Összehasonlító tanulmány az öregedésgátló tulajdonságokról és mechanizmusokról: Resveratrol és kalóriakorlátozás Ⅱ

A rezveratrol és a CR hatása a SIRT1, p53 és Foxo3a mRNS expressziójára öregedő patkányok szöveteiben

Oxidatív stressz körülményekgyakran indukálják a SIRT1 expresszióját és aktivitását. A SIRT1 modulálja a kulcsfontosságú túlélési faktorok, köztük a p53 és a Foxo3a funkcióit [9]. A rezveratrol és a CR hatásának meghatározására a SIRT1, p53 és Foxo3a mRNS szintjére D-Gal-indukált öregedő patkányokban kvantitatív RT-PCR vizsgálatokat végeztünk. A megfelelő negatív kontrollcsoporthoz képest a SIRT1 és a Foxo3a mRNS expresszió szintje szignifikánsan csökkent, de a p53 szint szignifikánsan emelkedett a D-Gal csoportban (P < 0.01; 9A ábra és 9B). Továbbá a resveratrol vagy CR egyidejű kezelés D-gal-lal patkányokban a SIRT1 és Foxo3a mRNS expressziójának növekedését okozta, de csökkentette a p53 szintet a modell kontrollcsoporthoz képest (P < 0,05). A CR-kezeléshez képest azonban a SIRT1 mRNS expresszió szintje szignifikánsan megnőtt a nagy dózisú resveratrol plusz D-gal csoport májában, a p53 mRNS expresszió szintje szignifikánsan csökkent a nagy dózisú rezveratrol plusz D-gal csoport májában és agyában. gal csoport (P < 0,05).

Kattintson ide a Cistanche öregedésgátló kiegészítők beszerzéséhez

A rezveratrol és a CR hatása a fő SIRT{0}}-asszociált fehérje expressziójára öregedő patkányok agyszövetében

A FOXO3a és a p53, amelyeket a SIRT1 szabályoz, a SIRT1 downstream molekulái. Ezzel egyidejűleg a SIRT1 aktivitását az upstream molekulái szabályozzák, például a DBC1 (más néven KIAA1967), az AROS (más néven RPS19BP1) és a HuR tumorszuppresszor (ELAVL1 néven is ismert) [9, 10] . A rezveratrol és a CR p53, FOXO3a, HuR, AROS és DBC1 fehérjeszintekre gyakorolt ​​hatásának meghatározására D-Gal-indukált öregedő patkányokban Western blot vizsgálatokat végeztünk. A megfelelő negatív kontrollcsoporthoz képest a FOXO3a, AROS és HuR fehérje expresszió szintje szignifikánsan csökkent, de a p53 és DBC1 szint szignifikánsan emelkedett a D-gal csoportban (P < 0.01 1. ábra0). Továbbá, a resveratrol vagy CR egyidejű kezelés D-gal-lal patkányokban a FOXO3a, AROS és HuR fehérje expressziójának növekedését okozta, de csökkentette a p53 és DBC1 szinteket a modell kontrollcsoporthoz képest (P < 0,05). A CR kezeléshez képest azonban a HuR fehérje expresszió szintje szignifikánsan megnőtt, de a DBC1 szint szignifikánsan csökkent a nagy dózisú rezveratrol plusz D-gal csoport agyában (P < 0,05). Nem volt különbség a rezveratrol plusz D-gal csoport és a CR plusz D-gal csoport között a p53, FOXO3a és AROS fehérje expresszió szintjében (P > 0,05).

FOXO3a és p53 expressziója agy- és májszövetekben

A FOXO3a és p53 expressziós állapotát agy- és májszövetekben immunhisztokémiával határoztuk meg. A FOXO3a és a p53 immunhisztokémiai analízise kimutatta, hogy a FOXO3a expressziója az agy- és májszövetekben szignifikánsan csökkent, és a p53 expressziója szignifikánsan nőtt a D-Gal csoportban a negatív kontrollcsoporthoz képest (P < 0).{13} }5, 11. ábra). Ezenkívül a resveratrol vagy CR egyidejű kezelés D-gal-lal patkányokban a FOXO3a expressziójának növekedését okozta, de csökkentette a p53 expressziót a modell kontrollcsoporthoz képest (P < 0,05). Nem volt azonban különbség a rezveratrol plusz D-gal csoport és a CR plusz D-gal csoport között a p53 és FOXO3a expressziókban (P > 0,05).

VITA

Az öregedés hátterében álló alapvető kémiai folyamatot először aAz öregedés szabad gyökök elmélete[11], ésoxidatív stresszúgy gondolják, hogy ez az elsődleges tényező az öregedés normális folyamatában.Szabadgyök iniciátor AAPHhozzászokottoxidatív stresszt váltanak kiés létrehozni egy oxidatív modelltstressz által kiváltott sejtöregedéshumán IMR{0}} sejtekben [12, 13]. Ennek a módszernek az az előnye, hogy az AAPH termikusan lebomlikgyököket generálnakbiotranszformációk vagy enzimek nélkül, és a sebességradikális generációkönnyen szabályozható az iniciátor koncentrációjának beállításával [12]. Az AAPH-t megállapítottákgátolja az emberi proliferációtAz IMR- 90 sejteket koncentráció- és időfüggő módon. Az eredmények azt mutatták, hogy a 2 napos inkubáció AAPH-val (1 mM) szignifikánsan növelte az SA -Gal pozitív arány százalékát, az apoptotikus sejtek populációját, csökkentette a SIRT1 mRNS expresszióját, és megnagyobbodott és laposabb morfológiát indukált. Ezek azt mutatták, hogy az AAPH által okozott oxidatív stressz az IMR-90 sejteket öregedéshez vezette. Ezen sejtes öregedési modell alapján a 10 μM resveratrol kezelés hatékonyabban gátolta az AAPH által kiváltott öregedést és apoptózist, mint a CR kezelés.

A D-gal állatmodell egy nemzetközileg elismert öregedő állatmodell, és széles körben alkalmazzák a területenöregedésgátló gyógyszerek. A D-gal egy fiziológiás tápanyag, amelyet általában D-galaktokináz és galaktóz-1-foszfát metabolizál az állatokban. A D-gal túlkínálata azonban, amelyet a fenti enzimek nem metabolizálnak, hanem felhalmozódnak a sejtekben, oxidatív stresszhez és sejtkárosodáshoz vezet [14]. Így a D-gal hosszú távú alkalmazása olyan változásokat idéz elő, amelyek a természetes öregedéshez hasonlítanak az állatokban, például lerövidül az élettartam, kognitív diszfunkció, neurodegeneráció, oxidatív stressz, csökkent immunválasz és előrehaladott glikációs végtermék (AGE) képződés [15]. A jelen tanulmány a mimetikus öregedési modell sikeres létrehozását jelezte, amit a figyelemre méltó tanulási és memóriazavar, az MDA termelés, a lipofuscin felhalmozódás, a T-AOC és SOD csökkenése, valamint a telomeráz aktivitás lelassulása bizonyít az agyban. Mindeközben a resveratrol vagy CR kezelések megvédték a D-gal-indukált patkányokat az oxidatív stressztől az antioxidáns enzimek aktivitásának növelésével, a lipidperoxidációs termékek szintjének csökkentésével, valamint az oxidatív és antioxidatív rendszerek egyensúlyának megőrzésével. A viselkedési és telomeráz aktivitási tesztekben a resveratrol vagy a CR kezelése visszafordíthatja a D-gal által kiváltott kognitív károsodást és a telomeráz aktivitást. Ezenkívül a nagy dózisú rezveratrollal kezelt öregedő modellpatkányok viszonylag jelentősebb hatást mutattak a viselkedésre, mint a CR-rel kezeltek.

11. ábra: A p53 (A, B) és FOXO3a (C, D) expressziójának immunhisztokémiai elemzése öregedő patkányok máj- (A, C) és agyszövetében (B, D). A nagyítás 20× volt. NG, negatív kontrollcsoport; MG, modell kontrollcsoport; RESL, alacsony dózisú rezveratrol csoport; RESH, nagy dózisú rezveratrol csoport; CR, kalóriakorlátozási csoport

Tanulmányok kimutatták, hogy a CR, a tápláló étrend 10-40 százalékos csökkentésekéslelteti az öregedést és növeli az élettartamot, így jelen vizsgálatban a CR egy általánosan használt szintjét (40 százalékos táplálékfelvétel-csökkenés) alkalmaztuk a CR csoport patkányaiban. Ennek ellenére egyes vizsgálatok kimutatták, hogy a CR-nek nincs jótékony hatása a természetes idős főemlősök élettartamára [16]. Hasonlóképpen, bár a resveratrol-kezelés kimutatták, hogy CR-szerű hatásokat vált kienergiaanyagcsereés az elhízott emberek metabolikus profilja [17], nem javította az anyagcsere-funkciókat normál glükóztoleranciával rendelkező, nem elhízott nőknél [18]. A vizsgálatok közötti különbségek oka nem világos, de előfordulhat, hogy a CR és a resveratrol helyreállítja a homeosztázist metabolikusan károsodott egyénekben, és kevésbé egészséges egyénekben, ami összhangban van a SIRT1 állatkísérletekben ismert funkcióival [19]. Ezért D-gal-indukálta öregedés patkánymodelleket alkalmaztunk a resveratrol vagy CR öregedésgátló hatásának összehasonlítására, nem pedig a természetesen öregedett patkánymodellre.

A SIRT1, egy (NAD plusz)-függő deacetiláz, az élettartam meghosszabbításában, a stresszrezisztenciában és az apoptózis csökkentésében játszott szerepe miatt nagy figyelmet kapott [20, 21]. A felhalmozódó tanulmányok határozottan arra utalnak, hogy a SIRT1 a resveratrol és a CR kulcsfontosságú célpontja [22]. A SIRT1-nek nagyszámú downstream molekulája létezik, köztük a p53, a Foxo1, a Foxo3, a Foxo4 és az E2F1, amelyeket a SIRT1 szabályoz. Ezzel egyidejűleg a SIRT1 aktivitását az upstream molekulái szabályozzák, például a p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR és AROS. Az akut tápanyag-megvonás egy transzkripciós programot aktivál a SIRT1 promoternél, amelyet a Foxo3a és a p53 transzkripciós faktorok irányítanak. Mivel a p53 elnyomja a SIRT1 génexpressziót, a Foxo3a általi eltávolítása aktiválja a SIRT1 transzkripcióját [23]. A DBC1-et és az AROS-t a közelmúltban a SIRT1 aktivitás közvetlen negatív, illetve pozitív szabályozójaként írták le, a HuR a SIRT1 expresszió szintjét csökkentő hatást mutatja öreg, öregedő sejtekben [9, 10].

CRkéslelteti az öregedést és meghosszabbítja a medián és a maximális élettartamotszámos fajban, beleértve a patkányokat, egereket, halakat, legyeket, férgeket és élesztőgombákat. A szabadon élő személyek ilyen szigorú diétás programjai azonban etikai és módszertani kérdéseket vetettek fel [24]. Jelenleg az egészségi állapot növelése fontosabb lehet, mint az élettartam meghosszabbítása. A legújabb vizsgálatok azt sugallják, hogy a resveratrol a SIR2 aktivitás egyik legerősebb ösztönzője az összes növényi polifenol közül [25], és a kalóriakorlátozáshoz hasonló mechanizmusokon keresztül befolyásolja a hosszú élettartamot. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a CR és a resveratrol hasonló aktivitással rendelkezik a SIRT1 mRNS expressziós szintjének helyreállításában, növelve a FOXO3a, AROS és HuR fehérje expresszióját, valamint csökkentve a p53 és DBC1 szinteket. Eközben számos meggyőző bizonyíték támasztja alá a resveratrol jótékony hatását a neurológiai, máj- és szív- és érrendszerre.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Sejtkultúra, stressz és kezelések

A humán diploid fibroblaszt IMR{0}} törzset az ATCC-től szereztük be. A sejteket minimális esszenciális tápközegben (MEM) (Gibco, Egyesült Királyság) tenyésztettük, amelyet 10% magzati szarvasmarha szérummal (FBS) (Gibco) egészítettek ki, 37 fokon, 5% CO2-ban. Az összefolyás elérése után a sejteket 6-lyukú tenyésztőlemezekre oltottuk. Egy nappal később a sejteket 48 órán át 1 mM 2,2'-azobisz(2-amidinopropán)-dihidrokloriddal (AAPH) (Sigma, USA) kezeltük MEM plusz 10% FBS-sel. Az AAPH szabad gyökös iniciátorral végzett 48 órás inkubáció az oxidatív stressz által kiváltott sejtöregedés modelljét hozza létre [12, 13]. A kontroll sejteket csak tápközegben inkubáltuk. Az AAPH-kezelés után az IMR-t{17}} hideg foszfátpuffer-sóoldattal (PBS) (pH 7,4) mostuk, és friss tápközeggel vagy resveratrol-t (resveratrol-csoport) vagy 3 százalékos FBS-sel (CR-csoport) tartalmazó MEM-mel inkubáltuk. további 48 órával a betakarítás előtt.

SA -gal festési aktivitás

A kezelést követő naptól kezdve ellenőriztük az öregedés biomarkereinek megjelenését (a proliferációs potenciál csökkenése és az SA -gal festődés növekedése) [26]. Ezután a sejteket megfestettük az SA-gal Staining Kit (CST, USA) gyártójának utasításai szerint. A festést követően több területen legalább 300 sejtet vizsgáltunk, és megszámoltuk az SA-gal pozitív sejteket. Ezeket a kísérleteket háromszor megismételtük, és az eredményeket standard deviációval (SD) tartalmazó átlagértékként mutattuk be. Az esetlegesen sejtkonfluencia miatti nem specifikus festődés elkerülése érdekében SA -gal hisztokémiai festést végeztünk szubkonfluens sejtekkel.

Pásztázó elektronmikroszkópos elemzés

A sejteket fedőlemezeken növesztettük 6-lyukú tenyésztőlemezeken a fent leírtak szerint. A resveratrol és a CR kezelés után eltávolítottuk a lemezekről a fedőlemezeket, majd a sejteket 2,5%-os foszfáttal pufferolt glutáraldehidben fixáltuk és utófixáltuk 1%-os pufferolt ozmium-tetroxidban. A rögzített mintákat t-butil-alkoholba merítettük fokozatos etanollal végzett dehidratálás után. A mintákat t-butil-alkoholból fagyasztva szárítottuk, majd auto Fine Coater (JFC-1600, JEOC, Japán) segítségével arannyal bevontuk, és pásztázó elektronmikroszkóppal (JEOL, JSM{11}) vizsgáltuk. }LV, Japán).

Apoptotikus elemzés

Resveratrol vagy CR inkubáció után az összes sejtet tripszinnel összegyűjtöttük, és kétszer mostuk PBS-sel, majd 400 µl Annexin V kötőpufferben újraszuszpendáltuk. Ezután a sejteket megfestettük az Annexin V-FITC sejt apoptózis detektáló készlet (BestBio, Kína) gyártójának utasításai szerint. A fluoreszcencia kimutatására FACSCalibur áramlási citométert (Becton-Dickinson, San Jose, CA) használtunk, és az apoptotikus sejtek százalékos arányát a FACSCalibur belső szoftverrendszere számította ki. Körülbelül 104 sejtet elemeztünk minden nyomvonalhoz.

Állati eljárások

Körülbelül 200 ± 10 g tömegű hím albínó Wistar patkányokat a Huazhong Tudományos és Technológiai Egyetem Tongji Medical College Kísérleti Állatközpontjából szereztünk be (SCXK 2010-0009). Az állatokat az adagolás előtt 2 hétig akklimatizálták a Hubei Kínai Orvostudományi Egyetem Kísérleti Állatközpontjában, ezalatt ad libitum szabadon hozzáférhettek élelemhez és vízhez. Az akklimatizáció után 50 patkányt választottunk ki, és öt, egyenként tízes csoportra osztottak. Az állatokat az Institutional Animal Ethical Committee (IAEC) által jóváhagyott nemzeti irányelvek és protokollok szerint tartották fenn.

Az I. csoport (negatív kontrollcsoport) patkányok csak vivőanyagot kaptak (1 ml/testtömeg-kg, 0,9 százalék sóoldat) 6 héten keresztül. A II. csoport (Model kontrollcsoport) patkányok D-gal-t (200 mg/testtömeg kg, Sigma Chemical, St. Louis, MO) kaptak 6 hétig. A III. csoport (alacsony dózisú rezveratrol csoport) patkányok D-gal-t és resveratrolt (50 mg/ttkg) kaptak 5%-os dimetil-szulfoxidban (DMSO) oldva 6 hétig. A IV. csoport (nagy dózisú rezveratrol csoport) patkányok D-galt és resveratrolt kaptak (100 mg/testtömeg-kg). Az V. csoport (CR csoport) patkányok D-gal-t és CR-t kaptak (40 százalékkal alacsonyabb kalóriatartalmú táplálékkal, mint az ad libitum táplált patkányok [27]) 6 hétig. A D-gal-t intraperitoneálisan, míg a rezveratrolt orálisan adtuk be a kísérlet teljes időtartama alatt. A patkányokat a kezelés utolsó napján leöltük, majd a vért, a szérumot és a szerveket azonnal összegyűjtöttük biológiai vizsgálat céljából, vagy –80 fokon tároltuk későbbi felhasználás céljából.

Viselkedési tesztek

A Morris vízi labirintus tesztet a patkányok térbeli tanulási és memóriaképességének felmérésére tervezték 6 héttel a sérülés után [28]. A Morris vízi labirintus teszt 4-napos tanulásból és memóriatréningből, valamint az 5. napon egy próbakísérletből állt. Az állatokat egy kör alakú medencében (155 cm átmérőjű) idomították vizuális jelzésekkel. Egy menekülési platformot (90 cm átmérőjű) 10 cm-rel a medencevíz felszíne alá merítettek, amelyet 25 ± 2 fokon tartottak. A platform helye az északnyugati kvadráns közepén maradt a 4-napos képzési időszak alatt. A patkányokat minden nap egy reggeli és egy délutáni blokkra képezték ki. A patkány szabadon úszott, amíg 120 másodpercen belül meg nem találta a platformot. Ha nem sikerült, 10 másodpercre az emelvényre helyezték. Feljegyeztük a menekülési késleltetést (az elmerült menekülési platform megtalálása) és az úszási sebességet. A szondát úgy végezték, hogy eltávolították a platformot, és hagyták, hogy minden patkány 120 másodpercig szabadon úszhasson a medencében. A betanított negyedben (ahol a peront eltávolították) a peronátlépések számát számítógépes videorendszerrel rögzítették. A vízi labirintus látható platformváltozatát nem végezték el, miután szignifikáns különbséget figyeltek meg az úszás sebességében a D-gal-lal és a vivőanyaggal kezelt patkányok között.

Oxidatív stresszhez kapcsolódó biológiai mutatók kimutatása

Az MDA, SOD és T-AOC szintjét a vérben és a szövetekben fotometriásan határoztuk meg a gyártó protokollja szerint, a kereskedelemben kapható enzimatikus vizsgálati készletekkel (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR China). Az ebben a részben leírt összes kísérletet három párhuzamosban végeztük el, hogy megkapjuk az átlagot és az SD-t.

A lipofuscin szintet a Sohal módszerrel határoztuk meg [29]. Röviden: lemértünk 200 mg agykérget, hozzáadtunk 2 ml kloroform-metanol (2:1) kivonatot, homogenizáltuk és szűrtük, majd a maradékot az extraktumtal mostuk, a szűrleteket egyesítettük, a kivonatot hozzáadtuk 5 ml-t, és fluoreszcencia spektrométeren mértük a fluoreszcencia intenzitását. Az emissziós hullámhossz 435 nm, a gerjesztési hullámhossz 365 nm volt. A spektrofluorométert úgy standardizáltuk, hogy a fenti hullámhosszokon 50-es elhajlást adjon kinin-hidrogén-szulfát 0,1 M H2SO4-ben készült 1 ug/ml-es oldatával. Az eredményeket relatív fluoreszcens egység/ml kloroform/g nedves szövettömeg értékben fejeztük ki.

TE aktivitás kimutatása

A telomeráz extrakcióhoz körülbelül 30 mg szövetet kétszer mostunk jéghideg PBS-ben, majd végül körülbelül 150 ml PBS-ben homogenizáltuk. A TE aktivitást TE ELISA kittel mértük a gyártó utasításai szerint (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, Kína). A vizsgálatok érzékenységi határa 0,8 NE/L volt a TE esetében.

RT-PCR elemzés

A SIRT1, Foxo3 és p53 mRNS expressziós szintjét máj- és agyszövetekben RT PCR analízissel elemeztük. A teljes RNS-t Trizol segítségével extraháltuk, mennyiségüket és tisztaságukat ultra mikrospektrofotométerrel (Thermo Fisher Scientific, USA) határoztuk meg 260 és 280 nm-en végzett abszorbanciamérés alapján. A mennyiségi meghatározás után a cDNS-t FastQuant RT készlettel (Tiangen Biotech, Peking, Kína) szintetizáltuk a gyártó utasításai szerint. A SIRT1, Foxo3, p53 mRNS expresszió szintjét RT-PCR-rel mértük TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Peking, Kína) segítségével, specifikus primerekkel (2. táblázat). A kvantitatív valós idejű PCR-t egy LightCycler 480 fokos PCR rendszerrel (Roche, Basel, Svájc) végeztük, 20 μl-t használva az egyes reakciók teljes térfogataként. A PCR-amplifikációt 15 perces 95 fokos denaturációval indítottuk, majd 40 ciklus 95 fokos 10 másodpercig, 59-63 fokos (hevítési hőmérséklet) 20 másodpercig és 72 fokos 30 másodpercig, majd a végső inkubáció 72 fokon. fokon 5 percig. Az egyes gének kapott ciklusküszöbszámát (Ct érték) a relatív változások szorzatára normalizáltuk a 2-∆∆CT módszer egyenlete szerint [30].

2. táblázat: Primer lista

Western blot analízis

A p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 és DBC1 fehérje expressziós szintjét az agyszövetekben Western blot analízissel elemeztük. Az agyszövetek teljes fehérjét RIPA Lysis Bufferrel (Beyotime, Kína) extraháltuk a gyártó utasításai szerint. A fehérjekoncentrációkat a BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Kína) segítségével határoztuk meg. 5 mg fehérjét választottunk el 12 százalékos SDS-poliakrilamid gélekkel, és PVDF membránra vittük (0,45 μm, Millipore, USA). A blotokat 5 százalék zsírmentes tejjel blokkoltuk TBS-ben, majd egy éjszakán át 4 fokon inkubáltuk az elsődleges antitestek megfelelő hígításával: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell). Signaling Technology), anti-HuR (#12582, Cell Signaling Technology), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Cell Signaling Technology), anti-- - hatás (AC004, ABclonal Technology) . A membránok mosása után a felesleges primer antitestek eltávolítása érdekében a membránokat 1 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk a megfelelő másodlagos antitestekkel 1:2000-1:5000 hígításban (AC004 vagy AS003, ABclonal Technology). A membránokat háromszor mostuk, majd Pierce ECL Western Blotting Substrate (Thermo Scientific) alkalmazásával tettük láthatóvá. -akciót belső kontrollként használták.

Immunhisztokémia

A szövetmintákat 10%-os semleges pufferolt formalinban fixáltuk a műtéti eltávolítás után 1 órán belül, és standard eljárásokkal paraffinba ágyaztuk. Ezután a fix paraffinba ágyazott mintákat 5- μm vastag metszetekre vágtuk, amelyeket xilolban paraffinmentesítettünk, etanolban rehidratáltunk, és mikrohullámú sütőben kezeltük az antigén kinyerése érdekében. A megfelelően hígított primer antitestet, az anti-p53-at (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) és az anti-FOXO3a-t (#12829, Cell Signaling Technology) 60 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk páráskamrában. A tárgylemezeket ezután PBS-ben öblítettük, majd inkubáltuk a nyúl elleni antitest elleni másodlagos antitesttel és a HRP vizualizálásával (koncentráció 1:300, #074-1506, KPL). Ezután a lemezeket mostuk, és a metszeteket enzim-szubsztrát diaminobenzidin (DAB, Sigma) oldatban előhívtuk. Az immunhisztokémiailag festett metszetek képeit Olympus digitális mikroszkóppal (IX-73P1F, Olympus, Japán) rögzítettük.

Statisztikai analízis

Az eredményeket átlag ± SD-ben fejeztük ki legalább három független kísérletre vonatkozóan, és az SPSS 18.{1}} szoftverrel elemeztük. A Morris vízi labirintus edzési feladatban a menekülési késleltetés és az úszás sebességének csoportos különbségeit kétirányú varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, ismételt mérésekkel, a faktorok a kezelés és az edzésnap. A többi adatot egyutas ANOVA-val, majd post-hoc Tukey-teszttel elemeztük. A 0,05-nél kisebb P értéket szignifikánsnak tekintettük.

KÖVETKEZTETÉSEK

A Resveratrol és a CR hasonló öregedésgátló aktivitást mutatott mind in vitro, mind in vivo, amit az a képességük bizonyít, hogy gátolják az AAPH által kiváltott öregedést és apoptózist, és helyreállítják a D-gal beadása által okozott életkorral összefüggő kognitív károsodást. Öregedésgátló mechanizmusaik közé tartozott a TE aktivitás fokozása, az oxidatív károsodások csökkentése és a SIRT1 útvonal szabályozása. Összességében 10 μM resveratrol in vitro és nagy dózisú resveratrol in vivo viszonylag erősebb öregedésgátló és stimuláló SIRT1-szintet mutatott. Ezek az eredmények a resveratrol CR-utánzó potenciáljára utaltak.

Rövidítések

AAPH, 2,2'-azobisz(2-amidinopropán)-dihidroklorid; AMPK, adenozin-monofoszfát-aktivált protein kináz; ANOVA, varianciaanalízis; AROS, a SIRT1 aktív szabályozója; CR, kalóriakorlátozás; DBC1, mellrákban törölve 1; D-gal, D-galaktóz; FBS, magzati szarvasmarha-szérum; Foxo3a, villafejes doboz 3a; HuR, Hu antigén R; MEM, minimum alapvető közeg; PBS, foszfát puffer sóoldat; PGC-1, peroxiszóma proliferátor által aktivált receptor G koaktivátor-1 ; RES, rezveratrol; SA-gal, öregedéssel asszociált -galaktozidáz; SD, standard eltérések; SIRT1, elnémító információ szabályozó; TE, telomeráz.

Szerzői hozzájárulások

A kutatás koncepciója és terve: Gang Chen; adatok beszerzése, elemzése és értelmezése: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; finanszírozás megszerzése és a kézirat kritikai átdolgozása a szellemi tartalom érdekében: Gang Chen, Ke-Li Chen; a kézirat írása: Juan Li. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta ennek a kéziratnak a kiadását. KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS ÉS FINANSZÍROZÁS

Ezt a munkát a Kínai Posztdoktori Tudományos Alapítvány (2016M601237), a Natural Science Foundation projekt (81373704, 30873292) finanszírozta.

ÖSSZEFÉRHETETLENSÉG

Nincs összeférhetetlenség az összes résztvevő szerző részéről.

IRODALOM

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Calcoric restrikció, resveratrol és melatonin: A SIRT1 szerepe és hatása az öregedésre és a kapcsolódó betegségekre. Mech Aging Dev. 2015; 146–148:28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. A kalóriakorlátozás csökkenti az életkorral összefüggő és minden ok miatti mortalitást rhesus majmokban. Nat Commun. 2014; 5:3557.

3. Sohal RS, Weindruch R. Oxidatív stressz, kalóriakorlátozás és öregedés. Tudomány. 1996; 273:59–63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Kalóriakorlátozás és étrend-korlátozás utánzók: stratégia az egészséges öregedés és a hosszú élettartam javítására. Curr Pharm Des. 2014; 20:2950–77.

5. Lane MA, Roth GS, Ingram DK. Kalória restrikciós mimetikumok: új megközelítés a biogerontológiához. Módszerek Mol Biol. 2007; 371:143–9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG és mások. A resveratrol javítja az egerek egészségét és túlélését magas kalóriatartalmú étrenden. Természet. 2006; 444:337–42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P és mások. A resveratrol a SIRT1 és a PGC-1alfa aktiválásával javítja a mitokondriális működést, és védelmet nyújt az anyagcsere-betegségekkel szemben. Sejt. 2006; 127:1109–22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. A sirtuinok kis molekulájú aktivátorai meghosszabbítják a Saccharomyces cerevisiae élettartamát. Természet. 2003; 425:191–6.

9. Kwon HS, Ott M. A SIRT1 hullámvölgyei. Trends Biochem Sci. 2008; 33:517–25.

10. Brooks CL, Gu W. Hogyan hat a SIRT1 az anyagcserére, az öregedésre és a rákra? Nat Rev Rák. 2009; 9:123–8.

11. Harman D. Az öregedés szabad gyökök elmélete. Mutat Re. 1992; 275:257–66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. A peroxil gyökök által kiváltott kataláz oxidatív károsodása: funkcionális védelem melatonin és más antioxidánsok által. Free Radic Res. 2003; 37:543–53.

13. Hubackova S, Krejcikova K, Bartek J, Hodny Z. Az IL1- és a TGF-Nox4 jelátvitel, az oxidatív stressz és a DNS-károsodás válaszreakciói a replikatív, onkogén-indukált és gyógyszer-indukált parakrin „Bystander öregedés” közös jellemzői '. Öregedés (Albany NY). 2012; 4:932–51. https://doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. A krónikus szisztémás D-galaktóz expozíció memóriavesztést, neurodegenerációt és oxidatív károsodást idéz elő egerekben: Protective effects of R{{ 2}} liponsav. J Neurosci Res. 2006; 84:647–54.

Kérdezz többet:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plusz 86 15292862950