Tevékenység által irányított fenolos kompozíciók izolálása Anneslea Fragrans falról. És citoprotektív hatásuk a hidrogén-peroxid által kiváltott oxidatív stressz ellen a HepG2 sejtekben 2. rész

Kérlek keress feloscar.xiao@wecistanche.comtovábbi információért

2.7. Gátló hatás az intracelluláris ROS-generációra

Az oxidatív stressz egyfajta egyensúlyhiány az oxidáció és az antioxidáció között a szervezetben [28]. A ROS túlzott felhalmozódása oxidatív stresszhez vezethet, amely károsíthatja a sejteket és szöveteket, például lipideket, membránokat és DNS-t [29]. Az antioxidánsok, köztük a polifenolok és a flavonoidok segíthetik a szervezetet csökkenteni a ROS okozta károkat. Általánosságban elmondható, hogy a H, O-t széles körben használják intracelluláris ROS zavaros termelés indukálására és a sejtek antioxidáns védelmének rontására [30]. Jelen vizsgálatunkban a H2O2-t választottuk az intracelluláris ROS abnormális felhalmozódásának indukálására és a sejtek antioxidáns védekezésének rontására. A H, O{5}}indukált HepG2 sejtekben az intracelluláris ROS képződést gátló hatás értékelésére az intracelluláris ROS szintjét áramlási citometriával teszteltük. Röviden, a HepG2 sejteket 6-lyukú lemezen tenyésztjük (1 × 10 fokos sejt/lyuk). 50 ug/ml különböző kivonatok vagy 8 ug/ml Vc (pozitív csoport) 24 órás inkubálása után a kontrollcsoport kivételével az összes csoportot HO-val indukáltuk 6 órán át. Minden egyes vegyület intracelluláris ROS-szintjét teszteltük (3. ábra). A ROS képződési arány szignifikánsan 215,64±9,80 százalékra nőtt H2O-ban - a kezelt csoport a kontroll csoporthoz képest (100 százalék). A H, O, kezelt csoporthoz képest a 2, 5 és 6 vegyületek jelentősen elnyomták az intracelluláris ROS termelést (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Citoprotektív hatás a H2O2-indukált sejtapoptózis ellen

Az apoptózis a sejtek alapvető biológiai jelensége, amely fontos szerepet játszik a sejtek szaporodásának, növekedésének és mutációjának szabályozó mechanizmusában, valamint a belső környezet stabilitásában. Az apoptózis, amely különbözik a nekrózistól, a sejthalál egy speciális típusa. Az apoptotikus folyamat zavara rossz hatással van a szervezetre, és számos betegséget okoz [32]. A H2O2, mint fontos jelátviteli molekula, szabályozza a sejtproliferáció, -növekedés és apoptózis folyamatát [5]. Jelen tanulmány a H, O, által indukált HepG2 sejtek apoptózisát mérte, és értékelte a 2., 5. és 6. vegyületek citoprotektív hatását. A HepG2 sejtek 1.0 mM H2O2-val történő kezelése után az apoptózis aránya jelentősen megnövekedett ( 57,20±1,97 százalék ), összehasonlítva a kontrollcsoportéval (9,10±0,62 százalék ,p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Anyagok és módszerek

3.1. Vegyszerek és reagensek

A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiához (HPLC) használt metanol, acetonitril és hangyasav HPLC minőségűek voltak, és a Mercktől (Darmstadt, Németország) vásárolták. A minta extrakciójához használt oldószerek, beleértve az etanolt, a diklór-metánt és az n-butanolt, analitikai minőségűek voltak. Az ionmentes vizet Milli-Q ultratiszta vízrendszerrel (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, USA) tisztítottuk, és minden kísérletben alkalmaztuk. A galluszsav, a rutin, a Trolox és a C-vitamin fenolos standard vegyületeit a Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd.-től (Chengdu, Kína) vásároltuk. metiltiazol-2-il-25-difenil-tetrazólium-bromid (MTT), Folin-Ciocalteu reagens, 2,2'- és bisz(3-etilbenzol-tiazolin-6-szulfonsav)( ABTS),2,2-difenil-1-pikrilhidrazilgyök (DPPH), 1,3,5-tri(2-piridil)-2,4,{{23 A }}triazint (TPTZ), a 2',7'-diklórfluoreszcein-diacetátot (DCFH-DA) és a FeSO{28}} a Sigma-Aldrich-től (Sanghaj, Kína) vásároltuk. Az NMR-spektrumokat Bruker AV-400 és/vagy DRX-500 spektrométerekkel vettük. Az ESIMS spektrumokat An Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF spektrométeren vettük fel.

További információért kattintson ide

3.2. Minta előkészítés

Anneslea fragrans Wall. a leveleket a kínai Lincang városból gyűjtötték be július 2-án020. A leveleket árnyékos helyiségben tömegállandóságig szárítottuk, majd elektromos darálóval porítottuk. Az extrakciót és a frakcionálást a korábban ismertetett módszerünk szerint végeztük kis módosítással [33]. A porított mintát (100 g) összekevertük 1000 ml 80%-os vizes etanol oldószerrel, és ultrahangos tisztítófürdőben, 200 W-on háromszor (0,5 óra alkalmanként) ultrahanggal kezeltük. Ezután az ultrahanggal kezelt szuszpenziót összegyűjtöttük, és 1500 × g-vel 10 percig centrifugáltuk Eppendorf centrifugával (TGL-20B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Shanghai, Kína). Az egyesített felülúszót rotációs bepárlóban (Hei-VAP, Heidolph, Németország) 50 fokon betöményítettük, majd vákuumszárító liofilizátorral (Alpha 1-2 LD plus, Christ, Németország) tovább szárítottuk. A nyers etanolos extraktumot (CE, 30 g) újra szuszpendáljuk vízzel, és egymás után háromszor megosztjuk diklór-metánnal, etil-acetáttal és n-butanollal. Betöményítés és liofilizálás után 3,2 g, 6,3 g, 7,2 g és 8,2 g tömegű diklór-metán-frakciót (DF), etil-acetát-frakciót (EAF), n-butanol-frakciót (BF) és maradék vízfrakciót (RWF) kapunk. , ill. A különböző frakciók antioxidáns aktivitása szerint a BF-et üvegoszlopokon (30 mm × 400 mm) kromatografáltuk, nedvesen megtöltöttük 20 g (száraz gyanta) kiválasztott hidratált D101 gyantával. A gyanta ágytérfogata (BV) körülbelül 40 ml volt. Az adszorpciós telítettség elérése után az oszlopot először 4×BV desztillált vízzel mostuk, majd etanol-víz eleggyel eluáltuk (0:100, 20:80, 50:50, 80:20, 100:0, térfogat/év, mindegyik 4× BV), így öt szubfrakciót kapunk (BF-A-tól E-ig). A deszorpciós oldatok minden részét vákuumban szárazra pároljuk. A CE-t, négy frakciót (DF, EAF, BF és RWF) és öt szubfrakciót (BF-A-tól E-ig) hűtőszekrényben tároltuk (-20 fok) további kísérletezés céljából.

3.3. Aktív összetevők biológiailag irányított izolálása

Az antioxidáns vizsgálatok és a HPLC analízis irányításával az antioxidáns frakciót tovább kromatografáltuk a tiszta vegyületek izolálására. Röviden, a BF-et hidratált gyanta D101 oszlopnak vetették alá, így öt szubfrakciót kaptunk (BF-A-tól E-ig). A BF-C-t (1,5 g) szilikagél oszlopnak vetjük alá, eluálószerként DCM/MeOH (15:1), majd preparatív TLC-vel (DCM/MeOH, 10:1) elválasztjuk, így kapjuk a 6. vegyületet (118 mg). ) és 7 (10 mg). BF-D-t (1,1 g) szilikagél oszlopnak vetünk alá (CHCl3/MeOH 10:1, 5:1), így az 1 (129 mg) és 4 (15 mg) vegyületet kapjuk. A BF-E-t (1,2 g) szilikagél oszlop (CHCl3/MeOH, 30:1, 10:1, 5:1), így kapjuk az 1 (216 mg), 2 (135 mg) vegyületet és egy keveréket. Ez utóbbit szilikagél oszlopon tisztítjuk (CHCl3/MeOH). 12:1), így a 3 (19 mg) és 5 (15 mg) vegyületet kapjuk (5. ábra).

3.4. A vegyületek szerkezetének meghatározása 1-7

A különböző frakciók antioxidáns aktivitása alapján három alfrakciót, BF-C-től E-ig vetettünk alá oszlopkromatográfiának. Ily módon a BF-C bioaktivitás-vezérelt frakcionálása E-vé hét egyedi fenolos vegyület izolálásához vezetett. Szerkezetük konfuzozid(1)[34], vaccinifolin (2)[34], 1-[4-( -D-glükopiranoziloxi)-2-hidroxifenil]-3- (4-hidroxi-3-metoxifenil)-1-propanon (3) [35], (S)-naringenin-7-O- -D-glükopiranozid (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahidroxi-dihidrokalkon(5)[26], (epi)-katekin (6)[26] és kornozid (7)[36] (1B. ábra) az 1D elemzésével -NMR és ESI-MS adatok és összehasonlítás az irodalomban korábban közölt vegyületekkel. Közülük a 3., 4. és 7. vegyületet először izolálták ebből a növényből.

A Cistanche javíthatja az immunitást

Confusoside (1). A molekulaképlet C21H24O, és az elválasztás 129 mg halványsárga tűket eredményezett. Az 'IH NMR (500 MHz, DMSO-d6) és az ESI-MS (m/z 421 [M plusz H]) adatok megegyeztek az irodalomban korábban közölt vegyülettel [34]. Az azonosítást a 13C NMR (125 MHz, DMSO-dg）∶δ204,4 s, C=O), 163,5 (s, C-2'), 163,3 (s, C) is támogatta. -4'), 155,5(s,C-4), 132,6(d,C-6'), 130,9(s,C-1), 129,2(d, C) -2, 6), 115,0(d,C-3/C-5), 114,4(s, C-1'), 108,3(d, C{{45} }'), 103,4(d,C-1"), 99,6(d,C-3'), 77,1(d, C-5"), 76,4(d, C{{ 57}}"), 73,1(d,C-2"), 69,5(d, C4'), 60,5(t,C-6'), 39,8(t,C-), 28,9( t, C-6).

A vacciniifolint (2) sárga amorf por formájában (153 mg) kaptuk, és a molekulaképlethez C2H24O1o rendeltük.'H-NMR (5{23}}0 MHz, DMSO-dg) és ESI-MS (m/z 437 [M) plusz H]) adatok megegyeztek a korábban közölt adatokkal [34]. Az azonosítást a 13CNMR (125 MHz,DMSO-de）∶δ204,4（s, C=O）,163,5（s, C-2'）,163,3 (s, C{) is támogatta. {21}}), 145,0(s, C-3), 143,3(s, C-4), 132,6(d, C-6), 131,7(s, C{{33) }}), 118,9(d, C-6), 115,8(d, C-2), 115,4(d, C-5), 114,4(s, C-1 '), 108,3(d, C-5'), 103,4(d, C-1'), 99,6(d, C-3'), 77,1(d, C{{57) }}"), 76,4(d,C-3'), 73,1(d,C-2"), 69,5(d,C-4'), 60,5(t,C{ {69}}'),39,4(t,Ca),29,1(t,C-6).

{{0}}[4-( -D-glükopiranoziloxi)-2-hidroxifenil]-3-(4-hidroxi-3-metoxifenil){{8 }}propanon (3). A vegyületet színtelen tűk formájában (19 mg) kaptuk, és a molekulaképletet C22H2O10-ként jelöltük meg.'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) és ESI-MS (m/z451 [M plusz H]* ) az irodalommal megegyező adatok [35]. Az azonosítást a 13CNMR (100 MHz,DMSO-d）∶δ204,5（s,C=O）,163,5（s,C-2'）,163,3（s,C{) is támogatta. {31}}'）, 147,4（s, C-3), 144,6(s, C-4), 132,6(d, C-6), 131,6(s, C{{ 43}}), 120,4 (d, C-6), 115,2 (d, C-5), 114,5 (s, C-1'), 112,6 (d, C{{55) }}), 108,3 (d, C-5'), 103,3 (d, C-1"), 99,5 (d, C-3'), 77,0 (d, C{{ 67}}'), 76,3 (d, C-3"), 73,0 (d, C-2"), 69,5 (d, C-4'), 60,5 (t, C -6'), 55,5 (q, C-OCH3), 39,5 (t, C-), 29,4 (t, C{89}}).

Az (S)-naringenin-7-O- -D-glükopiranozid (4) molekulaképlete C21H2.O10, amelyet 15 mg fehér por formájában kaptunk. Az IH NMR (500 MHz, DMSO-dg) és az ESI-MS (m/z 435 [M plusz H] plusz) adatok megegyeztek az előző munkával[22]. Az azonosítást a13C NMR (125 MHz,DMSO-d）∶δ197,2（s, C-4）,165,3（s, C-7）,165,2 (s, C{25) is támogatta }}), 162,9(s, C-9), 157,9(s, C-4'), 128,6(s, C-1'), 128,4(d, C{{37) }}',6'), 115,2 (d, C-3'/C-5'), 1{{110}}3,2 (s, C-10 ),99,6(d,C-1'), 96,5(d,C-6), 95,4(d,C-8), 78,7(d,C{57}}) ,77.{182}}(d, C{{6{{240}}}}"), 76,3 (d,C-3'), 73,0(d,C{{ 66}}"), 69,5 (d,C-4'), 60,5(t,C-6'), 42,0(t,C{75}}). A 2'3,4,A'-tetrahidroxi-dihidrokalkon (5) molekulaképlete C15H4O5, és fehér por formájában különül el (15 mg).'H-NMR (400 MHz, DMSO-dg) és ESI-MS (m/z 275 [ M plus H] plus ) adatok megfeleltek az irodalomban közölt adatoknak [26]. Az azonosítást a 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6）∶δ203,9 s, C=O）, 164,7(s, C{99}}'), 164,2(s,C) is támogatta. -4'), 144,9(s, C-3), 143,3(s, C-4), 133,0(d, C-6), 131,8(s, C{ {114}}), 118,9 (d, C-6), 115,7 (d, C-2), 115,4 (d, C-5), 112,5 (s, C{126) }}), 108,2(d,C-5'), 102,4(d,C-3'), 39,5(t, C-a2), 29,2(t, CB). Az (Epi)-katechin(6)-t fehér por formájában izoláltuk (118 mg), és a molekulaképletet CHO4-ként határoztuk meg.1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) és ESI-MS (m/z 291 [M plusz H] plus )adatok jól egyeztek a szakirodalomban közöltekkel [26]. Az azonosítást a13C NMR (125 MHz,DMSO-d6）∶δ156,4（s,C{156}}）,156,1（s, C{159}}）,155,3（s,C{162) is támogatta. }}）, 144,8(s,C-3'), 144,8(s,C-4'), 130,5(s,C-1'), 118,4(d,C{{ 174}}'), 115,0(d,C-5'), 114,4(d,C-2'), 99,0(s,C{183}}), 95,1(d,C{ {186}}), 93,8(d, C-8), 80,9(d, C-2), 66,2 (d, C{195}}), 27,8(t, C{198) }}). A (7) kornozidot amorf szilárd anyagként (10 mg) kaptuk, és a molekulaképletet C1H20O8-ként határoztuk meg.'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) és ESI-MS (m/z317 [M plusz H] plusz) adatok megfeleltek a közzétett adatok [36]. Az azonosítást a 13CNMR (100 MHz,DMSO-dg）∶δ185,3（s, C-4）,153,3（d,C-2）,153,2（d,C{{220) is támogatta. }}), 126,4 (d, C-3), 126,4(d, C-5), 102,8(d, C-1'), 76,8(d, C{{232} }'), 76,6(d,C-3'), 73,3(d,C-2'), 70,0(d,C{241}}), 67,3(s, C{244) }}), 63,8(t, C-8), 61,0(t, C-6'), 39,7(t, C{253}}).

3.5. Az összes fenol (TPC) és az összes flavonoid tartalom (TFC) meghatározása

Négy frakció (DF, EAE, BF és RWF) és öt részfrakció (BF-A-E) TPC-jét és TFC-jét a korábban ismertetett módszerünk szerint mértük [37]. A TFC esetében 1.0 ml mintát (1.0 mg/ml koncentrációjú) metanolban oldva kevertünk össze 0,5 ml Folin-Ciocalteu reagenssel. centrifugacsőbe és 1 percig inkubáltuk. Ezután 20 százalékos Na2CO3-oldatot (m/o) (1,5 ml) és ionmentesített vizet (7,0 ml) adtunk a csőhöz, és 10 percig 70 fokos vízfürdőben tartottuk. Szobahőmérsékletre hűtés után 200 ul oldatot átvittünk egy 96-lyukú mikrolemezre, és az abszorbanciát 765 nm-en SpectraMax M5 mikrolemez-leolvasóval (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) határoztuk meg.

A TFC esetében 1,2 ml mintaoldatot (10 mg/ml koncentrációjú) kevertünk össze 0,3 ml NaNO-val (5 százalékos m/o) és 3,8 ml 7. 0 százalékos vizes etanolt és 8 percig inkubáltunk. Ezt követően 0,3 ml 10 százalékos vizes Al(NO3), 4 ml 4 százalékos vizes NaOH-oldatot és 0,4 ml 70 százalékos vizes etanolt adtunk az elegyhez. és szobahőmérsékleten 30 percig reagálni hagyjuk. Ezután 200 μl oldatot vittünk át egy 96-lyukú mikrolemezre, amelynek abszorbanciáját 510 nm-en mértük mikrolemez-leolvasóval. A TFC-t és a TPC-t galluszsav-ekvivalens milligrammban (mg GAE/gextraktum) és rutin-ekvivalens per gramm kivonatban (mg RE/g kivonat) fejeztük ki.

3.6.Az antioxidáns aktivitás meghatározása

Négy frakció (DF, EAF, BF és RWF) és öt szubfrakció (BF-A-tól E-ig) antioxidáns aktivitását DPPH és ABTS gyökfogó assay és FRAP vizsgálat kombinációjával értékeltük a korábbi tanulmányunkban leírt módszer alapján. [33]. A DPPH vizsgálathoz 50μL mintaoldatot (50,100,200 ug/mL) összekevertünk 0,2 ml DPPH-oldattal (0,1 mmol/). L) egy 96-lyukú lemezbe, és hagyjuk 30 percig inkubálni. Az abszorbanciát 517 nm-en mértük SpectraMax M5 mikrolemez-leolvasóval (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). ABTS esetén 25 μL mintaoldatot (50, 100, 200 ug/ml) adtunk 0,2 ml-es LABTS oldathoz (7 mmol). Az elegyet 6 percig sötétben tartottuk, majd az abszorbanciát 734 nm-en rögzítettük. FRAP esetén 20 μL mintaoldatot (50 100 200 ug/ml) 0,18 ml FRAP reagenssel (7 mmol/) kevertünk össze. L) Sötétben, 37 °C-on 10 percig tartó inkubálás után az abszorbanciát 593 nm-en határoztuk meg. Minden vizsgálatot három párhuzamosban végeztünk. A DPPH, ABTS és FRAP értékeket umol Trolox egyenértékben fejeztük ki grammonként kivonat (μmol TE/g kivonat).

3.7.HPLC elemzés

A BF-et és a vegyületeket ({{0}}) egy Agilent 1260 HPLC rendszeren elemeztük, amely diódasoros detektorral volt összekapcsolva. Az elemzés előtt a frissen készített mintaoldatot egy 0,45 um nylon membránon átszűrtük. Az elválasztást Reprosil-Pur Basic C18 oszlopon (5 μm, 4,6 × 25{16}} mm, Németország) 35 fokon tartottuk. Az injektált térfogat 5,0 μl, az áramlási sebesség 1,0 ml/perc, a detektálási hullámhosszt 280 nm-re állítottuk be. A mozgófázisok 0,1% hangyasavval megsavanyított víz (A fázis) és acetonitril (B fázis) voltak, a lineáris gradiens elúciót a következőképpen végeztük: 0-3 perc, 20% B; 3-10 perc, 40 százalék B;10-15 min, 60 százalék B;15-20 min, 100 százalék B.

3.8. Sejtkultúra és sejtéletképesség

Humán májrák A HepG2 sejteket a Kunming Cell Banktól (Kunming, Kína) vásároltuk. A HepG2 sejteket 1% penicillin-sztreptomicinnel és 10% magzati szarvasmarha szérummal kiegészített DME-ben növesztettük 5% CO/95% levegő atmoszférában 37 °C-on. Amikor a sejteket megfelelő sűrűségig (körülbelül 80%) inkubáltuk, a pozitív kontrollal (Vc) és az izolált vegyületekkel kezeltük a további kísérletekhez.

A sejtek életképességét MTT assay-vel határoztuk meg az egyes minták citotoxicitásának értékelésére [29]. A sejteket lyukanként 1 × 104 sejt sűrűségben egy 96-lyukú lemezre oltottuk, és 24 órán át inkubáltuk. Mindegyik vegyületet (négy 50-200 ug/ml dózisban elkészítve) mindegyik lyukba 20 órán át adtuk. Ezután a sejteket MTT oldattal kezeltük 4 óra végkoncentrációval. Az MTT-t tartalmazó táptalajt eltávolítottuk, és 200 μl DMSO-t adtunk hozzá a formazán feloldásához.Az abszorbanciát 570 nm-en mikrolemez-leolvasóval rögzítettük.Az eredmények azt mutatták, hogy mindegyik vegyület nem toxikus a HepG2 sejtekre a vizsgált koncentrációkban.

3.9. A ROS képződés gátlása H2O2-indukált HepG2 sejtekben

H,O,-indukált HepG2 sejteket használtunk a ROS termelést gátló hatás meghatározására [3]. HepG2 sejteket (1.0×10 fokos sejt/lyuk) egy 6-lyukú lemezre oltottuk, és együtt tenyésztettük izolált vegyületekkel 50 ug/ml és Vc（8 ug/ ml) 20 órás inkubálás után a tápközeget eltávolítottuk, és 2 μl H, O (0,5 mM)-t adtunk minden egyes üreghez további 6 órán át. A kísérlet végén a sejteket 2 μL DCFH-DA-val (10 mM) jelöltük sötétben, 37 fokon 20 percig. Az abszorbanciát áramlási citometriával rögzítettük (Guava easy, de 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, USA).

3.10. A sejtapoptózis meghatározása

Az egyes vegyületek H2O2--indukált HepG2 sejtek apoptózisára gyakorolt ​​védőhatását humán annexin VFITC/PI apoptózis kit segítségével határoztuk meg [38]. A HepG2 sejteket 48 órán keresztül előkezeltük izolált vegyületekkel vagy anélkül. Inkubálás után 100 μl kötőpuffert adtunk a sejtekhez, és a sejtek sötétben 10 µl annexin V-FITC-vel reagáltak 5 percig szobahőmérsékleten és 10 µl propidium-jodiddal (PI) jégfürdőben 5 percig. min, egymás után. A sejtapoptózist azonnal elemeztük áramlási citometriával.

3.11. Statisztikai elemzés

Minden kísérletet három párhuzamosban végeztünk. Az összes értéket átlag ± standard eltérésként (SD) fejezzük ki. A csoportokon belüli és a csoportok közötti különbségeket egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, amelyet Tukey-teszt követett. A különbséget statisztikailag szignifikánsnak tekintettük p<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Konklúziók

Ebben a vizsgálatban az A. fragrans levelek különböző frakcióit frakcionáltuk, és elemeztük azok TPC-jét és TFC-jét. Az antioxidáns aktivitás által irányított izolálás során a 1-7 vegyületeket, köztük négy flavonoid glikozidot (1-4) és két flavonoidot (5 és 6) izoláltak és azonosítottak az A. fragrans leveleiből, ami arra utalt, hogy ez a faj gazdag. flavonoid vegyületekben. A 2., 5. és 6. vegyületek jelentős antioxidáns aktivitást mutattak DPPH, ABTS gyökfogó és FRAP vizsgálatokban. Ezenkívül láthatóan megakadályozták az oxidatív stressz károsodását a ROS-tartalom és a sejt apoptózis csökkenése révén a H2O2-indukált HepG2 sejtekben. Ezen eredmények szerint a polifenolvegyületek, különösen a flavonoidok fenolos hidroxilcsoportjaik miatt jelentős antioxidáns kapacitással rendelkeznek. Továbbá a glikozid részt és három fenolos hidroxilcsoportot tartalmazó 2-es vegyület volt az A. fragrans levelei közül a legnagyobb antioxidáns komponens. A 6. vegyület mutatta a legjobb antioxidáns aktivitást, ami jelentős mértékben hozzájárulhat az A. fragrans aktivitásához. Ezenkívül az A. fragrans kivonatai az antioxidánsok természetes forrásaként szolgálhatnának ígéretes egészségügyi italokban. Az A. fragrans leveleiből származó vegyületekkel végzett tanulmány azt sugallja, hogy ezek antioxidáns, egészséges teaként szolgálhatnak az oxidatív stressz által kiváltott sejtkárosodás kezelésére, és táplálék-kiegészítőként szolgálhatnak az élelmiszer- és egészségiparban.

Ez a cikk a Molecules 2021, 26, 3690-ből származik. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules