Az új peptidkeverék fehérítő hatása a melanoszóma biogenezisének, átvitelének és lebomlásának szabályozásával 1. rész

ABSZTRAKT

A peptidek aminosavak rövid láncai, amelyeket peptidkötések kötnek össze. Széles körben használják hatékony és biokompatibilis hatóanyagként a kozmetikai iparban. Ebben a tanulmányban új peptidkeveréket fejlesztettünk ki, és azonosítottuk annak pigmentációt gátló hatását a melanocitákon és a keratinocitákon. Eredményeink kimutatták, hogy a peptidkeverék gátolta a melanoszóma biogenezist a mikroftalmiával összefüggő transzkripciós faktor szabályozásán keresztül, amely a melanociták melanogenezisének kulcstényezője. És megfigyeltük, hogy a peptidkeverék gátolta a melanoszóma felvételt a proteáz által aktivált 2-es receptor, a keratinociták fagocitózissal rokon receptorának redukciója révén. Ezenkívül a peptidkeverék aktiválta az autofágia rendszert, ami a keratinocitákban átvitt melanoszómák lebomlását eredményezte. Egy többcélú peptidkeverék pigmentáció-ellenes hatását humán bőr ekvivalens modellben (MelanoDerm) értékelték. A peptidkeverék helyi kezelése jelentősen csökkentette az epidermális réteg melanintartalmát, ami arra utal, hogy újszerű kozmetikai anyagként alkalmazható.fehérítésfunkció.

A vonatkozó tanulmányok szerintcistancheegy közönséges gyógynövény, amelyet "az életet meghosszabbító csodanövényként" ismernek. Fő összetevője azcisztanozid, melynek különféle hatásai vannak, például antioxidáns, gyulladáscsökkentő és immunfunkciót serkentő. A mechanizmus a cistanche ésbőrfehérítésantioxidáns hatásában rejlikcistancheglikozidok. Az emberi bőrben a melanin oxidációja során keletkeziktirozináltal katalizálttirozináz, az oxidációs reakcióhoz pedig oxigén részvétele szükséges, így a szervezetben lévő oxigénmentes gyökök a melanintermelést befolyásoló fontos tényezővé válnak. A Cistanche cisztanozidot tartalmaz, amely antioxidáns, és csökkentheti a szabad gyökök képződését a szervezetben, ígygátolja a melanin termelését.

Kattintson a Cong rong Cistanche For Whitening gombra

Kérdezz többet:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Kulcsszavak

Autofágia ·Melanoszóma ·Mikroftalmiával összefüggő transzkripciós faktor ·PAR-2· Peptid

BEVEZETÉS

A melanint az epidermisz bazális rétegében elhelyezkedő melanociták termelik, hogy megvédjék a bőrsejteket a káros külső tényezőkkel szemben, beleértve az ultraibolya (UV) sugarakat, a finom port és a különféle kémiai vegyületeket [1]. A keratinocitákból főként UV-besugárzással kiválasztott faktorok, köztük az alfa-melanocita-stimuláló hormon (MSH), az adrenokortikotrop hormon, az őssejt-faktor, az endotelin 1, a hepatocita növekedési faktor, az alapvető fibroblaszt növekedési faktor és a granulocita-makrofág telep-stimuláló faktor, serkentik a melanociták felszínén lévő minden egyes receptor és a melanin egy lizoszómával rokon organellumban, az úgynevezett melanoszómában termelődik [2-7]. Ezen tényezők közül az MSH ​​egy kis peptid hormon, amely a pro-opiomelanokortinból származik. A -MSH melanocortin 1 receptorhoz való kötődése növeli a ciklikus adenozin-monofoszfát (cAMP) szintjét, amely aktiválja a protein kináz A-t (PKA) [8,9]. A PKA ezután foszforilálja a cAMP-reszponzív elemkötő fehérjét (CREB), és a mikroftalmia-asszociált transzkripciós faktor (MITF) transzkripcióját a foszfo-CREB indukálja [10]. A MITF a tirozináz, a tirozinázzal rokon protein 1 (TYRP1) és a dopakróm tautomeráz (Dct vagy TYRP2) transzkripciós faktoraként működik, amelyek a melanogenezis kulcsenzimei, és indukálja expressziójukat [11]. Az érett melanoszóma a dendritcsúcs felé mozog, és ebben a folyamatban szerepet játszik a Rab27a-ból, Melanophilinből és Myosin Va-ból álló melanoszóma motoros fehérje komplex [12-14]. A melanophilin, amelynek kötődoménjei vannak a Rab27a-hoz, a miozin Va-hoz és az aktinhoz, egyidejűleg kötődik a melanoszóma felszínén lévő Rab27a-hoz és az aktin filamentummal kölcsönhatásba lépő miozin Va-hoz. Ezeknek a motoros fehérjéknek az összeállítása szükséges a melanoszóma transzportjához az aktin filamentum mentén a dendritcsúcsokhoz [15- 19]. Ezt követően a melanociták dendritvégéből a szomszédos keratinocitákba átvitt melanoszómák és a beépült melanoszómák a keratinociták perinukleáris területén helyezkednek el [20,21]. Bár a megfelelő melaninképződés fontos a normál sejtvédelemhez, a túlzott melanintermelés hiperpigmentációt idéz elő, beleértve a melazmát, a szeplőket és a szoláris lentigót, ami mentális stresszhez és rossz életminőséghez vezethet [22,23]. Így igény mutatkozik olyan kielégítő fehérítőszerek kifejlesztésére, amelyek nem okoznak olyan mellékhatásokat, mint a bőrirritáció, allergia kiváltása és karcinogenezis, és számos tanulmány készült különböző fehérítő mechanizmusokra [24,25].

A peptidek rövid aminosavláncok, a fehérje legkisebb egysége, amelyek peptidkötésekkel kapcsolódnak egymáshoz. A közelmúltban kiterjedt kutatások és fejlesztések folytak a peptidekkel, mint hatóanyagokkal kapcsolatban a kozmetikai és a gyógyszeriparban, mivel magas biokompatibilitásuk és fehérjeutánzó képességük van [26,27].

Átvizsgáltuk peptidkönyvtárunkat, és négy peptidet találtunk, amelyek befolyásolják a melanin szintézisét, migrációját és transzferét, valamint a melanoszóma lebomlását elősegítő aktivitást. Ezt követően ennek a tanulmánynak az volt a célja, hogy megvizsgálja egy négy, azonos mólarányú peptidet tartalmazó peptidkeverék fehérítő aktivitását.

MÓD

Anyagok

A peptidszintézishez használt 2-CTC gyantát a BeadTech-től (Szöul, Korea) vásároltuk. Az Fmoc-aminosavat, a hidroxi-benzotriazolt (HOBt) és az N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol- 1-il)urónium-hexafluor-foszfátot (HBTU) a CS Bio Co.-tól vásároltuk ( San Francisco, CA, USA). A szintézisben használt reagensek, köztük a dimetil-formamid (DMF), N,N-diizopropil-etil-amin (DIEA), piperidin, trifluor-ecetsav (TFA), tioanizol, fenol, etán-ditiol (EDT), triizopropil-szilán (TIS) és dietil-éter. a Daejung Chemical & Metal Co., Ltd.-től (Szöul, Korea) vásárolták.

A Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) por melanocitákhoz és magzati szarvasmarha-szérumhoz (FBS) a Thermo Fisher Scientific-től (Waltham, MA, USA), a folyékony DMEM táptalajt és a penicillin/sztreptomicint pedig a Welgene Inc.-től (Gyeongsan, Korea) vásárolta. . Nátrium-hidrogén-karbonát, nátrium-hidroxid, arbutin, 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazólium-bromid (MTT), 3,{{ A 7}}dihidroxi-L-fenilalanint (LDOPA), a tripszint és a rapamicint a Sigma-Aldrich-től (St. Louis, MO, USA), a Solvable-t pedig a PerkinElmertől (Waltham, MA, USA) vásároltuk. A Rab27A, a melanofilin, a MITF, a tirozináz és az aktin elleni antitesteket a Santa Cruz Biotechnology-tól (Dallas, TX, USA), a Beclin{12}}, LC3, p62, p-CREB és p-ERK1/2 elleni antitesteket pedig a Santa Cruz Biotechnology cégtől vásároltuk. a Cell Signaling Technology-tól (Danvers, MA, USA) vásároltuk. A primer szintézist a Cosmo GENETECH cégben (Szöul, Korea) végeztük, és a továbbiakban a kísérletben alkalmaztuk (1. táblázat).

Peptid szintézis

A 0,84 mmol/g kapacitású CTC gyantát duzzadási reakciónak vetettük alá DMF oldószert tartalmazó reaktorban. Ezután 2 ekvivalens Fmoc-C terminális aminosavat és 2,5 ekvivalens DIEA-t adtunk DMF-ben a reaktorba, és további 2 órán át reagáltattuk. A reakció befejeződését Kaiser tesztkészlettel (Sigma-Aldrich) igazoltuk, és a gyantát DMF-fel mostuk. Az Fmoc-ot úgy távolítjuk el, hogy a mosott gyantához kétszer 20%-os piperidint/DMF-et adunk. A reakció befejeződését Kaiser tesztkészlettel igazoltuk, és a gyantát DMF-fel mostuk. Ezt követően a következő eljárást megismételtük az aminosavak sorrendjének megfelelően a C-terminálistól az N-terminálisig. Miután 2 ekvivalens Fmoc-aminosavat, 2 ekvivalens HBTU-t, 2 ekvivalens HOBt-t és 2,5 ekvivalens DIEA-t adtunk hozzá DMF-ben, a reakciót 2 órán keresztül folytattuk. A reakció befejeződését Kaiser tesztkészlettel igazoltuk, és a gyantát DMF-fel mostuk. Az Fmoc-ot eltávolítottuk egy aminosavból úgy, hogy a mosott gyantához kétszer 20%-os piperidint/DMF-et adtunk. A reakció befejeződését Kaiser tesztkészlettel igazoltuk, és a gyantát DMF-fel mostuk. A Pep-3 esetében a ferulinsav konjugációját a következő eljárással végeztük. 2 ekvivalens ferulasav, 2 ekvivalens HBTU, 2 ekvivalens HOBt és 2,5 ekvivalens DIEA hozzáadása után DMF-ben a reakciót 2 órán keresztül végezzük. A reakció befejeződését Kaiser tesztkészlettel igazoltuk, és a gyantát DMF-fel mostuk. A végső szintézis befejezése után hasítási oldatot (TFA:H2O: Ohioans ole:fenol:EDT:TIS=81.5:5:5:5:2.5:1) adtunk hozzá, hogy a peptidet elválasztsuk a gyantától. . A peptidet ezután dietil-éterrel kicsaptuk, és ötször mostuk. Ezt követően szárítást végeztünk a végső peptidtermék kinyerésére.

A szintetizált peptid tisztaságát HPLC (Thermo Fisher Scientific/U{{0}}) analízissel határoztuk meg, és UV 214 nm-en, 1 ml/perc áramlási sebesség mellett, mozgófázisban {{ 5}},1% TFA vízben/0,1% TFA acetonitrilben C18 (Agilent, Pursuit XRs, 250 × 4,6 mm, 5 m, 100 A) oszlop alkalmazásával.

A molekulatömeg azonosítására LC-MS/MS (AB SCIEX, 3200 Q-trap) analízist végeztünk, amelyet MS/MS-sel detektáltunk {{7 áramlási sebesség mellett. }},25 ml/perc mozgófázisban 0,1% hangyasav vízben/0,1% hangyasav acetonitrilben gradiens C18 (Agilent, Pursuit XRs, 100 × 2,0 mm, 5 m, 100Å) oszlop használatával . Az MS/MS elemzés feltételei között szerepelt az ESI pozitív mód, Forrás/Gáz: CUR=20, CAD=Magas, IS=5500, TEM=350, GS1=50 , GS2=50/Összetett DP=50–80, EP=10, CE=10–50 és CES=1–10 (2. táblázat).

Sejttenyésztés

A kísérletben használt B16F10 melanomasejteket az ATCC-től (Manassas, VA, USA) vásároltuk. A B16F10 sejteket 10% hővel inaktivált FBS-t, 1% penicillint/sztreptomicint és 1,5 g/l nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó DMEM tápközegben inkubáltuk 37 fokos hőmérsékleten, 5% CO2-tartalom mellett.

A HaCaT keratinocitákat a CLS-től (Eppelheim, Németország) vásároltuk. A HaCaT sejteket 10% hővel inaktivált FBS-t és 1% penicillint/sztreptomicint tartalmazó DMEM tápközegben inkubáltuk 37 °C-on, 5% CO2 mellett.

Sejt életképesség

A B16F10 sejteket egy 48-lyukú lemezre oltottuk 8 × 103 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket 2% FBS-t tartalmazó tápközegben 3 napon keresztül. Inkubálás után 20 l 4 mg/ml MTT-t kezeltünk mindegyik lyukban 4 órán át, és a tápközeget eltávolítottuk. Ezt követően a sejteket 500 l DMSO-val kezeltük a formazán feloldására. Az abszorbanciát 570 nm-en mértük spektrofotométerrel (Molecular Devices, San Jose, CA, USA).

Melanintartalom vizsgálat

A B16F10 sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 5 × 104 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket 2% FBS-t tartalmazó tápközegben 3 napon keresztül. A melanintermelés indukálására 100 ng/ml -MSH-t együtt kezeltünk, és 200 M arbutint használtunk pozitív kontrollként. A sejteket összegyűjtöttük és 200 l 1 M NaOH-dal végzett kezeléssel lizáltuk, és spektrofotométerrel mértük a lizátum abszorbanciáját 490 nm-en.

Tirozináz aktivitás teszt

A B16F10 sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 5 × 104 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket 2% FBS-t tartalmazó tápközegben 3 napon keresztül. A melanintermelés indukálására 100 ng/ml-MSH-t együtt kezeltünk, és 200 M arbutint használtunk pozitív kontrollként. Minden lyukat 200 l lízispufferrel (Sigma-Aldrich) kezeltünk a lizátum összegyűjtésére. A fehérje mennyiségi meghatározását követően BCA készlettel (Thermo Fisher Scientific), mindegyik csoportból 90 g fehérjét inkubáltunk 20 l 10 mM L-DOPA-val egy lyuklemezben 30 percig 37 °C-on. A keverék abszorbanciáját 475 nm-en spektrofotométerrel mértük.

Melanoszóma izoláció

A B16F1{{10}} sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 5 × 104 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. A sejteket 100 ng/ml-MSH-val kezeltük 72 órán keresztül a melaninszintézis indukálására, majd tripszin/EDTA kezeléssel összegyűjtöttük. A sejteket ezután 10 ml 0,25 M szacharózzal (10 mM HEPES pufferben) mostuk, és 10 ml 0,25 M szacharózoldatban újraszuszpendáltuk. Ezt követően folyékony nitrogénnel történő fagyasztás után 37 fokos felengedést végeztünk, amit 10-szer megismételtünk. 1,000 g-vel 10 percig végzett centrifugálás után a felülúszót összegyűjtöttük, és további 45 percig centrifugáltuk 20 630 g-n és 4 fokon. Ezt követően a pelletet DPBS-ben reszuszpendáltuk, és felhasználás előtt –80 °C-on tároltuk.

Melanoszóma felvételi teszt

A HaCaT sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 1 × 105 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután a peptidkeverékkel szérummentes tápközegben 1 órán át kezeltük, majd izolált melanoszómákkal 40 órán át kezeltük. A sejteket 200 l 1 M NaOH-val történő kezeléssel lizáltuk, és spektrofotométerrel mértük a lizátum abszorbanciáját 490 nm-en. Ezenkívül a melanoszómafestést Fontana-Masson Stain Kit (ScyTek Laboratories, Logan, UT, USA) segítségével végeztük, és a sejtek képeit fénymikroszkóppal detektáltuk.

Melanoszóma degradációs teszt

A HaCaT sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 1 × 105 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Izolált melanoszómákkal előkezeltük őket szérummentes tápközegben 48 órán át, majd 72 órán át peptidkeverékkel kezeltük. Egy mikromol rapamicint használtunk pozitív kontrollként. A sejteket 200 l 1 M NaOH-val történő kezeléssel lizáltuk, és spektrofotométerrel mértük a lizátum abszorbanciáját 490 nm-en. Ezenkívül a melanoszómafestést Fontana-Masson Stain Kit segítségével végeztük, és a sejtek képeit fénymikroszkóppal detektáltuk.

Génexpressziós elemzés (RT-PCR)

A B16F10 sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 5 × 104 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket 2% FBS-t tartalmazó tápközegben 3 napon keresztül. A melanintermelés indukálására 100 ng/ml-MSH-t együtt kezeltünk, és 200 M arbutint használtunk pozitív kontrollként. Az RNS-t RNS extrakciós kittel (Qiagen, Németország) izoláltuk a sejtekből, és a cDNS szintézist RT-PCR premix segítségével (iNtRON Biotechnology, Seongnam, Korea) végeztük. A reakcióelegy PCR előkeverékkel (iNtRON Biotechnology) és az egyes génekhez tartozó primerekkel történő elkészítése után a PCR-t PCR géppel (Eppendorf, Németország) hajtottuk végre. Ezt követően az mRNS expressziós mintázatait agaróz gélelektroforézissel határoztuk meg.

A HaCaT sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 3 × 105 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket szérummentes tápközegben 1 órán át, és további 4 egység tripszinnel kezeltük 16 órán át. A sejteket összegyűjtöttük, és az RT-PCR-t a fent leírt módon hajtottuk végre.

Fehérje expressziós elemzés (Western-blot)

A B16F10 sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 5 × 104 sejt/lyuk sűrűséggel, és 1 napig inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket 2% FBS-t tartalmazó tápközegben 3 napon keresztül. A melanintermelés indukálására 100 ng/ml -MSH-t együtt kezeltünk, és pozitív kontrollként 200 M arbutint használtunk. A sejteket lízispufferrel lizáltuk, és a protein mennyiségét BCA kit segítségével határoztuk meg. Húsz mikrogramm fehérjét választottunk el 8%-os poliakrilamid gélen, és elektroforetikusan vittük át polivinilidén-fluorid membránokra. A membránokat 0,5 százalékos Tween 20-at (PBS-T) tartalmazó PBS-ben, 5 tömeg/térfogat százalékos sovány tejben blokkoltuk. A blokkolóoldattal hígított primer antitestekkel való inkubálást egy éjszakán át 4 fokon végeztük, majd PBS-T-vel mostuk. A megfelelő másodlagos antitesteket blokkoló oldatokban hígítottuk, és a membránokkal inkubáltuk 1 órán át szobahőmérsékleten, majd PBS-T-vel mostuk. A membránokat Western detektáló reagenssel (Elpis Biotech, Daejeon, Korea) Gel Doc (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) segítségével tettük láthatóvá.

A p-CREB és a p-ERK elemzéséhez B16F10 sejteket oltottunk egy 6-lyukú lemezre 3 × 105 sejt/lyuk sűrűséggel, és 1 napig inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket 2% FBS-t tartalmazó tápközegben. Az inkubációs idő 30 perc volt a p-CREB analízisénél és 10 perc a p-ERK elemzésénél. A melanintermelés indukálására 100 ng/ml -MSH-t együtt kezeltünk, pozitív kontrollként pedig 200 M arbutint használtunk. A Western-blotot izolált fehérjék felhasználásával a fent leírt módon végeztük.

A HaCaT sejteket egy 6-lyukú lemezre oltottuk 3 × 105 sejt/lyuk sűrűséggel, és 16 órán át inkubáltuk. Ezután különböző koncentrációjú peptidkeverékkel kezeltük őket szérummentes tápközegben 3 napon keresztül. Kétszáz nanogramm rapamicint kezeltünk 3 órán át pozitív kontrollként. A Western-blotot izolált fehérjék felhasználásával a fent leírt módon végeztük.

Bőrekvivalens elemzés

A peptidkeverék fehérítő hatásának bőrekvivalens alkalmazásával történő teszteléséhez liposzómamintát készítettünk az alábbiak szerint. A peptidkeveréket 2,000 g/ml koncentrációjú desztillált vízben oldjuk, és pH-ját 7-re állítjuk be. 0.22- m pórusméretű szűrővel szűrjük, 1 százalék hidrogénezett foszfatidilkolin puffert 10 százalékos arányban kevertünk össze. A nanoméretű liposzómamintát úgy készítették elő, hogy a Microfluidizer segítségével ötször 1,000 bar nyomáson áthaladtak az 75-m-sejteken.

A MelanoDerm MEL-300-B-t (MatTek Corporation, Ashland, MA, USA) hetente háromszor 2 héten keresztül 25 l vagy 50 l liposzómával kezeltük, amely 2,000 g/ml peptidkeveréket tartalmazott. Ugyanilyen térfogatú vivőanyagot alkalmaztunk a kontrollszövetre. A kezelt bőr ekvivalenseit DPBS-sel mostuk, és fénymikroszkóppal ellenőriztük a melanociták morfológiáját. Ezt követően a melanintermelés elemzéséhez a bőr ekvivalenseit –80 fokon 30 percig lefagyasztottuk, majd szobahőmérsékleten felengedtük. A szövetmintákat 1%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal 30 percig inkubáltuk, majd szárítottuk. 300 l Solvable-val végzett kezelés után a mintákat egy éjszakán át 95 fokon hagytuk, majd szobahőmérsékletre hűtöttük. A szövetkivonat abszorbanciáját 490 nm-en spektrofotométerrel mértük.

A szöveteken belüli melanin eloszlásának szövettani vizsgálata érdekében az összes mintát 4%-os foszfáttal pufferolt formalinban fixáltuk 24 órán keresztül. A rögzített mintákat paraffinba ágyaztuk, és mikrotom segítségével 5-m-es metszetre vágtuk (Leica Biosystems, Wetzlar, Németország). A paraffin metszeteket Fontana-Masson Stain Kit segítségével festettük meg a gyártó utasításai szerint, és fénymikroszkópos vizsgálatot végeztünk.

Statisztika

Az ebben a vizsgálatban végzett kísérleteket háromszor vagy többször megismételték. Az adatok statisztikai szignifikanciáját Student-féle t-próbával teszteltük. A kapott értékeket átlag ± szórásként fejeztük ki, és statisztikailag szignifikánsnak tekintettük, ha a p-érték kisebb volt, mint 0,05.

EREDMÉNYEK

A peptidkeverék gátolja az MSH ​​által kiváltott melaninszintézist és a tirozináz aktivitást a B16F10 sejtekben

A peptidkeverék sejtek életképességére gyakorolt ​​hatásának meghatározására B16F10 melanoma sejteket és HaCaT keratinocitákat kezeltünk a peptidkeverékkel 10, 50, 100 és 200 M koncentrációban, és MTT vizsgálatot végeztünk. Az eredmények azt mutatták, hogy a peptidkeverék nem volt citotoxikus az összes kezelési koncentrációban, és a következő kísérleteket a fenti koncentrációtartományban végeztük (1A. ábra).

A peptidkeverék melaninszintézisre gyakorolt ​​gátló hatásának azonosítása érdekében a B16F10 sejteket 10, 50, 100 és 200 M koncentrációban kezeltük, hogy összehasonlítsuk a melanintermelési sebességet. Az eredmények a peptidkeverék melanintermelésének dózisfüggő gátlását mutatták. A gátlási arány 3 százalék volt a legalacsonyabb, 10 M koncentrációnál és 26 százalék a legmagasabb, 200 M koncentrációnál (1B. ábra).

A tirozináz a melaninszintézis egyik kulcsenzime. A tirozináz aktivitási vizsgálattal ellenőriztük, hogy a peptidkeverék melanogenezist gátló hatását a tirozináz szabályozása okozza. Az eredmények azt mutatták, hogy a peptidkeverék jelentősen gátolja a tirozináz aktivitást B16F10 sejtekben. A gátlási arány 8 százalék volt a legalacsonyabb, 10 M koncentrációnál és 33 százalék a legmagasabb, 200 M koncentrációnál (1C. ábra).

Kérjen többet: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501