Yishen Qingli Heluo granulátum a krónikus vesebetegség kezelésében: hálózati farmakológiai elemzés és kísérleti validálás
Dec 07, 2023
Háttér:Krónikus vesebetegség(CKD) globális népegészségügyi problémának számít, magas morbiditással és halálozással. A Yishen Qingli Heluo granulátum (YQHG) a képviselőjehagyományos kínai orvoslás(TCM) jogorvoslat aCKD klinikai kezelése. Ennek a tanulmánynak az a célja, hogy feltárja az YQHG mechanizmusát a CKD-ben hálózati farmakológia és kísérleti validáció révén.
Mód:A hagyományos kínai orvoslás rendszereiFarmakológiai (TCMSP) adatbázist és széles körű irodalombányászatot alkalmaztak az YQHG aktív vegyületeinek szűrésére. Számos bioinformatikai eszközt és online adatbázist alkalmaztunk az YQHG és a CKD releváns célpontjainak megszerzésére. Az YQHG és a CKD közötti metszéspontokat jelölt célpontoknak tekintettük. A vegyület-célpont, a gyógynövény-jelölt célpont és a fehérje-fehérje interakciós hálózatokat megszerkesztettük és megjelenítettük a topológiai elemzésekhez. A biológiai folyamatok és jelátviteli útvonalak meghatározására GO és KEGG dúsítási elemzéseket végeztünk. Molekuláris dokkolást használtunk a hálózati farmakológia megbízhatóságának igazolására. Végül farmakológiai értékelést végeztünk az YQHG CKD elleni mechanizmusának feltárására egy 5/6 nefrektómia modellen.
Eredmények:Hetvenkilenc jelölt célpontot, tíz alapvető biológiai folyamatot és egy kulcsfontosságú jelátviteli útvonalat (p53) szűrtünk. A PTGS2-t kulcsfontosságú célpontként azonosították a H-CT hálózat alapján. A molekuláris dokkolás azt mutatta, hogy a kvercetin, a kaempferol és a luteolin három kulcsfontosságú vegyület, amelyek a legjobb kötőaktivitással rendelkeznek. Ezenkívül az IL6 és a kvercetin stabil komplexet alkothat nagy kötési affinitással (-7,29 kcal/mol). Az in vivo kísérletek kimutatták, hogy az YQHG javította a veseműködést és a fibrózist 5/6 nefrektomizált patkányban. Ezenkívül a PTGS2, IL6 csökkent expresszióját és a p53 fokozott expresszióját figyelték meg a veseszövetben. Nevezetesen, az YQHG-vel kezelt patkányok bélmikrobiótája átalakult, amelyet a Firmicutes/Bacteroidota csökkent aránya jellemez.
Következtetés: Eredményeink előre jelezték és igazolták az YQHG lehetséges célpontjaitCKDholisztikus perspektívából, és értékes irányt adott az YQHG további kutatásához.
Kulcsszavak:Yishen Qingli Heluo granulátum, hálózati farmakológia,krónikus vesebetegség, 5/6 nephrectomia, bélmikrobióta
Bevezetés
Krónikus vesebetegségA (CKD) egyre inkább globális közegészségügyi problémaként ismerik el, magas megbetegedéssel (8724/100,000 fő) és mortalitással (15,9/100,000 fő).1 A kockázati tényezők és a betegségek, amelyek veseműködési zavarokhoz vezetnek, változatosak és kevéssé tisztázottak. Következésképpen kevés stratégia áll rendelkezésre a CKD progressziójának késleltetésére, a legtöbb jelenlegi kezelési stratégia a proteinuria csökkentésére, valamint a vérnyomás és a húgysav csökkentésére összpontosít. Például a renin-angiotenzin rendszer inhibitorai a fő terápiás gyógyszerek a CKD kezelésében a proteinuria csökkentése és a veseműködés védelme szempontjából.2,3 A tanulmány azonban arról számolt be, hogy ezek a gyógyszerek nem biztos, hogy segítenek megelőznia CKD progressziójanak nekvégstádiumú vesebetegség(ESRD);4 emellett számos mellékhatást okozhatnak, például megnövekedett szérum kálium-, kreatininszintet és rákkockázatot.5–8 Jelenleg a vesepótló kezelésben részesülők száma meghaladta a 2,6 milliót, és várhatóan 2030-ra világszerte megduplázódik, 5,4 millióra.9 Ha a CKD ESRD-vé válik, az nemcsak gazdasági terheket ró a betegekre, hanem nagymértékben befolyásolja életminőségüket is. Ennek megfelelően sürgősen fel kell tárni a lehetséges terápiás gyógyszereket a CKD megelőzésére és kezelésére ezen a területen.
A hagyományos kínai orvoslást (TCM) a krónikus vesebetegség lehetséges kezelési lehetőségének tekintik, bizonyított hatékonysága, széles körű alkalmazása és kevés mellékhatása miatt. Számos eset kimutatta, hogy a TCM gyógynövényeket alternatív forrásnak tekintik a CKD progressziójának késleltetésében a hagyományos tapasztalatok és a többcélú jellemzők miatt.10–12 A Yishen Qingli Heluo granulátumot (YQHG) a Jiangsu Tartományi Kínai Orvostudományi Kórház önállóan fejlesztette ki. TCM gyógymód a CKD klinikai kezelésére. A klinikai vizsgálatok kimutatták, hogy az YQHG javíthatja a klinikai tüneteket és csökkentheti a szérum kreatinin (Scr) szintjét. Ezen túlmenően, a CKD3 progresszióját CKD4-vé is késleltetheti az YQHG.13,14 Korábbi vizsgálatunk kimutatta, hogy az YQHG az autofágia, az apoptózis és a gyulladásos válasz szabályozásával mérsékelheti a vesekárosodást.15 A granulátummal kapcsolatos legtöbb tanulmány azonban főként néhány körülményre összpontosított. klasszikus jelátviteli utak, mint a MAPK, TGF- és rokon útvonalak, ami az átfogóság hiánya volt. A hatékony szisztematikus módszerek múltbeli hiánya miatt a krónikus vesebetegség elleni YQHG hatékony vegyületeinek, célpontjainak és megfelelő farmakológiai mechanizmusainak kutatása korlátozott. Ezért a kutatás az YQHG monomerének vagy aktív vegyületének mechanizmusára összpontosított a CKD kezelésében. Az YQHG azonban olyan, mint egy különféle hangszerekből álló kifinomult zenekar. Még mindig meg kell vizsgálni, hogyan működik együtt ez a 10 gyógynövény a tökéletes repertoár érdekében. Ezért fontos új utakat találni az YQHG CKD elleni mechanizmusainak átfogó megértéséhez. A hálózati farmakológia egy élvonalbeli módszertan, amelyet először Hopkins javasolt16. Ez a módszer összhangban van a TCM holisztikus nézetével. Az elmúlt években széles körben alkalmazták a TCM mechanizmusainak tisztázására a krónikus betegségek, köztük a krónikus betegségek kezelésében.17–19.
Ebben a tanulmányban először a hálózati farmakológiai megközelítést használtuk eszközként az YQHG aktív vegyületeinek feltárására, és megvizsgáltuk a mögöttes hatásmechanizmust a CKD kezelésében. Ezután molekuláris dokkolást alkalmaztak a hálózati farmakológia megbízhatóságának ellenőrzésére. Ezen túlmenően validáltuk az YQHG nefroprotektív potenciálját és a kulcsfontosságú célexpressziókat 5/6 nefrektomizált patkányban. Érdemes megjegyezni, hogy korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a bélmikrobióta fontos szerepet játszott a TCM terápiás hatásában.20–22 A bélmikrobióta megváltoztathatja a TCM gyógynövények kémiai összetételét, és más biológiai hasznosulást, biológiai aktivitást vagy toxicitást eredményezett, mint az előfutár. A TCM gyógynövények a bélmikrobióta sokféleségét és összetételét is átalakíthatják a kapcsolódó betegségek enyhítése érdekében.23 Ezért a 16S rRNS szekvenálást a TCM gyógynövények, a CKD és a bélmikrobióta profilja közötti kapcsolat elemzésére használják, megalapozva az YQHG-vel kapcsolatos további kutatásokat. E kutatás elemzési folyamatának részleteit az 1. ábra mutatja.
Anyagok és metódusok
Hálózati farmakológiai elemzések
Aktív vegyületek és kapcsolódó célpontok beszerzése az YQHG-ben Az egyes YQHG-ben található gyógynövények vegyületeit a TCMSP adatbázisból (https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) és széles körű irodalombányászatból szereztük be. A vegyületeket ADME kiértékelő rendszeren szűrtük át, amelyben az orális biohasznosulás (OB) és a gyógyszerszerűség (DL) volt a fő paraméter. Az OB 30% vagy annál nagyobb és DL 0,18-nál nagyobb vagy egyenlő volt a TCMSP adatbázis által javasolt ADME szűrési módszer küszöbértéke.24 TCMSP, STITCH (http://stitch.embl.de /), PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) és Swiss Target Prediction (http://www.swisstargetprediction.ch/) adatbázisokat használtunk az YQHG egyes aktív vegyületeinek megfelelő célpontok azonosítására. . Az eredmények szabványosítására az Uniprot (https://www.uniprot.org/) adatbázist használtuk.
Fishing for Candidate Targets of YQHG in Treating CKD A CKD-vel kapcsolatos célpontokat a GeneCards-tól (https://www.genecards.org/), az OMIM-től (http://www.omim.org/), a DisGeNET-től (https://) szereztük be. www.disgenet.org/), TTD (http://db.idrblab.net/ttd/) és MalaCards (https://www.malacards.org/) adatbázisok. A CKD és az YQHG összes összegyűjtött célpontját egyesítették, miután az Uniprot adatbázis szabványosította őket.
A CKD elleni YQHG célpontjait a Venn platform azonosította (http://bioinformatics.psb.ugent.be/web tools/Venn/), és az eredményeket további elemzésekhez használták fel.
Hálózatépítés
(1) Compound-target (C-T) network of YQHG: The data of active compounds and their corresponding targets were imported into Cytoscape software (v3.6.0, Boston, MA, USA) to construct the C-T interaction network. The degree centrality, betweenness centrality, and closeness centrality were evaluated by the Network Analyzer plug-in of Cytoscape software. According to the three topological parameters of each node, the key active compound of YQHG was selected and analyzed. (2) Herb-Candidate target (H-CT) network of YQHG: The data of 10 herbs and candidate targets were imported into Cytoscape software to construct the H-CT interaction network. The pie chart was used to indicate the herb to which the candidate target (represented by circular nodes) belonged. (3) Protein-protein interaction (PPI) network of candidate targets: The visualization of PPI network was obtained by combining the STRING database (https://string-db.org/) and Cytoscape software. The species were limited to Homo sapiens, and the PPI confidence score>A 0.9 volt a STRING adatbázis által javasolt szűrési paraméter.25 A csomópontok és az élek jelölt célpontokat, illetve fehérje-fehérje kölcsönhatásokat képviselnek a PPI-hálózatban. Ebben a vizsgálatban az alapvető célfehérjéket a "Degree" paraméterrel választottuk ki és azonosították. A Degree-t a hálózat csomópontjainak topológiai jelentőségének értékelésére használtuk, amelyet a Cytoscape szoftver Network Analyzer beépülő modulja számított ki.
GO és KEGG Pathway dúsítási elemzés
A GO biológiai folyamat kulcsfontosságú feltételeinek és a jelölt célpontok kritikus jelátviteli útvonalainak vizsgálatához az R csomagot (clusterProfiler, 4.1-es verzió.0) használtuk a GO és KEGG dúsítási elemzéshez.26 Korrigált P érték<0.05 was considered statistically significant.
Molekuláris dokkolás
A molekuláris dokkolás vizsgálata során az Autodock Vina 1.1.2 szoftvert használtuk a PPI és hálózati analizátor elemzések alapján azonosított YQHG kulcsfontosságú aktív vegyületei és a hub fehérjék közötti kötési mód és kölcsönhatások meghatározására. Ez a megközelítés a következő fő lépéseket tartalmazta: (1) Ligandum molekula előállítása. A hatóanyagok 3D szerkezetét mol2 formátumban töltöttük le a TCMSP adatbázisból. Az AutodockTools 1.5.6-ot használták a ligandumolekula megnyitására, hidrogén hozzáadására, gasteiger töltésre, ligandum gyökér kimutatására, forgatható kötés keresésére és meghatározására, végül pdbqt formátumban történő mentésére. (2) Receptor molekula előállítása. A hub fehérjék 3D struktúráit az RCSB Protein Data Bankból (www.rcsb.org) töltöttük le. A fehérje feltöltéséhez az AutodockTools 1.5.6-ot használtuk. Az összes hidrogénatom hozzáadása, a Gasteiger-töltés kiszámítása és a nem poláris hidrogén kombinálása után a rendszer receptorként határozza meg, és pdbqt formátumban menti. (3) Dokkolási paraméterek beállítása. AutoGrid eszköz a dokkoló doboz paramétereinek (XYZ koordináták és rácsméret) beállításához. A számítás pontosságának növelése érdekében a teljességértéket 20-ra állítottuk. (4) Végrehajtás és kimenet. A félig rugalmas dokkoláshoz az Autodock Vina 1.1.2 szoftvert használtuk, és a legjobb konformációt választották végső dokkolási konformációként. (5) Elemzés és megjelenítés. A dokkolási mód elemzéséhez a legjobb kötési affinitással rendelkező konformációt választottuk ki. A fehérje kötési affinitása kisebb volt, mint -5 kcal/mol, ami arra utal, hogy a fehérje bizonyos kötődési aktivitást mutat a vegyülettel.27 A vegyület és a legjobb konformációjú fehérje dokkolási eredményeit PyMol szoftverrel elemeztük és vizualizáltuk.
YQHG előkészítése
Az YQHG (tételszám: 20051031) 10 egyedi TCM granulátumból állt: Angelicae Sinensis Radix (Danggui, DG), Achyranthis Bidentatae Radix (Niuxi, NX), Centella Asiatica (L.) Urban (Jixuecao, JXC), Polygonati, RjhizomaguHang, HJ), Smilacis Glabrae Rhixoma (Tufuling, TFL), Radix Rhei Et Rhizome (Dahuang, DH), Pyrrosiae Folium (Shiwei, SW), Hedysarum Multijugum Maxim (Huangqi, HQ), Serissa Japonica (Thunb.) Thunb (Liuyuexue, LYX) ), a Polygoni Cuspidati Rhizoma Et Radix (Huzhang, HZ), amelyet a Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Co., Ltd. (Wuxi, Jiangsu, Kína) gyártott. Az egyetlen TCM granulátum és a megfelelő nyers gyógyszer arányát az 1. táblázat tartalmazza. A fenti granulátumokat Wei Sun professzor hitelesítette (Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Jiangsu, Kína). Ebben a vizsgálatban a testtömeg-alapú gyógyszeradagolási formátumot (kg-onként) használták a patkányok YQHG-dózisainak kiszámításához.28 70 kg-os felnőtt testtömeggel számolva a patkányokra átszámított klinikai ekvivalens dózis 2,8 g/kg volt, ami az YQHG közepes dózisaként használják. Ebben a vizsgálatban az alacsony és a magas dózis a YQHG közepes dózisának fele, illetve kétszerese volt. UHPLC-MS-t végeztünk az YQHG kivonat stabilitásának és hatékonyságának megerősítésére.
5/6 Nephrectomia és YQHG Adminisztráció felépítése
A hím Sprague Dawley (SD) patkányokat (20210312Aazz0619000112 sz., 6–8 hetes, 200–230 g) a Vital River Experimental Animal Co., Ltd. (Zhejiang, Kína) biztosította. A patkányokat a Nanjing Kínai Orvostudományi Egyetem specifikus kórokozómentes kísérleti állatközpontjában helyezték el. Pontosabban, a patkányokat műanyag ketrecekben helyezték el, és szabadon ellátták elegendő standard élelmiszerrel és vízzel. A patkányokat nevelő helyiség környezeti feltételei között szerepelt a hőmérséklet (22±2 fok), a páratartalom (50±10%) és a 12/12 órás fény/sötétség ciklus. Minden állatkísérletet a Nanjingi Kínai Orvostudományi Egyetem Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága által jóváhagyott protokoll szerint végeztek [engedélyszám: 202101A047]. A laboratóriumi állatok kíméletére vonatkozó irányelvek a Laboratory Animal Guidelines for Ethical Review of Animal Welfare (GB/T 35892–2018) voltak. Minden műtétet megfelelő altatásban végeztek, és mindent megtettek az állatok szenvedésének minimalizálása érdekében.
A CKD-t 24 patkányban indukáltuk kétlépéses 5/6-os nephrectómiával a korábban leírtak szerint.29 A két műtét menete a következő volt: a bal vese parenchyma 2/3-át abláltuk (elkerüljük a vesehilumot), majd gyorsan elhelyezzük. zselatin szivacsot a bemetszés felületére, hogy 4-5 percre megállítsa a vérzést. Egy héttel később jobb oldali egyoldali veseműtétet hajtottak végre. A vesefejet steril, 3–0 varrattal lekötöttük, majd a jobb vesét reszekáltuk. A hasüreget átöblítettük 0,9%-os steril sóoldattal, hogy elkerüljük a posztoperatív hasi adhéziót két műtét után. Az érzéstelenítés előidézése és fenntartása (az izoflurán fogyasztása 6 ml/h, illetve 3 ml/h volt) a műtét során a rágcsálógáz anesztéziagéppel (Yuyan-ABS) történt. Hat álműtéten átesett patkányt használtunk kontrollként. A CKD patkányokat véletlenszerűen négy csoportra osztották (n=6 minden csoportban). Az alcsoportok és a tápszondás szerek napi adagja a következő volt: I) Modellcsoport (steril víz); II. Alacsony dózisú YQHG csoport (1,4 g/kg YQHG); III) Közepes dózisú YQHG (2,8 g/kg YQHG); IV) Nagy dózisú YQHG (5,6 g/kg YQHG). A kísérlet során az összes patkányt hetente kétszer lemértük, és ennek megfelelően beállítottuk a gyógyszeradagokat. A kísérlet végén patkányokból vizelet- és székletmintákat vettünk, mielőtt leöltük őket. Vérmintákat és veseszöveteket gyűjtöttünk további vizsgálatokhoz.
Reagensek
Az Scr-t, a vér-karbamid-nitrogént (BUN) és a vizeletfehérje-mennyiségi vizsgálati készleteket (C011-2-1, C013-2-1, C035-2-1) a Nanjing Jiancheng Biotech Co., Ltd.-től (Nanjing, Jiangsu, Kína). Az IL-6 ELISA készletet (bsk00042) a Nanjing Jinyibai Biotech Co., Ltd.-től (Nanjing, Jiangsu, Kína) vásároltuk. A BCA fehérjekoncentráció vizsgálati készletet (PC0020) a Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.-től (Peking, Kína) szereztük be. Az anti-PTGS2 antitestet (ab179800), az anti-p53 antitestet (ab227655), az anti-GAPDH antitestet (ab181602) és a kecske anti-nyúl IgG H&L-t (HRP) (ab6721) az Abcam-tól (Cambridge, Egyesült Királyság) vásároltuk.
Scr, BUN és 24 órás vizeletprotein mennyiségi meghatározása
Az Scr, BUN és 24 órás vizeletfehérje szinteket Scr, BUN és vizeletfehérje kvantifikációs assay kittel mértük az utasításoknak megfelelően. Ezek közül a vizeletfehérje mennyiségi meghatározását 24 órás vizeletgyűjtéssel végezték metabolikus ketrecekkel a patkányok leölése előtti napon. A képlet a következő: Vizelet fehérje (mg/24h)=vizeletfehérje koncentráció (mg/L)×24h vizelettérfogat (L).
A veseszövetek kórszövettani értékelése
A patkányok veséit előhűtött PBS-sel (Solarbio) öblítettük, majd 4%-os paraformaldehidben (biosharp) rögzítettük. Metszeteket (4 μm) vágtunk ki a paraffinba ágyazott veseszövetből, és hematoxilinnel és eozinnal (H&E) vagy Masson trikrómmal (Masson) (Solarbio) festettük. A fénymikroszkópos képeket Digital Slide Scanner segítségével fényképeztük (Típus specifikáció: Pannoramic DESK, P-MIDI, P250; Cég: 3D HISTECH; Ország: Magyarország; Szkenner szoftver: Pannoramic Scanner). A glomeruláris és tubulointerstitialis fibrózis területének kiszámításának lépései a következők voltak: Először is a CaseViewer2.4 szoftverrel választottuk ki a glomeruláris (tubulointerstitialis) területet a 40×-es képalkotáshoz. Próbálja meg kitölteni a teljes látómezőt a szövettel, és ügyeljen arra, hogy az egyes képek háttérfénye egyenletes legyen. Másodszor, az Image-Pro Plus 6.0 szoftver képelemzést végzett, a pixelt standard egységként állította be, és minden szelethez két látómezőt választottak ki. Végül a fibrózis területét értékeltük, azaz a fibrózisos terület százalékos arányát (%)=glomeruláris (tubulointerstitális) fibrózis terület/glomeruláris (tubulointerstitialis) terület × 100%.
A bél mikrobiota elemzése
Az öt csoportban (Sham, Model, LD YQHG, MD YQHG, HD YQHG) lévő összes patkány ürülékét összegyűjtöttük a bél mikrobiota elemzéséhez. A bélmikrobióta szekvenálásának négy fő lépése a következő volt: I) A genom DNS kinyerése: A széklet teljes DNS-ét EZNA® Soil DNA Kit (Omega Bio-tek) segítségével extraháltuk a gyártó protokollja szerint. A DNS koncentrációját és tisztaságát 1%-os agarózgélen követtük. II) PCR amplifikáció: A 16S rRNS gén V3-V4 régióját egy specifikus primer (338F_806R) segítségével amplifikáltuk a vonalkóddal. A PCR amplifikációt a TransStart Fastpfu DNS polimeráz kit segítségével végeztük. III) PCR-termékek mennyiségi meghatározása, keverése és tisztítása: Tekintse meg az elektroforézis előzetes kvantifikációs eredményeit, a QuantiFluor™ -ST Assay Kit-et (Promega) használtuk a PCR-termékek kimutatására és mennyiségi meghatározására, majd a megfelelő arányok keverésére a szekvenálási követelményeknek megfelelően. minden minta. Ezután a PCR-termékek keverékét GeneJET Gel Extraction Kit-tel (Thermo Fisher Scientific) tisztítottuk. IV) Könyvtár előkészítés és szekvenálás: A profilalkotást a MiSeq platformon (Illumina, Inc., San Diego, CA) végeztük. A rövid leolvasások gyors hosszbeállítását (FLASH, 1.2.11-es verzió) használtuk a 16S rRNS szekvenálási adatok szűrésére. Az operatív taxonómiai egységeket (OTU-k) 97%-os hasonlósági határérték mellett választottuk ki, és a tisztított amplikonokat Illumina MiSeq platformon szekvenáltuk a Majorbio Biopharm Technology Co. Ltd.-nél (Sanghaj, Kína) a szabványos protokollok szerint.
Western blot és ELISA
A fagyasztott veseminták teljes fehérjét 1% PMSF-et (Beyotime) tartalmazó RIPA lízispufferrel (Beyotime) extraháltuk. A fehérjekoncentrációt BCA proteinkoncentrációs assay kit (Solarbio) segítségével határoztuk meg az utasítások szerint. A fehérjéket SDS-PAGE gélekkel választottuk el, és PVDF membránokra vittük (Solarbio). 5%-os BSA-val (Solarbio) történő blokkolást követően a membránokat PTGS2 (1:1000), p53 (1:1000), GAPDH (1:10 000) elsődleges antitestekkel inkubáltuk 4 fokon. éjszakai. Ezt követően a membránokat TBST-vel (Solarbio) mostuk, és 60 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk Goat Anti-Rabbit IgG H&L-rel (HRP) (1:20 000). A membránokat Ultrasensitive ECL Detection Kit-tel (Proteintech) 1-2 percig inkubáltuk, majd a BIO-RAD ChemiDoc XRS+ Gel Imaging System-en (Bio-Rad, California, USA) detektáltuk. A fehérjesávok szürkeértékeit Image Lab szoftverrel (Bio-Rad) elemeztük.
PBS-t adtunk a veseszövethez (1 ml/0,1 g), és az elektrohomogenizált mintát centrifugáltuk, hogy összegyűjtsük a felülúszót. Ezt követően patkány IL-6 ELISA készletet használtunk az IL-6 expressziójának kimutatására az utasításoknak megfelelően.
Statisztikai analízis
Minden adatot átlag±SEM-ben fejeztünk ki. A statisztikai elemzéshez és képalkotáshoz a GraphPad Prism 9.{1}} szoftvert (GraphPad, CA, USA) használtuk. A QQ diagramokat (1. kiegészítő ábra) kombináltuk a Shapiro–Wilk teszttel, hogy értékeljük az adatnormalitást. A normál eloszlású adatokhoz egyutas ANOVA-t, majd Tukey-tesztet alkalmaztunk. A nem normál eloszlású adatokhoz a Kruskal–Wallis tesztet, majd a nem paraméteres Wilcoxon rang-összeg tesztet alkalmaztuk. p<0.05 was considered statistically significant.
A Wecistanche támogató szolgáltatása – Kína legnagyobb ciszterna exportőre:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel.:+86 15292862950
Vásároljon további specifikációkért:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
SZEREZZE MEG TERMÉSZETES SZERVES CINCÁK KIVONATOT 25% ECHINACOSIDES ÉS 9% AKTEOZID tartalommal vesefertőzés ellen
