó kapacitása egy 200 000 hektáros bázishoz kapcsolódik, beleértve a 85,000+ hektáros művelést, valamint egy 20 000 tonnás GMP-gyárat a friss Cistanche és más botanikai termékek számára.

100 000 osztályú GMP gyártóműhely; fejlett ultraszűrés/nanoszűrés tisztítás és koncentrálás; és egy 10 000 osztályú mikrobiológiai labor.

 

Hotan Dicheng (Hetian Dicheng)
 

Tanúsítványok:Kínai SC, HACCP, biotanúsítványok (IOIA/International Organic Crop Improvement Association) és NOP (US Organic Program).

14 Cistanche-hoz kapcsolódó találmányi szabadalom, beleértve a membránszeparációs extrakciós technológiát.

Tudományos együttműködés a legjobb intézményekkel (pl. Pekingi Egyetem, Shanghai Jiao Tong Egyetem, Xinjiang Orvosi Egyetem, Kiotói Gyógyszerészeti Egyetem).

 

Az üzleti tevékenység kiterjed a Cistanche kivonatokra, egészségügyi kiegészítőkre, nyersanyagokra és a TCM-főzetekre, funkcionális élelmiszerekre, egészségügyi termékekre, étrend-kiegészítőkre, gyógyszerekre és bőrápolókra vonatkozó alkalmazásokra. A COVID-19 idején a WECISTANCHE több mint 1 milliárd RMB értékben adományozott Cistanche termékeket, ami erős társadalmi felelősségvállalást tükröz.

 

A Cistanche kivonat nagykereskedelme vagy beszerzése az oszteoporózisra fókuszáló formulákhoz, olyan célzási mechanizmusokhoz, mint a SIRT2–C/EBP –AREG moduláció, az oszteoblasztok differenciálása (RUNX2/ALP/OCN/OPN) és a kiegészítő felszívódásgátló támogatás – a WECISTANCHE méretezhető, az Egyesült Államok/EU kínálati szabványaihoz igazodva kínál. Tudjon meg többet: Rólunk - WECISTANCHE (https://www.xjcistanche.com/about-us).

Email:wallence.suen@wecistanche.com
Cím:No.1, 26. emelet, 1. egység, 6. épület, No.133 Sheng'an Street, High-tech District, Chengdu, Sichuan, Kína (kísérleti szabadkereskedelmi zóna).

 

Hivatkozások

[10] Li Y, Pei T, Zhu H és mtsai. A melatonin enyhíti a cirkadián ritmuszavar által kiváltott fokozott luteinizáló hormon pulzusfrekvenciát és a petefészek diszfunkcióját.J Pineal Res.2025;77(1):e70026. doi:10.1111/jpi.70026

[11] Liu J, Yang Y, He Y és mások. Az Erxian főzet enyhíti a ciszplatin által kiváltott korai petefészek-elégtelenséget patkányokban azáltal, hogy csökkenti a petefészek granulosa sejtek oxidációs szintjét.J Ethnopharmacol.2023;304:116046. doi:10.1016/j.jep.2022.116046

[12] Yang ZN, Du X, Wang A, et al. A melatonin a p38 jelátviteli útvonal szabályozásával javítja a Pb által kiváltott mitokondriális homeosztázist és a petefészek-károsodást.Ecotoxicol Environ Saf.2025;292:117937. doi:10.1016/j.ecoenv.2025.117937

[13] Okoye CN, Koren SA, Wojtovich AP. Mitokondriális komplex I ROS termelés és redox jelátvitel hipoxiában.Redox Biol.2023;67:102926. doi:10.1016/j.redox.2023.102926

[14] Keskin-Aktan A, Akbulut KG, Yazici-Mutlu Ç et al. A melatonin és a kurkumin hatása a SIRT2, Bcl-2 és Bax expressziójára felnőtt patkányok hippocampusában.Brain Res Bull.2018;137:306-310. doi:10.1016/j.brainresbull.2018.01.006

[15] Zhu T, Yan L, Deng S et al. A sertés petesejtek mitokondriumai melatonint szintetizálnak, ami javítja in vitro érését és embrionális fejlődését.Antioxidánsok.2024;13(7):814. doi:10.3390/antiox13070814